Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997

Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Jurnal Internasional Makromolekul Biologi

beranda j ourna l: ht tp: / /www.el sevi er .com / l ocate / ijbi omac

Desain rotasi komposit pusat faktorial penuh untuk imobilisasi laktase dalam hidrogel berbasis
polisakarida alami dan hidrolisis laktosa

Mariane Wolf, Alexandre Tadeu Paulino •

Universitas Negeri Santa Catarina, Departemen Teknik Makanan dan Kimia, BR 282, Km 574, CEP: 89870-000 Pinhalzinho, SC, Brasil

articleinfo abstrak

Sejarah artikel: Desain rotasi komposit sentral faktorial lengkap (FFCCRD) diterapkan untuk mempelajari imobilisasi laktase dalam hidrogel berbasis gum dan
Diterima 5 April 2019 kitosan Arab, dan hidrolisis laktosa. Kapasitas imobilisasi optimal kedua hidrogel yang bertujuan untuk mendapatkan aktivitas enzim
Diterima dalam bentuk revisi 1 Juni 2019 Diterima
terimobilisasi tinggi dan fraksi lepas rendah ditentukan pada 25.0 ° C, 39.88 mg mL - 1 konsentrasi enzim awal dan pH 6,5. Aktivitas enzim amobil
5 Juni 2019
dan fraksi pelepasan dari hidrogel berbasis gum arab adalah 0,322 U mg - 1 dan 0,193, masing-masing, selama hidrolisis laktosa yang
Tersedia online 6 Juni 2019
terkandung dalam UHTmilk. Nilai ini 0,289 Umg - 1 dan 0,136, masing-masing, menggunakan hidrogel berbahan kitosan. Aktivitas enzim amobil
dan fraksi yang dilepaskan dari hidrogel ini selama hidrolisis laktosa standar adalah 0,246 U mg. - 1 dan 0,407, dan 0,211 U mg - 1 dan 0,245,
Kata kunci:
Desain faktorial masing-masing. Kondisi terbaik untuk imobilisasi laktase dan hidrolisis laktosa dicapai dengan penerapan FFCCRD, yang dibandingkan dengan
Hidrogel hasil eksperimen.
Laktase
Laktosa
Hidrolisis © 2019 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.

1. Perkenalan
Hidrolisis laktosa melalui reaksi enzimatik dengan laktase sangat penting untuk proses industri
bioteknologi yang diterapkan dalam produksi makanan laktosa dosis rendah atau bebas laktosa [ 1 , 2 ].
Namun, laktase bebas benar-benar dinonaktifkan setelah fi siklus pertama hidrolisis [ 3 ]. Oleh karena
itu, imobilisasi laktase dalam matriks padat dengan tujuan menghidrolisis laktosa adalah strategi yang
menjanjikan untuk menghasilkan makanan laktosa dosis rendah atau bebas laktosa [ 3 , 4 ]. Imobilisasi
laktase dalam matriks padat memungkinkan hidrolisis laktosa untuk beberapa siklus berturut-turut
selama produksi makanan olahan susu [ 5 ]. Hidrogel berbasis polisakarida alami merupakan matriks
padat potensial untuk imobilisasi laktase karena biodegradabilitas, biokompatibilitas dan
non-toksisitasnya [ 6 - 8 ].
Hidrogel dibentuk oleh jaringan polimer hidrofilik bertaut silang yang dapat menyerap konsentrasi
besar air, pelarut dan biologis.
fl cairan, yang juga ef fi cientmatrices untuk enzim / protein imobilisasi [ 4 , 9 , 10 ]. Mekanisme penyerapan amobil. . Imobilisasi laktase dan hidrolisis laktosa diprediksi dan dipelajari secara eksperimental pada
air dan imobilisasi zat terlarut dalam jaringan hidrogel dapat dijelaskan dengan persamaan difusi Fick
dengan somemodi. fi kation [ 11 , 12 ]. Jaringan aporous dari hidrogel berbasis polisakarida alami
dipengaruhi oleh derajat ikatan silang, yang mengubah koefisien difusi zat terlarut. fi efisien, kapasitas
imobilisasi dan
rilis terkontrol pro fi le [ 13 , 14 ]. Proses pelepasan protein / enzim yang dikendalikan juga dipengaruhi
oleh penyerapan dan desorpsi molekul air [ 11 ]. Kajian absorpsi air dan imobilisasi laktase pada
jaringan hidrogel dilakukan dengan memvariasikan suhu, pH dan kekuatan ionik bertujuan untuk
mendapatkan keuntungan / keuntungan terbaik. fi t untuk proses industri hidrolisis laktosa [ 5 - 15 ].
Imobilisasi, adsorpsi dan pelepasan zat terlarut dari hidrogel juga dapat dipelajari dengan desain
faktorial [ 16 ]. Dalam hal ini, efek faktor gabungan dan interaksinya mengubah fi tanggapan akhir [ 17 , 18 ].
Desain rotasi komposit pusat faktorial penuh (FFCCRD) dan metodologi permukaan respons (RSM)
diterapkan secara luas untuk memprediksi efek gabungan di antara faktor-faktor yang berbeda [ 19 , 20 ].
Kombinasi dari metodologi ini memungkinkan untuk de fi ne efek dari variabel independen individu
atau variabel independen gabungan selama imobilisasi laktase dalam hidrogel, dan hidrolisis laktosa [ 21
, 22 ]. Selain itu, model matematika fundamental dihasilkan untuk menjelaskan data eksperimen [ 23 , 24 ].
Dengan demikian, tujuan dari penelitian ini adalah untuk menerapkan desain rotasi komposit sentral
faktorial lengkap (FFCCRD) untuk mempelajari imobilisasi laktase dalam hidrogel gumbased Arab
(AGBH) dan hidrogel berbasis kitosan (CBH), dan kemudian hidrolisis laktosa menggunakan laktase
suhu yang berbeda, konsentrasi enzim awal dan nilai pH. Akhirnya, data yang diprediksi oleh
FFCCRD dibandingkan dengan hasil eksperimental untuk simulasi situasi dunia nyata.

• Penulis yang sesuai.

Alamat email: alexandre.paulino@udesc.br (DI Paulino).

https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2019.06.032
0141-8130 / © 2019 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.
 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997 987

Tabel 1 Tabel 3
Nilai variabel berkode dan nyata (antara tanda kurung). Variabel independen: suhu Analisis varian diterapkan pada studi imobilisasi laktase di AGBH dan CBH.
ture (x 1), konsentrasi laktase awal (x 2) dan pH (x 3).
Sumber dari Jumlah dari Derajat Berarti F dihitung F ditabulasi R2
Percobaan Kondisi eksperimental variasi kotak kebebasan kotak

x1 x2 x3 Hidrogel berbahan dasar permen karet arab (AGBH)

