SYNTHESIS OF SILVER NANOPARTICLES USING DIOSCOREA BULBIFERA

TUBER EXTRACT AND EVALUATION

OF ITS SYNERGISTIC POTENTIAL IN COMBINATION WITH ANTIMICROBIAL
AGENTS
LATAR BELAKANG

Proses ramah lingkungan untuk sintesis nanomaterial perak merupakan aspek penting dari
penelitian nanoteknologi saat ini. Di antara 600 spesies dari genus Dioscorea, Dioscorea bulbifera
memiliki aplikasi terapeutik yang mendalam karena fitokimia yang unik. Dalam tulisan ini, kami
melaporkan sintesis cepat nanopartikel perak dengan reduksi ion Ag + menggunakan ekstrak umbi D.
bulbifera. Metode dan hasil: Analisis fitokimia mengungkapkan bahwa ekstrak umbi D. bulbifera kaya
akan flavonoid, fenolik, gula pereduksi, pati, diosgenin, asam askorbat, dan asam sitrat. Proses
biosintesis cukup cepat, dan nanopartikel perak terbentuk dalam waktu 5 jam.
Spektroskopi serapan ultraviolet, mikroskop elektron transmisi, mikroskop elektron transmisi
resolusi tinggi, spektroskopi dispersif energi, dan difraksi sinar-X mengkonfirmasi pengurangan ion Ag +.
Variasi morfologi nanopartikel perak bioreduced termasuk bola, segitiga, dan segi enam. Studi optimasi
mengungkapkan bahwa laju maksimum sintesis dapat dicapai dengan 0,7 mM solusi AgNO3 pada 50 ° C
dalam 5 jam. Nanopartikel perak yang dihasilkan ditemukan memiliki aktivitas antibakteri yang kuat
terhadap bakteri Gram-negatif dan Gram-positif.
Antibiotik Betalactam (piperacillin) dan makrolide (erythromycin) masing-masing menunjukkan
peningkatan 3,6 kali lipat dan 3 kali lipat, dalam kombinasi dengan nanopartikel perak secara selektif
terhadap Acinetobacter baumannii multidrugresistant. Sinergi penting terlihat antara nanopartikel perak
dan kloramfenikol atau vankomisin terhadap Pseudomonas aeruginosa, dan masing-masing didukung
oleh peningkatan diameter zona 4,9 kali lipat dan 4,2 kali lipat. Demikian pula, kami menemukan
peningkatan maksimum 11,8 kali lipat dalam diameter zona streptomisin bila dikombinasikan dengan
nanopartikel perak melawan E. coli, memberikan bukti kuat untuk aksi sinergis kombinasi antibiotik dan
nanopartikel perak. Kesimpulan: Ini adalah laporan pertama tentang sintesis nanopartikel perak
menggunakan ekstrak umbi D. bulbifera diikuti oleh estimasi potensi sinergisnya untuk peningkatan
aktivitas antibakteri dari agen antimikroba spektrum luas. Kata kunci: Ekstrak umbi Dioscorea bulbifera,
nanopartikel perak, sinergi antimikroba.
PENGANTAR
Nanopartikel telah menerima perhatian yang cukup dalam beberapa tahun terakhir karena
berbagai aplikasi mereka di bidang katalisis, fotonik, optoelektronika, penandaan biologis, aplikasi
farmasi pengendalian pencemaran lingkungan, sistem pengiriman obat, dan kimia bahan. Meskipun
telah ada penelitian yang luas pada sintesis kimia nanopartikel, partikel-partikel ini memiliki beberapa
potensi bahaya, termasuk karsinogenisitas, genotoksisitas, sitotoksisitas, dan toksisitas umum. Ada
kebutuhan untuk mengembangkan prosedur yang bersih, tidak beracun, dan ramah lingkungan untuk
sintesis dan perakitan partikel nano. Sintesis nanopartikel logam semata-mata tergantung pada
pengetahuan mikroorganisme dan perilaku mereka, yang memainkan peran penting. Terhadap latar
belakang ini, para peneliti telah bekerja ekstensif pada sintesis ekstraseluler dan intraseluler dari
nanopartikel logam menggunakan bakteri, jamur, ragi, dan banyak sumber biologis lainnya. Salah satu
kelemahan utama menggunakan mikroba untuk bioreduksi adalah kebutuhan untuk mempertahankan
kondisi aseptik, yang tidak hanya padat karya tetapi juga sangat mahal dalam hal biaya produksi industri.
Ada laporan tentang sintesis nanopartikel menggunakan serai dan daun nimba. Ekstrak daun telah
digunakan untuk sintesis nanopartikel perak, yang telah menyoroti kemungkinannya sintesis yang cepat
dan mungkin juga mengurangi langkah-langkah yang terlibat dalam pemrosesan hilir, sehingga membuat
proses lebih ekonomis dan hemat biaya. Sastry et al, Shankar et al, dan Ankamwar et al telah bekerja
secara luas pada biosintesis nanopartikel logam dari berbagai sumber tanaman.
Mereka telah melaporkan sintesis nanopartikel yang memiliki bentuk dan morfologi yang
eksotis. Keberhasilan spektakuler dalam bidang ini telah membuka prospek pengembangan metode
