Evaluasi Perubahan Metabolik pada Buah Piper Sarmentosum di Berbagai Musim oleh

Metabolomik Menggunakan Spektroskopi Fourier Transform Infrared (FTIR)

 ketidak konsistenan dalam produk obat herbal, yang merupakan salah satu tantangan
utama yang dihadapi oleh industri produk alami. Metabolomics mendeteksi, mengukur
dan membuat katalog waktu proses metabolisme terkait sistem biologis terintegrasi. Oleh
karena itu, penelitian ini bertujuan untuk menggunakan metabolisme untuk menyelidiki
perubahan metabolisme terkait waktu dalam buah Piper sarmentosum untuk menemukan
waktu yang tepat untuk memanen buah untuk menjaga konsistensi dalam kemanjuran dan
reproduktifitas batch-batch.
 Ukuran buah yang sama dikumpulkan dari lokasi yang sama dari April 2006 hingga
Agustus 2007 dengan selang waktu dua bulan. Setiap koleksi dianggap sebagai kumpulan
independen tunggal. Bubuk buah kering dari masing-masing kelompok dianalisis dalam
rangkap tiga dengan spektrofotometer FTIR dalam pelet kalium bromida.
 Spektra FTIR dari batch yang berbeda dianalisis dengan chemometrics, analisis
komponen utama (PCA), untuk mengevaluasi identifikasi, klasifikasi dan diferensiasi
(ICD) menggunakan perangkat lunak aplikasi PerkinElmer. Semua sampel menunjukkan
korelasi (86,24%) dengan mengacu pada PCA 1 dan 9.38% di PCA2. Sampel yang
dikumpulkan pada November-Desember 2006 dan Juli-Agustus 2007 dikelompokkan
jauh dari yang lain di sisi positif dan negatif dari kuadran atas. Hasil ini menunjukkan
bahwa konstituen metabolik dalam sampel bervariasi di semua batch. Namun, korelasi
dalam sampel mungkin membantu untuk memprediksi konsistensi dalam aktivitas
farmakologis. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa profil sidik jari FTIR dari sampel
dalam kombinasi dengan chemometrics adalah alat yang efektif dari ICD yang dapat
membantu industri produk alami untuk mengganti kerugian kualitas dan reproduktifitas
batch-batch.

MATERIAL DAN METODE

 Buah Piper sarmentosum dengan ukuran yang sama dikumpulkan dari Kebun Raya
Fakultas Ilmu Farmasi, Universiti Sains Malaysia, dari April 2006 hingga Agustus 2007
dengan selang waktu dua bulan, dan disahkan oleh Prof. Dr. Zhari Ismail, Sekretariat
Herbal , Sekolah Ilmu Farmasi, Universiti Sains Malaysia di mana spesimen voucher
disimpan referensi vide No. 0071/06. Setiap koleksi dianggap sebagai kumpulan
independen tunggal. Buah dibersihkan, dipotong-potong kecil, dikeringkan pada suhu
40oC dan dihaluskan.

INSTRUMENTASI
Sampel dianalisis untuk mendapatkan spektrum FTIR menggunakan Spektrometer FTIR untuk
mengevaluasi identifikasi, klasifikasi dan diferensiasi menggunakan perangkat lunak aplikasi
PerkinElmer.
a. Rekaman spektrum FTIR
b. Analisis spektrum FTIR dengan analisis komponen utama

