JUDUL JURNAL

Effects of extraction solvents on concentration and antioxidant activity of black and black
black mate tea polyphenols determined by ferrous tartrate and Folin–Ciocalteu methods
LATAR BELAKANG
Teh merupakan minuman yang paling banyak dikonsumsi di seluruh dunia dan
merupakan produk dari bidang pertanian. Studi eksperimental terbaru menyatakan bahwa teh
dapat memelihara kesehatan tubuh karena memiliki kandungan polifenol yang tinggi.
Polifenol yang ada pada teh memiliki beberapa aktivitas farmakologis seperti antioksidan,
antikarsinogenik dan antiarteriosklerotik.
Sistem pelarut yang berbeda beda telah banyak digunakan untuk ekstraksi polifenol
dari tanaman. Hasil ekstraksi tergantung pada pelarut dan metode ekstraksi. Metode ekstraksi
harus mengekstraksi semua senyawa yang ingin diteliti dan harus menghindari modifikasi
kimianya. Air, campuran air dari etanol, metanol, dan aseton umumnya digunakan untuk
mengekstrak tanaman. Para peneliti biasanya menggunakan air mendidih untuk ekstraksi
polifenol dari teh hijau, hitam dan teh black mate. Juga, campuran metanol air, aseton dan
etanol, metanol absolut dan etanol absolut telah digunakan untuk tujuan ini. Namun, sejauh
ini penggunaan dimethylformamide (DMF) untuk ekstraksi polifenol belum dilaporkan.
Metanol absolut untuk polifenol teh dan campuran aseton air untuk ekstraksi total fenolik
gandum ternyata lebih efektif daripada air. Namun, air ditemukan sebagai pelarut terbaik
untuk mengekstraksi katekin teh dibandingkan dengan 80% metanol dan 70% etanol. Juga,
dalam ekstraksi polifenol, ekstraksi tunggal tidak cukup dibandingkan dengan prosedur
ekstraksi campuran.
Dapat disimpulkan bahwa masih belum jelas sistem pelarut mana yang lebih efektif
untuk mengekstraksi fenolik total teh dan mengevaluasi aktivitas antioksidan. Di sisi lain,
sedikit yang diketahui tentang kandungan polifenol dan aktivitas antioksidan teh black mate.
Sehingga, tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki pengaruh pelarut ekstraksi yang
berbeda pada total polifenol dan aktivitas antioksidan dari teh hitam dan black mate. Sistem
pelarut organik dengan polaritas berbeda termasuk metanol absolut, etanol, aseton, dan DMF
dan larutan lainnya pada konsentrasi yang berbeda. Selain itu, dalam penelitian ini dua
metode spektrofotometri berdasarkan reaksi yang berbeda diuji untuk menentukan polifenol.
Salah satunya adalah metode Folin-Ciocalteu yang banyak digunakan dalam analisis dan
lainnya adalah metode yang telah digunakan terutama untuk analisis polifenol teh.
METODOLOGI PENELITIAN
Ekstraksi polifenol dari teh
Sampel teh bubuk (0,2 g) diekstraksi dengan air suling atau pelarut organik. Untuk
ekstraksi air, teh hitam dan teh black mate dimasukkan dengan 10 ml air suling yang baru
direbus selama 10 menit dalam termos. Kemudian disaring dengan Whatman No. 1 dan
dengan cepat didinginkan di bawah air.
 Untuk ekstraksi pelarut organik, tiga konsentrasi yang berbeda (50%, 80% dan 100%)
dari aseton, DMF, etanol dan metanol digunakan. Eksperimen sebelumnya menunjukkan
bahwa ekstraksi DMF teh menghasilkan kandungan polifenol yang lebih tinggi dan
pemisahan kromatografi yang lebih baik dibandingkan dengan ekstraksi etanol dan aseton.
Meskipun, DMF bukan subjek penelitian untuk sekarang, DMF dimasukkan untuk menguji
kemungkinan untuk menjadi pelarut alternatif untuk pelarut umum lainnya untuk studi lebih
lanjut. Sampel teh bubuk (0,2 g) diekstraksi dengan 2 ml pelarut selama 1 jam pada pengocok
horizontal. Campuran disentrifugasi pada 8500g selama 10 menit dan selanjutnya
didekantasi. Residu diekstraksi ulang dua kali selama 2 jam dan prosedur ekstraksi diulang
dua kali selama 3 jam. Lima supernatan digabungkan dan disimpan pada suhu -18 C sampai
dianalisis. Setiap ekstraksi pelarut dilakukan dalam rangkap tiga.
Penentuan kandungan senyawa polifenol
Ferrous tartrate method (method # 1)
Kandungan polifenol teh (TP) dalam ekstrak teh ditentukan dengan metode
spektrofotometri. Satu mililiter ekstrak teh dipindahkan ke labu volumetrik 25 ml
untuk bereaksi dengan larutan pewarna 5 ml (1 g ferro sulfat dan 5 g kalium natrium
tartrat tetrahidrat dilarutkan dalam 1000 ml air suling), 4 ml air suling dan 15 ml
buffer (0,067 M kalium fosfat, pH 7,5). Diperlukan waktu beberapa menit untuk
menghasilkan warna. Pembacaan absorbansi dilakukan pada panjang gelombang 540
nm oleh spektrofotometer Shimadzu UV-VIS 1601, menggunakan larutan blanko air
suling.
Kandungan polifenol teh (TP) dihitung dengan perasamaan berikut:

Di mana L1 adalah volume total larutan ekstrak dalam ml; L2 adalah volume
larutan ekstrak yang digunakan untuk analisis dalam ml; M adalah massa daun teh
dalam mg; A adalah absorbansi pada 540 nm; 1,957: konstan, artinya ketika
absorbansi pada 540 nm adalah 0,5 pada kondisi sebelumnya, konsentrasi TP adalah
1,957 mg / ml.
Folin–Ciocalteu method (method # 2)
Jumlah total fenolik ditentukan dengan menggunakan metode Folin-Ciocalteu.
Kurva kalibrasi asam galat (berkisar antara 0,005 hingga 0,05 mg / ml), ditentukan
dari persamaan regresi kurva kalibrasi (y = 62,94x - 0,67, R = 0,99), dinyatakan
sebagai setara mg asam galat per gram sampel. Dalam metode ini, 1 ml ekstrak teh
dilarutkan 10-75 kali dengan air deionisasi (untuk mendapatkan absorbansi dalam
kisaran kurva kalibrasi yang disiapkan) dicampur dengan 1 ml reagen Folin-Ciocalteu
fenol yang dilarutkan 3 kali. Dua mililiter larutan natrium karbonat 35% ditambahkan
ke dalam campuran, dikocok hingga rata dan diencerkan hingga 6 ml dengan
menambahkan 2 ml air. Campuran dibiarkan selama 30 menit dan warna biru yang
terbentuk diukur pada panjang gelombang 700 nm menggunakan spektrofotometer.
 Penentuan aktivitas antioksidan dengan metode penangkal radikal DPPH
Aktivitas antioksidan sampel teh diukur dengan menggunakan uji DPPH.
Lima puluh mikroliter ekstrak teh diencerkan 15 kali lipat dengan air suling
(langsung, 5 dan 10 kali lipat dalam uji tambahan) dicampur dengan alikuot 1950
mikroliter 6 x 10-5 M DPPH radikal dalam metanol. Air suling digunakan sebagai
kontrol bukan ekstrak. Campuran reaksi dicampur dengan vortex dan didiamkan pada
suhu 25 ° C dalam gelap selama 60 menit. Absorbansi pada 517 nm diukur
menggunakan spektrofotometer menggunakan metanol sebagai blanko. Aktivitas
antioksidan dinyatakan sebagai persentase penghambatan radikal DPPH dan
ditentukan oleh persamaan berikut:

Uji Statistik
Semua data dinyatakan sebagai rata-rata ± standar deviasi dengan pengukuran
tiga kali dan dianalisis oleh SPSS untuk Windows (ver. 10.1). Analisis one way
(ANOVA) dan Duncan’s multiple range test dilakukan untuk menguji setiap
perbedaan yang signifikan antara pelarut yang digunakan. Perbandingan statistik
antara variabel (misalnya, polifenol dengan metode # 1-polifenol dengan metode # 2,
aktivitas antioksidan teh hitam-aktivitas antioksidan teh black mate dan polifenol teh
hitam-polifenol teh black mate) dilakukan dengan uji-t Student. Perbedaan dianggap
signifikan pada p <0,05. Korelasi antara variabel dibentuk dengan analisis regresi
HASIL AKHIR PENELITIAN
Ekstrak pelarut secara signifikan mempengaruhi total kandungan polifenol dan
aktivitas antioksidan dari ekstrak teh. Tingkatan dalam kandungan polifenol dari ekstrak yang
dihasilkan bervariasi tergantung pada konsentrasi pelarut, metode yang digunakan dan
tanaman teh. Terlepas dari metode yang digunakan, pelarut yang paling efisien untuk
ekstraksi polifenol adalah 50% DMF dan aseton 50% untuk teh hitam dan teh black mate.
Dalam kedua kasus, kandungan polifenol dari ekstrak aseton absolut adalah yang terendah.
Dalam penelitian ini, DMF yang belum digunakan untuk ekstraksi polifenol terbukti seefisien
pelarut yang biasa digunakan seperti aseton bahkan lebih untuk tujuan ini. Ekstrak 50%
aseton dan etanol 50% dari teh hitam dan teh black mate masing-masing menunjukkan
aktivitas antioksidan tertinggi. Korelasi yang baik diperoleh antara sifat antioksidan dari
ekstrak teh dan total kandungan polyfenolnya dan ekstrak teh black mate memiliki
kemampuan menangkal radikal yang lebih tinggi daripada teh hitam. Aktivitas antioksidan
yang lebih tinggi dari ekstrak teh black mate, kecuali untuk ekstrak air, dibandingkan dengan
teh hitam tampaknya konsisten dengan kandungan polifenol yang lebih tinggi ditentukan oleh
metode #2. Oleh karena itu, direkomendasikan bahwa metode #2 untuk penentuan polifenol
akan lebih tepat daripada metode #1 dalam penelitian selanjutnya.