Regresi 18.693,91 7.00 2670,56 42.35 2.39 93.15

1 - 1 (20.0) - 1 (24,46) - 1 (6.0)
Sisa 1639.52 26.00 63.06
2 + 1 (20.0) - 1 (55,30) - 1 (6.0)
Total 20.333.43 33.00 616.16
3 - 1 (30,0) + 1 (24,46) - 1 (6.0)
4 + 1 (30.0) + 1 (55,30) - 1 (6.0) Hidrogel berbasis kitosan (CBH)
5 - 1 (20.0) - 1 (24,46) + 1 (7.0) Regresi 28.323.18 7.00 4046.17 41.01 2.39 92.89
6 + 1 (20.0) - 1 (55,30) + 1 (7.0) Sisa 2565.09 26.00 98.66
7 - 1 (30,0) + 1 (24,46) + 1 (7.0) Total 30.888,27 33.00 936.01
8 + 1 (30.0) + 1 (55,30) + 1 (7.0)
9 - 1,68 (16,59) 0 (39,88) 0 (6,5)
10 + 1,68 (33,41) 0 (39,88) 0 (6,5)
11 0 (25,0) - 1,68 (13,65) 0 (6,5)
dicuci dengan air ultra murni, dipotong menjadi potongan silinder, dibekukan dalam Ultra freezer
12 0 (25,0) + 1,68 (66,60) 0 (6,5)
(IULT 335 D, Indrel, Brazil), beku-kering (TFD5503, Ilshin Lab. Co. Ltd., Korea) di - 60,0 ± 1,0 ° C
13 0 (25,0) 0 (39,88) - 1,68 (5,66)
14 0 (25,0) 0 (39,88) + 1,68 (7,34) selama 24 jam, dan diterapkan untuk imobilisasi laktase. Sebuah AGBH disintesis dalam dua
15 0 (25,0) 0 (39,88) 0 (6,5) langkah: Pertama, 12,0 g AG dilarutkan dalam air ultra murni pada
16 0 (25,0) 0 (39,88) 0 (6,5)
17 0 (25,0) 0 (39,88) 0 (6,5)
60,0 ± 1,0 ° C dengan pengadukan konstan, menyesuaikan pH larutan menjadi
3.0 dengan asam klorida pekat. Selanjutnya, 1,35 g GMA ditambahkan, dan larutan encer dibiarkan
terus diaduk pada suhu 50,0 ± 1,0 ° C selama 24 jam dalam reaktor tertutup. Modi tersebut fi polisakarida
2. Bahan-bahan dan metode-metode diendapkan dalam etanol, dipisahkan dengan sentrifugasi, dicuci dengan air ultra murni, dibekukan
dalam Ultra freezer dan dibekukan pada - 60,0 ± 1,0 ° C selama 24 jam. Kedua, 7,50 g modi fi ed AG
2.1. Reagen dilarutkan dalam 50,0 mL air ultra murni pada 50,0 ± 1,0 ° C. Lanjut,

Gum arab (AG), kitosan (CS), glycidyl methacrylate (GMA), akrilamida (AAm), kalium persulfat
(PPS), asam akrilat (AcA), N, N ′ -
methylenebisacrylamide (MBA), asam asetat (AAc), Bradford reagent (BR) dan bovine serum albumin
(BSA) semuanya dibeli dari Sigma-Aldrich®. Laktase (ECnumber 3.2.1.23) dipasok oleh Prozyn®
Brazil. Reagen lain yang digunakan adalah semua kelas analitik dan semua larutan disiapkan dengan
air ultra murni.
140,0 mg PPS dan 1,50 mg AAm ditambahkan, dan larutan encer dibiarkan terus diaduk pada suhu
65,0 ± 1,0 ° C selama 90 menit dengan tujuan menyelesaikan reaksi kopolimerisasi. Hidrogel yang
terbentuk direndam dalam air ultra murni, dipotong berbentuk silinder, dibekukan dalam Ultra freezer,
dan dibekukan pada - 60,0 ± 1,0 ° C selama 24 jam untuk diterapkan dalam imobilisasi laktase.

2.2. Sintesis hidrogel berbasis polisakarida alami 2.3. Desain faktorial

CBH disintesis dengan melarutkan 0,30 g CS dalam 30,0mL 2,0% AAc, deaerasi larutan selama
30 menit untuk menghilangkan oksigen dan menghasilkan atmosfer inert. Selanjutnya, larutan
deaerasi yang mengandung 15,0 mL air murni, 140,0 mg PPS, 3,57 g AcA dan 150,0 mg MBA
ditambahkan ke dalam sistem ini, dan dibiarkan terus diaduk pada 70,0 ±
1,0 ° C selama 3 jam dengan tujuan menyelesaikan reaksi kopolimerisasi. Hidrogel yang terbentuk
direndam dalam 0.100 mol L - 1 Larutan NaOH,
Sebuah desain rotasi komposit pusat faktorial penuh (FFCCRD) adalah
digunakan untuk memprediksi efek suhu (° C) (x 1), awal en-
konsentrasi zyme (mg mL - 1) ( x 2) e pH (x 3) selama imobilisasi laktase di AGBH dan CBH. FFCCRD
dengan enam titik aksial ( α
± 1,68) dan tiga ulangan pada titik pusat, dengan total 17 percobaan dalam rangkap, dijelaskan
dalam Tabel 1 . Kapasitas imobilisasi (mg g - 1), aktivitas enzim (Umg - 1) dan melepaskan fraksi enzim

Meja 2
Rata-rata kapasitas imobilisasi laktase, aktivitas enzimatik dan fraksi laktase yang dilepaskan dari hidrogel berbasis gum arab (AGBH) dan hidrogel berbasis kitosan (CBH) dengan mengaplikasikan FFCCRD.

Uji coba Kapasitas imobilisasi (mg g - 1) Aktivitas enzimatik (U mg - 1) Pecahan terbebaskan

AGBH CBH AGBH CBH AGBH CBH

1 99,18 ± 0,31 125,39 ± 1,62 0,156 ± 0,001 0,136 ± 0,001 0,348 ± 0,002 0,223 ± 0,007
2 95,66 ± 0,52 119,30 ± 1,04 0,205 ± 0,001 0,174 ± 0,002 0,456 ± 0,004 0,268 ± 0,007
3 104,81 ± 0,48 129.19 ± 1.41 0,204 ± 0,000 0,174 ± 0,001 0,463 ± 0,001 0,294 ± 0,007
4 101,21 ± 0,71 124,37 ± 2,15 0,299 ± 0,001 0,256 ± 0,002 0,598 ± 0,000 0,376 ± 0,003
5 103,35 ± 0,66 130,81 ± 1,47 0,108 ± 0,002 0,092 ± 0,001 0,140 ± 0,000 0,174 ± 0,007
6 77.06 ± 0.31 98.07 ± 2.07 0,131 ± 0,001 0,113 ± 0,001 0,277 ± 0,000 0,156 ± 0,004
7 129.36 ± 1.26 159,63 ± 4,50 0,183 ± 0,001 0,156 ± 0,000 0,208 ± 0,000 0,130 ± 0,001
8 91,76 ± 0,00 115,11 ± 0,57 0,231 ± 0,000 0,197 ± 0,000 0,311 ± 0,001 0,197 ± 0,004
9 80,19 ± 0,42 102.03 ± 2.01 0,258 ± 0,001 0,223 ± 0,001 0,519 ± 0,000 0,329 ± 0,007
10 106,63 ± 0,94 134.43 ± 0.44 0,093 ± 0,001 0,079 ± 0,000 0,214 ± 0,000 0,136 ± 0,003
11 87.95 ± 0.72 109,38 ± 0,10 0,105 ± 0,001 0,126 ± 0,001 0,172 ± 0,000 0,105 ± 0,003
12 138,50 ± 0,83 170.49 ± 4.77 0,321 ± 0,000 0,277 ± 0,002 0,534 ± 0,001 0,288 ± 0,007
13 95,67 ± 0,68 118,93 ± 0,08 0,125 ± 0,000 0,093 ± 0,004 0,205 ± 0,000 0,136 ± 0,004
14 91,11 ± 0,77 113,01 ± 2,21 0,254 ± 0,001 0,216 ± 0,002 0,539 ± 0,002 0,336 ± 0,002
15 151,81 ± 0,48 188.71 ± 2.09 0,249 ± 0,001 0,214 ± 0,001 0,399 ± 0,000 0,252 ± 0,005
16 150,87 ± 0,02 189.58 ± 1.38 0,243 ± 0,001 0,207 ± 0,000 0,415 ± 0,000 0,245 ± 0,000
17 150,86 ± 0,71 189,39 ± 0,28 0,246 ± 0,000 0,211 ± 0,002 0,408 ± 0,000 0,239 ± 0,000
988 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997

digambarkan sebagai variabel dependen. Suhu tubuh 16,59 dan 33,41 ° C, konsentrasi laktase awal
13,65 dan 66,60 mg mL - 1, dan pH
5.66 dan 7.34 masing-masing adalah tingkat inferior dan superior. Validasi model matematika yang
diusulkan didasarkan pada uji-F dan koefisien determinasi fi cient (R 2). Setiap faktor dan interaksi
dipelajari dengan mempertimbangkan signifikansinya fi tidak bisa masuk fl pengaruh masing-masing
tanggapan pada 95% con fi tingkat dence (hal b 0,05) [ 25 ]. Metodologi permukaan respons (RSM)
digunakan untuk menggambarkan efek individu dan kumulatif dari variabel uji dan efek selanjutnya
pada respons masing-masing. FFCCRD dilakukan menggunakan perangkat lunak Statistica 7.0®
dengan mempertimbangkan semua percobaan dalam duplikat, dengan sertifikat reproduktifitas. fi dikategorikan
setelah mengulangi beberapa uji coba secara acak

