4.

5 Evaluasi Penyerapan Obat Oral pada Manusia

4.5.1 Asesmen Penyerapan Obat Menggunakan Data In Vivo

4.5.1.1 Estimasi Fraksi Obat yang Diserap Menggunakan Permeabilitas Injeksi Eksperimental
Dalam Vivo

Suatu metode in vivo telah berhasil ditetapkan untuk mengukur permeabilitas usus
manusia dengan perfusi usus in situ (Lennernas et al., 1997; Sun et al., 2002.2002; Cao etal.,
2006). Sebuah tabung perfusi, seperti yang diilustrasikan dalam Gambar. 4.8, ditempatkan di
jejunum manusia untuk memungkinkan lewat obat melalui segmen usus 10-cm. Konsentrasi
obat diukur pada saluran masuk dan keluar dari tabung perfusi. Permeabilitas obat kemudian
dihitung dengan Persamaan berikut Peff, manusia = Q (1 out Cout / Cin) / 2πRL, (4.17) di
mana Peff, manusia adalah permeabilitas obat di usus manusia, Q adalah laju aliran perfusi (2
menit ml − 1), Cin adalah konsentrasi obat inlet dari tabung perfusi, Cout adalah konsentrasi
obat keluar dari tabung perfusi, R adalah jari-jari usus halus manusia (2cm), dan L adalah
segmen perfusi 10 cm. Ketika permeabilitas diplot terhadap fraksi obat yang diserap,
hubungan dapat dibangun (4.18) (Gambar 4.9) (Amidon et al., 1988, 1995; Oh et al., 1993),
Fa = 1 − exp (−2An ) = 1 − exp (−2Peff, humanTres / R), (4.18) di mana Fa adalah daya tarik
dari diserap, Peff, manusia adalah kemampuan usus manusia, Tres adalah waktu transit di
usus kecil manusia (3 jam), R adalah jari-jari usus kecil manusia (2 cm) .

GAMBAR 4.8. Tabung perfusi untuk pengukuran permeabilitas usus manusia in situ
GAMBAR 4.9. Prediksi fraksi obat yang diserap menggunakan permeabilitas jejunum
manusia. Obat diberi label dengan simbol yang berbeda. Simbol tertutup adalah obat yang
diserap melalui proses yang dimediasi oleh pembawa, sementara simbol terbuka adalah obat
yang diserap melalui difusi pasif (Sun et al., 2002)

An= Peff,human×Tres/R.

Namun, ketika perfusi usus in situ dilakukan, konsentrasi obat yang rendah digunakan
untuk pengukuran permeabilitas. Dalam hal ini, konsentrasi obat selalu di bawah batas
kelarutannya. Karena sebagian kecil dari obat yang diserap adalah suatu fungsi dari kelarutan
dan permeabilitasnya, (4.18) tidak cocok untuk memprediksi daya serap obat yang diserap
ketika konsentrasi obat yang tinggi di atas in vivo batas kelarutan digunakan dalam
percobaan. (Yu et al., 1996; Yu and Amidon, 1999)

Fa = 1 − exp (−2An), ketika Cin <S, Cout <S, (4.19)

Fa = 2An / D0, ketika Cin> S, Cout> S, (4.20)

Fa = 1−1 / [D0 exp ( −2An + D0 −1)], ketika Cin> S, Cout <S, (4.21)

Di mana Fa adalah fraksi dari obat yang diserap, An = Peff, manusia × Tres / R, Cin
adalah konsentrasi inlet obat tabung perfusi, Cout adalah konsentrasi obat outlet tabung
perfusi, Peff, manusia adalah permeabilitas usus obat pada manusia, Tres adalah waktu transit
di usus halus manusia (3 jam), D0 adalah jumlah dosis [D0 = (dosis / volume) / S], dan S
adalah kelarutan obat. Tantangan untuk metode ini adalah bahwa permeabilitas usus obat
harus diperoleh secara in vivo pada manusia, yang sangat sulit dan tidak tersedia selama
tahap awal penemuan dan pengembangan obat. Sementara itu hubungan antara Cout (atau
Cin) dan kelarutan juga sulit untuk ditentukan secara in vivo.
4.5.1.2 Estimasi Dosis Penyerapan Maksimum Menggunakan Absorpsi In Vivo Tingkat
Konstan dan Kelarutan Obat