"green synthesis" untuk nanopartikel logam dengan sifat struktural yang dibuat khusus menggunakan
bahan awal jinak. Perak telah digunakan sebagai agen penyembuhan dan antibakteri di seluruh dunia
selama ribuan tahun. Manfaatnya atas penggunaan antibiotik dapat digunakan sebagai strategi yang
kuat untuk memerangi meningkatnya resistensi multi-obat yang dihasilkan dari penggunaan antibiotik
secara luas. Oleh karena itu, kemanjuran klinis antibiotik telah dikompromikan. Resistensi antibiotik
telah menjadi masalah serius yang mengancam kesehatan manusia. Dari semua agen antimikroba
anorganik, unsur perak dan senyawa nanopartikel telah diuji secara luas. Sondi dan Salopek-Sondi baru-
baru ini menunjukkan bahwa nanopartikel perak (0) adalah agen antimikroba yang cukup efektif
terhadap Escherichia coli. Selain itu, nanopartikel perak memiliki sifat yang sangat baik dalam hal
entropi konformasi dalam ikatan polivalen, yang membuatnya mudah bagi mereka untuk menempel
pada rantai polimer antibiotik yang fleksibel. Selain itu, nanopartikel perak telah mengembangkan kimia
permukaan dan stabilitas kimia dengan baik, dan memiliki ukuran yang sesuai. Mereka mampu
mempertahankan bentuk dan ukuran yang konstan dalam larutan. Dengan demikian, nanopartikel perak
adalah pilihan yang baik sebagai bahan nano anorganik dalam kombinasi dengan berbagai kelas
antibiotik untuk digunakan melawan mikroorganisme patogen.
Dioscorea bulbifera adalah unik di antara 600 spesies dari genus Dioscorea karena fitokimia
spesifik spesiesnya, mendukung aplikasi luasnya dalam terapi. Ekstrak umbi D. bulbifera kaya akan
senyawa polifenol, terutama flavonoid dan katekin, yang telah berkontribusi terhadap sifat antioksidan
dan antidiabetiknya. Dalam laporan sebelumnya, kami melaporkan sintesis nanopartikel emas
menggunakan D. bulbifera.
Namun, hingga saat ini, tidak ada laporan tentang sintesis nanopartikel perak menggunakan
ekstrak umbi D. bulbifera. Mengingat latar belakang ini, penyelidikan rinci diperlukan ke dalam
potensinya untuk digunakan dalam sintesis nanopartikel perak, bersama dengan karakterisasi dan
aplikasi dalam terapi. Demikian pula, tidak ada laporan termasuk evaluasi menyeluruh dari peran
nanopartikel perak dalam peningkatan kemanjuran berbagai kelompok antibiotik, yaitu, β-laktam,
sefalosporin, aminoglikosida, rifamycin, glikopeptida, kuinolon, tetrasiklin, trimetoprim, karbapen, siklik
peptida, dan makrolida, terhadap sekelompok besar bakteri Gram-positif dan Gram-negatif. Dalam
makalah ini, kami melaporkan untuk pertama kalinya sintesis nanopartikel perak dengan reduksi ion Ag
+ dengan bantuan ekstrak umbi D. bulbifera. Kami telah menggunakan umbi kaldu untuk reduksi ion Ag
+ secara biogenik. Tujuan kami dalam pekerjaan ini adalah untuk mengurangi perak ionik menjadi
partikel nano menggunakan biomaterial yang membahas dua faktor utama, yaitu, kebutuhan
biomaterial untuk ramah lingkungan dan tidak menghasilkan limbah industri beracun dan untuk itu
menjadi hemat biaya dan mudah diproduksi. Kami juga menyelidiki efek dari kondisi reaksi, seperti suhu
dan konsentrasi AgNO3, pada tingkat sintesis nanopartikel perak. Kami belajar efek antimikroba mereka
pada berbagai konsentrasi melawan berbagai bakteri Gram-negatif dan Gram-positif. Selanjutnya, kami
mengevaluasi nanopartikel perak dalam kombinasi dengan berbagai kelompok antibiotik untuk
peningkatan aktivitas antimikroba secara sinergis terhadap bakteri patogen. Di sini, kami menyajikan
studi rinci pertama tentang potensi sinergis nanopartikel perak biogenik dalam kombinasi dengan 22
antibiotik berbeda terhadap 14 bakteri patogen yang kuat.
BAHAN DAN METODE
Bahan tanaman dan persiapan ekstrak umbi D. bulbifera dikumpulkan dari wilayah Ghats Barat
di Maharashtra, India, dipotong menjadi irisan tipis, dan dikeringkan selama dua hari pada suhu kamar.
Ekstrak umbi disiapkan dengan menempatkan 5 g bubuk umbi yang dicuci bersih dan ditumbuk halus ke
dalam labu Erlenmeyer 300 mL dengan 100 mL air suling steril, didihkan campuran selama 5 menit, lalu
didekantasi. Ekstrak yang diperoleh disaring melalui kertas saring Whatman No 1. Filtrat dikumpulkan
dan disimpan pada suhu 4 ° C untuk penggunaan lebih lanjut.