Sebuah) b)
70

60

C Enzyme ( mg mL- 1)
50

40
150
30 120
100

20 80
60
40
10
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 20
0
Suhu (° C)

c) d)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
140
6.2 120
6.0 100
5.8 80
5.6 60
5.4 40
10 20 30 40 50 60 70 20
0
C Enzim ( mg mL- 1)

e) f)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0 140

5.8 100
60
5.6
20
5.4
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0

Suhu (° C)

Gambar 1. Respon permukaan dan diagram kontur untuk imobilisasi laktase dalam hidrogel berbasis gum arab sebagai fungsi suhu dan konsentrasi laktase awal (a, b), konsentrasi laktase awal dan pH (c, d), serta suhu dan pH (e, f) .
 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997 989

hari. Analisis varians dan regresi digunakan dengan tujuan untuk menentukan signifikansi fi tidak dapat hubungan matematika antara faktor dan tanggapan disajikan dalam Persamaan. (1) :
secara statistik memodelkan parameter dan koefisien regresi fi cients. Model matematis polinomial
linier dan kuadrat, serta efek interaksi antara parameter uji untuk setiap variabel respon dijelaskan
dengan menerapkan metodologi kuadrat-terkecil [ 26 ]. Model polinomial kuadrat diterapkan untuk X Xk k -X1 K
X
Y ¼ β Hai þ k β saya X saya þ β ii X saya 2 þ β aku j X saya X j ð1Þ
saya ¼ 1 saya ¼ 1 saya ¼ 1 j¼2

Sebuah) b)
70

60

C Enzyme ( mg mL- 1)
50

40

30
180
140
20
100
60
10
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 20
0
Suhu (° C)

c) d)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0 180
5.8 140
5.6 100
5.4 60
10 20 30 40 50 60 70 20
0
C Enzim ( mg mL- 1)

e) f)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0
5.8 150

5.6 100
50
5.4
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0

Suhu (° C)

Gambar 2. Respon permukaan dan diagram kontur untuk imobilisasi laktase pada hidrogel berbasis kitosan sebagai fungsi dari temperatur dan konsentrasi awal laktase (a, b), konsentrasi laktase awal dan pH (c, d), serta temperatur dan pH (e,
f).
990 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997

Tabel 4 hidrolisis laktosa diperoleh dengan merendam potongan AGBH dan CBH yang mengandung laktase
Analisis varian diterapkan pada studi aktivitas enzimatik laktase amobil di AGBH dan CBH.
amobil dalam gelas Erlenmeyer fl bertanya dengan baik larutan laktosa standar atau sampel susu
UHT, disiapkan di speci fi c penyangga. Sampel yang sama dikumpulkan pada interval waktu 0, 30,
Sumber dari Jumlah dari Derajat Berarti F dihitung F ditabulasi R2
variasi kotak kebebasan
60, 120, 180 dan 240 menit dengan tujuan untuk menentukan konsentrasi glukosa dan protein oleh
Hidrogel berbahan dasar permen karet arab (AGBH) UV - vis spektrofotometri sesuai dengan yang dijelaskan pada Bagian 2.4 hingga 2.6 .
Regresi 0.15 6.00 0,02 58.08 2.46 94.62
Sisa 0,01 27.00 0,00
Total 0.16 33.00 0,00
3. Hasil dan Pembahasan
Hidrogel berbasis kitosan (CBH)
Regresi 0.11 6.00 0,02 72.76 2.46 95.45
3.1. Kapasitas imobilisasi, aktivitas enzimatik dan fraksi yang dilepaskan
Sisa 0,01 27.00 0,00
Total 0.11 33.00 0,00
Meja 2 menunjukkan rata-rata kapasitas imobilisasi laktase, aktivitas enzimatik dan fraksi laktase
yang dilepaskan dari AGBH dan CBH dengan menerapkan FFCCRD. Kapasitas imobilisasi AGBH
berkisar antara 77,06 ± 0,31 hingga 151,81 ± 0,48 mg laktase per g hidrogel kering; sedangkan
di mana Y adalah respons yang diprediksi, β 0, β saya, β ii dan β aku j adalah regresi kapasitas imobilisasi CBH berkisar antara 98.07 ± 2.07 hingga 189.58 ± 1.38mg laktase per g
coef fi klien dari model yang diterapkan, X saya dan X j adalah variabel independen berkode. hidrogel kering pada percobaan yang berbeda. Aktivitas enzimatik laktase yang diimobilisasi di AGBH
berkisar antara 0,093 ± 0,001 hingga 0,321 ± 0,000 U mg - 1, dan aktivitas enzimatik laktase yang
diimobilisasi di CBH berkisar antara 0,092 ± 0,001 hingga 0,277 ±
2.4. Imobilisasi laktase dalam hidrogel

Uji eksperimental untuk imobilisasi laktase dalam AGBH dan CBH dilakukan dengan
mencampurkan 100.0mg potongan hidrogel kering dalam fi c larutan penyangga. Selanjutnya, larutan
alikuot dikumpulkan pada interval waktu dari 0 sampai 480 menit untuk penentuan konsentrasi
laktase menurut metode Bradford [ 27 ], menggunakan UV - vis spektrofotometer (Femto Cirrus 80SA).
Kasus imobilisasi laktase
0,002 U mg - 1. Akhirnya, fraksi laktase yang dilepaskan dari AGBH berkisar dari 0,140 ± 0,000 sampai
0,598 ± 0,000, dan nilai-nilai ini dari 0,105 ± 0,003 sampai 0,376 ± 0,003 untuk laktase yang
diimobilisasi di CBH. Variasi statistik kecil ditemukan untuk variabel respon di titik pusat,
menunjukkan pengulangan yang baik dari data eksperimen.

pacities (q e) hidrogel dihitung menggunakan Persamaan. (2) :

3.1.1. Kapasitas imobilisasi
Tabel 3 menunjukkan hasil analisis varians (ANOVA) diterapkan pada studi imobilisasi laktase di
q e ¼ C ð t ¼ 0 Þ - C tersisa ∙ V. ð2Þ
mSðt¼0Þ AGBH dan CBH. Data regresi signifikan secara statistik fi cant untuk nilai p lebih rendah dari 0,05. Dari
persamaan regresi (Persamaan. (4) dan (5) ), dapat disimpulkan
di mana C ( t = 0) dan C tersisa adalah kandungan laktase awal dan sisa
konsentrasi dalam larutan, masing-masing, m s (t = 0) adalah massa hidrogel kering dan V adalah x itu 1, x 2 dan x 3 ( efek linier), x 2, x 2 1 2 dan x2 3( efek kuadrat) dan
volume larutan. x 1 x 3 ( interaksi efek linier) adalah signi fi parameter cant selama proses imobilisasi laktase dalam
hidrogel. Kontribusi qua-
2.5. Aktivitas enzimatik laktase amobil istilah drastis juga diwakili oleh diagram cembung pada respon permukaan [ 25 ]. Signi fi efek variabel
cant selama imobilisasi laktase di AGBH dan CBH dijelaskan oleh model matematika yang
AGBH dan CBH yang mengandung laktase amobil direndam dalam kaca Erlenmeyer fl meminta direpresentasikan dalam Persamaan. (4) dan (5) , masing-masing.
yang mengandung campuran spesi fi c buffer dan laktosa. Aliquot larutan dikumpulkan dari 0 sampai
240 menit untuk penentuan konsentrasi glukosa yang terbentuk menggunakan UV - vis
spektrofotometer pada 504 nm dan kit enzimatik (Bioclin®). Aktivitas enzimatis diperkirakan melalui
qe AGBH ¼ 150: 898 þ 3: 423x 1 - 19: 879x 2 1
reaksi hidrolisis laktosa dan diekspresikan sebagai Umg - 1 ( μ mol glukosa yang terbentuk untuk setiap 2 - 5: 43x 3 - 19: 604x 2
þ 10: 008x 2 - 12: 675x 2 3- 7: 152x 1 x 3 ð 4 Þ
menit reaksi per mg laktase amobil).