Metode lain bertujuan untuk memperkirakan dosis serap maksimum

(MAD)berdasarkan konstanta laju absorpsi in vivo (Curatolo, 1987) dengan yang berikut
persamaan MAD = SKaV T, (4,22) di mana S adalah kelarutan obat, Ka adalah laju
penyerapan konstan, V adalah volume air intake (250 ml), dan T adalah waktu transit di usus
kecil (3 jam). Misalnya, MAD bisa diperkirakan menggunakan nilai Ka yang berbeda (Tabel
4.1). Namun, Ka harus diperoleh dari studi farmakokinetik in vivo pada hewan atau manusia,
yang biasanya tidak tersedia selama tahap awal penemuan dan pengembangan obat. Atau, Ka
dapat diperkirakan dengan permeabilitas obat in vivo jika tersedia oleh (4.23) Ka = Peff,
manusia (A / V) = Peff, manusia (2π RL / π R2L) = Peff, manusia (2 / R), (4.23) di mana A
adalah area permukaan, V adalah volume, R adalah jari-jari, dan L adalah panjangnya usus
kecil. Namun, juga sulit untuk memperkirakan volume yang sesuai untuk perhitungan dalam
metode ini. Meskipun asupan air standar adalah 250 ml, setiap hari volume sekresi lambung
adalah 2.000 ml; volume sekresi usus berada dalam kisaran dari 1.500–2.000 ml; dan sekresi
empedu dan pankreas adalah 500-1.500 ml (Dressman et al.,1998).

4.5.1.3 Estimasi MAD dari Permeabilitas Obat dalam In Vivo pada Manusia dan Kelarutan
Obat

Pada keadaan stabil perfusi usus manusia in situ, fluks obat J adalah fungsi permeabilitas,
konsentrasi obat, dan luas permukaan penyerapan (Amidon et al., 1988, 1995; Oh et
al.,1993), Kemudian,

Di mana J adalah fluks obat, Peff, manusia adalah permeabilitas obat dalam usus
manusia, S adalah kelarutan obat, A adalah area permukaan penyerapan, T adalah waktu
transit di usus kecil (3 jam), R adalah jari-jari usus halus (2 cm), dan L adalah panjang usus
kecil (6 m). Perlu dicatat bahwa area permukaan usus kecil untuk penyerapan obat harus
mencakup luas permukaan vili dan mikrovili, tetapi luas permukaan yang dihitung pada
(4.24) hanya area permukaan tabung usus tanpa pertimbangan seperti itu. Namun, karena
permeabilitas yang diperoleh dalam perfusi in situ dihitung dengan (4.17), di mana luas
permukaan juga tidak termasuk vili dan mikrovili, kesalahan dibatalkan dalam perhitungan
MAD di (4.25), dan itu tidak mempengaruhi MAD estimasi jika permeabilitas usus manusia
digunakan. Contoh-contoh untuk estimasi MAD menggunakan permeabilitas dengan (4,25),
atau menggunakan Ka yang dihitung dari permeabilitas manusia dengan (4,22) dan (4,23)
dirangkum dalam Tabel 4.2. Sebagai perbandingan dari contoh-contoh pada Tabel 4.1 dan
4.2, nampaknya MAD mungkin diremehkan menggunakan konstanta laju absorpsi dalam
(4.22) karena asumsi 250 ml volume dalam perhitungan. MAD mungkin terlalu tinggi
menggunakan permeabilitas dalam (4,9) karena asumsi bahwa obat diserap pada konsentrasi
maksimum (pada kelarutannya) di seluruh wilayah usus kecil (6 m).

TABEL 4.2. Estimasi MAD menggunakan permeabilitas usus obat pada manusia dengan
mengikuti persamaan: MAD = Peff, humanS2π RLT, MAD = Peff, humanS AeffT, atau
dengan konstanta laju penyerapan yang dihitung (Ka) dengan persamaan berikut: Ka = Peff,
manusia ( 2 / R) dan MAD = S KaV T
 Dengan luas permukaan maksimum selama seluruh periode penyerapan 3 jam,
sementara pada kenyataannya hanya usus kecil parsial yang digunakan pada waktu tertentu.
Oleh karena itu, luas permukaan penyerapan efektif 800 cm 2 diusulkan untuk menghitung
MAD (Curatolo, 1987). Contoh-contoh untuk estimasi MAD menggunakan luas permukaan
efektif ini juga diringkas dalam Tabel 4.2. MAD menggunakan area permukaan penyerapan
efektif tampaknya lebih tepat. Jika MAD berdasarkan permeabilitas dan kelarutan di bawah
dosis klinis yang diperlukan, pengembangan formulasi, dan pengiriman akan sangat
menantang.

