Revisian 2

VALIDASI METODE ANALISIS ASAM GALAT
MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA

TINGGI DAN APLIKASINYA DALAM EKSTRAK ETANOL
DAUN BIDARA LAUT (Ziziphus mauritiana Lam)
SKRIPSI
oleh:
Melissa Oktavia
165010012
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
SEMARANG
November 2020
HALAMAN JUDUL
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat

dalam mencapai derajat Sarjana Farmasi
Program Studi Ilmu Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim
oleh:
Melissa Oktavia
165010012
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
SEMARANG
November 2020
i
INTISARI
VALIDASI METODE ANALISIS ASAM GALAT MENGGUNAKAN

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI DAN APLIKASINYA
DALAM EKSTRAK ETANOL DAUN BIDARA LAUT
(Ziziphus mauritiana Lam)
Daun bidara laut (Ziziphus mauritiana Lam) mengandung senyawa fenolik

yang terbukti memiliki aktivitas antioksidan. Senyawa yang terkandung dalam
tanaman bidara laut yaitu fenolik, flavonoid, alkaloid, tanin dan saponin. Salah
satu fenolik yang paling penting adalah asam galat. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui kandungan asam galat dalam ekstrak etanol daun bidara laut
(EEDBL) menggunakan metode KCKT.
Daun bidara laut diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pelarut
etanol 70% yang diuapkan menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh
ekstrak kental. Analisis kandungan asam galat EEDBL menggunakan alat KCKT
(Jazco) yang dilengkapi dengan detektor UV-Vis pada panjang gelombang 258
nm. Fase gerak yang digunakan yaitu metanol:air dengan perbandingan (50:50
v/v) dan fase diam menggunakan C18 dengan laju alir 1,0 mL/menit. Uji validasi
yang dilakukan pada penelitian ini meliputi uji linieritas, sensitivitas, selektivitas,
presisi dan akurasi.
Hasil penelitian menunjukkan EEDBL mengandung asam galat 0,193%.
Metode analisis tervalidasi dengan nilai parameter yaitu uji linieritas dengan nilai
korelasi (r)= 0,9997, LOD sebesar 0,261 µg/mL dan LOQ 0,871 µg/, uji
selektivitas yang baik, uji presisi yang didapatkan %RSD 0,514% dan uji akurasi
dengan perolehan kembali 99,665%-100,810%.
Kata kunci: ekstrak daun bidara laut, KCKT, fenolik, asam galat, validasi
ii
ABSTRACT
VALIDATION OF GALLIC ACID ANALISYS USING HIGH

PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY METODS AND ITS
APPLICATIONS IN ETHANOL EXTRACT BIDARA LEAF (Ziziphus
mauritiana Lam)
Bidara leaf (Ziziphus mauritiana Lam) contain phenolic compounds which

are proven to have antioxidant activity . The compound contained in bidara leaf
in phenol, flavonoids, alkaloids, tannin and saponin. One of the most important
phenolic is gallic acid. This research aim to know the gallic acid in ethanol
extract bidara leaf (EEBL) using high performance liquid chromatography
metods.
Bidara leaf extracted using maceration method with ethanol 70% solvent
which is evaporated using rotary evaporator so obtained viscous extract. Analisys
of qallic acid content using the HPLC tool (Jazco) equipped with a UV-Vis
detector at a mavelength 258 nm. Using mobile phasemethanol : water (50:50)
and using C18 column with water rate 1,0 mL/menit. Validation test was conducted
on the test of linearity, selectivity, sensitivity, precision and accuracy.
The results showed that EEBL contained 0,103% qallic acid. The analysis
method is validated with parameter values, namely: linearity with the correlation
(r ) = 0,9997, LOD 0,261 µg/mL and the LOQ 0,871 µg/mL, good selectivity,
precision test generates %RSD 0,514% and accuracy 99,665%-100,810%.
Keywords : extracted bidara leaf,, HPLC, Fenolic, gallic acid , validatio
iii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul

oleh:
Melissa Oktavia
165010012
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
Pada tanggal: 16 November 2020
Pembimbing,
(apt. Aqnes Budiarti, S.F., M.Sc.)
Mengetahui:
Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim
Dekan,
(Dr. apt. Maulita Cut Nuria, M.Sc.)
iv
SURAT PERNYATAAN
Yang bertanda tangan di bawah ini:
Nama : Melissa Oktavia
NIM : 165010012
Judul Skripsi : Validasi Metode Analisis Asam Galat Menggunakan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dan Aplikasinya Dalam
Ekstrak Daun Bidara Laut (Ziziphus mauritiana Lam).
Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi saya tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi dan sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah skripsi saya dan disebutkan dalam daftar pustaka.
Demikian surat pernyataan ini dibuat untuk dapat digunakan sebagaimana
mestinya.
Semarang, November 2020

ditandatangani
Melissa Oktavia
v
PERSEMBAHAN
“ Proses hidup akan terlampaui secara sempurna jika memiliki skill, selebihnya
rasa kasian dan keberuntungan.”
Kupersembahkan untuk:
Kedua orang tua tercinta, bapak Karminto dan ibu Zubaidah
atas segala doa dan perjuangan selama ini
Adikku Maldino Dwi Julianto dan segenap keluarga tercinta
Almamater sebagai wujud terima kasih dan khidmahku
vi
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT, yang telah
melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan penulisan skripsi yang berjudul “Validasi Metode Analisis
Asam Galat menggunakan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dan
Aplikasinya dalam Ekstrak Etanol Daun Bidara Laut (Ziziphus
mauritiana Lam).” Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat
dalam memperoleh derajat Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas
Wahid Hasyim Semarang.
Penulisan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan dan dukungan berbagai
pihak. Untuk itu penulis ingin mengucapkan terimakasih sebesar-besarnya
kepada :
1. Ibu Dr. apt. Maulita Cut Nuria, M.Sc selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim Semarang.
2. Ibu apt. Aqnes Budiarti, S.F., M.Sc dan Ibu apt. Emy Susanti, S.Farm.,
M.Biomed selaku pembimbing utama dan pendamping yang telah
meluangkan waktu, tenaga, fikiran dan memberikan bimbingan kepada
penulis selama penyusunan skripsi.
3. Dosen penguji yang bersedia meluangkan waktu dan memberikan saran,
masukan dan koreksi terhadap skripsi ini.
vii
4. Seluruh dosen di Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
yang telah memberikan bekal ilmu pengetahuan sebagai dasar penulisan
skripsi ini.
5. Seluruh Staf di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Kimia Farmasi
Universitas Wahid Hasyim yang telah membantu untuk penelitian di
Laboratorium.
6. Teruntuk kedua orangtua saya yang senantiasa memberikan doa dan
dukungan lebih terhadap saya demi kelancaran semasa studi hingga
selesai.
7. Teman Seperjuangan Wahyu Setyaningsih dan Rotama Gurning yang
saling membantu dan pemberikan semangat hingga penyusunan skripsi ini
selesai.
8. Rekan kerjaku diapotek yang memberikan semangat, motivasi dan bantuan
dalam menyelesaikan skripsi.
9. Kakakku Abdul Rouf yang memberikan doa dan dukungannya dalam
segala hal.
10. Dan semua pihak yang tidak dapat saya sebutkan satu persatu yang telah
banyak membantu pada penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dan jauh dari
sempurna skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi dunia
farmasi yang sebagai mana mestinya.
Semarang, November 2020
viii
Melissa Oktavia
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL................................................................................................i
INTISARI................................................................................................................ii
ABSTRACT.............................................................................................................iii
PENGESAHAN SKRIPSI.....................................Error! Bookmark not defined.
PENGESAHAN SKRIPSI......................................................................................iv
SURAT PERNYATAAN........................................................................................v
PERSEMBAHAN...................................................................................................vi
KATA PENGANTAR...........................................................................................vii
DAFTAR TABEL...................................................................................................xi
BAB I. PENDAHULUAN.......................................................................................1
A. Latar Belakang..............................................................................................................1
B. Rumusan Masalah.........................................................................................................3
C. Tujuan Penelitian..........................................................................................................3
D. Manfaat Penelitian........................................................................................................3
E. Tinjauan Pustaka...........................................................................................................4
1. Daun Bidara Laut (Ziziphus mauritiana Lam)...............................................4
a. Definisi..........................................................Error! Bookmark not defined.
b. Klasifikasi Tanaman.....................................Error! Bookmark not defined.
c. Morfologi Daun Bidara Laut........................Error! Bookmark not defined.
d. Kandungan Daun Bidara Laut......................Error! Bookmark not defined.
2. Ekstraksi............................................................Error! Bookmark not defined.
3. Kuersetin............................................................Error! Bookmark not defined.
F. Landasan Teori...........................................................................................................14
G. Hipotesis.....................................................................................................................15
BAB II. METODE PENELITIAN.........................................................................16
A. Bahan dan Alat yang Digunakan.................................................................................16
1. Bahan............................................................................................................16
2. Alat...............................................................................................................16
B. Jalannya Penelitian......................................................................................................17
x
1. Determinasi Tanaman...................................................................................17
2. Preparasi Daun Bidara Laut..........................................................................17
a. Pembuatan Serbuk Simplisia Daun Bidara Laut..........................................17
b. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Bidara Laut (EEDBL)..............................18
3. Uji Kualitatif.............................................................................................................19
4. Pembuatan Larutan Standar Kuersetin..................................................................19
5. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal.............................................................19
6. Optimasi Fase Gerak................................................................................................19
7. Pembuatan Fase Gerak.............................................................................................20
8. Pembuatan Kurva Baku...........................................................................................20
9. Validasi......................................................................................................................20
a. Uji Linieritas.................................................................................................20
b. Uji Selektivitas.............................................................................................21
c. Uji Presisi.....................................................................................................22
d. Uji Akurasi...................................................................................................23
e. Uji Sensitivitas..............................................................................................21
10.Analisis KandunganAsam Galat.............................................................................24
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN......................................25
DAFTAR PUSTAKA............................................Error! Bookmark not defined.
LAMPIRAN...........................................................................................................41
xi
DAFTAR TABEL
Tabel I. Hasil optimasi komposisi fase gerak........Error! Bookmark not defined.

