Energi menuntut gaya hidup hari ini, perlu untuk menjelajahi dan pemanfaatan sumber energi baru

yang terbarukan serta sebagai eco-friendly adalah suatu keharusan. Di daerah pedesaan
mengembangkan negara berbagai biomassa selulosa (kotoran ternak, pertanian residu, dll) yang
tersedia di banyak yang memiliki sangat baik potensial untuk memenuhi permintaan energi,
terutama di sektor domestik. Di India sendiri, diperkirakan ada lebih dari 250 juta sapi dan jika
sepertiga dari kotoran yang dihasilkan per tahun yang tersedia untuk produksi biogas, lebih dari 12
juta biogas tanaman dapat diinstal [1]. biogas biasanya mengacu pada gas yang dihasilkan oleh
pencernaan anaerobik (AD) dari bahan biodegradable seperti biomassa, kotoran atau limbah,
sampah kota, limbah hijau dan energi tanaman [2]. Saya t terdiri dari berbagai persen metana,
karbon dioksida, nitrogen, hidrogen, amonia dan uap air. Biogas digunakan untuk pembakaran
langsung dalam memasak atau pencahayaan aplikasi, atau untuk mesin pembakaran daya untuk
kekuatan motif atau listrik generasi. Seperti gas alam, biogas dapat langsung digunakan untuk
pemanasan. Sebuah meter kubik biogas dengan 60% kandungan metana dapat menggantikan sekitar
0,6 meter kubik gas alam atau 0,6 L bahan bakar minyak selama pembangkit listrik di gabungan
panas dan listrik [3]. Jenis pembangkit energi adalah praktis karbon dioksida netral sebagai gas
rumah kaca dilepaskan selama pembakaran sebelumnya telah dikonsumsi oleh tanaman. jumlah
yang cukup besar dari biogas telah dihasilkan oleh pencernaan anaerobik unggas kotoran, babi dan
sapi DUNGS. Fermentasi substrat (digestate) dari biogas produksi dapat digunakan sebagai kuantitas
tinggi pupuk. Ada sejumlah bakteri yang terlibat dalam * Penulis Sesuai: pratikz.biotech@gmail.com
proses pencernaan anaerobik termasuk asam asetat bakteri pembentuk (acetogens) dan metana
membentuk archaea (Metanogen). Organisme ini memberi makan pada awal bahan baku, yang
mengalami sejumlah proses yang berbeda mengubahnya menjadi molekul menengah termasuk gula,
hidrogen dan asam asetat sebelum akhirnya beralih ke biogas. spesies yang berbeda dari bakteri
yang mampu bertahan di rentang suhu yang berbeda. Yang hidup secara optimal antara 35 - 40 ° C
disebut mesophiles dari mesofilik bakteri. Beberapa bakteri dapat bertahan hidup di panas dan
kondisi yang lebih bermusuhan dari 55 - 60 ° C, ini disebut thermophiles atau bakteri termofilik [4].
Sampai hari ini angka laporan yang tersedia di biogas (metana) produksi dari kotoran sapi, namun
pekerjaan yang sangat sedikit yang telah dilakukan keluar pada pemantauan potensi bakteri
metanogen untuk produksi biogas dari kotoran sapi tersebut. Penelitian ini adalah bertujuan skrining
bakteri metanogen dari cowdung untuk produksi biogas menggunakan kotoran sapi sebagai substrat
di fed batch yang digester anaerobik. Potensi metanogen bakteri yang dipilih diidentifikasi lebih
lanjut menggunakan fenotipik dan analisis filogenetik.