ANALISIS FITOKIMIA
Total konten flavonoid
Sampel 0,5 mL ekstrak umbi D. bulbifera dicampur dengan 0,5 mL 2% AlCl3 dalam metanol dan
diinkubasi selama 10 menit pada suhu kamar. Setelah tepat 10 menit, absorbansi tercatat pada 368 nm.
Total konten fenolik diukur dari kurva kuersetin standar.
Total konten fenolik
Sampel 0,125 mL ekstrak umbi D. bulbifera dicampur dengan 0,5 mL air deionisasi. Fagen-
Ciocalteau reagen 0,125 mL ditambahkan dan diinkubasi selama 5 menit pada suhu kamar diikuti
dengan penambahan 1,25 mL larutan 7% Na2CO3. Volume dibuat hingga 3 mL dengan air suling diikuti
oleh inkubasi selama 90 menit pada suhu kamar. Absorbansi tercatat pada 760 nm.
Total kandungan flavonoid diperkirakan dari kurva asam galat standar. kadar pati Lima gram
bubuk umbi D. bulbifera kering dicuci berulang kali menggunakan etanol 70% untuk menghilangkan gula
sampai pencucian tidak menunjukkan warna dengan pereaksi anthrone. Residunya dikeringkan dan
direbus dalam 100 mL air suling untuk mendapatkan ekstrak umbi D. bulbifera tanpa gula. Sampel 1 mL
ekstrak umbi D. bulbifera diuapkan sampai kering dan dilarutkan dalam 60% asam perklorat. Setelah itu,
4 mL pereaksi anthrone ditambahkan, diikuti dengan merebus dalam penangas air selama 8 menit.
Intensitas warna hijau gelap dicatat pada 630 nm, dan kandungan pati diperkirakan dengan
perbandingan dengan kurva glukosa standar.
Total reducing sugar
Sejumlah 100 mL ekstrak umbi D. bulbifera dibuat hingga volume 1 mL menggunakan air suling,
dan 1 mL reagen dinitrosalisilat ditambahkan. Campuran disimpan pada 100 ° C selama 5 menit, dan
absorbansi dicatat pada 540 nm. Total gula pereduksi dihitung dari kurva maltosa standar
Konten diosgenin
Sampel 1 mL ekstrak umbi D. bulbifera diuapkan sampai kering, dan 5 mL asam perklorat 60%
ditambahkan ke dalam residu kering dan aduk hingga tercampur rata. Absorbansi direkam pada 410 nm
setelah 10 menit, dan konten diosgenin adalahditentukan dari kurva diosgenin standar.
Kadar asam askorbat
Sampel 2 mL ekstrak umbi D. bulbifera diuapkan sampai kering, diikuti oleh rekonstitusi asam
oksalat 4%. Sampel kemudian brominasi dan 1 mL reagen dinitrofenil hidrazin ditambahkan, diikuti oleh
dua tetes tiourea 10%. Setelah dicampur dengan seksama, tabung dijaga pada suhu 37 ° C selama 3 jam.
Kristal osazon oranye-merah yang terbentuk dilarutkan dalam 7 mL asam sulfat 80%. Absorbansi
diukur pada 540 nm. Kandungan asam askorbat dalam ekstrak umbi D. bulbifera dihitung dengan
perbandingan dengan kurva standar untuk asam askorbat.
kandungan asam sitrat
Ekstrak umbi D. bulbifera kuantitas 1 mL diuapkan sampai kering dan dilarutkan dalam 1 mL
asam trikloroasetat 5%. Tabung dihentikan setelah penambahan tetes demi tetes 8 mL anhidrida asetat
anhidrat, diikuti dengan inkubasi pada suhu 60 ° C selama 10 menit dalam penangas air. Setelah itu, 1
mL piridin ditambahkan ke setiap tabung dan dipasang kembali, setelah itu tabung diinkubasi pada 60 °
C selama 40 menit. Pada akhir periode ini, tabung dipindahkan ke penangas air es selama 5 menit dan
absorbansi tercatat pada 420 nm. Total kandungan asam sitrat ditentukan dari sitrat standar kurva asam
dalam kisaran 10-400 ug / mL.

