2.

4 Analisis Metabolit dengan Kromatografi Cair – Spektrometri Massa Waktu Penerbangan

Quadrupole Hibrid (LC – QTOF-MS)

 Produk setelah degradasi

-Kandungan metabolit,enzim kasar,dan larutan pewarna terdegradasi sebesar 15ml.
-eksrak dipekatkan dalam vakum hingga kering dan dilarutkan lagi dalam 3 mL metanol LC-MS grade
CHROMASOLV (Sigma-Aldrich)
-zat tersebut di sentrifugasi dengan 14.000 rpm selama 10 menit guna untuk menghilangkan kotoran.
-di injeksi secara otomatis ke dalam LC − QToF − MS dengan 0,5 μL
-Pemisahan kromatografi dicapai pada sistem kelas I Waters ACQUITY UPLC dengan ukuran partikel
2,1 mm x 100 mm, 1,7 μm Waters ACQUITY UPLC BEH Kolom C18 dipanaskan hingga 40 ° C dan
baki sampler otomatis didinginkan hingga 15 ° C.
-Fase gerak air (A) dan asetonitril (B), masing-masing dengan 0,01% asam format
- Gradien digunakan: 0−1.5 menit, 10% B; 1,5−2 menit, 10−50% B; 2−6 menit, 50−100% B; 6−9
menit, 100% B; 9−10 menit, 90−10% B; 10-12 menit, 10% B.
-laju alir yang di pertahankan 0,4ml
-tegangan kapiler 0,5 kV, tegangan kerucut sampling 40 V, suhu sumber 100 ° C, dan suhu desolvasi
350 ° C. Laju aliran desolvasi nitrogen 500 L / jam.
-25−45 eV ramp energi tabrakan dalam sel tumbukan gelombang-T menggunakan argon kemurnian
(≥99.999%) sebagai gas tabrakan
-koreksi massa data sentroid dengan leusin enkefalin; [M + H] + = 556,2766 yang diambil sampelnya
pada interval 10 detik
-Spektrometer massa dikalibrasi dengan rentang massa 50−1200 Da menggunakan larutan natrium
format 0,5 mM yang disiapkan dalam 90:10 2-propanol / air (v / v).