qe CBH ¼ 188: 942 þ 4: 384x 1 - 24: 117x 2 1

2 - 7: 184x 3 - 24: 917x 2
þ 11: 533x 2 - 16: 443x 2 3- 8: 294x 1 x 3 ð 5 Þ
2.6. Fraksi laktase yang dilepaskan

Fraksi laktase yang dilepaskan ditentukan dengan cara merendam potongan AGBH dan CBH di mana qe AGBH dan qe CBH adalah kapasitas imobilisasi laktase
kering yang mengandung laktase amobil dalam gelas Erlenmeyer. fl tanya dengan speci fi c larutan yang AGBH dan CBH, masing-masing, dan x 1, x 2 dan x 3 adalah variabel bebas (suhu, konsentrasi
penyangga. Selanjutnya, alikuot larutan dikumpulkan pada interval waktu dari 0 hingga 240 menit laktase awal dan pH,
untuk penentuan konsentrasi laktase menggunakan UV. - vis spektrofotometri dan metode Bradford [ 27 masing-masing).

]. Fraksi laktase yang dilepaskan dihitung menggunakan Persamaan. (3) :
Fraksi laktase yang dilepaskan ¼ Konsentrasi laktase yang dilepaskan
Konsentrasi laktase yang tidak dapat bergerak
Sebagai F dihitung nilai lebih tinggi dari F. ditabulasi nilai, dan
F dihitung / F ditabulasi rasio sekitar 17,50, model ini dapat diterapkan untuk menjelaskan imobilisasi laktase
di AGBH
dan CBH [ 25 ]. Menurut koefisien determinasi fi klien (R 2), dimungkinkan untuk menyimpulkan bahwa
kapasitas imobilisasi laktase dari AGBH dan CBH dijelaskan dengan reliabilitas masing-masing 93,15
ð3Þ
dan 92,89% [ 28 ]. Gambar. 1 dan 2 menunjukkan permukaan respons 3D dan diagram kontur 2D
untuk imobilisasi laktase di AGBH dan CBH. Dari permukaan respon dan diagram kontur ditemukan
pengaruh variabel independen dalam proses imobilisasi. Kapasitas imobilisasi laktase optimal dari

2.7. Hidrolisis laktosa AGBH dan CBH dicapai pada 25,0 ± 1,0 ° C, 39,88 mg mL - 1

Hidrolisis laktosa menggunakan laktase amobil dioptimalkan dengan FFCCRD dengan

mempertimbangkan kapasitas imobilisasi yang optimal, aktivitas enzimatik dan fraksi yang
dilepaskan. Hasil percobaan untuk konsentrasi laktase awal dan pH 6,5.
 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997 991

Kapasitas imobilisasi laktase CBH lebih tinggi dari pada AGBH. Hasil ini dapat dikaitkan dengan
ukuran pori dan derajat ikatan silang hidrogel [ 29 ], serta dengan ukuran molekul enzim [ 30 Selain itu,
suhu dan pH mempengaruhi proses imobilisasi. Pada suhu yang lebih tinggi, difusi enzim ke jaringan
hidrogel polimer difasilitasi karena penurunan viskositas larutan, dan karena peningkatan relaksasi
makromolekul dari jaringan tiga dimensi hidrofilik [ 31 ]. Jika tidak,
variasi pH mempengaruhi proses imobilisasi enzim karena adanya titik isoelektrik [ 30 ]. Ini mengubah
konformasi makromolekul [ 32 ], intensitas interaksi antarmolekul [ 33 ], kapasitas imobilisasi dan rilis
pro fi les [ 31 ]. Konsentrasi enzim awal yang tinggi dalam larutan air dapat dengan cepat memenuhi
jaringan polimer tiga dimensi hidrogel [ 34 ], sedangkan imobilisasi dan distribusi enzim yang homogen
dalam jaringan hidrogel pada konsentrasi awal yang rendah dapat diperoleh [ 35 ].

Sebuah) b)
70

60

C Enzyme ( mg mL- 1)
50

40
0,308
0.26
30
0.21
0.16
20
0.11
0,06
10
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0,01

Suhu (° C)
c)
d)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2 0.31
6.0 0.26
5.8 0.21
5.6 0.16
5.4 0.11
010 020 030 040 050 060 070 0,06
0,01
C Enzim ( mg mL- 1)

e) f)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0 0.25
5.8 0.2
0.15
5.6
0.1
5.4
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0,05
0
Suhu (° C)

Gambar 3. Respon permukaan dan diagram kontur untuk aktivitas enzimatik laktase yang diimobilisasi dalam hidrogel berbasis gum arab sebagai fungsi suhu dan konsentrasi laktase awal (a, b), konsentrasi laktase awal dan pH (c, d), serta suhu
dan pH (e , f).
992 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997

3.1.2. Aktivitas enzimatik diwakili dalam Persamaan. (6) dan (7) , masing-masing.

Pengaruh variabel respon pada aktivitas enzimatik laktase

2
diamobilisasi dalam AGBH dan CBH diwakili oleh x 1, x 2 dan x 3 ( linier SEBUAH AGBH ¼ 0: 246 - 0: 036x 1 - 0: 025x 2 1þ 0: 050x 2 - 0: 011x 2
efek), x 2 1, x 22 dan x2 3( efek kuadrat). X 2 x 3 interaksi (efek linier þ 0: 032x 3 - 0: 020x 2 3 ð6Þ

interaksi fect) hanya signi fi cant untuk aktivitas laktase yang diimobilisasi di CBH. Model matematika
2þ 0: 038x 2 þ 0: 028x 3 - 0: 021x 2
yang menjelaskan aktivitas enzimatik laktase yang diimobilisasi dalam AGBH dan CBH adalah SEBUAH CBH ¼ 0: 211 - 0: 031x 1 - 0: 022x 1 3ð 7Þ
þ 0: 008x 2 x 3

Sebuah) b)
70

60

C Enzyme ( mg mL- 1)
50

40

0.25
30
0.2
0.15
20
0.1
0,05
10
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0

Suhu (° C)

c) d)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0 0.25
5.8 0.2
5.6 0.15
5.4 0.1
10 20 30 40 50 60 70 0,05
0
C Enzim ( mg mL- 1)

e) f)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0 0.2

5.8 0.15

5.6 0.1
0,05
5.4
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0

Suhu (° C)

Gambar 4. Respon permukaan dan diagram kontur aktivitas enzimatik laktase yang diimobilisasi dalam hidrogel berbasis kitosan sebagai fungsi suhu dan konsentrasi laktase awal (a, b), konsentrasi laktase awal dan pH (c, d), serta suhu dan pH
(e, f).
 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997 993

Tabel 5
Analisis varian diterapkan pada studi fraksi laktase yang dilepaskan dari AGBH dan CBH. F CBH ¼ 0: 245 - 0: 061x 1 þ 0: 035x 2 - 0: 016x 2 2