SINTESIS NANOPARTIKEL PERAK

Ion Ag + dikurangi dengan menambahkan 5 mL ekstrak umbi D. bulbifera menjadi 95 mL larutan
AgNO3 10-3 M. Pengurangan ion Ag + dipantau dengan mengukur spektrum ultraviolet-terlihat dari
solusi secara berkala pada spektrofotometer (SpectraMax M5, Molecular Devices Corporation,
Sunnyvale, CA) yang beroperasi pada resolusi 1 nm. Efek suhu pada tingkat sintesis dan ukuran
nanopartikel perak disiapkan dipelajari dengan melakukan reaksi dalam penangas air pada suhu 4 ° C –
50 ° C dengan refluks. Konsentrasi larutan AgNO3 juga bervariasi dari 0,3 hingga 5 mM.

TEM, HRTEM, DAN CAHAYA DINAMIS PENGUKURAN HAMBURAN

Morfologi permukaan dan ukuran nanopartikel perak bioreduced ditentukan menggunakan
mikroskop elektron transmisi (TEM, Tecnai 12 Cryo, FEI, Eindhoven, Belanda). Morfologi dan ukuran
nanopartikel perak juga ditandai oleh mikroskop elektron transmisi resolusi yang lebih tinggi (HRTEM,
JEOL-JEM-2100, Peabody, MA). Spektrum dispersif energi untuk nanopartikel perak yang diambil
menggunakan spektrometer dispersif energi yang dilengkapi dengan mikroskop elektron pemindaian
analitik JEOL JSM 6360A pada kisaran energi 0-20 keV mengkonfirmasi sintesis nanopartikel perak
menggunakan D. bulbifera ekstrak umbi. Ukuran partikel dalam 3 mL campuran reaksi dianalisis
menggunakan peralatan hamburan cahaya dinamis (Zetasizer Nano-2590, Malvern Instruments Ltd,
Worcestershire, Inggris) dalam kuvet polystyrene.
Pengukuran difraksi sinar-X
Pembentukan fase nanopartikel bioreduced dipelajari menggunakan difraksi sinar-x. Data
difraksi untuk film nanopartikel tipis kering sepenuhnya pada slide kaca direkam pada difraktometer x-
ray (D8Advanced, Brucker, Jerman) dengan sumber Cu Kα (1,54 Å).
FTIR
Serbuk nanopartikel kering diperoleh dengan cara sebagai berikut. Nanopartikel perak disintesis
setelah 5 jam reaksi larutan AgNO3 1 mM dengan ekstrak umbi D. bulbifera disentrifugasi pada 10.000
rpm selama 15 menit pada suhu kamar, setelah itu pelet disebarkan kembali dalam air suling steril.
Proses sentrifugasi dan redispersi dalam air suling steril diulang tiga kali untuk memastikan pemisahan
yang lebih baik dari entitas bebas dari partikel nano. Pelet yang dimurnikan kemudian dikeringkan dan
dikenai Fourier transform infrared (FTIR, IRAffinity-1, Shimadzu Corporation, Tokyo, Jepang)
menggunakan pengukuran spektroskopi menggunakan teknik pelet kalium bromida (KBr) dalam mode
refleksi difus pada resolusi 4 cm − 1. Bubuk partikel nano dicampur dengan KBr dan terkena sumber
inframerah 500-4000 cm-1. Proses serupa digunakan untuk studi FTIR ekstrak umbi D. bulbifera sebelum
dan sesudah bioreduksi.
AKTIVITAS BAKTERISIDA DAN DALAM KOMBINASI
Efek nanopartikel perak disintesis menggunakan ekstrak umbi D. bulbifera, antibiotik standar,
dan kombinasi keduanya diuji terhadap strain bakteri Gram-positif dan Gram-negatif menggunakan
metode difusi cakram pada pelat agar Muller-Hinton. Sebuah koloni tunggal dari masing-masing strain
uji ditanam semalaman dalam medium cair Muller-Hinton pada pengocok rotari (200 rpm) pada suhu 37
° C. Sel-sel yang tumbuh semalaman dicuci dua kali dalam salin fosfatebuffered steril dan inokula
disiapkan dengan pengenceran dengan salin dapar fosfat ke 0,4 McFarland standar dan diaplikasikan
pada pelat bersama dengan nanopartikel dan antibiotik standar. Untuk menentukan efek gabungan,
cakram yang mengandung 500 μg antibiotik berbeda diimpregnasi lebih lanjut dengan 5 μL nanopartikel
perak yang baru disiapkan pada konsentrasi akhir 30 μg / cakram. Setelah inkubasi pada 37 ° C selama
18 jam, zona hambatan diukur. Tes dilakukan dalam rangkap tiga.
HASIL
ANALISIS FITOKIMIA
D. bulbifera dikenal kaya akan berbagai phytochemical seperti fenolik, flavonoid, karbohidrat,
dan vitamin yang mungkin memainkan peran penting dalam bioreduksi nanopartikel perak. Analisis
fitokimia ekstrak umbi D. bulbifera mengungkapkan kadar flavonoid yang tinggi hingga 4 mg / mL.
Demikian pula, ekstrak umbi D. bulbifera ditemukan kaya akan konten fenolik. Total gula pereduksi juga
ditemukan relatif tinggi (hingga 3,41 mg / mL), diikuti oleh pati. Dioscorea diketahui mengandung
saponin yang dikenal sebagai diosgenin. Tabel 1 menunjukkan keberadaan diosgenin 26 μg / mL dalam
ekstrak umbi D. bulbifera. Selain phytochemical lainnya, asam askorbat dan asam sitrat terdeteksi dalam
kisaran 0,1-0,3 mg / mL.

SINTESIS NANOPARTIKEL PERAK DAN STUDI OPTIMASI

Bioreduksi Ag + menjadi Ag0 dimediasi oleh ekstrak umbi D. bulbifera dipantau dengan merekam
spektrum serapan sebagai fungsi waktu. Warna coklat kekuningan nanopartikel perak yang terkenal
muncul karena eksitasi dari getaran plasmon permukaan dengan maksimum absorbansi pada 450 nm
(Gambar 1). Ini mungkin memainkan peran kunci dalam proses bioreduksi. Solusi koloid dengan
pengembangan warna cokelat yang intens menunjukkan sintesis nanopartikel perak, yang menunjukkan
peningkatan yang stabil dengan waktu pengocokan pada 150 rpm dan 40 ° C. Spektrum ultraviolet-
terlihat dari campuran reaksi ekstrak umbi D. bulbifera dan AgNO3 dicatat pada interval waktu yang
teratur (Gambar 2). Meskipun tidak ada sintesis yang signifikan pada t = 0 menit dan t = 30 menit, laju
sintesis meningkat pada t = 60 menit pada tingkat yang sangat cepat dan selesai dalam 5 jam.
Nanopartikel perak yang dibentuk menggunakan ekstrak umbi D. bulbifera ditemukan sangat stabil,
mungkin karena adanya pati dalam ekstrak yang mencegah aglomerasi, bahkan setelah 30 hari.
Optimalisasi konsentrasi AgNO3 dilakukan dengan memplot absorbansi pada panjang gelombang
puncak nanopartikel perak terhadap waktu. Variasi dalam kinetika reaksi diamati pada konsentrasi yang
berbeda (Gambar 3). Laju sintesis ditemukan maksimum pada konsentrasi 0,7 mM, sedangkan
konsentrasi yang lebih tinggi memiliki laju bioreduksi yang relatif rendah, dengan 0,3 mM menunjukkan
laju sintesis paling lambat.
 Dengan demikian, studi optimasi menunjukkan pengaruh konsentrasi yang signifikan pada
sintesis nanopartikel perak. Kami selanjutnya menyelidiki peran suhu pada laju reaksi dengan
memvariasikan suhu dari 4 ° C hingga 50 ° C. Sintesis maksimal nanopartikel perak dicapai pada 50 ° C
(Gambar 4). Reaksi lambat pada suhu yang lebih rendah, dan tidak ada perbedaan signifikan yang
ditemukan pada 4 ° C, 20 ° C, dan 30 ° C. Namun, peningkatan laju reaksi diamati dengan peningkatan
suhu.

