Bahan dan Metode

1. ALT Bakteri

a. Bahan

1) Sampel Padat (Sempolan)

Sampel yang digunakan adalah sempolan (daging ayam olahan) yang

sudah digoreng dan dibeli di pinggir jalan depan gedung Keperawatan FK

Undip.

2) Nutrient Agar (NA)

Fungsi utama dari media nutrient agar (NA) adalah sebagai medium

kultivasi dan enumerasi (penghitungan) bakteri.

3) Aquades

Aquades merupakan air murni berwarna bening yang biasanya

digunakan sebagai pelarut.
4) Kapas

Dalam praktikum ini kapas digunakan sebagai penutup tabung reaksi.

5) Plastic wrap

Plastic wrap dalam praktikum ini digunakan sebagain perekat cawan petri

yang akan diinkubasi.

b. Alat

Nama Nama
No Gambar No Gambar
Alat Alat

Tabung
1 6 Tip biru
reaksi
 Rak
2 tabung 7 Autoclave
reaksi

Cawan
3 8 Inkubator
petri

Lampu
4 9 Mortar
spiritus

Mikropipet
5 100 –
1000 µl

c. Metode

1) Sterilisasi

Semua alat gelas dan beberapa bahan yang akan digunakan disterilisasi

menggunakan autoclave dengan suhu 121 0C selama 15 menit dengan

tekanan 1 atm.

2) Pengenceran Sampel

Tabung reaksi steril masing-

masing diisi 9 ml aquades
 pengencerannya (mulai 10-1, 10-2, 10-3 dst.)
dst

Tabung 1 diisi 1 ml sampel

Dihomogenkan
a) Sampel yang digunakan adalah 1 gram sampel padat yang sudah

diencerkan dengan cara dimasukkan ke tabung reaksi berisi 9 ml

Didapatkan suspense sampel dengan
pengenceran
aquades steril, kemudian 10-1 menggunakan vortex.
dihomogenkan

b) Pengambilan setiap larutan suspense dilakukan dengan menggunakan

Dari pengenceran 10-1 sebanyak 1 ml
mikropipet. dimasukkan ke tabung reaksi 2

c) Pengenceran sampel dilakukan secara duplo.

Dihomogenkan
3) Penanaman

Cawan petri sterilsuspense

Didapatkan sebanyaksampel
masing-masing
dengan
diberi tanda mulaipengenceran 1010
dari kontrol, -2 , 10 , dst.
-1 -2

Cawan petri
Dilakukan kontrol,yang
percobaan dimasukkan
sama sampai
1 ml aquades
pengenceran steril
10-6

Cawan petri 10-1, dimasukkan 1 ml dari

suspense sampel pengenceran 10-1

Didapatkan suspense sampel dengan

pengenceran 10-1, dst.

Media NA sebanyak 15-20 ml dimasukkan ke

masing-masing cawan petri yang berisi suspense
sampel

Cawan petri digoyang hingga

suspense sampel merata

Setelah media padat, cawan petri

direkatkan dengan plastic wrap

Inkubasi selama 24 jam dengan suhu

370C

Diamati dan dihitung jumlah koloni

yang ada
 a) Pengambilan suspense dilakukan dengan menggunakan mikropipet

b) Sebelum dimasukkan ke cawan petri, media NA ditunngu beberapa

menit sampai suhu berkisaran ±500C

c) Jumlah koloni bakteri dihitung menggunakan spidol

4) Perhitungan

a) Dihitung jumlah koloni pada kontrol dan tingkat pengenceran yang

dibuat

b) Ditentukan tingkat pengenceran yang dipakai dalam perhitungan

jumlah bakteri

1
c) Dimasukkan angka ke dalam rumus: H itung bakteri= A−B × × P
c

Keterangan:
A = jumlah koloni sampel
B = jumlah koloni kontrol
C = volume sampel ditanam (ml)
P = tingkat pengenceran sampel

2. Uji Daya Hambat Bakteri

a. Bahan

1) Sampel antibakteri

Sampel antibakteri yang dipakai adalah Citronella Oil Sereh Wangi dan

terdiri dari konsentrasi yang berbeda yaitu 25%, 50%, dan 100%.

2) Nutrient Agar (NA)

Fungsi utama dari media nutrient agar (NA) adalah sebagai medium

kultivasi dan enumerasi (penghitungan) bakteri.

 3) Strain murni bakteri

Strain murni bakteri yang digunakan dalam praktikum ini sudah

jadi,sehingga dapat langsung digunakan.

4) Blank disc

Blank disc digunakan untuk membuktikan daya hambat antibakteri.

5) Kapas

Kapas digunakan untuk menutuk tabung reaksi agar tidak terkontaminasi.

b. Alat
No Nama Alat Gambar No Nama Alat Gambar

1 Autoclave 6 Pinset steril

Tabung
2 Inkubator 7
reaksi steril

Lampu Rak tabung

3 8
spiritus reaksi

Lidi kapas
4 9 Penggaris
steril
 Cawan
5 10 Vortex
petri

c. Metode
1) Sterilisasi

Semua alat gelas dan beberapa bahan yang akan digunakan disterilisasi

menggunakan autoclave dengan suhu 121 0C selama 15 menit dengan

tekanan 1 atm.

2) Uji Daya Hambat Bakteri

Disiapkan media NA yang sudah ada di

cawan petri

Lidi kapas steril dicelupkan ke

dalam suspense bakteri

Lalu diratakan pada permukaan media

NA hingga merata

Didiamkan beberapa saat supaya

suspense bakteri meresap ke dalam agar

Blank disc diambil satu per satu

dengan pinset steril

Dicelupkan dalam sampel

antibakteri

Diletakkan pada permukaan media NA

dengan sedikit ditekan

Diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 370C

 mengukur diameternya dengan penggaris

a) Suspense bakteri harus benar-benar merata hingga menutupi seluruh

permukaan media NA

b) Cawan petri dibagi 4 bagian sesuai konsentrasi antibakteri (kontrol,

25%, 50%, dan 100%)

c) Blank disc diletakkan pada setiap bagian cawan petri masing-masing

d) Uji daya hambat bakteri dilakukan secara duplo

e) Hasil diameter zona hambat yang didapatkan adalah rata-rata 2

percobaan

f) Selama percobaan dilakukan di dekat spirtus agar sterilisasi tetap

terjaga

Himedia. 2003. Technical Data for Nutrient Agar. Mumbai: HiMedia Laboratories Pvt.

Ltd.