4.5.2 Penilaian Penyerapan Obat Menggunakan Data In Vitro

Ketika MAD diperkirakan dengan data in vivo, baik konstanta laju penyerapan in vivo, atau
obat permeabilitas usus in vivo diperlukan untuk perhitungan. Namun, selama tahap awal
penemuan dan pengembangan obat, data in vivo biasanya tidak tersedia. Tantangannya
adalah untuk mengoptimalkan proses untuk memilih com-pound untuk mengevaluasi studi
manusia in vivo berdasarkan data in vitro. Untungnya, permeabilitas obat dalam sel Caco-2
dan kelarutan obat secara rutin disaring di industri farmasi. Data ini dapat digunakan untuk
memprediksi fraksi dari obat yang diserap dan MAD pada manusia untuk mengidentifikasi
kandidat terbaik untuk pengembangan klinis lebih lanjut.
4.5.2.1 Kondisi Pengujian In Vitro untuk Menentukan Permeabilitas Obat dalam Sel Caco-2
dan Korelasi Permeabilitas In Vitro / In Vivo

Banyak laboratorium telah menetapkan metode untuk mengukur permeabilitas obat di

Indonesia Sel Caco-2 dengan kondisi pengujian yang berbeda (Chong et al., 1996; Yee, 1997;

GAMBAR 4.10. Korelasi permeabilitas in vitro / in vivo dari 20 obat pada pH 6,5. Korelasi
Koefisien (R2 = 0,7276) dihitung dari permeabilitas semua 20 obat. Korelasi Koefisien (R2 =
0,8492) dihitung dari permeabilitas obat berikut:furosemide, hidroklorotiazid, atenolol,
simetidin, manitol, terbutalin, metoprolol,propranolol, desipramine, antipyrine, piroxicam,
ketoprofen, dan naproxen. Korelasi Koefisien (R2 = 0,7854) dihitung dari permeabilitas obat
berikut:sefaleksin, enalapril, lisinopril, losartan, amoksisilin, fenilalanin, L-leusin, L-dopa, D-
glukosa, siklosporin, dan verapamil. Obat diberi label dengan simbol yang berbeda. Simbol
hitam adalah obat yang diserap melalui proses yang dimediasi oleh pembawa , sedangkan
simbol abu-abu dan terbuka obat yang diserap melalui difusi pasif (Sun et al., 2002)

(Pade dan Stavchansky, 1998; Yamashita et al., 2000). Beberapa laboratorium

menggunakan penyangga dengan pH 7,4 di kedua sisi apikal dan basolateral sel Caco-2,
sementara yang lain gunakan buffer pH 6,5 di sisi apikal dan buffer pH 7,4 di sisi basolateral.
Kapan analisis korelasi dilakukan antara permeabilitas obat in vitro di Caco-2 sel dan
permeabilitas obat in vivo pada manusia, korelasi yang lebih baik diamati antara
permeabilitas in vivo manusia dan permeabilitas Caco-2 diukur pada pH 6,5 dari pada pH 7,4
(Gambar 4.10 dan 4.11). Koefisien korelasi (R2) in vitro dan permeabilitas in vivo dari 24
obat yang diuji pada pH 7,4 adalah 0,5126 in (4,26), sementara koefisien korelasi
permeabilitas in vitro dan in vivo (R2) dari 20 obat ditentukan pada pH 6,5 adalah 0,7276 di
(4,27) (Sun et al., 2002).

Log Peff, human = 0.4926 Log Peff, Caco−2 − 0.1454, (4.26)

Log Peff, human = 0.6532 Log Peff, Caco−2 − 0.3036. (4.27)

GAMBAR 4.11. Korelasi permeabilitas in vitro / in vivo dari 24 obat pada pH 7,4. Korelasi
Koefisien (R2 = 0,5126) dihitung dari permeabilitas semua 24 obat. Koefisien korelasi (R2 =
0,8376) dihitung dari permeabilitas berikut ini obat: furosemide, hydrochlorothiazide,
atenolol, ranitidine, cimetidine, mannitol, terbutaline, creatine, metoprolol, propranolol,
desipramine, antipyrine, piroxicam, ketoprofen,dan naproxen. Koefisien korelasi (R2 =
0,6775) dihitung dari permeabilitas dari obat berikut: sefaleksin, enalapril, lisinopril, losartan,
amoksisilin, fenilalanin, L-leusin, L-dopa, D-glukosa, siklosporin, dan verapamil. Obat diberi
label dengan simbol yang berbeda. Simbol hitam adalah obat yang diserap melalui proses
pembawa-dimediasi, sementara simbol abu-abu dan terbuka adalah obat yang diserap melalui
difusi pasif (Sun et al., 2002)