TeM, hrTeM, dan spektrometri dispersif energi

Bentuk dan ukuran nanopartikel disintesis dijelaskan dengan bantuan TEM dan HRTEM. Gambar
TEM mengkonfirmasi pembentukan nanopartikel perak (Gambar 5 dan 6). Pembentukan nanotriangles
perak adalah peristiwa yang sangat langka. Mayoritas terbentuk sebagai nanorod perak dan segitiga
dalam kisaran ukuran 8-20 nm (Gambar 5A). Gambar HRTEM jelas menunjukkan bahwa partikel nano
sebagian besar berbentuk bola. Partikel nano dari dimensi yang lebih besar (sekitar 75 nm) diamati.
Analisis TEM dan HRTEM juga kadang-kadang menunjukkan nanopartikel heksagonal bersama dengan
segitiga dan batang (Gambar 5C dan 6D).
 Gambar 2 Spektra ultraviolet-terlihat direkam sebagai fungsi dari waktu reaksi larutan AgNO3 1 mM dengan ekstrak umbi
Dioscorea bulbifera pada suhu 40 ° c.

Gambar 3 Tentu saja waktu pembentukan nanopartikel perak diperoleh dengan konsentrasi AgNO3 yang berbeda
menggunakan ekstrak umbi Dioscorea bulbifera pada 40 ° c.

Nanopartikel perak bersifat anisotropik dan termasuk partikel segitiga, bola, dan ellipsoidal
(Gambar 5D, E, dan F). Fitokimia yang ada dalam umbi diyakini sebagai agen yang bertanggung jawab
untuk mengurangi Ag + menjadi Ag0, tetapi bentuknya diyakini dikendalikan oleh faktor kimia seperti
asam askorbat dan asam sitrat. Demikian pula, kandungan pati ekstrak umbi D. bulbifera dapat
memainkan peran penting dalam pembatasan. Banyak nanopartikel triangularshaped diamati selain
batang.
 Gambar 4 Tentu saja waktu pembentukan nanopartikel perak diperoleh dengan 1 mM AgNO3 menggunakan ekstrak umbi
Dioscorea bulbifera dengan suhu reaksi yang berbeda.

Hasil spektroskopi x-ray dispersif energi mengkonfirmasi adanya sejumlah besar perak tanpa
kontaminan (Gambar 7). Puncak penyerapan optik diamati pada sekitar 3 keV, yang khas untuk
penyerapan nanocrystallites perak metalik karena resonansi plasmon permukaan. Distribusi ukuran
partikel nanopartikel perak yang ditentukan oleh hamburan cahaya dinamis seperti yang ditunjukkan
pada Gambar 8 ditemukan sekitar 13,54 nm, yang sesuai dengan analisis TEM.

Gambar 5 karakterisasi nanopartikel perak yang dibentuk dengan 1 mM AgNO3 dan 5% ekstrak umbi Dioscorea bulbifera pada
suhu 40 ° C dengan mikroskop elektron transmisi. (A) nanotriangles perak dan nanorod, (B) nanopartikel perak anisotropik, (C),
nanohexagon perak, dan (D) nanopartikel perak tidak beraturan.
Gambar 6 karakterisasi nanopartikel perak yang dibentuk dengan 1 mM AgNO3 dan ekstrak umbi Dioscorea bulbifera 5% pada
suhu 40 ° C dengan mikroskop elektron transmisi resolusi tinggi. (A) nanopartikel perak pada resolusi 20 nm, (B dan C)
nanopartikel perak bulat, dan (D) nanopartikel perak heksagonal

Analisis difraksi sinar-X

Data difraksi untuk bubuk kering direkam pada difraktometer sinar-X Brucker menggunakan
sumber Cu Kα (1,54 Å). Pembentukan fase dikonfirmasi dari puncak karakteristik seperti (111), (200),
(220), dan (311). Data cocok dengan Komite Bersama standar untuk Set Difraksi Bubuk, Kartu 040783,
mengkonfirmasi struktur kubik berpusat pada wajah untuk nanopartikel perak (Gambar 9). Kurangnya
puncak yang menyerupai logam atau oksida logam selain dari perak murni dalam data difraksi
mengkonfirmasi kemurnian nanopartikel perak yang disintesis. Perluasan puncak menunjukkan ukuran
partikel yang lebih kecil.
Ukuran kristalit dihitung menggunakan rumus Scherrer:
d = 0,9λ / βcos
di mana 0,9 adalah faktor bentuk, umumnya diambil untuk sistem kubik, λ adalah panjang
gelombang x-ray, biasanya 1,54 Å, β adalah lebar penuh pada setengah intensitas maksimum dalam
radian, dan θ adalah sudut Bragg. Dengan menggunakan rumus di atas, ukuran kristalit yang dihitung
adalah sekitar 10 nm.
 Gambar 7 Profil spektrometer dispersif energi spot representatif mengkonfirmasi keberadaan nanopartikel perak.