Tabel II. Hasil kurva baku kuersetin......................Error! Bookmark not defined.
Tabel V. Hasil uji linieritas kuersetin.....................Error! Bookmark not defined.
Tabel VI. Hasil uji sensitivitas (LOD dan LOQ) standar kuersetin..............Error!
Bookmark not defined.
Tabel III. Presisi kadar kuersetin hasil uji..............Error! Bookmark not defined.
Tabel VII. Hasil uji kadar kuersetin dalam EEDBL............Error! Bookmark not
defined.
xii
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Daun bidara laut (Ziziphus mauritiana Lam) adalah tanaman yang memiliki
banyak khasiat dalam pengobatan tradisional. Kandungan bidara laut antara lain
polifenol, flavonoid, tanin, alkaloid dan saponin (Setiawan dkk., 2014). Senyawa
fenolik berperan sebagai antioksidan alami pada tumbuhan. Senyawa fenolik
alami umumnya berupa polifenol yang membentuk senyawa eter,ester atau
glikosida antara lain flavonoid, tanin, kumarin dan lignin (Dhurhania dan
Novianto, 2018).
Senyawa fenolik adalah gugus hidroksi yang berikatan pada cincin aromatis
yang memilki satu (fenol) atau lebih (polifenol) sehingga mudah teroksidasi
dengan menyumbangkan atom hidrogen pada radikal bebas. Kemampuannya
membentuk radikal fenoksi yang stabil pada reaksi oksidasi menyebabkan
senyawa fenolik sangat potensial sebagai antioksidan (Dhurhania dan Novianto,
2018).
Aziz dkk., (2020) melakukan validasi metode KCKT untuk menetapkan
kadar asam klorogenat dalam ekstrak etanol daun yakon (Smallanthus
sonchifolius (Poepp. & Endl.) H. Robinson). Fase gerak yang digunakan adalah
asam format 0,1% dalam asetonitril dan asam format 0,1% dalam air. Fase diam
yang digunakan adalah oktadesilsilan (C18). Laju alir 0,8 mL/menit dan detektor
UV pada panjang gelombang 328 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Kadar
asam klorogenat dalam ekstrak daun yakon sebesar 1,02%.
1
Utami dkk., (2017) melakukan validasi metode KCKT untuk menetapkan
kadar senyawa barberin dari ekstrak etanol akar dan batang sekunyit (Fibraurea
tinctoria Lour). Fase gerak yang digunakan adalah campuran eluen metanol:air.
Fase diam yang digunakan adalah oktadesilsilan (C18). Laju alir 1 mL/menit dan
detektor UV pada panjang gelombang 346 nm. Hasil penelitian menunjukkan
bahwa ekstrak etanol sekunyit mengandung senyawa berberin sebesar 25,8%.
Wahid, (2020) melakukan validasi metode KCKT untuk menganalisis
kualitatif dan kuantitatif tanin ekstrak kulit buah delima putih (Punica Granatum
L.). Fase gerak yang digunakan adalah asam fosfat 0,55% (v/v). Fase diam yang
digunakan adalah oktadesilsilan (C18).Laju alir 1,5 mL/menit dan detektor UV
pada panjang gelombang 277 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar
tanin ekstrak etanol kulit buah delima sebesar 2,01%.
Kromatografi cair kinerja tinggi adalah teknik pemisahan yang paling
banyak digunakan karena memiliki kelebihan dalam hal sederhana, praktis dan
sensitif. Validasi metode analisis dilakukan untuk menjamin bahwa metode
analisis akurat, spesifik, reprodusibel dan tahan pada kisaran yang akan dianalisis
(Gandjar dan Rohman, 2007).
Berdasarkan latar belakang diatas maka dilakukan penelitian tentang
validasi metode analisis asam galat menggunakan KCKT dan aplikasinya dalam
EEDBL.
2
B. Rumusan Masalah
1. Apakah validasi metode analisis asam galat dalam EEDBL dapat dilakukan
dengan metode KCKT?
2. Berapa kadar asam galat dalam EEDBL dengan metode KCKT?
C. Tujuan Penelitian
1. Memvalidasi metode analisis asam galat dalam EEDBL dengan metode
KCKT dan aplikasinya.
2. Penetapan analisis kadar asam galat dalam EEDBL dengan metode KCKT.
D. Manfaat Penelitian
Hasil penelitian ini diharapkan menghasilkan validasi metode analisis asam
galat menggunakan KCKT dan aplikasinya dalam EEDBL.
3
E. Tinjauan Pustaka
1. Daun Bidara Laut (Ziziphus mauritiana Lam)
a. Definisi
Bidara laut (Ziziphus mauritiana Lam) adalah tanaman yang tumbuh di
daerah tropis dan subtropis. Berbagai bagian tanaman ini telah digunakan sebagai
obat tradisional pada berbagai penyakit. Semua bagian tanaman bidara banyak
digunakan dalam pengobatan tradisional seperti daun, buah, biji, akar dan batang
(Marwat dkk., 2009).
Gambar 1. Daun bidara laut (Ziziphus mauritiana Lam)
b. Klasifikasi Tanaman
Klasifikasi bidara laut sebagai berikut (Setiawan dkk., 2014)
Kingdom : Plantae
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Rosales
Family : Rhamnaceae
4
Genus : Strychnos
Spesies : Ziziphus Mauritiana Lam.
c. Morfologi Daun Bidara Laut
Bidara laut adalah pohon kecil dan berduri yang berdiameter batang
mencapai 30 cm dengan tinggi rata-rata 12 m. Kulit batang berwarna kuning
pucat, keras dan kuat. Semua bagian dari pohon bidara laut terasa pahit dan yang
paling pahit adalah bagian akarnya. Daun mempunyai ukuran sekitar 2,6 - 6,1 cm
x 1,7-3,7 cm dan bagian bawah daun pada umumnya mempunyai warna lebih
pusat daripada bagian atanya. Bidara laut mempunyai buah berbentuk bulat
dengan diameter 20–30 mm (Setiawan dkk., 2014).
d. Kandungan dan Khasiat Daun Bidara
Daun bidara laut memiliki senyawa aktif yang berperan sebagai pengobatan.
Senyawa yang terkandung dalam daun bidara yaitu fenolik, flavonoid, alkaloid,
tanin dan soponin. Semua bagian tanaman bidara laut banyak digunakan dalam
pengobatan trasisional seperti buah, daun, kulit batang dan akar. Daun bidara laut
digunakan untuk mengobati sebagai anticacing dan antioksidan. Selain sebagai
bahan obat, tanaman ini dapat digunakan untuk bahan baku kosmetik (Setiawan
dkk., 2014).
2. Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi
senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut
yang sesuai, kemudian semua pelarut diuapkan dan serbuk yang tersisa
5
diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes
RI, 2000).
Ekstraksi adalah penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga
terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Simplisia yang
diekstrak mengandung senyawa aktif yang dapat larut dan senyawa yang tidak
dapat larut seperti serat, karbohidrat dan protein. Beberapa jenis senyawa aktif di
dalam bidara laut mengandung fenolik, flavonoid, alkaloid, tanin dan saponin.
Struktur kimia yang berbeda-beda akan mempengaruhi kelarutan serta stabilitas
senyawa aktif yang ada dalam simplisia terhadap pemanasan, udara, cahaya,
logam berat dan derajat keasaman. Senyawa aktif dalam suatu simplisia, maka
pemilihan pelarut dan cara ekstraksi dapat dilakukan dengan cepat dan tepat
(Depkes RI, 2000).
Tujuan ekstraksi bahan alam yaitu untuk menarik komponen kimia yang
terdapat dalam suatu bahan alam yang didasarkan pada prinsip perpindahan
massa komponen zat ke dalam pelarut dimulai dari lapisan antar muka kemudian
berdifusi masuk ke dalam pelarut (Harbone, 1987). Pelarut yang baik adalah
pelarut yang dapat melarutkan zat aktif dari ekstrak serta membebaskan ekstrak
dari senyawa lain yang tidak diinginkan. Pelarut yang digunakan yaitu air,
etanol, campuran etanol air, metanol, kloroform, eter, dan heksan. Metode
ekstraksi yang dipilih sesuai dengan senyawa aktif yang terkandung didalam
simplisia. Salah satu metode yang mudah dilakukan adalah maserasi. Maserasi
merupakan salah satu metode ekstraksi cara dingin (Depkes RI, 2000).
6
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan
pelarut dengan beberapa kali pengadukan pada temperatur ruangan (kamar).
Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian
konsentrasi pada keseimbangan dalam senyawa terlarut dan pegadukan secara
terus menerus. Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut
setelah dilakukan penyaringan maserat pertama dan seterusnya. Keuntungan
metode maserasi adalah mudah dilakukan, murah, dan sederhana (Depkes RI,
2000).
3. Asam Galat
Asam galat (C6H2(OH)3CO2H) adalah turunan dari asam hidroksibenzoad
yang tergolong asam fenolik sederhana dan sebagai larutan standar yang stabil
dan murni (Apsari dan Susanti, 2011).
Struktur asam galat memiliki gugus fungsional –OH yang mampu bereaksi
dengan radikal bebas sehingga menghindari proses oksidasi lebih lanjut. Asam
galat mampu bereaksi dengan radikal bebas peroksi dan hidroksiperoksi yang
terbentuk dari reaksi oksidasi. Radikal asam galat yang terbentuk distabilkan
melalui interaksi dua ikatan hidrogen pada posisi ortho (Apsari dan Susanti,
2011).
Fenolik adalah gugus hidroksi yang berikatan pada cincin aromatis yang
memilki satu (fenol) atau lebih (polifenol) sehingga mudah teroksidasi dengan
menyumbangkan atom hidrogen pada radikal bebas. Struktur asam galat dapat
dilihat pada gambar 2.
7
Gambar 2. Struktur Kimia Asam Galat
4. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Kromatografi adalah suatu proses pemisahan analit dalam suatu sampel
yang terdistribusi menjadi dua fase, yaitu fase diam dan fase gerak. KCKT atau
biasa juga disebut dengan HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
dimana teknik pemisahan sejumlah senyawa organik dan anorganik, senyawa
biologis, analisis ketidakmurnian dan analisis senyawa-senyawa yang tidak
mudah menguap (Gandjar dan Rohman, 2007). Skema komponen KCKT dapat
Gambar 3. Skema Komponen KCKT
8
Komponen KCKT adalah sebagai berikut :
a. Wadah fase gerak dan fase gerak.
Wadah fase gerak harus bersih dan lembab (inert). Wadah fase gerak pada
umumnya dapat menampung fase gerak antara satu sampai dua liter pelarut.
Fase gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat
bercampur yang berperan dalam daya elusi dan resolusi dimana daya tersebut
ditentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam dan sifat
komponen-komponen sampel, kemampuan elusi meningkat dengan
meningkatnya polaritas pelarut untuk fase normal (fase diam lebih polar dari
pada fase gerak) dan untuk fase terbalik (fase diam kurang polar dari pada fase
gerak) kemampuan elusi menurun dengan meningkatnya polaritas, sebelum
menggunakan fase gerak harus disaring untuk menghindari partikel-partikel
kecil dan dilakukan penghilangan gas (degassing) dengan cara di sonifikasi,
karena adanya gas akan mengacaukan analisis (Gandjar dan Rohman, 2007).
b. Pompa
Pompa yang digunakan untuk KCKT adalah pompa yang mempunyai
syarat sebagaimana syarat wadah pelarut, yaitu pompa harus inert terhadap fase
gerak. Bahan yang umum digunakan untuk pompa yaitu teflon, gelas, baja tahan
karat. Kecepatan alir 20 mL/menit digunakan untuk preparatif pompa.
Ada dua jenis alat pemompa yang digunakan dalam kromatografi cair
kinerja tinggi yaitu pompa dengan aliran fase gerak konstan dan pompa dengan
tekanan konstan. Tujuan penggunaan pompa yaitu untuk menghantarkan fase
9
gerak dari wadah fase gerak melewati detektor dan menuju ke pembuangan,
aliran harus konstan dan bebas dari gangguan.
c. Tempat penyuntikan sampel
Alat penyuntik terbuat dari tembaga tahan karat dan katup teflon yang
dilengkapi dengan keluk sampel (sample loop) internal atau eksternal. Pada saat
pengisian sampel, sampel digelontor melewati keluk sampel dan kelebihanya
dikeluarkan ke pembuang (Gandjar dan Rohman, 2007).
d. Kolom
Kolom pada KCKT dibagi menjadi dua jenis yaitu kolom konvensional
dan kolom mikrobor. Kolom mikrobor mempunyai 3 keuntungan dibandingkan
dengan kolom konvensional, yaitu :
1) Komsumsi fase gerak kolom mikrobor hanya 80% atau lebih kecil dibanding
dengan kolom konvensional karena pada kolom mikrobor kecepatan alir fase
gerak yang lebih lambat (10-100 µl /menit).
2) Adanya aliran fase gerak yang lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih
ideal jika digabung dengan spektrometer massa.
3) Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solut lebih pekat, karenanya
jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel terbatas misal sampel
klinis.
Fase diam yang sering digunakan berupa silika yang dimodifikasi secara
kimiawi, silika yang tidak dimodifikasi atau polimer-polimer stiren dan divinil
benzen, permukaan silika adalah polar dan sedikit asam karena adanya residu
gugus silanol (Si-OH). Fase diam C18 adalah fase diam yang paling banyak
10
digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran
rendah, sedang, maupun tinggi (Gandjar dan Rohman, 2007).
e. Detektor
KCKT dilengkapi dengan detektor UV- Vis sehingga dapat mendeteksi
suatu zat atau senyawa. Detektor pada metode KCKT dibagi menjadi dua
golongan yatu :
1) Detektor universal (mampu mendeteksi zat secara umum, tidak bersifat
spesifik, dan tidak bersifat selektif).
2) Detektor spesifik (mampu mendeteksi analit secara spesifik dan selektif).
5. VALIDASI
Validasi metode analisis yaitu suatu tindakan penilaian terhadap parameter
suatu prosedur untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi
persyaratan yang telah ditetapkan. Parameter validasi metode analisis dibagi
menjadi 5 parameter meliputi linieritas, sensitivitas, selektivitas, presisi dan
akurasi (Harmita, 2004). Parameter tersebut diuraikan dan didefinisikan sebagai
berikut :
a. Linieritas
Linieritas adalah kemampuan suatu metode analisis untuk memperoleh
hasil-hasil uji yang secara langsung dan proporsional dengan konsentrasi analit
pada kisaran yang diberikan. Pengujian linieritas dilakukan sebanyak 3 kali
dengan cara menghubungkan antara respon (y) dengan konsentrasi (x). Linieritas
dapat diukur dengan melakukan pengukuran tunggal pada konsentrasi yang
berbeda-beda. Data yang diperoleh selanjutnya ditentukan nilai slope, intersep
11
dan koefisien korelasinya dengan persamaan Y = BX + A (Gandjar dan Rohman,
2007).
b. Sensitivitas
Batas deteksi (LOD) merupakan konsentrasi paling rendah dalam sampel
yang masih terdeteksi, tetapi tidak selalu bisa dikuantifikasi. LOD merupakan
batas uji yang secara spesifik menyatakan apakah analit berada diatas atau
dibawah nilai tertentu. Batas nilai kuantitasi (LOQ) yaitu konsentrasi analit
paling rendah pada sampel yang ditentukan dengan presisi dan akurasi yang bisa
diterima pada kondisi operasional metode yang digunakan. LOD dan LOQ
diekspresikan sebagai konsentrasi. LOD dan LOQ bisa dihitung secara statistik
dengan regresi linier dan kurva kalibrasi (Ganjar dan Rohman, 2007).
c. Selektivitas
Selektivitas adalah suatu kemampuan dari metode analisis untuk mengukur
analit yang dituju secara tepat dan spesifik dengan adanya komponen-komponen
lain dalam matriks. Penggunaan detektor pada panjang gelombang yang spesifik
juga merupakan cara yang efektif untuk melakukan pengukuran selektifitas.
Daya pisah (resolusi) antara analit yang dituju dengan pengganggu lainnya >1,5
(Gandjar dan Rohman, 2007). Selektivitas ditentukan melalui perhitungan nilai
resolusinya (R) dengan rumus:
t R 2−t R 1
R=2
W 1 +W 2
Keterangan:
R = Resolusi
12
tR2 = Waktu retensi puncak pertama
tR2 = Waktu retensi puncak kedua
W1 = Lebar dasar puncak pertama
W2 = Lebar dasar puncak kedua
d. Presisi
Presisi adalah kedekatan antar serangkaian hasil dimana hasil tersebut
diperoleh dari beberapa kali pengujian. Presisi digambarkan dengan %RSD
(Relative Standart Deviation). Syarat nilai presisi yang baik yaitu kurang dari
2%. Nilai RSD dirumuskan dengan :
SD
RSD= 100 %
x́
Keterangan :
SD = Standar Deviasi
x́ = Kadar rata-rata sampel
e. Akurasi
Akurasi adalah kedekatan antara hasil pengujian dengan hasil sebenarnya.
Sampel dibuat metode yang akan diuji validitasnya. Syarat nilai akurasi yang
baik yaitu berkisar antara 98 - 102% (Harmita, 2004). Nilai % perolehan
kembali dirumuskan dengan :
A−B
% Perolehan Kembali= x 100 %
C
Keterangan :
13
A = Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku.
B = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku
C = Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan.
F. Landasan Teori
Aziz dkk., (2020) melakukan penelitian validasi metode KCKT untuk
menetapkan kadar asam klorogenat dalam ekstrak etanol daun yakon
(Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.) H. Robinson). Fase gerak yang
digunakan adalah asam format 0,1% dalam asetonitril dan asam format 0,1%
dalam air. Fase diam yang digunakan adalah oktadesilsilan (C18). Laju alir 0,8
mL/menit dan detektor UV pada panjang gelombang 328 nm. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa Kadar asam klorogenat dalam ekstrak daun yakon sebesar
1,02%.
Utami dkk., (2017) melakukan penelitian validasi penelitian metode KCKT
untuk menetapkan kadar senyawa barberin dari ekstrak etanol akar dan batang
sekunyit (Fibraurea tinctoria Lour). Fase gerak yang digunakan adalah
campuran eluen metanol:air. Fase diam yang digunakan adalah oktadesilsilan
(C18). Laju alir 1 mL/menit dan detektor UV pada panjang gelombang 346 nm.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol sekunyit mengandung
senyawa berberin sebesar 25,8%.
Wahid, (2020) melakukan penelitian validasi penelitian metode KCKT
untuk menganalisis kualitatif dan kuantitatif tanin ekstrak kulit buah delima
putih (Punica Granatum L.). Fase gerak yang digunakan adalah asam fosfat
14
0,55% (v/v). Fase diam yang digunakan adalah oktadesilsilan (C18).Laju alir 1,5
mL/menit dan detektor UV pada panjang gelombang 277 nm. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa kadar tanin ekstrak etanol kulit buah delima sebesar 2,01%.
G. Hipotesis
Berdasarkan tinjauan pustaka dan landasan teori, maka dapat disusun
hipotesis sebagai berikut:
1. Metode analisis asam galat dalam EEDBL dapat tervalidasi.
2. EEDBL mengandung asam galat.
15
BAB II. METODE PENELITIAN
A. Bahan dan Alat yang Digunakan
1. Bahan
Bahan yang akan digunakan untuk maserasi adalah daun bidara laut
(Ziziphus mauritiana Lam), bahan pelarut yang digunakan adalah etanol 70%,
bahan yang digunakan uji kualitatif adalah etanol p.a dan FeCl3 5%. Bahan yang
digunakan pada uji KCKT adalah EEDBL, metanol dan aqua p.a sebagai fase
gerak dan asam galat sebagai larutan standar.
2. Alat
Alat yang digunakan dalam maserasi adalah tampah, kertas payung, blender,
oven, moisture balance, corong bunchen, rotary evaporator, dan alat-alat gelas.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah KCKT (Jazco) terdiri dari
pompa (PU 2080 plus), injektor manual, kolom C18 (125×4,6 mm), detektor UV
(2070 plus) dan pengolahan data pada komputer (Ezchrom elite),
spektrofotometer UV-VIS (1800 Shimadzu).
Digital Ultrasonic Cleaner (Jeken), mikropipet (Socorex), membrane filter
0,45 μm (Whatman), dan alat-alat gelas yang lazim digunakan di Laboratorium
Kimia Analisis.
16
B. Jalannya Penelitian
1. Determinasi Tanaman
Determinasi tanaman dilakukan untuk mengetahui identitas tanaman yang
digunakan pada penelitian yaitu tumbuhan daun bidara laut. Determinasi
tanaman dilakukan di Laboratorium Ekologi dan Biosistematika Jurusan Biologi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Diponegoro
Semarang.
2. Preparasi Daun Bidara Laut
a. Pembuatan Serbuk Simplisia Daun Bidara Laut
Daun bidara laut segar dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan
pengotor yang menempel. Daun bidara laut sebanyak 3 kg dikeringkan dengan
oven pada suhu 50˚C sampai kering dengan ditandai daun mudah hancur bila
diremas dengan tangan. Simplisia disortasi kering untuk memastikan tidak ada
pengotor atau memisahkan bagian simplisia yang sudah rusak atau gosong
akibat pengovenan. Simplisia kering dibuat serbuk dengan menggunakan alat
penyerbuk elektrik untuk mendapatkan derajat halus yang sama.
Persyaratan kadar air simplisia kering sebelum dilakukan proses
penyaringan yaitu kurang dari 10% (Depkes RI, 1985). Prosedur pemeriksaan
kadar air yaitu dengan menimbang kurang lebih 1 gram serbuk daun bidara laut
dan dihitung kadar airnya menggunakan alat moisture balance didapatkan kadar
air 5,0%. Setelah diperoleh hasil kadar air, susut pengeringan serbuk simplisia
dihitung dengan rumus sebagai berikut :
berat sortasi basah−berat sortasi kering