verapamil, L-dopa, D-glukosa, dan L-leusin dikeluarkan, in vitro / in vivo korelasi

permeabilitas meningkat pada kedua pH, sehingga koefisien korelasi permeabilitas (R2) dari
15 obat yang difusi secara pasif pada pH 7,4 dan 13 secara pasif obat terdifusi pada pH 6,5
masing-masing 0,8376 in (4,28) dan 0,8492 in (4,29).
Log Peff, human = 0.6836 Log Peff, Caco−2 − 0.5579, (4.28)

Log Peff, human = 0.7524 Log Peff, Caco−2 − 0.5441. (4.29)

4.5.2.2 Estimasi Fraksi Obat yang Diserap Manusia Menggunakan In Vitro Permeabilitas
Obat dalam Sel Caco-2
Ketika permeabilitas obat in vitro dalam sel Caco-2 diplot terhadap fraksi obat diserap
pada manusia, hubungan juga dapat dibangun seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 4.12
dan 4.13 (Sun et al., 2002). Seperti yang ditunjukkan dengan jelas oleh data ini, mungkin sulit
memprediksi fraksi obat yang diserap untuk obat dengan permeabilitas Caco-2 yang rendah.

GAMBAR 4.12. Prediksi fraksi obat yang diserap menggunakan permeabilitas Caco-2
pada pH 6.5. Obat diberi label dengan simbol yang berbeda. Simbol tertutup adalah obat yang
diserap proses mediasi pembawa, sedangkan simbol terbuka adalah obat yang diserap melalui
difusi pasif (Sun et al., 2002)
 GAMBAR 4.13. Prediksi fraksi obat yang diserap menggunakan permeabilitas Caco-2
pada pH 7.4. Obat diberi label dengan simbol yang berbeda. Simbol tertutup adalah obat yang
diserap proses mediasi pembawa, sedangkan simbol terbuka adalah obat yang diserap melalui
difusi pasif (Sun et al., 2002)
Lebih banyak perbedaan juga diamati untuk obat dengan penyerapan yang dimediasi
oleh pembawa rute terutama ketika permeabilitas obat dalam sel Caco-2 diperoleh pada pH
7.4 di sisi apikal.
4.5.2.3 Estimasi MAD pada Manusia Berdasarkan Data In Vitro

Karena korelasi permeabilitas obat in vitro dan in vivo telah terbentuk pada (4.26),
permeabilitas obat in vivo pada manusia dapat dengan mudah diperkirakan dengan
permeabilitas obat in vitro dalam sel Caco-2. Meskipun beberapa substrat transporter
menunjukkan perbedaan yang tinggi dari korelasi permeabilitas in vitro / in vivo ketika
permeabilitas Caco-2 diperoleh pada pH 7,4, korelasi keseluruhan telah menunjukkan
prediksi yang masuk akal ketika permeabilitas Caco-2 diperoleh pada pH 6,5. Karena MAD
dapat diperkirakan menggunakan permeabilitas obat in vivo pada manusia dengan (4,25),
MAD dapat diperkirakan dengan permeabilitas obat in vitro dalam sel Caco-2 sebagai berikut
(4,30) (Sun et al., 2002)

MAD = Peff, humanS AeffT = 10(0.6532 Log Peff,Caco−0.3036) S AeffT, (4.30)

permeabilitas obat in vitro dalam sel Caco-2, S adalah kelarutan obat, Aeff adalah
area permukaan penyerapan yang efektif tanpa mempertimbangkan vili dan mikrovili. T
adalah waktu transit di usus kecil (3 jam). Seperti yang dibahas sebelumnya, kesalahan
dikaitkan ketika tidak mempertimbangkan luas permukaan vili dan mikrovili dibatalkan
dalam perhitungan MAD menggunakan permeabilitas pada (4,25) dan (4,30). Selain itu, luas
permukaan mikrovili dalam sel Caco-2 juga tidak relevan dalam perhitungan MAD, karena
permeabilitas manusia dihitung dengan permeabilitas Caco-2 dengan analisis korelasi. MAD
dapat diperkirakan menggunakan (4,22) dan (4,23), di mana Ka dapat diperkirakan dengan
permeabilitas manusia in vivo atau Caco-2 permeabilitas in vitro dengan yang berikut (4,31).