Analisis FTIr
Spektrum serapan FTIR dari ekstrak umbi D. bulbifera sebelum dan sesudah pengurangan perak
ditunjukkan pada Gambar 10. Ekstrak umbi bulbifera menunjukkan gugus hidroksil dalam senyawa
alkohol dan fenolik yang didukung oleh adanya puncak yang kuat di sekitar 3300 cm − 1 . Puncak tajam
ini mewakili ikatan O-H tidak terlihat pada ekstrak umbi D. bulbifera setelah bioreduksi. Ini menunjukkan
bahwa poliol terutama bertanggung jawab untuk reduksi Ag + menjadi nanopartikel perak. Ini dapat
menyebabkan hilangnya ikatan O – H. Kita bisa mengamati gugus hidroksil gratis di FTIR nanopartikel
perak pada 3600 cm − 1. Pita absorbansi pada 2931 cm − 1, 1625 cm − 1, 1404 cm − 1, dan 1143 cm − 1
dikaitkan dengan getaran regangan alkil C-C, konjugasi C-C dengan cincin benzena, tekukan C-O –H dan
C – O stretch dalam alkohol tersier jenuh atau sekunder yang sangat simetris dalam ekstrak umbi D.
bulbifera, masing-masing.
Kehadiran puncak pada 3749 cm-1 dan 1523 cm-1 menunjukkan bahwa nanopartikel perak dapat
dikelilingi oleh amina, karena puncak menunjukkan -NH2 peregangan simetris dan ikatan N-O dalam
senyawa nitro. Efek antimikroba dari antibiotik saja dan dikombinasikan dengan nanopartikel Perak
dikenal sebagai salah satu zat antimikroba yang paling universal.
Efek individu dan gabungan dari nanopartikel perak bioreduced dengan 22 antibiotik berbeda
diselidiki terhadap 14 strain bakteri menggunakan metode difusi disk. Diameter zona hambatan
nanopartikel perak terhadap berbagai kultur patogen diamati (Tabel 2). Nanopartikel perak
menunjukkan sitotoksisitas maksimum terhadap E. coli dan Pseudomonas aeruginosa, sementara
aktivitas sedang ditemukan untuk Salmonella typhi dan Bacillus subtilis. Nanopartikel perak ditemukan
relatif kurang aktif dalam membunuh Staphylococcus aureus.
 Dikombinasikan dengan nanopartikel perak, aktivitas antibakteri dari antibiotik menunjukkan
variasi yang luas, tidak hanya antara kelompok tetapi juga antara anggota kelompok yang sama (Tabel
3).
Ketika dikombinasikan dengan aminoglikosida, yaitu amikasin dan gentamisin, nanopartikel perak
menunjukkan sinergi yang sebanding (peningkatan 0,1-2,2 kali lipat), dan kanamycin ditemukan lebih
unggul melawan P. aeruginosa, menunjukkan peningkatan 4,2 kali lipat dalam penghambatan saat
digunakan dalam kombinasi. Namun, sinergi terbaik ditemukan dengan streptomisin terhadap E. coli, di
mana penghambatan meningkat 11,8 kali lipat.

Gambar 8 histogram distribusi ukuran nanopartikel perak disintesis oleh ekstrak umbi Dioscorea bulbifera.

Di antara β-laktam, aktivitas ampisilin ditingkatkan terhadap Klebsiella pneumoniae, Neisseria

mucosa, dan P. aeruginosa, dengan peningkatan aktivitas 3-4 kali lipat. Di sisi lain, aktivitas penisilin
ditemukan ditingkatkan secara moderat terhadap Acinetobacter baumannii, Enterobacter cloacae, P.
aeruginosa, B. subtilis, dan Pseudomonas koreensis, dan tertinggi terhadap K. pneumoniae. Penting
untuk dicatat bahwa kemanjuran piperasilin dalam kombinasi dengan nanopartikel perak ditingkatkan
secara selektif terhadap A. baumannii Penting untuk dicatat bahwa kemanjuran piperasilin dalam
kombinasi dengan nanopartikel perak ditingkatkan secara selektif terhadap A. baumannii hingga 3,6 kali
lipat. Feropenem menunjukkan sinergi diabaikan atau tidak dalam kombinasi dengan nanopartikel perak
terhadap organisme yang diuji, kecuali untuk K. pneumoniae. Demikian pula, dalam kelompok antibiotik
sefalosporin, sinergi diamati hanya untuk ceftazidime terhadap E. coli. Polymyxin, antibiotik peptida
siklik, menunjukkan variasi aktivitas yang dapat diabaikan baik digunakan sendiri atau dalam kombinasi
dengan nanopartikel perak terhadap semua patogen uji. Bahkan bakteri Gramnegatif seperti K.
pneumoniae, Proteus mirabilis, dan P. aeruginosa, ditemukan dihambat dengan adanya kombinasi
vancomycin dan nanopartikel perak, yang sebaliknya menunjukkan pola resisten di hadapan antibiotik
saja. Eritromisin menunjukkan peningkatan aktivitas 1,5-3,0 kali lipat terhadap K. pneumoniae, P.
mirabilis, P. aeruginosa, S. typhi, dan A. baumannii dalam kombinasi dengan nanopartikel perak.
Nanopartikel perak meningkat kemanjuran asam nalidiksat, anggota kelompok antibiotik kuinolon,
melawan mikroba Gram-positif dan Gramnegatif, khususnya E. coli dan P. koreensis.
Rifampisin dan tetrasiklin menunjukkan aktivitas yang identik dengan adanya dan tidak adanya
nanopartikel perak terhadap sebagian besar patogen yang diuji. Aktivitas kloramfenikol terhadap P.
aeruginosa sangat ditingkatkan hingga 4,9 kali lipat di hadapan nanopartikel perak, tetapi sinergi sedang
diamati terhadap patogen Gram-positif lain yang diuji. Kombinasi nanopartikel perak dengan
nitrofurantoin dan trimethoprim menunjukkan kemanjuran sinergis selektif yang identik terhadap K.
pneumoniae.