Susut pengeringan = × 100%
berat sortasi basah
17
Serbuk daun bidara laut disimpan di tempat yang tidak terkena sinar
matahari supaya tidak terjadi dekomposisi kandungan senyawa dan diberi silika
gel agar dapat tahan lama (Depkes RI, 1985).
b. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Bidara Laut
Serbuk daun bidara laut sebanyak 200 gram diekstraksi menggunakan
metode maserasi. Maserasi Serbuk simplisia dimasukkan ke dalam toples kaca
yang bersih, ditambahkan cairan penyari etanol 70% sebanyak 1500 mL. Toples
kaca ditutup rapat diletakkan pada tempat yang terlindung dari cahaya dan
dilakukan selama 3 hari, diaduk 2 kali sehari hingga homogen. Setelah 3 hari
dilakukan proses penyaringan, hasil penyaringan ini disebut maserat I. Ampas
hasil penyaringan diremaserasi dengan menambahkan etanol 70% sebanyak 500
mL dan diletakkan pada tempat yang terlindung dari cahaya selama 2 hari
dengan perlakuan yang sama diaduk sehari 2 kali hingga homogen dan setelah 2
hari dilakukan proses penyaringan. Hasil penyaringan ini disebut maserat II.
Hasil filtrat maserasi dan remaserasi dicampur dan dipekatkan menggunakan
rotary evaporator pada suhu 54˚C dengan kecepatan 70 rpm sampai diperoleh
ekstrak kental. Setelah diperoleh ekstrak kental daun bidara laut, rendemen
ekstrak kental dihitung dengan rumus sebagai berikut :
Bobot serbuk ( Kg )
% Rendemen simplisia = x 100%
Bobot Sortasi Basah (Kg)
18
Ekstrak kental yang didapatkan kemudian disimpan guna mempertahankan
kualitas fisik dan kestabilan kandungan senyawa aktif daun bidara laut sehingga
tetap memenuhi persyaratan mutu (Depkes RI, 1985).
3. Uji Kualitatif
EEDBL ditimbang sebanyak 2 gram secara seksama, dilarutkan
menggunakan etanol p.a sebanyak 10 mL, diaduk hingga homogen ditambahkan
FeCl3 5% sebanyak 3 tetes. Hasil EEDBL menunjukkan positif adanya fenolik
dengan ditandai perubahan warna hijau kehitaman.
4. Pembuatan Larutan Standar Asam Galat

