103

Dipipetke dalam kuvet ReagenBlanko $tandar Sampel

Standar 10pl
Sampel 10 pl
Reagen 1000pl 1000ul 1000Ul
Dicampurdenganbaik, diukursesude
DibacaabsorbansisqEpqlCe! rtaqdqr terhadapRB datamwaktu 60 nienit.

Perhitungan

1. DenganStandar

,.i Cholesterol= 6A sampel,/64 standarx 200 mg/dl atau

Cholesterol= 6A sampel,/64 standarx 5,16mmol/

2. DenganFaktor
'i

,} Panjanggelombang C (mg/dl) C (mmoUl)

Hg 546 nm 860 x 5A 22,2x6A

b. FrosedurAnalisisHDL KolesterolSerum

AnalisisHDL kolesterolserumdietentukandengankit FluitestHDL-CHOL

REF 410 Lor D312 dari Biocon Jerman menggunakanmetode presipitasi

(pengendapan).

Prinsip uji

Denganpemberianasarnfosfotungstat
dan magnesiurnkhloridake dalam
sarnpel maka kilomikron, VLDV dan LpL akan mengendap. $etelah
disentrifugasidi dalam cairan supernatanmengandungfraksi HDL, kadarnya

ditentukandenganmetodeenzimatik.
 104

Reagen

Reagenmengandungasamfosfotungstat
0,55mmouldanmagnesiumkhloricla
disimpanpadasuhu+tS sampat+AgoC.
25 mmoyl. Reagenlnistebitapabita

Prosedur

1 Presipitasi(Pengendapan)

Dipipetke dalamkuvet Makro SemiMikro

Sampel 500p1 200p1
Reagenpresipitasi(tanpapengenceran) 1000p1
Reagenpresipitasi(diencerkan) 500;tl

Dicampurdenganbaik, diinkubasi
setama10 menitpadasuhuruang.sentrifus

selama2 menitpada 100009atau 10 menit pada40009.Setelahdisentrifugasi

supernatanyang jernih dipisahkandari endapandalam waktu satu jam dan

tentukankonsentrasikolesteroldenganmetodeCHOD-pAp.

2. PenentuanKolesterol

Dipipetke dalamkuvet ReagenBlanko Sampel

Akuabidestitata 1 0 0trI
SupernatanHDL 100pl
ReagenCHOD-PAPKolesterol 1000pl 1 0 0 0u l
Dicampurdenganbaik,diukursesudah

atau 10 menitpada suhu z}-zsoc. Dibacaabsorbansisampelterhadapreagen

blankodalamwaktu60 menit.
""rffi
r-t
$ 105
, ,,,,,,1,i{

' '1,
ij
, -1, : , $
Perhitungan

,,',.'i*
SemiMikro(mg/dt)
,' C= 2 8 0 x A s a mp e l C= 3 2 7 x A s a mp e l
,j C= lB B x A s a mp e t C= 2 2 Q x A s a mp e l
t:.ri

,'j
,,.,,j
Dengan perhitungan
dapatditentukan:

(mg/dl)= kolesteroltotal
LDl-kolesterol
,,,: - triqliserida - HDL-kolesterol
atau-
LDl-kolesterot(mmol/l)= kolesteroltotal - triqliserid? HDL-kolesterol
-
2,2

c. ProsedurAnatisisLDL KolesterolSerum

AnalisisLDL koresteror
serumditentukandengankit FruitestLDL-CHOL
REF 413 Lor DzB3 dari Biocon Jerman menggunakan
rnetode presipitasi
(pengendapan).

PrinsipUji

LDLdiendapkan
denganheparinpadatitikisoerektrik
(pH s,12). seterah
disentrifugasi
sisda LDL dan VLDL di daramsupernatandan dapat ditentukan

denganmetodeenzimatik.