Gambar 9 Representasi profil x-ray representatif dari nanopartikel perak film tipis

Gambar 10 Fourier mengubah spektrum serapan inframerah dari ekstrak umbi Dioscorea bulbifera kering (A) sebelum
bioreduksi dan (B) setelah bioreduksi lengkap ion Ag + pada 50 ° c.
DISKUSI
Kami telah berhasil menunjukkan rute cepat dan efisien untuk sintesis nanopartikel perak
menggunakan ekstrak umbi D. bulbifera. Perkembangan warna coklat kekuningan intens karena
resonansi plasmon permukaan mengkonfirmasi sintesis nanopartikel perak. Umbi D. bulbifera adalah
sumber yang kaya flavonoid dan turunan asam fenolik.
Flavonoid memainkan peran penting dalam proses reduksi untuk sintesis partikel nano. Dengan
demikian, kandungan flavonoid dan fenolik yang tinggi dalam ekstrak umbi D. bulbifera yang terungkap
dalam analisis fitokimia sangat mendukung potensi ekstrak umbi D. bulbifera menjadi bioreduce Ag + to
Ag0. Demikian pula, gula pereduksi yang diketahui memainkan peran penting dalam bioreduksi
ditemukan dominan dalam ekstrak umbi D. bulbifera. Penting untuk dicatat bahwa D. bulbifera
mengandung asam askorbat dan asam sitrat dalam jumlah yang signifikan.
Ini sesuai dengan keberadaan asam askorbat dan sitrat dalam ekstrak umbi D. bulbifera dalam
penelitian kami juga. Penggunaan yang luas dari asam askorbat dan sitrat dalam sintesis nanopartikel
perak memberikan alasan yang kuat untuk penggunaan ekstrak umbi D. bulbifera dalam sintesis dan
pembentukan nanopartikel perak. Diosgenin dilaporkan sebagai saponin dominan dalam D. bulbifera
yang mungkin berkontribusi terhadap sifat surfaktan dari ekstrak umbi D. bulbifera. Surfaktan tanaman
banyak digunakan dalam sintesis nanopartikel perak. Demikian juga, kandungan pati yang signifikan
dalam ekstrak umbi D. bulbifera mencerminkan sifat pembatasan ekstrak, dan pati banyak digunakan
dalam berbagai proses sintetik untuk membatasi dan menstabilkan partikel nano perak.
Dengan demikian, studi fitokimia mendukung penggunaan ekstrak umbi D. bulbifera sebagai
agen yang sesuai untuk memfasilitasi sintesis nanopartikel perak. Pengurangan lengkap Ag + dalam
waktu 5 jam menunjukkan bahwa sintesis jauh lebih cepat dibandingkan dengan tanaman lain seperti
Roussillonvi portulacastrum L yang membutuhkan waktu 24 jam untuk sintesis lengkap nanopartikel
perak terjadi. Studi optimisasi menunjukkan bahwa ketajaman puncak meningkat dengan kenaikan
suhu. Kemungkinan besar, ini terjadi karena peningkatan laju reaksi konversi ion logam menjadi partikel
nano pada suhu yang lebih tinggi. Baru-baru ini, berbagai sistem tanaman telah digunakan untuk
mensintesis nanopartikel perak bulat dan tidak teratur. Meskipun nanospheres mendominasi populasi
nanopartikel perak yang disintesis seperti yang dibuktikan dari HRTEM dan TEM mikrograf, dalam
beberapa kasus anisotropi diamati mirip dengan laporan lain.
 Anisotropi di antara nanopartikel perak dapat dikaitkan dengan laporan baru-baru ini oleh
Huang et al yang menyebutkan bahwa kristal perak yang baru terbentuk dengan menggunakan bubuk
daun Cinnamomum camphora secara bertahap ditutup oleh molekul pelindung, yang akibatnya
menghilangkan sintering cepat nanopartikel yang lebih kecil, menghasilkan pembentukan
nanotriangles .
Data spektrometri dispersif energi tempat mengkonfirmasi kemurnian nanosilver logam,
sedangkan ukuran partikel dihitung sekitar 10 nm dari data difraksi sinar-x. Spektrum serapan FTIR
menawarkan informasi mengenai perubahan kimia dalam kelompok fungsional yang terlibat dalam
bioreduksi. Umbi D. bulbifera diketahui mengandung berbagai senyawa bioaktif, termasuk flavonoid,
terpenoid, fenantren, asam amino, protein, dan glikosida. Diperkirakan bahwa gugus alkohol dioksidasi
menjadi gugus karbonil selama reduksi, yang mendukung saran bahwa gugus poliol terutama
bertanggung jawab untuk proses bioreduksi. Dengan demikian, fraksi D. bulbifera yang larut dalam air
memainkan peran kunci dalam bioreduksi prekursor dan evolusi bentuk dalam nanopartikel.
Ion perak dan senyawa berbasis perak sangat beracun bagi mikroorganisme, menunjukkan efek
biosidal yang kuat terhadap spesies mikroba karena ini adalah spesies yang sangat reaktif dengan luas
permukaan yang besar. Nanopartikel perak yang diproduksi menggunakan mikroba dan ekstrak
tanaman diketahui menunjukkan antimikroba yang kuat aktivitas.
Aktivitas antimikroba yang ditentukan dengan menggunakan metode difusi cakram menegaskan
bahwa menggabungkan antibiotik dengan nanopartikel perak menghasilkan efek bakterisidal yang lebih
besar pada patogen uji dibandingkan salah satu agen antibakteri yang digunakan sendirian. Eksperimen
ini memberikan bukti kuat sinergi antibakteri antara antibiotik dan nanopartikel perak. Pengamatan
yang sangat menarik bahwa A. baumannii, patogen nosokomial yang resisten terhadap hampir semua
antibiotik dan garam logam yang dikenal, biasa digunakan dalam obat-obatan, juga bisa peka dengan
adanya perak partikel nano.
Oleh karena itu, pendekatan kombinasi antibiotik dan nanopartikel perak ini akan memberikan
strategi untuk pengendalian A. baumannii yang efektif. Dari hasil, kita dapat menyimpulkan bahwa efek
antimikroba dari nanopartikel perak adalah kontributor utama untuk efek sinergis yang diamati dengan
kombinasi nanopartikel perak dan antibiotik.
Para ilmuwan telah menetapkan mekanisme antibakteri dari β laktam, kloramfenikol,
aminoglikosida, tetrasiklin, dan glikopeptida. Namun, belum ada penjelasan yang konsisten untuk
mekanisme antimikroba perak, meskipun aplikasi perak untuk membakar luka telah dilakukan selama
lebih dari satu abad. Ini dapat dikaitkan dengan fakta bahwa perak pada konsentrasi rendah tidak masuk
ke dalam sel, tetapi diserap ke permukaan bakteri seperti halnya perak cenderung teradsorpsi ke
permukaan lain.
Dengan demikian, ion perak melawan dehidrogenasi karena respirasi terjadi melintasi membran
sel pada bakteri daripada melintasi membran mitokondria seperti pada sel eukariotik. Sekali lagi,
beberapa hipotesis menunjukkan bahwa oksidasi katalitik dari ion perak, dengan oksigen yang baru
lahir, bereaksi dengan membran sel bakteri, yang menyebabkan kematian sel. Efek antimikroba dari
antibiotik dalam kombinasi dengan nanopartikel perak diamati dalam penelitian ini. Ini jelas
menunjukkan bahwa peningkatan kemanjuran adalah karena aksi antibakteri sinergis antara antibiotik
dan nanopartikel perak. Seperti dibahas di atas, nanopartikel perak dan antibiotik dapat membunuh
bakteri dengan mekanisme berbeda. Dengan demikian, efek sinergis dapat bertindak sebagai alat yang
sangat kuat melawan mikroorganisme resisten.
Reaksi ikatan antara antibiotik dan nanopartikel perak oleh khelasi pada akhirnya meningkatkan
konsentrasi agen antimikroba pada titik-titik tertentu pada membran sel. Ini mungkin disebabkan karena
pendekatan selektif nanopartikel perak terhadap membran sel yang terdiri dari fosfolipid dan
glikoprotein. Oleh karena itu, nanopartikel perak memfasilitasi pengangkutan antibiotik ke permukaan
sel yang bertindak sebagai pembawa obat. Ketika nanopartikel perak berikatan dengan protein yang
mengandung sulfur dari membran sel bakteri, permeabilitas membran meningkat, memfasilitasi
peningkatan infiltrasi antibiotik ke dalam sel. Baru-baru ini, ditunjukkan bahwa khelasi perak (I)
mencegah pelepasan DNA. Nanopartikel perak tersusun dari atom perak (0 ).72 Nanopartikel perak
berukuran lebih besar daripada ion perak (I), yang membuatnya bereaksi dengan lebih banyak molekul,
yang mengarah ke aktivitas antimikroba yang lebih banyak.
Tabel 2 Zona penghambatan (mm) konsentrasi yang berbeda dari nanopartikel perak pada patogen uji dengan metode difusi
cakram
Tabel 3 Zona penghambatan (mm) antibiotik yang berbeda terhadap jenis uji tanpa adanya dan dengan nanopartikel perak (30
ug / disc)