Asam galat ditimbang sebanyak 100 mg secara seksama dan dimasukkan ke
dalam labu takar 100 mL. Asam galat dilarutkan dengan pelarut metanol sampai
tanda batas. Dari larutan stok 1000 µg/mL yang sudah jadi diambil sebanyak 1
mL dimasukkan ke dalam labu takar 50 mL hingga tanda batas (Kadar 20
µg/mL).
5. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal
Penentuan panjang gelombang pengukuran larutan standar asam galat dibuat
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 258 nm.
6. Optimasi Fase Gerak
Optimasi komposisi fase gerak yang digunakan terdiri dari campuran fase
gerak metanol:air dengan perbandingan metanol:air (50:50 v/v), metanol:air
(45:55 v/v), metanol:air (55:45 v/v). Laju alir yang digunakan yaitu 1,0
mL/menit. Perbandingan fase gerak dipilih yang memberikan data paling
optimal.
19
7. Pembuatan Fase Gerak
Fase gerak dari campuran metanol dan air perbandingan (50:50 v/v).
Pembuatan fase gerak untuk 250 mL diambil 125 mL metanol dimasukkan ke
dalam labu takar 250 mL dan ditambahkan 125 mL air. Campuran fase gerak
diultrasonikasi selama 15 menit.
8. Pembuatan Kurva Baku