Reagen

Reagenmengandungheparin0,68 g/r, sodiumsitrat

0,064 mor/rdan stabirizer
2%. Reageninistabilapabila padasuhu+2 sampai+B oC.
disimpan

{
{
 r06

Prasedur

1 Presipitasi
(Pengendapan)

Dipipetke dalamtabungsentrifus

Sampet re
Reagen
LDL I roOopr
Dicampurdenganbaik, didiamkanselama10 m@
oc dan disentrifus
selama 15 menit pada 4000 rpm. Setelah disentrifugasi
supernatan yang jernih dipisahkandari endapan dalam waktu satu jam
ditentukankonsentrasikolesteroldenganmetodeCHOD-pAp.

2. PenentuanKolesteral

Dipipet ke dalam kuvet ReagenBlanko Sampel

Akuabidestilata 100pl
Sr.rpernatan
HDL 100pl
ReagenCHOD,FAPKolesterol 1000pl 1000pl
Dicarnpurdenganbaitt,dl
atau10menitpadasuhu2}-zsoc.Dibaca
absorbansi
sampelterhadap
reagen
blankodalarnwaktu60 menit.

Perhitungan

Panjanggelombang Makro (mg/dl)

Hg 546 nm C= 1 0 2 8 x A s a mp e l
500 nnr Q = 6 9 0 x A s a mp e l

LDL kolesterol= Totalkolesterol-LDLkolesterolsupernatan

 107

d. ProsedurAnalisis TrigtiseridaSerum

Analisistrigliseridaserum ditentukandengail kit FluitestTG

REF 5748
Lor D716 dari Biocon Jerman menggunakanmetode Gpo-pAp
yang
merupakanuji kolorimetrikenzimatik.

Prinsip uji

Trigliserida
dihidrolisissecaraenzimatismenjadigliserolmenurutreaksi
berikut:

LPL
Trgliserida ---------------+ Gliserol + asam lemakbebas
GK
Gliserol+ ATP *- G-3-p + ADp
GPO
G-3-P + 9r --------*+ DAp + grg,

j
POD
H2O2 + 4-a m i noa nti pyrin + p-khlorofenol -------*->
4 HzO+ Quinonimine

Reagen

Reagen Rl (reagenenzim) dan reagenR4 (standar)

stabirbiradisimpan
,l padasuhu+2 sampaig oCdan terlindung
daricahaya.

Prosedur

Panjanggelombang : 500 -550nm,Hg 546 nm

S uhu : +37oC
KuvetKaca : 1cm
Pengukuranterhadapreagenblanko(RB) dirakukan
satu kari untuk satu seri
pemeriksaan.
Lampiran 4 Prosedur Penentuan Profil Lipid Serum

a. ProsedurAnalisis KolesterolTotal Serum

Analisiskolesteroltotal serum dietentukandengan kit Fluitestchol REF

4241 LOi D393 dari Biocon Jerman menggunakanmetode CHOD-PAPyang

enzimatik.
uji kolorimetrik
merupakan

Prinslp ufi

Kolesteroldan kolesterolester dilepaskandari lipoproteindenganenzim,

selanjutnyadioksidasisecaraenzimatiksepertireaksiberikut:

Cholesterolesferase
Cholesterolester + HzO Cholesterol + Fatty acids

CholesterolOxrdase
Oe
Cholesterol+ Cholesten3-on +

Peroxidase
H2A2l 2 HzOz+ Phenol + 4-aminoantipyrine--+--+ Quinoneimine dye + 4
HzO

Reagen

Reagen / Rl (reagen enzim) mengandung: phenot, cholesterol oxidase,

cholesterol esterase, peroxidase dan 4-aminoantipyrine. Seoangkan reagen R4

(standar)mengandungcholesterol. Reagen ini stabil bila disimpan pada suhu +2

sampaiBoC.

Prosedur

Panjanggelombang : 500 nm, Hg 546 nm

Suhu : +37oC

KuvetKaca :1 cm

Pengukuranterhadapreagenblanko(RB) dilakukansatu kali untuk $atu $eri

pemeriksaan.