Ka = Peff, human(2/R) = (2/R)10(0.6532 Log Peff,Caco−0.3036) , (4.31)

Dimana Peff, manusia adalah obat permeabilitas in vivo pada manusia, Peff, Caco
adalah obat permeabilitas in vitro dalam sel Caco-2, dan R adalah jari-jari usus kecil (2 cm).
Contoh estimasi MAD menggunakan permeabilitas obat in vitro dalam sel Caco-2 dirangkum
dalamTabel4.3.

4.5.3 Correlation of Oral Drug Bioavailability and Intestinal Permeability Between Rat and
Human, penyerapan obat

Dalam model hewan dapat digunakan untuk memprediksi penyerapan obat pada
manusia .Perbandingan korelasi nilai bioavailabilitas oral (F) dari 48 obat pada tikus dan
manusia korelasi (r 2 = 0,29)).dengan, kolerasi dalam ketersediaan hayati 35 obat antara
monyet dan manusia dengan r 2 = 0,502 disebabkan oleh lebih dekat kesamaan fisiologis
antara monyet dan manusia. Data ini menunjukkan bahwa bioavailabilitas oral pada tikus
tidak dapat digunakan untuk memprediksi bioavailabilitas obat oral pada manusia. Karena
kesamaan struktural membran usus.
GAMBAR 4.14. Korelasi ketersediaan hayati oral antara tikus dan manusia. Total 48 obat
diplot. Persamaan tersebut menjelaskan korelasi untuk bioavailabilitas oral tikus (Frat) dan
bioavailabilitas oral manusia (Fhuman) (Cao et al., 2006)

GAMBAR 4.15. Korelasi permeabilitas obat pada jejunum tikus dan jejunum manusia.
Koefisien permeabilitas (Peff) ditentukan oleh perfusi usus in situ. Persamaan
menggambarkan korelasi untuk permeabilitas tikus (Prat) dan permeabilitas manusia
(Phuman) (Cao et al., 2006)

Dengan permeabilitas obat di jejunum manusia (Gbr. 4.15). Itu menunjukkan obat itu
permeabilitas pada tikus umumnya lima sampai sepuluh kali lipat lebih rendah dari
permeabilitas dalam manusia. Namun, kedua obat yang dimediasi oleh pembawa dan pasif
menunjukkan korelasi yang masuk akal (r 2 = 0,7). Menariknya, verapamil (substrat P-gp)
permeabilitas pada manusia menyimpang dari kurva korelasi. Korelasi permeabilitas antara
manusia dan tikus sangat meningkat (r 2 = 0,8) ketika verapamil dikecualikan dalam analisis.
 Penelitian ini sesuai dengan laporan lain, bahwa persentase penyerapan 98 obat
berkorelasi antara tikus dan manusia dengan korelasi r 2 = 0,88 (Zhao et al., 2003). Untuk
memahami mekanisme yang mendasari kesamaan dalam penyerapan obat usus antara
manusia dan tikus, analisis korelasi ekspresi tingkat transporter dan enzim metabolisme
antara tikus dan usus manusia lebih lanjut dilakukan (Cao et al., 2006). Korelasi sedang
(denganr 2> 0,56) ditemukan untuk tingkat ekspresi transporter di duodenum manusia dan
tikus. Meskipun ada perbedaan yang diamati dalam ekspresi MDR1, MRP3, GLUT1, dan
GLUT3, transporter lainnya (seperti PepT1, SGLT-1,GLUT5, MRP2, NT2, dan transporter
afinitas glutamat tinggi) dan keseluruhan ekspresi pengangkut narkoba berbagi tingkat
ekspresi yang sama pada manusia dan usus tikus dengan pola ekspresi dependen regional,
yang memiliki ekspresi tinggi di usus kecil dan ekspresi rendah di usus besar. Data ini
menyediakan mekanisme molekuler untuk persamaan dan korelasi penyerapan obat (Fa) di
usus kecil antara tikus dan manusia. Sebaliknya, ekspresi enzim metabolisme (CYP3A4 /
CYP3A9 dan UDPG) menunjukkan 12 hingga 193-lipat perbedaan antara usus manusia dan
tikus dengan ketergantungan regional yang berbeda pola ekspresi. Tidak ada korelasi yang
ditemukan untuk ekspresi metabolism Enzim antara tikus dan usus manusia, yang
menunjukkan perbedaan obat metabolisme dalam dua spesies yang berbeda dan tantangan
dalam memprediksi Fg dan F dari tikus ke manusia.