Larutan stok asam galat 20 µg/mL dipipet 500, 1000, 1500, 2000, 2500 dan
3000 µL dimasukkan ke dalam labu takar 5 mL dengan pelarut metanol hingga
tanda (kadar larutan asam galat menjadi 2, 4, 6, 8, 10 dan 12 µg/mL).
Masing-masing larutan diinjeksikan ke dalam sistem KCKT dengan volume
penyuntikan 20 µL dideteksi pada panjang gelombang 258 nm dan laju alir 1,0
mL/menit. Replikasi masing-masing kurva baku sebanyak 6 kali.
9. Validasi
a. Uji Linieritas
Uji linieritas dilakukan dengan cara:
1) Larutan standar asam galat dengan konsentrasi 2, 4, 6, 8, 10 dan 12
µg/mL kemudian diinjeksikan sebanyak 20 μL ke alat KCKT.
2) Luas area dari puncak standar asam galat yang diperoleh setiap
konsentrasinya dibuat persamaan regresi linier, dan dihitung koefisien
korelasinya.
3) Uji linieritas dilakukan 3 kali pengulangan.
20
4) Persamaan garis linier yang paling baik digunakan sebagai persamaan
kurva baku dalam menetapkan kadar sampel.
5) Sebagai parameter adanya hubungan linier digunakan koefisien
korelasi r pada analisis regresi linier y = bx + a. Hubungan linnier yang
ideal dicapai jika nilai b = 0 dan r = +1 atau –1 bergantung pada arah
garis (Harmita, 2004).
b. Uji Sensitivitas
Kepekaan dapat diukur dengan nilai limit deteksi (LOD) dan limit
kuantitatif (LOQ), LOD merupakan batas deteksi suatu analit, kadar terkecil
analit dalam larutan standar kuersetin yang dapat terdeteksi dan masih
memberikan respon berbeda dengan respon blanko. Nilai LOD diperoleh dari
persamaan Y= YB + 3 SB. LOQ merupakan kuantitas terkecil dalam sampel
yang masih dapat menunjukkan pengukuran secara teliti dan tepat. Nilai LOQ
diperoleh dari persamaan Y= YB + 10 SB. Semakin kecil nilai LOD dan LOQ
maka semakin peka suatu metode (Gandjar dan Rohman, 2007).
c. Uji Selektivitas
Larutan standar asam galat diinjeksikan sebanyak 20 μL ke alat KCKT.
Berdasarkan kromatogram dapat dilihat puncak analit standar asam galat
terpisah dengan sempurna.
Selektivitas metode dapat ditentukan melalui perhitungan daya resolusinya
(Rs) dengan persamaan:
21
t R 2−t R 1
R=2
W 1 +W 2
Keterangan:
R = Resolusi
tR2 = Waktu retensi puncak pertama
tR2 = Waktu retensi puncak kedua
W1 = Lebar dasar puncak pertama
W2 = Lebar dasar puncak kedua
Nilai resolusi digunakan sebagai parameter untuk menunjukkan selektivitas
metode analisis berdasarkan pemisahan antar puncak (peak) dengan nilai yang
baik ≥ 2 (Gandjar dan Rohman, 2007).
d. Uji Presisi
Penentuan presisi dilakukan dengan mengukur larutan standar asam galat
konsentrasi 100% sebanyak 6 kali. Presisi ditentukan dengan menghitung
deviasi standar antar beberapa pengukuran sampel. Presisi dinyatakan dengan
%RSD (Relative Standard Deviation) dan persyaratan % RSD ≤ 2 (Gandjar dan
Rohman, 2007).
SD
RSD = x 100%
x́
Keterangan :
22
SD = Standar Deviasi
x́ = Kadar rata-rata sampel
e. Uji Akurasi
Uji akurasi metode analisis ditentukan dengan parameter persen perolehan
kembali dengan metode penambahan baku pada analit. Sampel dianalisis,
kemudian bahan baku (80, 100 dan 120% dari kadar analit target) ditambahkan
ke dalam sampel, dicampurkan dan dianalisis lagi. Masing-masing larutan
disaring menggunakan membran filter 0,45 μm kemudian diinjeksikan sebanyak
20μL, masing-masing direplikasi 3 kali. Perolehan kembali dihitung dengan
membandingkan jumlah sampel EEDBL terukur untuk masing-masing
penambahan baku terhadap kadar baku asam galat yang ditambahkan. Penelitian
ini dilakukan uji ketepatan dengan metode uji perolehan kembali. Uji ketepatan
dilakukan dengan cara sebagai berikut:
A−B
Perolehan Kembali (%) = x 100 %
C
Keterangan:
A = konsentrasi sampel + konsentrasi standar yang terukur
B = konsentrasi sampel
C = konsentrasi standar teoretis yang ditambahkan (Harmita, 2004).
Nilai perolehan kembali bergantung pada matriks sampel, prosedur proses
sampel, dan konsentrasi analit. Batas penerimaan PK adalah 98-102% (Harmita,
2004).
23
10. Analisis KandunganAsam Galat
Preparasi sampel EEDBL ditimbang 100 mg secara seksama, dilarutkan
dengan metanol ke dalam labu takar 50 mL sampai tanda batas. Saring larutan
sampel dengan membran filter 0,45 µm sebanyak 5 kali. Diinjeksikan sampel ke
dalam sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µL. Lakukan replikasi
masing-masing sebanyak 6 kali.
24
25
BAB III. HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Determinasi Tanaman Bidara Laut
Determinasi dari suatu tanaman bertujuan untuk mengetahui kebenaran
identitas tanaman, apakah tanaman tersebut benar-benar tanaman yang diinginkan.
Tanaman bidara laut (Ziziphus mauritiana Lam) yang digunakan untuk penelitian
ini dideterminasi di Laboratorium Ekologi dan Biosistematika Jurusan Biologi
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Diponegoro
Semarang dengan menggunakan buku Flora of Java karangan Backer dan Van den
Brink (1968). Hasil determinasi tanaman bidara laut menunjukkan bahwa tanaman
yang digunakan benar-benar Ziziphus mauritiana Lam dengan kunci determinasi
sebagai berikut : 1b-2b-3b-4b-6b-7b-9b-10b-11b-12b-13b-14b-15a-(Gol 8 daun
tunggal, terletak tersebar)-239b-243b-244b-248b-249b-250b-146a-147b-150b-
151a (Famili 71 Rhamnaceae) Genus: Ziziphus-Species: Ziziphus mauritiana
Lam.
B. Pengumpulan dan Pengeringan Daun Bidara Laut
Daun bidara laut diambil dari Meteseh, Kecamatan Tembalang, Semarang
pada bulan Mei 2020. Daun bidara laut dipilih dalam keadaan baik dan tidak
cacat. Daun bidara laut yang sudah diambil, dilakukan proses sortasi basah dengan
tujuan memisahkan kotoran yang menempel pada daun bidara laut dicuci dengan
air mengalir dengan tujuan menghilangkan kotoran yang menempel pada daun
bidara laut dan dikeringkan menggunakan oven pada suhu 50°C. Tujuan
26
pengeringan untuk mendapatkan daun bidara laut yang sudah kering tidak mudah
rusak, sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama (Depkes RI, 1985).
C. Ekstrak Etanol Daun Bidara Laut
Pengubahan bentuk simplisia kering menjadi serbuk bertujuan untuk
memperluas permukaan kontak dari simplisia sehingga mempermudah kelarutan
senyawa aktif dalam cairan penyari untuk mendapatkan kandungan senyawa
didalamnya (Voight,1995). Serbuk daun bidara laut memiliki kadar air ≤ 5%.
Syarat kadar air untuk serbuk simplisia tidak lebih dari 10% (Depkes RI, 1985).
Daun bidara laut segar sebanyak 3000 gram, daun bidara laut kering sebanyak
1100 gram sedangkan serbuk simplisia sebanyak 1090 gram. Randemen simplisia
daun bidara laut yang dihasilkan sebanyak 36,333% dan susut pengeringan
simplisia daun bidara laut yang dihasilkan sebanyak 63,333%.
Bobot serbuk simplisia daun bidara laut yang digunakan untuk proses
ekstraksi sebanyak 200 gram. Proses ekstraksi menggunakan metode maserasi
dengan pelarut etanol 70% dikerjakan 5 hari dengan pengadukan 2 kali sehari
yaitu pagi dan sore. Maserat yang didapatkan sebanyak 1,8 L selanjutnya
dikentalkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50oC. Ekstrak kental yang
didapatkan sebanyak 23 gram dan randemen ekstrak kental sebanyak 11,5%. Hasil
EEDBL berwarna hijau pekat dan kental.
D. Identifikasi Senyawa Asam Galat
Sebelum dilakukan validasi metode analis asam galat dalam EEBDL, maka
dilakukan uji kualitatif dengan maksud untuk memastikan bahwa dalam ekstrak
27
etanol daun bidara laut terkandung senyawa metabolit sekunder fenolik (Syafitri,
2014).
Hasil identitas uji tabung menunjukkan ekstrak etanol daun bidara laut
positif adanya fenolik dengan ditandai perubahan warna hijau kehitaman. Tujuan
penambahan FeCl3 adalah untuk bereaksi dengan salah satu gugus hidroksil yang
ada pada senyawa polifenol. Adapun reaksi yang terjadi antara senyawa fenol
dengan FeCl3 terlihat pada Gambar 4
Gambar 4. Reaksi Fenolik dengan FeCl3
E. Optimasi Panjang Gelombang Maksimum Asam Galat
Tujuan dilakukan penentuan panjang gelombang maksimal adalah untuk
mendapatkan panjang gelombang yang memberikan nilai absorbansi maksimal
dan stabil. Hasil penelitian yang diperoleh penentuan panjang gelombang
maksimum asam galat dengan menggunakan spektrofotometri UV-Vis 258 nm.
Hasil scanning dapat dilihat pada Gambar 5.
F. Optimasi Fase Gerak
Optimasi fase gerak digunakan untuk menentukan fase gerak yang paling
optimum. Fase gerak terdiri atas campuran pelarut yang dapat bercampur secara
keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi. Daya elusi dan resolusi
ditentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat
komponen-komponen sampel (Gandjar dan rohman, 2009). Komposisi fase gerak
28
terdiri dari metanol:air 50:50 v/v. Optimasi fase gerak dilakukan dengan cara
merubah jumlah perbandingan antara metanol:air 50:50 v/v sedikit demi sedikit
agar diperoleh komposisi yang tepat. Panjang gelombang yang didapatkan 258 nm
dan laju alir yang digunakan 1 mL/menit. Hasil optimasi metanol:air 50:50v/v
terlihat pada gambar 6.
(a)
(b)
(c)
29
Gambar 6. Hasil kromatogram optimasi fase gerak
Keterangan:
a. Fase gerak campuran metanol:air (50:50) v/v
b. Fase gerak campuran metanol:air (45:55) v/v
c. Fase gerak campuran metanol:air (55:45) v/v
Tabel 1. Hasil optimasi fase gerak
Komposisi
tR (menit) Luas Puncak Keterangan
Fase Gerak
50 : 50 0,787 132286
45 : 55 0,777 125318 Optimasi
55 : 45 0,790 125684
Pada optimasi komposisi fase gerak pertama yaitu metanol:air dengan
perbandingan 45:55 v/v, menghasilkan kromatogram dengan area puncak yang
kurang luas, waktu retensi (tR) yang lebih lama dan peaknya simetris.
Pada optimasi komposisi fase gerak kedua yaitu metanol:air dengan
perbandingan 50:50 v/v, menghasilakn kromatogram dengan area puncak yang
dihasilkan luas dan waktu retensi (tR) lebih cepat dan peaknya simetris.
Pada optimasi komposisi fase gerak ketiga yaitu metanol:air dengan
perbandingan 55:45 v/v, menghasilkan kromatogram dengan area puncak kurang
luas, waktu retensi (tR) lebih singkat dan peaknya simetris.
Berdasarkan optimasi komposisi fase gerak yang dipilih adalah waktu
retensi yang cepat dan peaknya simetris serta menghasilkan area puncak yang
luas. Jadi optimasi komposisi yang dipilih adalah optimasi komposisi
perbandingan 50:50 v/v.
30
G. Pembuatan Kurva Baku Asam Galat
Kurva baku adalah kurva yang diperoleh dengan memplotkan nilai absorban
dengan konsentrasi larutan standar yang bervariasi menggunakan panjang
gelombang maksimal. Dalam kurva baku digunakan rentang konsentrasi yang
berfungsi untuk mendapatkan persamaan regresi linier yang nantinya akan
digunakan untyuk menetapkan kadar sutu sampel. Pembuatan kurva baku asam
galat dilakukan dengan membuat enam seri kadar dari larutan standar asam galat
yaitu 2, 4, 6, 8, 10 dan 12 µg/mL.
Diinjeksikan ke sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µL dideteksi
pada panjang gelombang 258 nm dengan laju alir 1,0 mL/menit. Hasil yang
didapatkan persamaan regresi linier dari hubungan antara kadar vs luas area
adalah y = 34329,51x + (-9305,27) dengan koefesien korelasi (r) = 0,9997.
Persamaan regresi linier yang didapat digunakan untuk penetapan kadar asam
galat dalam sediaan EEDBL. Hasil pembuatan kurva baku ditunjukkan pada tabel
II dan gambar 5 dibawah ini.
Tabel II. Hasil kurva baku asam galat
Kadar Luas area