BAHAN DAN METODE

pengumpulan sampel: Sampel cowdung sapi asli berkembang biak Siri dikumpulkan dari Namchi,
Sikkim Selatan, India, di disterilkan wadah dan disimpan pada suhu 4 ° C sampai digunakan untuk
percobaan. Fabrikasi dari digester anaerobik: Anaerobic digester digunakan untuk produksi biogas
dari kotoran sapi adalah batch tetap prototipe (Gambar 1). ISSN: 0975-833X Tersedia online di
http://www.journalcra.com International Journal of Research sekarang Vol. 4, Issue, 07, pp.028-031,
Juli 2012 JURNAL INTERNASIONAL  PENELITIAN LANCAR Sejarah Artikel: Menerima 18 April 2012
Menerima dalam bentuk direvisi 25 Mei 2012 Diterima 27 Juni 2012 Diterbitkan 30 Juli online 2012
Kata kunci: digester anaerobik, Biogas, cowdung, 16S rDNA, bakteri metanogen, SEM. Gambar 1:
Gambaran tipe batch tetap fabrikasi digester anaerobik media tumbuh: Isolasi dan rutin sub-kultur
dari kotoran sapi isolat bakteri dilakukan pada media nutrien (Di g / L: Peptone, 10; Natrium klorida,
5; ekstrak ragi, 5 dan Agar, 15) pada pH 7,0 pada 35ºC. Isolasi bakteri dari kotoran sapi: Untuk isolasi
dan skrining bakteri metanogen, sekitar 1 g cowdung sampel ditimbang dan dituangkan ke dalam
tabung reaksi yang berisi 9ml media nutrisi diautoklaf dan diinkubasi di bawah kondisi anaerob
untuk 72 jam di 35ºC untuk meningkatkan pertumbuhan bakteri metanogen anaerob. Setelah
inkubasi, tabung uji kemudian secara manual gelisah untuk membentuk seragam solusi dan
didiamkan selama beberapa detik untuk yang lebih besar partikel untuk menetap. pengenceran yang
diperoleh dari 10-1 (W / v) selanjutnya serial diencerkan ke 10-5 (w / v) dan 100μl dari 10-5
pengenceran kemudian menyebar berlapis di piring agar nutrien dan lanjut diinkubasi pada 35 ° C
selama 24 jam. Setelah inkubasi, koloni murni yang berbeda diperoleh dari piring diisolasi dan
dimurnikan dengan metode streak plate dan dipindahkan ke nutrisi agar slants sebagai saham. Isolat
bakteri kemudian digunakan sebagai inokulum dalam digester anaerobik mengandung cowdung
sebagai substrat untuk memeriksa potensi masing-masing untuk biogas produksi. Analisis biogas (gas
metana): Isi metana di sampel biogas yang kuantitatif dianalisis dengan gas Metode kromatografi
[5]. Sampel biogas yang dianalisis menggunakan kromatografi gas (GC 2014 series kromatografi
Schimadzu) dilengkapi dengan saluran Maju ionisasi Detector (FTD) dan SPB-1 (silang metil silikon)
kolom. Kolom kapiler digunakan dengan panjang 30 m yang terbuat dari silika menyatu dengan
lapisan poliamida. Gas pembawa terkandung Helium (0,8 Kg / cm2 ), Udara (0,45 Kg / cm2 ) Dan
Hidrogen (0,6 Kg / cm2 ). Kolom, injector dan suhu detektor disimpan di 150oC, 250oC, 270oC
masing-masing. Area di bawah puncak diukur dengan cara dari integrator berdasarkan
mikroprosesor (Schimadzu GC 2014 series) yang melekat pada kromatografi tersebut. Konsentrasi
metana yang dihasilkan dinyatakan dalam persentase (%). Identifikasi bakteri metanogen potensial:
The isolat bakteri menunjukkan produksi maksimum biogas awalnya dipelajari untuk fitur
karakteristik fenotipik pada agar-agar nutrisi diikuti oleh klasifikasi berdasarkan pengecatan Gram
[6]. visualisasi lebih lanjut dari isolat bakteri di bawah SEM dilakukan untuk menentukan sel mereka
morfologi. Setelah inkubasi 24 jam dari kultur bakteri di nutrisi kaldu pada 35 ° C, budaya
disentrifugasi pada 10.000 rpm selama 10 menit dan pelet sel yang diperoleh ditetapkan oleh 2,5%
(v / v) gluteraldehyde dan dehidrasi dengan berturut-turut perendaman selama 10 menit dalam
etanol pada berikut ini konsentrasi: 30% (v / v), 50, 70, 80, 90 dan 100%. Ini kemudian diikuti dengan
titik pengeringan kritis, paladium lapisan emas dan kemudian divisualisasikan di bawah JEOL 840
SEM [7]. Potensi isolat outsourcing ke BioServe, Hyderabad untuk 16S rDNA sequencing. Urutan
diperoleh awalnya dianalisis di Server NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) menggunakan alat
nBLAST dan urutan yang sesuai di-download (Altschul, 1990). Pohon filogenetik dibangun
menggunakan MEGA4 paket dengan metode tetangga bergabung [8].

