MATERIAL DAN METODE

Kulit manggis ungu gelap yang dipilih untuk penelitian ini baru saja dari Jawa Tengah,
Indonesia. Bahan lainnya standar α-mangostin (Sigma-Aldrich 98%), etanol 70% (Dwicentra), n-
hexane (Merck), etil asetat (Merck), metanol (Merck), aquades (Dwicentra), VCO (Bagoes),
PEG 400 (Bratachem), Tween 80 (Bratachem), dan buffer fosfat (Bratachem) digunakan.

Persiapan Ekstraksi Tanaman

Satu kg bubuk kulit manggis diambil dalam lima thimbles berbeda dan diekstrak secara maserasi
selama 72 jam menggunakan etanol 70%, etil asetat. Sampel yang diekstrak diuapkan
menggunakan waterbath sampai menjadi ekstrak kental.

Persiapan Fraksinasi Tanaman

Beberapa ekstrak etanol kental dipartisi dengan n-heksana untuk mendapatkan fraksi dan residu
larut n-heksana. Kemudian, residu ditambahkan dengan etil asetat untuk mendapatkan fraksi etil
asetat dan residu. Selanjutnya, fraksi larut yang diekstraksi dari fraksi n-heksana, fraksi etil
asetat, dan residu dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary evaporator dan waterbath pada 40
± 0,5 °C untuk memperoleh fraksi kental.

Kurva standar α-manggis

Kurva standar dibuat dengan menggunakan panjang gelombang tertentu. Diperoleh dengan
memindai panjang gelombang dari panjang gelombang maksimum dalam 200-400 nm.

Verifikasi Uji Akurasi

Metode Analisis Akurasi ditentukan dengan menggunakan larutan standar α-mangostin 1 mL

dalam 10 mL metanol. Dari larutan stok dibuat konsentrasi 4 mg / mL, 5 mg / mL, 6 mg / mL, 7
mg / mL, dan 8 mg / mL.

Presisi

Presisi ditentukan dengan menerapkan metode pengulangan menggunakan larutan standar α-

mangostin dengan konsentrasi 5 mg / mL. Presisi dilakukan dengan mengukur absorbansi
menggunakan spektrofotometer UV-Vis 6 kali pengulangan.
Ekstrak dan Fraksi Pengukuran Kelarutan dalam VCO

Sebanyak 10 mg ekstrak etanol, ekstrak etil asetat, fraksi etil asetat, fraksi n-heksana dan residu
dari kulit manggis ditambahkan ke 10 mL VCO sebagai fase minyak. Campuran residu dari kulit
manggis ditambahkan ke 10 mL VCO sebagai fase minyak. Campuran dikondisikan dalam
waterbath pada 40 ° C selama 10 menit. Proses pelarutan fraksi dalam pembawa dimaksimalkan
oleh sonikator selama 15 menit dan dibiarkan selama dua hari pada suhu kamar. Setelah dua hari,
bagian yang tidak larut dipisahkan dengan sentrifugasi pada 3000 rpm selama 20 menit. Sampel
yang mampu melarutkan lebih banyak VCO dipilih sampel yang digunakan untuk fase optimasi
berikutnya.

Optimalisasi formulasi komposisi surfaktan, co-surfaktan, dan minyak dengan Simplex

Lattice Design

Penentuan formulasi optimal dilakukan menggunakan perangkat lunak desain simplex lattice
Design Expert®version 7. Desain simplex lattice dioptimalkan campuran tiga komponen yaitu
minyak, surfactant, dan co-surfaktan dari 14 formulasi dalam berbagai komposisi. Karakteristik
SNEDDS dari sifat fisik yang digunakan dalam penentuan formula optimum adalah untuk
menguji transmitansi dan pH.

Pengukuran transmitansi

Formula kandidat prakonsentrasi SNEDDS (100 µl) dengan air suling sampai volume akhir 5
mL. Campuran dihomogenisasi dengan vortex selama 30 detik. Emulsi yang diperoleh diukur
absorbansi pada panjang gelombang 650 nm dengan baku air suling untuk menentukan tingkat
kejelasan.

Pengukuran pH

SNEDDS (100 µL) dilarutkan dalam 5 mL air suling. pH Nanoemulsi terukur untuk evaluasi
formula optimal.

Pengukuran Pemuatan Obat

Sampel dipilih dari kulit manggis (5, 10, 15, 20, 25.30, 50, 75, 100, 125,150 mg) ditambahkan ke
5 mL formulasi optimal SNEDDS. Teknik ini disebut metode dispersi padat. 20 SNEDDS
kemudian dihomogenisasi dengan vortex selama 5 menit, dengan sonikator selama 5 menit, 45
°C air selama 5 menit.

Waktu Pengukuran Emulsifikasi

500 mL air suling yang dikondisikan pada pengaduk 120 rpm. Sebanyak 1 mL SNEDDS yang
mengandung zat aktif aktif diteteskan ke dalam media dengan cepat.

Pengamatan Ukuran dan Potensi Zeta

Pengukuran dilakukan menggunakan Particle Size Analyzer (PSA) adalah untuk mengetahui
ukuran dan distribusi nanopartikel. Sebanyak 1 mL SNEDDS dicampur dengan air suling hingga
5 mL, dihomogenisasi dengan cara membalik. Selanjutnya, dimasukkan ke dalam kuvet untuk
analisis pengukuran potensial Zeta dilakukan dengan Zetasizer.

Pengamatan Stabilitas

SNEDDS dipanaskan dan dipertahankan pada 37ºC dan dihomogenisasi dengan vortex selama
30 detik. Diamati setiap jam selama 4 jam untuk menentukan stabilitasnya. Nanoemulsi menjadi
stabil jika tidak membentuk gumpalan atau sedimen. SNEDDS disimpan selama tiga bulan.

Tes Permeasi (In Vitro)

Tes difusi dilakukan dengan in vitro menggunakan sel Difusi Franz. Komposisi reseptor diisi
dengan dapar fosfat pH 7,4 (50 mL) dan suhu disimpan pada 37 ° C. Selaput removable kulit ular
ditempatkan di antara kompartemen donor dan kompartemen reseptor ke posisi stratum korneum
menghadap ke atas. Reseptor diberi makan melewati bagian bawah kulit detasemen membran
dengan pompa peristaltik. Sampel diambil pada 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 jam.

Analisis Data dalam studi kelarutan kulit manggis di VCO

Data kemudian dianalisis dengan One Way ANOVA untuk membandingkan nilai yang
signifikan kelarutan kulit manggis dari ekstrak dan fraksi.