þ 0: 037x 3 - 0: 023x 1 x 2 þ 0: 015x 2 x 3 ð9Þ

Sumber dari Jumlah dari Derajat Berarti F dihitung F ditabulasi R2
variasi kotak kebebasan kotak

Hidrogel berbahan dasar permen karet arab (AGBH)

di mana F AGBH dan F CBH adalah fraksi laktase yang dilepaskan dari AGBH
Regresi 0.61 4.00 0.15 77.09 2.70 93.65 dan CBH, masing-masing, dan x 1, x 2 dan x 3 adalah variabel bebas (suhu, konsentrasi laktase awal
Sisa 0,06 29.00 0,00 dan pH, masing-masing).
Total bb 33.00 0,02
Tabel 5 menunjukkan hasil analisis varian (ANOVA) yang diterapkan pada studi fraksi laktase
Hidrogel berbasis kitosan (CBH) yang dilepaskan dari AGBH dan CBH.
Regresi 0.19 6.00 0,03 43.77 2.46 91.50 F dihitung nilai fraksi laktase yang dilepaskan dari AGBH dan CBH masing-masing adalah 77,09 dan
Sisa 0,02 27.00 0,00
43,77. Nilai-nilai ini lebih tinggi
Total 0.21 33.00 0,01
daripada F ditabulasi nilai masing-masing 2,70 dan 2,46. Itu
F dihitung / F ditabulasi rasio masing-masing adalah 28,55 dan 17,79. Berdasarkan R 2 nilai-nilai, dapat
disimpulkan bahwa model matematika dijelaskan
untuk pelepasan laktase dari AGBH dan CBH menjelaskan masing-masing 93,65 dan 91,50% dari
di mana A AGBH dan A CBH adalah aktivitas enzimatik laktase
data eksperimen. Secara keseluruhan, model ini dapat diterapkan untuk memprediksi kondisi
diamobilisasi inAGBHand CBH, masing-masing, dan x 1, x 2 dan x 3 adalah variabel bebas (suhu,
pelepasan enzim yang optimal selama aplikasi bioteknologi atau bahkan dalam sistem pelepasan
konsentrasi laktase awal dan pH,
laktase terkontrol ke individu yang tidak toleran laktosa. Gambar. 5 dan 6 menunjukkan permukaan
masing-masing).
respons 3D dan diagram kontur 2D untuk fraksi laktase yang dilepaskan dari AGBH dan CBH.
Tabel 4 menunjukkan hasil analysis of variance (ANOVA) yang diterapkan pada studi aktivitas
Peningkatan konsentrasi laktase awal dan nilai pH pada proses imobilisasi meningkatkan fraksi
enzimatik laktase yang diimobilisasi di
laktase yang dilepaskan selama hidrolisis laktosa. Fraksi enzim yang dilepaskan maksimum
AGBH dan CBH. F dihitung nilai masing-masing adalah 58,08 dan 72,76,
ditemukan setelah imobilisasi pada konsentrasi laktase awal yang berkisar dari 50 sampai 70 mg mL - 1,
dan F ditabulasi nilai keduanya 2,46. F dihitung / ditabulasi rasio berkisar antara 23,61 hingga 29,58. Kedua
model matematika itu signifikan fi tidak bisa dan
prediktif, yang dapat digunakan untuk menjelaskan aktivitas laktase yang diimobilisasi pada AGBH
dan CBH dengan reliabilitas masing-masing 94,62 dan 95,45%. Gambar. 3 dan 4 menunjukkan
suhu berkisar antara 16,0 hingga 20,0 ° C, dan nilai pH antara 6,5 hingga 7,6. Gaya interaksi
permukaan respons 3D dan diagram kontur 2D untuk aktivitas enzimatik laktase yang diimobilisasi di
antarmolekul yang lemah dan kuat yang terjadi antara enzim dan hidrogel selama proses imobilisasi
AGBH dan CBH. Aktivitas enzimatis yang lebih tinggi diamati setelah proses imobilisasi
mempengaruhi pelepasan pro. fi les [ 8 - 31 - 38 ]. Oleh karena itu, pelepasan laktase dari AGBH dan CBH
menggunakan konsentrasi laktase awal mulai dari 60,0 hingga 70,0 mg mL - 1, suhu berkisar antara
dapat terjadi karena destabilisasi interaksi fisiokimia, pelepasan / penyerapan air pro. fi les, relaksasi
20,0 hingga 24,0 ° C dan pH antara 6,4 hingga 7,2. Ukuran pori, derajat ikatan silang dan tekanan
makromolekul dan fenomena difusi [ 8 , 36 - 39 ]. Pada suhu tinggi, derajat pembengkakan hidrogel
osmotik dalam jaringan hidrogel polimer tiga dimensi hidrofilik di fl memengaruhi aktivitas enzimatik
meningkat karena peningkatan ukuran pori dan perluasan jaringan polimer, meningkatkan
enzim yang tidak bisa bergerak setelah kontak dengan larutan laktosa, menghasilkan transfer massa fl
konsentrasi biomolekul yang tidak dapat bergerak [ 30 ]. Namun, ini juga meningkatkan rasio degradasi
ow [ 4 , 5 ]. Peningkatan konsentrasi laktase awal meningkatkan konsentrasi laktase amobil,
termal enzim dan menurunkan gaya interaksi antarmolekul antara enzim dan hidrogel, meningkatkan
meningkatkan aktivitas enzimatik. Konsentrasi laktase amobil yang tinggi mungkin tidak memuaskan
fraksi enzim yang dilepaskan [ 40 ]. Oleh karena itu, pengatur suhu penting untuk proses imobilisasi
karena meningkatkan jumlah enzim yang teradsorpsi pada permukaan hidrogel, meningkatkan fraksi
yang tujuannya adalah mempelajari proses pelepasan enzim yang dikendalikan. Interaksi
pelepasan selama produksi makanan baik laktosa dosis rendah atau bebas laktosa [ 5 , 36 ]. Penurunan
antarmolekul yang kuat dapat terjadi selama proses imobilisasi, menonaktifkan sebagian enzim dan
aktivitas enzimatik dari titik pusat menunjukkan terbentuknya beberapa lapisan enzim yang
menghambat pelepasannya [ 35 - 41 ]. Ini bisa menjelaskan fraksi enzim yang dilepaskan lebih rendah
diendapkan pada permukaan jaringan polimer. Proses imobilisasi enzim dengan formasi multi-layer
setelah imobilisasi pada media asam [ 4 ]. Saturasi permukaan setelah proses imobilisasi pada
menurunkan jarak antara situs aktif enzim dan gugus hidrofilik jaringan polimer, yang mempengaruhi
konsentrasi enzim awal yang tinggi menurunkan interaksi antarmolekul antara pendukung dan
reaksi hidrolisis laktosa. Aktivitas enzim yang tidak dapat bergerak juga dapat dipengaruhi oleh
substrat [ 42 ], meningkatkan fraksi yang dilepaskan [ 35 ]. Akhirnya, FFCCRD dapat diterapkan untuk
saturasi situs aktif adsorpsi, relaksasi makromolekul jaringan polimer tiga dimensi hidrofilik, dan
mengoptimalkan proses pelepasan laktase terkontrol selama produksi baik laktosa dosis rendah atau
perubahan konformasi molekul enzim [ 3 , 4 , 35 ]. Aktivitas enzim bebas menurun pada suhu tinggi
makanan bebas laktosa, serta pada individu yang tidak toleran laktosa.
karena denaturasinya. Namun, kadang-kadang dihindari dengan penerapan enzim yang tidak bisa
bergerak [ 5 ]. Aktivitas enzimatis juga dipengaruhi oleh penurunan pH larutan akibat perubahan
morfologi dan kimiawi situs aktif yang disebabkan oleh titik isoelektrik [ 37 ].