2 59016
4 125318
6 198717
8 269918
10 331148
12 401891
31
Gambar 5. Hasil scanning optimasi panjang gelombang
Kurva baku secara KCKT yang diperoleh dari seri kadar 2,4,6,8,10 dan 12
µg/mL hingga menghasilkan grafik kurva baku yang linier dengan nilai (r) adalah
0,9997.
H. Validasi Metode Analisis
1. Uji Linieritas
Uji linieritas bertujuan untuk mengetahui apakah dua variabel mempunyai
hubungan yang linier atau tidak secara signifikan. Uji linieritas digunakan sebagai
persyaratan dalam analisis korelasi atau regresi linier. Uji linieritas dilakukan pada
enam konsentrasi asam galat yaitu 2, 4, 6, 8, 10 dan 12 µg/mL. Uji dilakukan 3
kali replikasi dari masing-masing konsentrasi. Hasil uji linieritas dapat dilihat
pada tabel III.
Tabel III. Hasil uji linieritas asam galat
32
Persamaan
No Konsentrasi (µg/mL) Luas Puncak
Regresi
2 60375
4 122345
a : (- 9305,27)
6 209918
1 b : 34329,51 x
8 286091
r : 0,9997
10 351148
12 454594
15 364257
30 591127
a = 186592,45
45 777398
2 b = 13033,51
60 998453
r = 0,9978
75 1126586
90 1367289
15 363879
30 581745
a = 128847,8
45 728551
3 b = 14349,37
60 983597
r = 0,9958
75 1166912
90 1468453
Penetapan uji kinieritas berdasarkan pada hubungan linier antara konsentrasi
sampel dengan luas area kromatogram. Dari ketiga persamaan regresi linier pada
tabel III dapat diketahui bahwa ketiga garis tersebut menunjukkan kolerasi yang
baik dengan koefisien korelasi (r) memenuhi kriteria nilai r yang dapat diterima
yaitu lebih besar dari 0,990.
Persamaan garis regresi terbaik yaitu linieritas pada replikasi ketiga dengan
nilai sebesar Y= 34329,51x + (-9305,27) dengan nilai r = 0,9997. Persamaan
regresi linier ini digunakan untuk menghitung penetapan kadar fenolik asam galat
dalam EEDBL. Hubungan linier antara konsentrasi fenolik asam galat terhadap
luas area dapat dilihat pada gambar 5.
33
Gambar 6. Hasil grafik linieritas kadar asam galat
2. Uji Sensitivitas
Uji sensitivitas metode analis dinyatakan limit of detection (LOD) dan
limit of quantification (LOQ). Nilai LOD dan LOQ pada penelitian ini
ditentukan berdasarkan persamaan regresi linier y = 34329,51 x + (- 9305,27)
dengan nilai r = 0,9997. LOD diperoleh dari persamaan Y = YB + 3 SB. LOQ
adalah kuantitas terkecil analit dalam sampel yang memenuhi kriteria cermat dan
saksama. LOQ diperoleh dari persamaan Y = YB + 10 SB. Hasil uji LOD sdan
LOQ dapat dilihat pada tabel IV.
Tabel IV. Hasil uji sensitivitas LOD dan LOQ asam galat
No. Metode LOD LOQ
((µg/mL) (µg/mL)
1. KCKT 0,261 0,871
Berdasarkan tabel hasil uji sensitivitas LOD dan LOQ diperoleh nilai LOD
0,261 µg/mL dan nilai LOQ 0,871 µg/mL. Semakin kecil nilai LOD dan LOQ
maka sensitif suatu metode analisis (Gandjar dan rohman, 2009).
34
3. Uji Selektivitas
Uji selektivitas bertujuan untuk mentukan nilai resolusi (R) antara puncak
asam galat dan komponen lainnya yang ikut ditetapkan. Semakin nilai resolusi
maka pemisahan komponen-komponen yang terelusi dengan waktu retensi yang
berdekatan semakin efisien. Berdasarkan hasil kromatogram asam galat dapat
Gambar 7. Hasil kromatogram optimasi komposisi fase gerak
Berdasarkan hasil yang terukur kromatogram kadar asam galat adalah fase
gerak metanol:air 50:50 v/v sedangkan komponen lainnya dalam matriks tidak
teratur. Hasil kesimpulan bahwa metode analisis memiliki selektivitas yang baik
sehingga mampu mengukur asam galat secara cermat pada saat bersama dengan
sampel.
4. Uji Presisi
Uji presisi bertujuan untuk mengukur memyebaran hasil individual dari
rata-rata jika prosedur secara berulang-ulang pada sampel yang diambil dari
campuran yang homogen. Dilakukan penetapan kadar asam galat dengan
konsentrasi 20 πg/mL dan replikasi sebanyak 6 kali. Penetuan uji presisi
berdasarkan nilai RSD waktu retensi, luas area, dan tinggi puncak kromatogram.
35
Dari hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa metode analisis yang divalidasi
memiliki ketelitian yang baik karena semua nilai memenuhi persyaratan nilai RSD
yang dapat diterima yaitu kurang dari 2% (Harmita, 2004). Hasil uji presisi kadar
fenolik asam galat EETBL
dapat dilihat pada tabel V.
Tabel V. Hasil uji presisi kadar asam galat
kadar fenolik
kadar
Kadar (ppm) sebelum
Luas sebelum kandungan
Sampel sesudah pengenceran
Puncak pengenceran %
pengenceran dalam 1 g sampel
(ppm)
(mg)
1 122213 3,831 19,155 0,192 0,192
2 122759 3,847 19,235 0,192 0,192
3 122828 3,849 19,245 0,192 0,192
4 123089 3,857 19,283 0,193 0,193
5 123351 3,864 19,321 0,193 0,193
6 123382 3,865 19,326 0,193 0,193
Rata-rata 0,193
SD 0,0006
RSD 0,331%
5. Uji Akurasi
Uji akurasi bertujuan untuk menentukan parameter persen perolehan
kembali dengan motode penambahan baku pada analit (standard addition
method). Uji sampel dianalisis dengan sejumlah bahan baku 80%,100%,120%
dari target kadar analit ditambahkan kedalam sampel, dicampur dan dianalisis
kembali. Masing-masing sampel direplikasi sebanyak 3 kali. Perolehan
kembali dihitung dengan membandingkan jumlah kadar asam galat EEDBL
yang terukur untuk masing-masing penambahan baku terhadap kadar baku
asam galat yang ditambahkan. Ukuran yang diperoleh menunjukkan derajat
36
kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Nilai range
akurasi yaitu antara 98-102% (Harmita, 2004).
Tabel VI. Hasil uji akurasi kadar asam galat

Kadar
Kadar Baku
Total
Replikas Sampel (C) Perolehan Rata-
waktu (A) SD %RSD
i (B) (µg/mL kembali (%) rata
(µg/mL
(µg/mL) )
)
1 7,735 3,831 3,922 99,524
0,153
100:80 2 7,739 3,831 3,922 99,645 99,665 0,152
%
3 7,747 3,831 3,922 99,827
1 9,917 3,831 6,095 99,862
100:10 0,174
2 9,936 3,831 6,095 100,173 99,973 0,173
0 %
3 9,919 3,831 6,095 99,884
1 12,038 3,831 8,134 100,904
100:12 100,81 0,103
2 12,032 3,831 8,134 100,827 0,104
0 0 %
3 12,022 3,831 8,134 100,699
Penambahan kadar fenolik asam galat EEDBL sebanyak 7,739 µg/mL yang
setara 80% dari kadar analit target (20 µg/mL) menghasilkan rentang nilai
perolehan kembali 99,524 – 99,827%.
Penambahan kadar fenolik asam galat EEDBL sebanyak 9,936 µg/mL yang
setara 100% dari kadar analit target (20 µg/mL) menghasilkan rentang nilai
Penambahan kadar fenolik asam galat EEDBL sebanyak 12,032 µg/mL
yang setara 120% dari kadar analit target (20 µg/mL) menghasilkan rentang nilai
Nilai perolehan kembali yang dihasilkan dari penelitian memenuhi kroteria
rentang nilai yang diperoleh yaitu 98-102% (Harmita, 2004). Metode analisis
yang digunakan dapat menghasilkan kadar fenolik asam galat EEDBL yang dekat
dengan kadar sebenarnya.
37
I. Penetapan Kadar Fenolik Asam Galat Ekstrak Etanol Daun Bidara Laut
Penetapan kadar fenolik asam galat merupakan pengaplikasian dari suatu
metode analisis yang telah di validasi. Penetapan kadar fenolik asam galat
EEDBL dilakukan dengan memasukkan absorbansi sampel pada Y dari
persamaan regresi y = 34329,51 x + (-9305,27). Hasil perhitungan kadar fenolik
asam galat dalam EEDBL secara KCKT dapat dilihat pada tabel VII.
Tabel VII. Hasil uji penetapan kadar asam galat dalam EEDBL
kadar fenolik
Kadar (ppm) kadar sebelum sebelum
Luas kandungan
Sampel sesudah pengenceran pengenceran
Puncak %
pengenceran (ppm) dalam 1 g
sampel(mg)
1 122213 3,831 19,155 0,192 0,192
2 122759 3,847 19,235 0,192 0,192
3 122828 3,849 19,245 0,192 0,192
4 123089 3,857 19,283 0,193 0,193
5 123351 3,864 19,321 0,193 0,193
6 123382 3,865 19,326 0,193 0,193
Rata-rata 0,193
SD 0,0006
RSD 0,331%
Berdasarkan hasil tabel diatas diperoleh kadar fenolik asam galat dalam
EEDBL adalah 0,1926%. Keseluruhan hasil penelitian ini menunjukkan bahwa
penetapan kadar fenolik asam galat dalam EEDBL menggunakan KCKT dapat
diaplikasikan untuk identifikasi kadar fenolik asam galat.
38
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa :
1. Validasi metode analisis asam galat menggunakan KCKT dan aplikasinya
dalam EEDBL dengan fase diam C18 (250 mm x 4,6 mm), fase gerak yang
digunakan adalah metanol:air (50:50 v/v) dengan laju 1,0 mL/menit, detektor
UV-Vis pada panjang gelombang 258 nm dapat divalidasi.
2. Senyawa asam galat dalam EEDBL yang dianalisis dengan metode KCKT
diperoleh kadar rata-rata sebesar 0,103% dan EEDBL posisif mengandung
asam galat.
B. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian dengan jenis daun bidara yang lainnya
2. Perlu dilakukan penelitian tentang kandungan yang lain yang terdapat dalam
daun bidara laut
3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai validasi metode analisis
kandungan buah, kulit dan batang pada tanaman yang berbeda menggunakan
metode KCKT menggunakan fase gerak dan fase diam yang berbeda.
39
DAFTAR PUSTAKA
Apsari, Dwi, P., dan Susanti, H., 2011, Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak
Metanol Kelopak Bunga Rosella Merah (Hibiscus Sabdariffa Linn) dengan
Variasi Tempat Tumbuh secara Spektrofotometri, Jurnal Ilmiah
Kefarmasian, 2(1), 73-80.
Aziz, Z., Nurhidayati, L., Abdillaha, S., Yuliana, N.D., dan Simanjuntak, P.,
2020, Optimasi dan Validasi Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
untuk Menetapkan Kadar Asam Klorogenat dalam Ekstrak Etanol Daun
Yakon (Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.) H. Robinson), Fakultas
Farmasi Universitas Pancasila, Jakarta Selatan.
Backer, C.A., Backhuizen van den Brink, R.C., 1965, Flora of Java,
Spermatophytes only, Volume I, N.V.P. Noordhoff, Gronigen, The
Netherlands.
Depkes RI., 2000, Parameter Standard Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Cetakan
Persehatan Indonesia, Jakarta.
Depkes RI., 1985, Cara Pembuatan Simplisia, Departemen Kesehatan Republik