HASIL DAN DISKUSI

Isolasi bakteri dari kotoran sapi: Mengikuti seri pengenceran cowdung itu, tujuh morfologi yang
berbeda koloni bakteri dijemput dari penyebaran piring, dinamakan sebagai PRATIK-20, PRATIK-30,
PRATIK-40, PRATIK- 50, VBC1, VBC2 dan VBC3. Selain itu, bakteri isolat dipelajari untuk produksi
metana. analisis produksi biogas: cowdung itu diautoklaf selama 30 menit pada 120 ° C dan
diencerkan dengan konsentrasi 75% menggunakan 24h budaya lama cowdung isolat di media nutrisi,
dituangkan ke dalam digester anaerobik palsu diikuti oleh inkubasi pada 35 ° C selama 30 hari.
Diamati bahwa di antara semua isolat bakteri diinokulasi dalam digester anaerobik, yang mengisolasi
PRATIK-20 dan VBC3 adalah dua potensi bakteri metanogen yang dihasilkan signifikan konsentrasi
33,54% dan 40,50% dari biogas (metana) dari kotoran sapi. bakteri metanogen: The koloni bakteri
dari isolat PRATIK-20 yang, melingkar, halus, buram, 1 mm diameter dan sementara VBC3 adalah
bersegregasi, melingkar dan keputihan. Itu isolat PRATIK-20 dan VBC3 diamati menjadi grampositive
dan gram basil negatif masing-masing. pemindaian mikrograf dari bakteri isolat PRATIK-20 dan VBC3
yang seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2 (a, b). analisis urutan 16S rDNA menunjukkan bahwa
isolat PRATIK-20 memiliki kesamaan tertinggi 99% dengan strain Bacillus sp. SRC_DSF22 (GU797304)
sementara ketegangan VBC3 menunjukkan kesamaan tertinggi 100% dengan tak berbudaya Proteus
sp. (JQ624316). Berdasarkan fenotipik yang karakteristik dan analisis filogenetik, saring PRATIK-20
dan VBC3 diidentifikasi sebagai Bacillus sp. dan Proteus sp. sebagai ditunjukkan pada Gambar 3 (a,
b). The16S rDNA urutan isolat PRATIK-20 dan VBC3 telah disimpan di Bank Gene dengan JQ726697
nomor aksesi dan JX089650 masing-masing. 029 International Journal of Current Research, Vol. 4,
Issue, 07, pp.028-031, Juli 2012 Gambar 2: Memindai mikrograf dari Bacillus sp. PRATIK- 20 (a) dan
Proteus sp.VBC3 (b) diisolasi sebagai bakteri metanogen dari yang cowdung. Figure.11: Pohon
filogenetik dari isolat PRATIK-20 (a) dan VBC3 (b) dalam kaitannya dengan Bacillus dan spesies
Proteus, masing-masing. Pohon ini dibangun dengan menggunakan algoritma Tetangga-bergabung.
Nomor di pohon mengacu bootstrap nilai pada 1000 ulangan. nomor nukleotida aksesi diberikan
dalam kurung. bar menunjukkan diperkirakan perbedaan 0,1% di urutan nukleotida. Dilaporkan
bahwa Bacillus sp. dan Proteus sp. yang terisolasi dari pencernaan anaerobik kulit singkong dicampur
dengan limbah babi untuk biogas dan generasi pupuk bio [9], yang memberikan bukti untuk alam
metanogen dari isolat bakteri Bacillus sp. PRATIK-20 dan Proteus sp.VBC3. Kesimpulan Sebuah
analisis kritis dari penelitian menyimpulkan bahwa isolat PRATIK-20 dan VBC3 adalah potensi
metanogen Bakteri hadir dalam cowdung, maka penelitian ini merekomendasikan pemanfaatan
strain terisolasi untuk produksi biogas. Itu Penelitian ini juga menunjukkan optimasi lebih lanjut dari
parameter physiochemical dan penggunaan strain terisolasi bersama dengan bakteri Acidogenic dan
fermentatif untuk efektif, volumetrik dan produksi yang lebih cepat dari biogas dari digester
anaerobik untuk skala komersial.