3.2. Hidrolisis laktosa

Laktasi diimobilisasi ke dalam pengujian percobaan AGBH dan CBH, dengan hasil yang
dioptimalkan dengan FFCCRD yang bertujuan untuk hidrolisis laktosa. Kapasitas imobilisasi optimal
dari kedua hidrogel yang memastikan aktivitas enzimatik laktase amobil yang tinggi dan fraksi yang
dilepaskan rendah ditemukan pada 25.0 ± 1.0 ° C, 39.88mgmL - 1 konsentrasi laktase awal dan pH6,5. Tabel
3.1.3. Fraksi laktase yang dilepaskan
6 menunjukkan kapasitas imobilisasi yang optimal, aktivitas enzimatis dan fraksi laktase yang
Efek signi fi variabel cant pada fraksi laktase yang dilepaskan
dilepaskan selama hidrolisis laktosa standar dan laktosa yang terkandung dalam susu UHT. AGBH
dari kedua hidrogel adalah x 1, x 2 dan x 3 ( efek linier), dan x 2 2( sebagai-
dan CBH efektif fi matriks padat yang efisien dan menjanjikan untuk imobilisasi laktase dan hidrolisis
efek drastis). X 1 x 2 dan x 2 x 3 interaksi hanya signi fi cant untuk proses rilis dari CBH. Parameter ini
laktosa. Aktivitas enzimatik yang lebih tinggi ditemukan selama hidrolisis laktosa yang terkandung
direpresentasikan dalam
dalam susu UHT karena adanya kofaktor enzimatik [ 4 , 43 ]. Selain itu, konsentrasi laktase yang
Persamaan. (8) dan (9) .
dilepaskan lebih rendah ditentukan karena tekanan osmotik yang tinggi

F AGBH ¼ 0: 408 - 0: 106x 1 þ 0: 071x 2 - 0: 022x 2 2þ 0: 077x 3 ð8Þ

994 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997

Sebuah)
b)
70

60

C Enzyme ( mg mL- 1)
50

40
0.7
0.6
30
0,5
0.4
20
0.3
0.2
10
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0.1
0
Suhu (° C)

c) d)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0 0,5
5.8 0.4
5.6 0.3
5.4 0.2
10 20 30 40 50 60 70 0.1
0
C Enzim ( mg mL- 1)

e) f)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4 0.6
6.2 0,5

6.0 0.4

5.8 0.3
0.2
5.6
0.1
5.4
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0

Suhu (° C)

Gambar 5. Permukaan respon dan diagram kontur untuk fraksi laktase yang dilepaskan dari hidrogel berbasis gum arab sebagai fungsi suhu dan konsentrasi laktase awal (a, b), konsentrasi laktase awal dan pH (c, d), serta suhu dan pH (e, f).

yang terjadi selama penyerapan air dan difusi zat terlarut ke dalam matriks polimer [ 36 ].
Gambar 7 menunjukkan hasil percobaan untuk konsentrasi glukosa yang terbentuk dalam
larutan (a), aktivitas laktase amobil (b) dan fraksi laktase yang dilepaskan dari AGBH dan CBH
selama hidrolisis laktosa yang terkandung dalam susu UHT. Percobaan ini dilakukan dengan
menerapkan kondisi percobaan terbaik yang ditemukan oleh FFCCRD. Konsentrasi glukosa
meningkat dengan bertambahnya waktu setelah
hidrolisis laktosa menggunakan laktase amobil, tanpa kehilangan aktivitas enzimatiknya sepenuhnya.
Aktivitas enzimatis dan fraksi yang dilepaskan sedikit lebih tinggi dari AGBH karena fenomena difusi
laktase dalam jaringan hidrogel, yang dipengaruhi oleh struktur polimer yang lebih berpori, dan
interaksi fisiokimia yang lebih lemah antara hidrogel dan enzim [ 10 ]. Akhirnya, hidrolisis laktosa yang
terkandung dalam laktosa standar atau susu UHT dapat dijelaskan dengan data imobilisasi dan
pelepasan eksperimental / prediksi.
 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997 995

Sebuah) b)
70

60

C Enzyme ( mg mL- 1)
50

40

30

20
0.4
0.3
10
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0.2
0.1
Suhu (° C)

c) d)
7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4
6.2
6.0 0,5
5.8 0.4
5.6 0.3
5.4 0.2
10 20 30 40 50 60 70 0.1
0
C Enzim ( mg mL- 1)

f)
e) 7.6
7.4
7.2
7.0
6.8
6.6
pH

6.4 0.45
6.2 0.4
6.0 0.35
5.8 0.3

5.6 0.25
0.2
5.4
14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 0.15
0.1
Suhu (° C)

Gambar 6. Permukaan respon dan diagram kontur untuk fraksi laktase yang dilepaskan dari hidrogel berbasis kitosan sebagai fungsi suhu dan konsentrasi laktase awal (a, b), konsentrasi laktase awal dan pH (c, d), serta suhu dan pH (e, f) ).

4. Kesimpulan
Imobilisasi laktase dalam hidrogel berbasis polisakarida merupakan strategi yang menarik dan
menjanjikan untuk menghasilkan makanan olahan susu. Kapsul hidrogel yang mengandung laktase
amobil juga bisa menjadi strategi untuk sistem pelepasan enzim terkontrol ke individu yang tidak
toleran laktosa. Kondisi percobaan yang optimal untuk imobilisasi laktase dan
hidrolisis laktosa diatur menggunakan FFCCRD. Variabel independen dalam fl memengaruhi variabel
respons dengan cara yang sama. Oleh karena itu, model matematika yang diterapkan untuk
mempelajari imobilisasi laktase, aktivitas enzimatik dan proses pelepasan berguna untuk
menjelaskan pengaruh variabel independen dalam hidrolisis laktosa. Imobilisasi laktase dan hidrolisis
laktosa dapat divalidasi dengan menggunakan speci fi c kondisi dan kriteria dioptimalkan dengan
FFCCRD untuk industri
996 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997

Tabel 6 Referensi
Kapasitas imobilisasi optimal, aktivitas enzimatis dan fraksi laktase yang dilepaskan selama hidrolisis laktosa standar
dan laktosa yang terkandung dalam susu UHT.
[1] TM Bayless, E. Brown, DM Paige, Non-persistensi laktase dan intoleransi laktosa,
Curr. Gastroenterol. Rep.19 (2017), 23. https://doi.org/10.1007/s11894-017-0558-9 .
Hidrolisis Optimal Enzimatik Dirilis
[2] M. Corgneau, J. Scher, L. Ritie-Pertusa, DT Le, J. Petit, Y. Nikolova, S. Banon, C. Gaiani,
imobilisasi aktivitas (U laktase
Kemajuan terbaru tentang intoleransi laktosa: ambang batas toleransi dan jawaban yang tersedia saat ini, Crit.
kapasitas (mg g - 1) mg - 1) pecahan
Rev. Food Sci. Nutr. 57 (15) (2017) 3344 - 3356, https://doi.org/10. 1080 / 10408398.2015.1123671 .