Indonesia.
Dhurhania, A., dan Novianto, A., 2018, Uji Kandungan Fenolik Total dan
Pengaruhnya terhadap Aktivitas Antioksidan dari Berbagai Bentuk
Sediaan Sarang Semut (Myrmecodia pendens), Studi D3 Farmasi, Sekolah
Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional, Surakarta.
Gandjar, I.G., dan Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Cetakkan 1,
Pustaka Pelajar, Yogyakarta.
Harbone, J. B., 1978, Metode Fitokimia: penuntun cara modern menganalisis

tumbuhan. Ed II. Diterjemahkan oleh Padmawinata K, Sudiro I, Institut
Teknologi Bandung.
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara

Perhitungannya.,
Majalah Ilmu Kefarmasian, 1(3), 117-135.
40
Marwat, S. K., Khan, M.A., Rehman, F., Ahmad, M., Zafar, M., and Sultana, S.,
2009, Salvadora persica, Tamarix aphylla and Ziziphus mauritiana Lam
Three Woody Plant Species Mentioned in Holy Quean and Ahadith and
Their Ethnobotanical Uses in North Western Part (D. I. Khan) of Pakistan,
Pakistan Journal of Nutrition, 8(5), 542-547.
Setiawan, O., Wahyuni, N., Susila, W.W., Rahayu, A.D., dan Rostiawati, T.,
2014, Bidara Laut (Strychnos ligustrina Blume) syn. S. lucida R. Br:
Sumber Bahan Obat Potensial di Nusa Tenggara Barat dan Bali, FORDA
press, Bogor.
Syafitri, N.E., Bintang, M., dan Falah, S., 2014, Kandungan Fitokimia, Total
Fenol, dan Total Flavonoid Ekstrak Buah Harendong (Melastoma affine D.
Don), Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor (IPB), Bogor.
Utami, R., Fernando, A., Sari, I., dan Furi, M., 2017, Penetapan Kadar Berberin
dari Ekstrak Etanol Akar dan Batang Sekunyit (Fibraurea tinctoria Lour)
dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT), Sekolah
Tinggi Ilmu Farmasi, Riau.
Voight, R., 1995, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Diterjemahkan Oleh

Soedani Noerono Soewandi, Apt, Yogyakarta : Universitas Gadjah Mada
Press.
Wahid, R.A. H., 2020, Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Tanin Ekstrak Kulit
Buah Delima Putih (Punica Granatum L.) Menggunakan Metode
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT), Universitas PGRI
Yogyakarta,Yogyakarta.
41
\
LAMPIRAN
42
Lampiran 1. Determinasi Daun Bidara Laut
43
Lampiran 1. Lanjutan...
44
45
46
Lampiran 2. Perhitungan Rendemen Simplisia, Ekstrak Etanol Daun Bidara
Laut (Ziziphus mauritiana Lam)
1. Simplisia Daun Bidara Laut
Berat sortasi basah daun bidara laut = 3 kg
Berat serbuk daun bidara laut = 1,09 kg
Berat sortasi kering daun bidara laut = 1,1 kg
Bobot serbuk ( Kg )
% Rendemen simplisia = x 100%
Bobot Sortasi Basah (Kg)
1,09 kg
= x 100%
3 kg
= 36,333%
Berat Sortasi Basah ( g )−Berat Kering(g)
Susut Pengeringan = x
Bobot Sortasi Basah( g)
100%
3000 gram−1.100 gram
= x 100%
3000 gram
= 63,333%
2. Ekstrak Etanol 70% Daun Bidara Laut
Berat serbuk daun bidara laut = 200 gram
Berat ekstrak daun bidara laut = 23 gram
Bobot Ekstrak Kental(gram)

% Rendemen ekstrak etanol = x 100%
Bobot Serbuk Simplisia (gram)
23 gram
= x 100%
200 gram
= 11,5%
47
Lampiran 3. Perhitungan Larutan Standar Asam Galat
1. Penimbangan Asam galat
Berat cawan porselen 33344,3 mg

Berat cawan porselen + bahan 33444,5 mg
Berat cawan porselen + sisa 33344,5 mg
Berat bahan (asam galat) 100
a. Pembuatan larutan standar asam galat 1000 µg/mL sebanyak 100 mL
100 gram 100.000mg

1000 µg/mL = = = 1000 µg/mL
1mL 100 mL
b. Pembuatan larutan standar asam galat 20 µg/mL sebanyak 50 mL
20 µg 1000 µg 1 mg
20 µg/mL = = =
1 mL 50 mL 50 mL
Dari larutan 1000 yang sudah jadi diambil 1 mL, kemudian masukan ke
dalam labu takar 50 mL ditambah metanol hingga tanda batas. Kemudian dibuat
seri konsentrasi larutan standar asam galat 2,4,6,8,10 dan 12 µg/mL dari larutan
asam galat dengan kadar 20 µg/mL ke dalam labu takar 5 ml.
a) 2 µg/mL
V 1 x C1 = V 2 x C2
V1 x 20 µg/mL = 5 mL x 2 µg/mL
5 mL x 2 µg /mL
V1 =
20 µg /mL
V1 = 0,5 mL ̴ 500 µL
Diambil larutan stok sebanyak 500 µL, ditambahkan metanol hingga 5 mL.
48
b) 4 µg/mL
V 1 x C1 = V 2 x C2
5 mL x 4 µg /mL
V1 =
20 µg/mL
V1 = 1 mL ̴ 1000 µL
c) 6 µg/mL
V 1 x C1 = V 2 x C2
5 mL x 6 µg/mL
V1 =
20 µg /mL
V1 = 1,5 mL ̴ 1500 µL
c. 8 µg/mL
V 1 x C1 = V 2 x C2
V1 x 20 µg/mL = 5 mL x 8 µg/m
5 mL x 8 µg/mL
V1 =
20 µg /mL
V1 = 2 mL ̴ 2000 µL
49
Diambil larutan stok sebanyak 2000 µL, ditambahkan metanol hingga 5 mL
d. 10 µg/mL
V 1 x C1 = V 2 x C2
5 mL x 10 µg /mL
V1 =
20 µg /mL
V1 = 2,5 mL ̴ 2500 µL
e. 12 µg/mL
V 1 x C1 = V 2 x C2
5 mL x 12 µg /mL
V1 =
20 µg /mL
V1 = 3 mL ̴ 3000 µL
50
Lampiran 4. Penimbangan Sampel Ekstrak Etanol Daun Bidara Laut
Berat cawan porselen 36043,2 mg
Berat cawan porselen + bahan 56143,2 mg
Berat cawan porselen + sisa 56043,0 mg
Berat bahan (Ekstrak kental daun bidara laut) 100 ,2 mg
Keterangan : 100,2 mg EEDBL ditambahkan fase gerak metanol:air 50:50
v/v.
51
Lampiran 5. Panjang Gelombang Maksimal Asam Galat
52
Lampiran 6. Contoh Kromatogram Kurva Baku Asam Galat
a. Larutan baku asam galat 2 µg/mL
b. Larutan baku asam galat 4 µg/mL
c. Larutan baku asam galat 6 µg/mL
53
d. Larutan baku asam galat 8 µg/mL
e. Larutan baku asam galat 10 µg/mL
f. Larutan baku asam galat 12 µg/mL
54
Lampiran 7. Contoh Kromatogram Sampel Ekstrak Etanol Daun Bidara
Laut Replikasi 6 kali
a. Kromatogram Sampel EEDBL Replikasi 1
b. Kromatogram Sampel EEDBL Replikasi 2
c. Kromatogram Sampel EEDBL Replikasi 3
55
d. Kromatogram Sampel EEDBL Replikasi 4
e. Kromatogram Sampel EEDBL Replikasi 5
f. Kromatogram Sampel EEDBL Replikasi 6
56
X Xi² Xi-X̅ (Xi-X̅ )² Yi Yc (Yi-Yc) (Yi-Yc)²
2 4 -5 25 59016 59353,8 -337,75 114075,06
4 16 -3 9 125318 128013 -2694,8 7261785,4

6 36 -1 1 198717 196672 2045,21 4182883,9
8 64 1 1 269918 265331 4587,19 21042312

10 100 3 9 331148 333990 -2841,8 8075997,7
12 144 5 25 401891 402649 -757,85 574336,62