HASIL DAN DISKUSI

Dari penelitian ini diadapatkan hasil Spektrum IR bubuk buah menunjukkan pita pada
3650 cm-1 (amida), 2900- 2850 cm-1 (CH), 1634-1500 cm-1 (pita domain aromatik), 1725-1705
cm-1 (karbonil) dan 1200- 1100 cm-1 (alkena). Analisis komponen utama (PCA) menggunakan
prosedur matematika yang mengubah sejumlah variabel yang mungkin berkorelasi menjadi
sejumlah kecil variabel tidak berkorelasi yang disebut komponen utama. PCA1 menunjukkan
kemungkinan variabilitas maksimum dan setiap komponen yang berhasil mengindikasikan
reaming kemungkinan variabilitas. Secara teoritis, ini merupakan transformasi optimal untuk
data dalam bentuk kuadrat terkecil. PCA memilih sumbu PCA pertama sebagai garis yang
melewati pusat dan meminimalkan kuadrat jarak setiap titik ke garis PCA. Garis melintasi variasi
maksimum dalam data. Sumbu PCA kedua juga melewati variasi maksimum dalam data tetapi
harus sudut kanan ke poros PCA 1, benar-benar tidak berkorelasi.

Spektra FTIR dari berbagai kelompok buah tanaman dikodekan sebagai: Maret-April
2006 (a, b, c), Mei-Juni 2006 (d, e, f), Juli-Agustus 2006 (g, h, i) , September-Oktober 2006 (j, k,
l), November-Desember 2006 (m, n, o), Januari-Februari 2007 (p, q, r), Maret-April 2007 (s, t,
u), Mei -Juni 2007 (v. W, x) dan Juli-Agustus 2007 (y, z, z2). Spektra ini kemudian dianalisis
dalam kombinasi dengan chemometrics, PCA (Gbr. 1). Hasil menunjukkan bahwa semua sampel
kecuali dua yang dikumpulkan pada November-Desember 2006 (m, n, o) dan Juli-Agustus 2007
(y, z, z2) dikelompokkan dalam dua kuadran yang lebih rendah. Hasil gambar menunjukkan
bahwa sampel dari batch yang berbeda adalah 86,24% berkorelasi dengan referensi ke PC 1,
sedangkan 9,38% tidak berkorelasi sehubungan dengan PC 2. Dari melihat gambar, kita dapat
dengan mudah mengidentifikasi gradien dari depan kiri bawah ke depan. gradien
mengindikasikan kanan bawah di mana PCA 1 dan PCA 2 meningkat. Dari hasil ini, kami dapat
memprediksi aktivitas serupa dalam sampel yang berkorelasi dan dikelompokkan bersama.
Spektra FTIR yang menunjukkan perbedaan dan kesamaan ditunjukkan pada Gambar. 2.

Fig. 1: Report of principal component analysis of FTIR fingerprints of Piper sarmentosum fruit from different batches collected from
April 2006 to August 2007

Fig. 2: Comparison of FTIR spectra of Piper sarmentosum fruit from different batches, A (spectra of samples showing difference); B
(spectra of samples showing similarity)

Variasi dalam metabolit tanaman dapat diminimalkan dengan penerapan protokol kontrol
kualitas yang ketat sejak pemilihan benih, penaburan pada waktu yang tepat, kontrol kondisi
budidaya, pengumpulan pada umur yang sesuai, pengeringan dan penyimpanan. Tujuan ini dapat
dicapai dengan penerapan praktik pertanian dan pengumpulan yang baik dan praktik manufaktur
yang baik. Sejumlah pedoman untuk praktik pertanian dan pengumpulan yang baik telah
disarankan oleh Organisasi Kesehatan Dunia. Variasi ini selanjutnya dapat diminimalkan dengan
penerapan metode farmakognostik untuk mengetahui tanaman mana, yang diidentifikasi dengan
nomenklatur botani dan bagian tanaman mana yang digunakan persentase. Dalam penelitian ini,
kami telah mengumpulkan buah dari lokasi yang sama untuk meminimalkan variabel seperti
kondisi pertumbuhan, ukuran buah, waktu pengumpulan, pengeringan dan penyimpanan.
Kondisi iklim adalah satu-satunya variabilitas.
Dapat disimpulkan dari hasil penelitian ini bahwa profil sidik jari metabolomik dalam
kombinasi dengan kemometrik merupakan alat yang efektif untuk penilaian cepat dan mudah
terhadap kesamaan diferensiasi dalam sampel dan dapat digunakan sebagai alat analitis dalam
penjaminan kualitas.