Hidrogel berbahan dasar permen karet arab (AGBH)

[3] BR Facin, B. Moret, D. Baretta, LA Bel fi bijih, AT Paulino, Imobilisasi dan kontrol
Laktosa standar 151,18 ± 0,57 0,246 ± 0,407 ±
rilis trolled β- galaktosidase dari hidrogel yang dicangkok kitosan, Food Chem. 179 (2015) 44 - 51, https://doi.org/10.1016/j.foodche
0,002 0,007
.
Laktosa terkandung dalam UHT 151,18 ± 0,57 0,322 ± 0,193 ±
[4] M. Wolf, BC Gasparin, AT Paulino, Hidrolisis menggunakan laktosa β- d-galaktosidase
susu 0,009 0,005
tidak bisa bergerak dalam modi fi ed Hidrogel berbahan dasar permen karet Arab untuk produksi susu bebas
laktosa / rendah laktosa, Int. J. Biol. Macromol. 115 (2018) 157 - 164, https: //
Hidrogel berbasis kitosan (CBH)
doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.04.058 .
Laktosa standar 189.23 ± 1.09 0,211 ± 0,245 ±
[5] M. Wolf, LA Bel fi bijih, EB Tambourgi, AT Paulino, Produksi laktosa dosis rendah
0,003 0,005
susu menggunakan laktase yang diimobilisasi dalam hidrogel, Int. Dairy J.92 (2019) 77 - 83, https: //
Laktosa terkandung dalam UHT 189.23 ± 1.09 0,289 ± 0,136 ±
doi.org/10.1016/j.idairyj.2018.12.004 .
susu 0,006 0,001
[6] MH Kim, S. An, K. Won, HJ Kim, SH Lee, Penjebakan enzim ke dalam
selulosa - manik-manik hidrogel komposit biopolimer menggunakan cairan ionik biokompatibel, J. Mol. Catal. B
Enzim. 75 (2012) 68 - 72, https://doi.org/10.1016/j. molcatb.2011.11.011 .

[7] D. Elieh-Ali-Komi, MR Hamblin, Kitin dan kitosan: produksi dan aplikasi nanomaterial biomedis serbaguna, Int. J.
aplikasi dengan biaya / manfaat luar biasa fi t dan kinerja. Itu con- Adv. Res. 4 (2016) 411.
[8] F. Zonatto, EC Muniz, EB Tambourgi, AT Paulino, Adsorpsi dan re- terkontrol
fi rmed oleh hasil eksperimen.
sewa kalium, fosfat dan amonia darimodi fi ed Hidrogel berbahan dasar permen karet Arab, Int. J. Biol.
Macromol. 105 (2017) 363 - 369, https://doi.org/10.1016/j. ijbiomac. 2017.07.051 .
Ucapan Terima Kasih
[9] AT Paulino, MR Guilherme, LH Mattoso, EB Tambourgi, Smart hydrogels
berdasarkan modi fi ed gum arabic sebagai perangkat potensial untuk biomaterial magnetik, Macromol. Chem.
Para penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada lembaga pembina Phys. 211 (2010) 1196 - 1205, https://doi.org/10.1002/macp. 200900657 .
Brasil, FAPESC, atas beasiswa master dan dukungan penelitiannya. Penelitian ini fi dibiayai sebagian
[10] K. Varnier, T. Vieira, M. Wolf, LA Bel fi bijih, EB Tambourgi, AT Paulino,
olehCoordenação deAperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Kode
Hidrogel berbasis polisakarida untuk imobilisasi dan pelepasan terkontrol dari serum albumin sapi, Int. J. Biol.
Keuangan 001. ATP mengakui CNPq (Grant No 312356 / 2015-3) untuk fi dukungan keuangan. Macromol. 120 (2018) 522 - 528, https: // doi. org / 10.1016 / j.ijbiomac.2018.08.133 .

b)
Sebuah)
1.50 Enzim diimobilisasi di AGBH Enzim
200 Enzim diimobilisasi di AGBH Enzim
diimobilisasi di CBH
diimobilisasi di CBH
175
1.25
Concentration of glucose (mg dL- 1)

Enzymatic activity (U mg-1)

150
1.00
125

100 0.75

75
0,50

50
0.25
25

0 0,00
0 30 60 90120150180210240270300330 0 30 60 90120150180210240270300330
min min