7 364 70 41251391
Lampiran 8. Perhitungan LOD dan LOQ Asam Galat
Dari persamaan 34329,51x + (-9305,27) maka Yc dapat dihitung:
1. Y = 34329,51x + (-9305,27)
Y = 34329,51(2) + (-9305,27)
Y = 59353,75
2. Y = 34329,51x + (-9305,27)
Y = 34329,51(4) + (-9305,27)
Y = 128012,77
3. Y = 34329,51x + (-9305,27)
Y = 34329,51(6) + (-9305,27)
Y = 196671,79
4. Y = 34329,51(8) + (-9305,27)
Y = 265330,81
5. Y = 34329,51(x) + (-9305,27)
Y = 34329,51(10) + (-9305,27)
57
Y = 33398,83
6. Y = 34329,51(12) + (-9305,27)
Y = 34329,51(12) + (-9305,27)
Y = 402648,85
Persamaan kurva baku: 34329,51(12) + (-9305,27) (r = 0,9997)
S y / x ={∑ ¿ ¿ ¿
= (41251391/4)½
= 3211,362
S 2
∑ Xi ¿¿
a=¿ S y/x
√ n ∑ ¿¿¿
36400 ❑ 364 364

= 2989,616 x ❑
√ √ √
6 x 7000 6 x 364 6 x 70
= 2989,616 x 3211,362
= 9600739,22
Perhitungan LOD
Nilai Y pada batas deteksi ditentukan dengan persamaan Y = YB + 3 SB
YB = nilai intersept (a) pada persamaan kurva kalibrasi
SB = simpangan baku intersept (a) (Sa)
58
Lampiran 8. Lanjutan…
Y = (-305,27) + 3 (2989,616)
= (-305,27) + 8968,85
= (-336,42)
Maka nilai LOD :
Y = 34329,51x + (-9305,27)
(-336,42) = 34329,51x + (-9305,27)
X = 0,261 µg/mL
Perhitungan LOQ :
Dihitung berdasarkan rumus Y = YB + 10 SB
Y = (-9305,27) + 10 (2989,616)
= (-9305,27) + 29896,16
= 20590,89
Maka nilai LOQ :
Y = 34329,51x + (-9305,27)
20590,89 = 34329,51x + (-9305,27)
X = 0,871 µg/mL
59
Lampiran 9. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Asam Galat
1. Perolehan kembali pada sampel yang ditambah baku sejumlah 80% dari target
kadar analit dalam sampel
a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
1) Luas puncak asam galat = 122213
2) Kadar asam galat berdasarkan persamaan garis :
Y = 34329,51x + (-9305,27) adalah 3,8315 µg/mL
b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
2) Kadar asam galat berdasarkan persamaan garis;
Y = 34329,51x + (-9305,27) adalah 3,922 µg/mL
c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
1) Luas puncak total analit 1 = 256223
Luas puncak total analit 2 = 256385
2) Berdasarkan persamaan garis Y = 34329,51x + (-9305,27) maka :
Kadar total analit 1 = 99,541 µg/mL
Perhitungan perolehan kembali
A−B
% perolehan kembali= x 100 %
C
60
a. Analit 1
18,056−9,984 14,058−10,051 7,735−3,831

% perolehan kembali = x
8,060 3,989 3,922
100% = 99,541%
b. Analit 2
14,072−10,051 47,740−3,831 18,046−9,984

3,989 3,922 8,060
100% = 99,669%
c. Analit 3
14,066−10,051 7,747−3,831 18,053−9,984

% perolehan kembali = x 100%
3,989 3,922 8,060
= 99,847%
14,072−10,051 99,541 %+99,87 %+99,847 % 18,046−9,984

X̅ =
3,989 3 8,060
299,057 %
=
3
= 99,686%
SD = 0,152
SD
%RSD =
X̅
0,152
=
99,686 %
= 0,153%
61
d. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
Y = 34329,51x + (-9305,27) adalah 3,8315 µg/mL
e. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
Y = 34329,51x + (-9305,27) adalah 6,095 µg/mL
f. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
62
A−B
C
a. Analit 1
18,056−9,984 14,058−10,051 9,917−3,831

8,060 3,989 6,095
100% = 99,852%
b. Analit 2
14,072−10,051 9,936−3,831 18,046−9,984

3,989 6,095 8,060
100% = 100,164%
c. Analit 3
14,066−10,051 9,919−3,831 18,053−9,984

3,989 6,095 8,060
= 99,885%
14,072−10,051 99,852 %+100,164 % +99,885 % 18,046−9,984

X̅ =
3,989 3 8,060
299,901%
=
3
= 99,967%
SD = 0,173
SD
%RSD =
X̅
0,173
=
99,967 %
63
= 0,173%
g. Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku (B)
Y = 34329,51x + (-9305,27) adalah 3,8315 µg/mL
h. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)
Y = 34329,51x + (-9305,27) adalah 8,134 µg/mL
i. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)
64
A−B
C
d. Analit 1
18,056−9,984 14,058−10,051 12,039−3,831

8,060 3,989 8,134
100% = 100,904%
e. Analit 2
14,072−10,051 12,032−3,831 18,046−9,984

3,989 8,134 8,060
100% = 100,827%
f. Analit 3
14,066−10,051 9,919−3,831 18,053−9,984

3,989 6,095 8,060
= 100,699%
14,072−10,051 100,904 %+100,827 %+100,699 % 18,046−9,984

X̅ =
3,989 3 8,060
302,43 %
=
3
= 100,81%
65
SD = 0,104
SD
%RSD =
X̅
0,104
=
100,81%
= 0,103%
Lampiran 10. Dokumentasi Penelitian
a. Simplisia
Pengeringan dalam lemari

Sortasi basah Penimbangan daun segar
pengering
66
Penimbangan daun kering Penyerbukan Cek kadar air 5,0%
b. Metode Maserasi
Ekstrak etanol daun bidara

Serbuk 200 mg dimaserasi Proses pengadukan maserasi
laut sebanyak 23 gram

c. Uji Tabung Fenolik
Uji tabung fenolik
d. Pembuatan Larutan Standar Asam Galat
67
Berat cawan porselen Berat cawan porselen + zat Berat cawan porselen sisa
(33344,3 mg) (33444,5 mg) (33444,5 mg).
Kadar Asam Kadar Asam

Galat menjadi Galat menjadi 20
1000 µg/mL µg/mL
68

Revisian 2

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Revisian 2

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

VALIDASI METODE ANALISIS ASAM GALAT

MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA

UNIVERSITAS WAHID HASYIM

Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat

UNIVERSITAS WAHID HASYIM

VALIDASI METODE ANALISIS ASAM GALAT MENGGUNAKAN

Daun bidara laut (Ziziphus mauritiana Lam) mengandung senyawa fenolik

VALIDATION OF GALLIC ACID ANALISYS USING HIGH

Bidara leaf (Ziziphus mauritiana Lam) contain phenolic compounds which

Keywords : extracted bidara leaf,, HPLC, Fenolic, gallic acid , validatio

VALIDASI METODE ANALISIS ASAM GALAT

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

(apt. Aqnes Budiarti, S.F., M.Sc.)

(Dr. apt. Maulita Cut Nuria, M.Sc.)

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Melissa Oktavia

Judul Skripsi : Validasi Metode Analisis Asam Galat Menggunakan

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dan Aplikasinya Dalam

Ekstrak Daun Bidara Laut (Ziziphus mauritiana Lam).

yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan

Demikian surat pernyataan ini dibuat untuk dapat digunakan sebagaimana

Semarang, November 2020

rasa kasian dan keberuntungan.”

Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT, yang telah

melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan

penelitian dan penulisan skripsi yang berjudul “Validasi Metode Analisis

Asam Galat menggunakan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dan

Aplikasinya dalam Ekstrak Etanol Daun Bidara Laut (Ziziphus

dalam memperoleh derajat Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas

Wahid Hasyim Semarang.

pihak. Untuk itu penulis ingin mengucapkan terimakasih sebesar-besarnya

Universitas Wahid Hasyim Semarang.

M.Biomed selaku pembimbing utama dan pendamping yang telah

meluangkan waktu, tenaga, fikiran dan memberikan bimbingan kepada

penulis selama penyusunan skripsi.

3. Dosen penguji yang bersedia meluangkan waktu dan memberikan saran,

masukan dan koreksi terhadap skripsi ini.

yang telah memberikan bekal ilmu pengetahuan sebagai dasar penulisan

5. Seluruh Staf di Laboratorium Fitokimia dan Laboratorium Kimia Farmasi

Universitas Wahid Hasyim yang telah membantu untuk penelitian di

6. Teruntuk kedua orangtua saya yang senantiasa memberikan doa dan

dukungan lebih terhadap saya demi kelancaran semasa studi hingga

7. Teman Seperjuangan Wahyu Setyaningsih dan Rotama Gurning yang

saling membantu dan pemberikan semangat hingga penyusunan skripsi ini

8. Rekan kerjaku diapotek yang memberikan semangat, motivasi dan bantuan

dalam menyelesaikan skripsi.

9. Kakakku Abdul Rouf yang memberikan doa dan dukungannya dalam

banyak membantu pada penelitian dan penyusunan skripsi ini.

Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dan jauh dari

farmasi yang sebagai mana mestinya.

Semarang, November 2020

Tabel I. Hasil optimasi komposisi fase gerak........Error! Bookmark not defined.

fenolik berperan sebagai antioksidan alami pada tumbuhan. Senyawa fenolik

alami umumnya berupa polifenol yang membentuk senyawa eter,ester atau

dengan menyumbangkan atom hidrogen pada radikal bebas. Kemampuannya

membentuk radikal fenoksi yang stabil pada reaksi oksidasi menyebabkan

senyawa fenolik sangat potensial sebagai antioksidan (Dhurhania dan Novianto,

Aziz dkk., (2020) melakukan validasi metode KCKT untuk menetapkan

kadar asam klorogenat dalam ekstrak etanol daun yakon (Smallanthus

asam klorogenat dalam ekstrak daun yakon sebesar 1,02%.

detektor UV pada panjang gelombang 346 nm. Hasil penelitian menunjukkan

bahwa ekstrak etanol sekunyit mengandung senyawa berberin sebesar 25,8%.

Wahid, (2020) melakukan validasi metode KCKT untuk menganalisis

digunakan adalah oktadesilsilan (C18).Laju alir 1,5 mL/menit dan detektor UV