PROSEDUR IHC NEOPOLY

No Langkah-langkah Lama Proses

1 Deparafinasi (xylol I, xylol II, xylol III) @5menit
Untuk menghilangkan paraffin dari jaringan
2 Rehidrasi (Alkohol absolut, 96%, 90%, 80%, dan70%) @ 5 menit
Memasukkan air secara perlahan ke dalam jaringan
sehingga nantinya dapat bereaksi dengan reagen
3 Cuci air mengalir 5 menit
4 Antigen Retrieval dalam RG-1 atau decloacking chamber 30 menit 950C
Slide ditempatkan dalam wadah berisi buffer retrieval (Core
retrieval buffer pH 9 atau universal retrieval buffer pH 6)
5 Didinginkan ± 30 menit
6 Cuci dengan PBS 2x @ 5 menit
Mempertahankan osmolaritas sel
7 Blocking endogen peroksida dengan 3% H2O2 15 menit
Memblokir endogen peroksidase pada jaringan
8 Cuci dalam PBS 2x @ 5 menit
Mempertahankan osmolaritas sel
9 Antibodi primer 60 menit
10 Cuci dalam PBS 2x @ 5 menit
Mempertahankan osmolaritas sel
11 One Step Neopoly Polymer 30 menit
Antibody sekunder yang berlabel polimer dan HRP
12 Cuci dalam PBS 2x @ 5 menit
Mempertahankan osmolaritas sel
13 DAB Maksimal 5 menit
1 ml DAB buffer + 1 ml DAB substrate
14 Cuci air mengalir 5 menit
15 Counterstain dengan hematoxylin 30 detik
16 Cuci air mengalir 5 menit
17 Lithium carbonate 1 menit
18 Dehidrasi (Alkohol 70%, 80%, 90%, 96%, absolut) @ 5 menit
19 Clearing (xylol I, xylol II, xylol III) @ 5 menit
20 Mounting + cover glass