c)
0.20 Enzim diimobilisasi di AGBH Enzim
diimobilisasi di CBH
0.18

0.16
Released enzyme fraction

0.14

0.12

0.10

0,08

0,06

0,04

0,02

0,00
0 30 60 90 120150 180 210240
min

Gambar 7. Hasil percobaan untuk konsentrasi glukosa yang terbentuk dalam larutan (a), aktivitas laktase amobil (b) dan fraksi laktase yang dilepaskan dari AGBH dan CBH. Eksperimen dilakukan dengan menerapkan kondisi eksperimen terbaik
yang ditemukan oleh FFCCRD.
 M.Wolf, AT Paulino / Jurnal Internasional Makromolekul Biologi 135 (2019) 986 - 997
[11] CC Lin, AT Metters, Hidrogel dalam formulasi rilis terkontrol: desain jaringan
dan pemodelan matematika, Adv. Obat Deliv. Rev.58 (2006) 1379 - 1408, https: //
doi.org/10.1016/j.addr.2006.09.004 .
[12] MA Abureesh, AA Oladipo, M. Gazi, Sintesis mudah dari kitosan yang sensitif terhadap glukosa -
hidrogel poli (vinil alkohol): optimasi pelepasan obat dan sifat pembengkakan, Int.
J. Biol. Macromol. 90 (2016) 75 - 80, https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2015.10.001 .
[13] F. Villaverde Cendon, RM Matos Jorge, R. Weinschutz, AL Mathias, Pengaruh matriks
komposisi, ukuran bola dan konsentrasi hormon pada koefisien difusi fi efisiensi insulin untuk pengiriman
gastrointestinal terkontrol untuk pengobatan diabetes, J. Microencapsul. 35 (2018) 13 - 25, https://doi.org/10.1080/02652048.2017.1409820
. R. Fernandez-Lafuente, pertukaran Ion dari β- galactosidase: pengaruh pH imobilisasi terhadap stabilitas
[14] Y. Ma, Y. Sun, Y. Fu, G. Fang, X. Yan, Z. Guo, Perilaku pembengkakan berbasis lignin berpori
poli (asam akrilik), Chemosphere 163 (2016) 610 - 619, https://doi.org/10.1016/j. chemosphere.2016.08.035 .
[15] FA Aouada, MR de Moura, LHC Mattoso, hidrogel biodegradable sebagai pengiriman ve-
hicle untuk pelepasan terkontrol pestisida, Formulasi-Pestisida, Efek, Nasib, IntechOpen 2011, hlm.81 - 102, https://doi.org/10.5772/14139
.
[16] MR Guilherme, AV Reis, AT Paulino, TA Moia, LH Mattoso, EB Tambourgi,
Hidrogel polimer berbasis pektin sebagai pembawa pelepasan nutrisi pertanian dan penghilangan logam berat
dari air limbah, J. Appl. Polym. Sci. 117 (2010) 3146 - 3154, https://doi.org/10.1002/app.32123 .
[17] A. Homaei, F. Samari, Investigasi aktivitas dan stabilitas papain dengan adsorpsi
pada nanotube karbon multi-dinding, Int. J. Biol. Macromol. 105 (2017) 1630 - 1635,
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.02.038 .
[18] Q. Zhu, W. Zhuang, H. Niu, L. Ge, BV Hernandez, J. Wu, D. Wang, D. Liu, Y. Chen, C.
Zhu, H. Ying, Af fi nity menginduksi imobilisasi adenylate cyclase dari lisat sel mentah untuk konversi ATP,
Colloids Surf. B Biointerfaces 164 (2018) 155 - 164,
https://doi.org/10.1016/j.colsurfb.2018.01.033 .
[19] A. Hill, S. Karboune, C. Mateo, Menyelidiki dan mengoptimalkan imobilisasi
levansucrase untuk meningkatkan aktivitas transfruktosilasi dan stabilitas termal, Process Biochem. 61 (2017)
63 - 72, https://doi.org/10.1016/j.procbio.2017.06.011 .
[20] RL de Oliveira, JL Dias, OS da Silva, TS Porto, Imobilisasi pektinase dari
Aspergillus aculeatus dalam manik-manik alginat dan clari fi kation jus apel dan umbu dalam reaktor bed pack,
Food Bioprod. Proses. 109 (2018) 9 - 18, https://doi.org/
10.1016 / j.fbp.2018.02.005 .
[21] B. Das, AP Roy, S. Bhattacharjee, S. Chakraborty, C. Bhattacharjee, Hidrolisis laktosa
oleh β- enzim galaktosidase: optimasi menggunakan metodologi permukaan respon, ekotoksikol. Mengepung.
Saf. 121 (2015) 244 - 252, https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.
2015.03.024 .
[22] MM Elnashar, GE Awad, ME Hassan, MS Mohy Eldin, BM Haroun, AI El-
Diwany, Imobilisasi optimal β- galaktosidase ke κ- manik-manik gel karagenan menggunakan metodologi
permukaan respon dan aplikasinya, Scienti fi cWorldJournal 2014 (2014) https://doi.org/10.1155/2014/571682 .
[23] GE Box, JS Hunter, desain eksperimental multi-faktor untuk mengeksplorasi sur-
wajah, Ann. Matematika. Stat. 28 (1) (1957) 195 - 241, https://doi.org/10.1214/aoms/ 1177707047 (2007).
[24] D. Ba ş, IH Boyac saya, Pemodelan dan pengoptimalan I: kegunaan metode permukaan respons-
odology, J. Food Eng. 78 (3) (2007) 836 - 845, https://doi.org/10.1016/j.jfoodeng.
2005.11.024 .
[25] BB Neto, IS Scarminio, RE Bruns, Bagaimana Melakukan Eksperimen: Penelitian dan Pengembangan dalam
Sains dan Industri, Editor Buku, Porto Alegre, Brasil, 2010.
[26] RH Myers, DC Montgomery, Metodologi Permukaan Respon: Proses dan Optimasi Produk Menggunakan
Eksperimen yang Dirancang, vol. v3, Wiley, New York, 1995.
[27] MM Bradford, Sebuah metode yang cepat dan sensitif untuk penghitungan mikrogram
jumlah protein yang menggunakan prinsip pengikatan protein-pewarna, Anal. Biochem. 72 (1 - 2) (1976) 248 - 254,
https://doi.org/10.1016/0003-2697(76)90527-3 .
[28] MI Rodrigues, AF Iemma, Perencanaan Eksperimen dan Optimasi Proses: Strategi Perencanaan Berurutan, Casa
do Pao, Rio de Janeiro, Brasil, 2005.
[29] S. Kang, A. Asatekin, AM Mayes, M. Elimelech, Mekanisme antifouling protein
Membran PAN UF menggunakan aditif PAN-g-PEO, J. Membr. Sci. 296 (2007) 42 - 50, https://doi.org/10.1016/j.memsci.2007.03.012
.
997
[30] H. Essa, E. Magner, J. Cooney, BK Hodnett, Dalam fl pengaruh pH dan kekuatan ion pada adsorpsi, pelindian
dan aktivitas mioglobin yang diimobilisasi ke silikat mesopori yang dipesan, J. Mol. Catal. B Enzim. 49 (2007)
61 - 68, https://doi.org/10.1016/j. molcatb.2007.07.005 .
[31] SM Santos, JA Cecilia, E. Vilarrasa-García, IJS Junior, E. Rodríguez-Castellón, DC Azevedo, Pengaruh agen
pengubah struktur dalam SBA-15 untuk aplikasinya dalam adsorpsi biomolekul, Mater Mikropori Mesopori. 232
(2016) 53 - 64, https://doi.org/10.1016/j.micromeso.2016.06.004 .
[32] TL Albuquerque, S. Peirce, N. Rueda, A. Marzocchella, LR Gonçalves, MVP Rocha,
enzym, Process Biochem. 51 (2016) 875 - 880, https: // doi. org / 10.1016 / j.procbio.2016.03.014 .
[33] JCSD Santos, O. Barbosa, C. Ortiz, A. Berenguer-Murcia, RC Rodrigues, R. Fernandez-Lafuente, Pentingnya
properti pendukung untuk imobilisasi atau puri fi kation enzim, ChemCatChem. 7 (2015) 2413 - 2432, https://doi.org/10.
1002 / cctc. 201500310 .
[34] M. Monier, I. Youssef, DA Abdel-Latif, Sintesis kitosancinnamate responsif foto untuk ef fi jebakan yang efisien β-
enzim galaktosidase, Bereaksi. Funct. Polym. 124 (2018) 129 - 138, https://doi.org/10.1016/j.reactfunctpolym.2018.01.
012 .
[35] L. Fernandez-Lopez, SG Pedrero, N. Lopez-Carrobles, JJ Virgen-Ortíz, BC Gorines,
C. Otero, R. Fernandez-Lafuente, Ikatan silang fisik lipase dari Rhizomucor miehei diimobilisasi pada oktil
agarosa melalui pelapisan dengan polimer ionik: menghindari pelepasan enzim dari pendukung, Process
Biochem. 54 (2017) 81 - 88, https://doi.org/
10.1016 / j.procbio.2016.12.018 .
[36] W. Zhang, A. Abbaspourrad, D. Chen, E. Campbell, H. Zhao, Y. Li, Q. Li, DA Weitz, Tekanan osmotik memicu
pelepasan cepat enzim yang dienkapsulasi dengan aktivitas yang ditingkatkan, Adv. Funct. Mater. 27 (29)
(2017) 1700975, https://doi.org/10.1002/adfm. 201700975 .
[37] Z. Zhang, R. Zhang, L. Zou, DJ McClements, Enkapsulasi protein dalam manik-manik hidrogel alginat:
pengaruh pH terhadap stabilitas mikrogel, retensi protein dan pelepasan protein, Food Hydrocoll. 58 (2016) 308 -
315, https://doi.org/10.1016/j.foodhyd.2016.03.015 .
[38] DI Paulino, LA Bel fi bijih, LT Kubota, EC Muniz, VC Almeida, EB Tambourgi, Pengaruh magnetit terhadap
perilaku adsorpsi Pb (II), Cd (II), dan Cu (II) dalam hidrogel berbasis kitosan, Desalinasi. 275 (2011) 187 - 196, https://doi.org/10
desal. 2011.02.056 .
[39] P. Ahmed, D. Dasgupta, S. Pandit, N. Dewan, Sebuah pendekatan yang menjanjikan untuk mendukung sistem
pengiriman obat target usus besar yang tepat: review, World J. Pharm. Pharm. Sci. 5 (2016) 556 - 568, https://doi.org/10.20959/wjpps2
.
[40] DJ McClements, Enkapsulasi, perlindungan, dan pelepasan komponen aktif hidrofilik: potensi dan keterbatasan
sistem pengiriman koloid, Adv. Interf Koloid. Sci. 219 (2015) 27 - 53, https://doi.org/10.1016/j.cis.2015.02.002 .
[41] JJ Virgen-Ortíz, SG Pedrero, L. Fernandez-Lopez, N.Lopez-Carrobles, BC Gorines,
C. Otero, R .. Fernandez-Lafuente, Desorpsi lipase yang diimobilisasi pada manik-manik oktilagarosa dan
dilapisi dengan polimer ionik setelah inaktivasi termal. Adsorpsi polimer yang lebih kuat / komposit protein yang
tidak terlipat, Molekul 22 (2017) 91,
https://doi.org/10.3390/molecules22010091 .
[42] H. Kono, I. Oeda, T. Nakamura, The preparation, swelling characteristics, and albumin adsorption and release
behaviors of a novel chitosan-based polyampholyte hydrogel, React. Funct. Polym. 73 (2013) 97 – 107, https://doi.org/10.1016/
reactfunctpolym.2012.08.016 .
[43] H. Bovenhuis, M.H.P.W. Visker, N.A. Poulsen, J. Sehested, H.J.F. Van Valenberg, J.A.M. Van Arendonk, L.B.
Larsen, A.J. Buitenhuis, Effects of the diacylglycerol oacyltransferase 1 (DGAT1) K232A polymorphism on fatty
acid, protein, and mineral composition of dairy cattle milk, J. Dairy Sci. 99 (2016) 3113 – 3123, https://doi.org/
10.3168/jds.2015-10462 .