KESIMPULAN
Dalam upaya untuk menemukan agen nabati alami, ramah lingkungan, dan mudah tersedia
untuk sintesis nanopartikel logam, kami telah menunjukkan untuk pertama kalinya efisiensi ekstrak
umbi D. bulbifera dalam sintesis cepat nanopartikel perak stabil yang memiliki berbagai morfologi yang
menarik karena beragam kelompoknya phytochemical seperti fenolik, flavonoid, gula pereduksi, asam
askorbat, asam sitrat, dan diosgenin. Berdasarkan studi kinetik kami, bersama dengan bukti yang
diperoleh dari FTIR, kami mengusulkan bahwa biomolekul utama yang bertanggung jawab untuk sintesis
nanopartikel adalah polifenol atau flavonoid. Hasil penelitian kami menunjukkan bahwa kombinasi
nanopartikel perak dan antibiotik memiliki efisiensi antibakteri sinergis terhadap mikroba uji, terutama
P. aeruginosa, E. coli, dan A. baumannii. Untuk menjelaskan mekanisme efek antibakteri sinergis ini,
bukti eksperimental yang lebih rumit akan diperlukan. Secara keseluruhan, pendekatan kombinasi
antibiotik dan nanopartikel perak ini tampaknya menjadi salah satu strategi terbaik untuk
mengendalikan mikroorganisme resisten antibiotik dan karenanya manajemen terapi dalam
pengendalian infeksi.

Pengakuan
SG mengakui dukungan keuangan untuk pekerjaan ini dari Institut Bioinformatika dan Bioteknologi,
Universitas Pune, India