ANALISIS

BAKTERI AIR

Afika Herma Wardani, M.Sc.

Mikroorganisme Indikator Kualitas Air
• Mikroorganisme indikator : mikroorganisme yg keberadaanya di dalam air menunjukkan
kemungkinan adanya pathogen
• Mikroorganisme indikator harus :
1) non-patogen,
2) muncul secara konsisten di air yang terkontaminasi patogen,
3) tidak berkembang biak di perairan,
4) dapat dideteksi dengan andal bahkan pada konsentrasi rendah, dan
5) hadir dalam jumlah yang lebih banyak daripada pathogen dan
6) memiliki waktu bertahan hidup yang serupa dengan patogen.
Standar Air Minum
• Adalah angka-angka batasan pada beberapa parameter air yg menjadi
acuan bagi para praktisi dalam mengolah dan membagikan air.
• PMK No. 492 Tahun 2010, syarat mikrobiologi air minum:
Parameter Mikrobiologi Satuan Kadar maksimum
a) Escherichia coli jumlah/100 mL 0
b) Total Bakteri Coliform jumlah/100 mL 0
Standar Air Bersih
• Regulasi PMK Nomor 416 Tahun 1990, syarat air bersih parameter mikrobiologi
Satuan air bersih Kadar yang diperbolehkan
Total Coliform (MPN) jumlah/100 ml Bukan air perpipaan 50
jumlah/100 ml Air perpipaan 10

• Regulasi PMK Nomor 32 Tahun 2017, syarat air untuk keperluan higiene sanitasi
parameter biologi:
Parameter wajib Unit Kadar maksimum yang diperbolehkan
1) Total Coliform CFU/100 ml 50
2) E. coli CFU/100 ml 0

Air untuk Keperluan Higiene Sanitasi digunakan untuk pemeliharaan kebersihan perorangan seperti
mandi dan sikat gigi, serta untuk keperluan cuci bahan pangan, peralatan makan, dan pakaian. Selain
itu Air untuk Keperluan Higiene Sanitasi dapat digunakan sebagai air baku air minum.
Standar Air Kolam Renang
• Regulasi PMK Nomor 32 Tahun 2017,
syarat air kolam renang parameter biologi
Perhitungan Jumlah Sel Bakteri
1. Secara Langsung
• Dengan preparat yg diberi pewarna
• Dengan counting chamber (ruang hitung)
a. Dengan hemasitometer
b. Petroff-Hauser
c. Levy counting chambers
• Dengan preparat pewarna berfluoresen
• Membran filter
2. Secara tidak langsung
• Hitung cawan (standard plate count)
• Jumlah Perkiraan Terdekat (JPT/ MPN)
Penghitungan Secara Langsung :
1) Dengan preparat yang diberi pewarna
• Tidak dapat membedakan sel • Preparat sederhana yg diwarnai
hidup dan sel mati • mengoleskan sejumlah volume pada luas
objek yang telah diukur,
• Pewarna yang digunakan : • Beri pewarna dengan metilen biru atau cat
lain yang sesuai,
1) Methylene Blue
• hitung sel bakteri pada bagian – bagian
2) Trypane blue tertentu yang telah diketahui luasnya.
3) Crystal violet
Pengitungan Secara Langsung :
2) Dengan counting chamber
• Menggunakan Petroff Hauser
• suspensi bakteri dengan volume tertentu
(0,01) ml ditempatkan pada kaca objek dg
bingkai kusus
• Ditambahkan pewarna
• Sel dihitung
• Keutungan : tidak perlu waktu inkubasi
• Kerugian :
ü Tidak selalu dapat membedakan antara bakteri
hidup dan mati
ü Bakteri motil sulit dihitung
ü Membutuhkan konsentrasi bakteri yg tinggi
Pengitungan Langsung :
3)Dengan preparat yang diberi pewarna
fluoresen
• Dapat digunakan untuk mewarnai semua
spesies bakteri
• Contoh pewarna acridine orange, dapat
mewarnai sel hidup dan mati dg
berinteraksi dg DNA dan komponen
protein sel. Sel yg diwarnai akan
berpendar oranye saat diberi sinar UV.
• Untuk menentukan jumlah total bakteri
dari sampel
• Pewarna lain :
üSianotitolil tetrazolium shloride (CTC) :
berikatan dg protein respirasi
üAuromine : berikatan dg dinding sel
Mycobacterium
üRhodamine : berikatan dg dinding sel
Mycobacterium
1. Penghitungan langsung:
4) Membran Filter
• Prinsip : menyaring sampel air dg volume yg diketahui,
melalui membrane selulosa asetat dg diameter pori
(0,45 µm).
• Menggunakan vakum untuk mempercepat penyaringan
air
• Bakteri yg tertahan pada permukaan membrane
ditempatkan di atas media selektif yg sesuai secara
aseptis.
• Diinkubasi 24 jam pada suhu yg sesuai (coliform dan E.
coli 37°C, fecal coliform 44,5 °C)
• Koloni dihitung (jumlah koloni / unit volume air ) (air
minum/bersih : CFU/100ml)
• Media yang digunakan tergantung bakteri yg akan
dihitung
ü endo medium (Total coliform)
ü Cromocult (Total coliform dan E.coli)
Volume sampel untuk membrane filter
Penghitungan tidak langsung:
1) hitung cawan / standar plate count
• Sampel dg pengenceran berseri yg
mengandung mikroba diinokulasikan
ke media yg sesuai
• Metode pour plate atau spread
• Inkubasi pada suhu yg sesuai
• Menghitung koloni (petri dg 30-300)
dan memperhatikan faktor
pengenceran
• Kelemahan: bias jika digunakan untuk
menghitung total populasi campuran
• Menguntungkan jika hanya
menghitung populasi tertentu
• Satuan cfu/ml atau cfu/ bahan uji
Penghitungan tidak langsung:
2)MPN
Ragam tabung untuk air
• MPN adl metode menghitung jumlah mikroba minum/air bersih
menggunakan media cair pd tabung reaksi yg pd
umumnya setiap pengenceran menggunakan 3 atau
5 seri tabung dan perhitungan yg dilakukan
merupakan tahap pendekatan secara statistik.
• Ada 3 tahap :
1) Uji pendugaan (presumptive test)
2) Uji penegasan/konfirmasi (confirmed test)
3) Uji kelengkapan
• Prinsip: sampel diencerkan secara serial dan
diinokulasi pd kaldu laktosa. Tabung positif ditandai
dengan terbentuknya gas dan asam. Terbentuknya
gas ditandai dg gelembung, asam ditandai dg
perubahan warna (keruh). Jumlah tabung positif
dibandinkan dengan table MPN.
Perhitungan Biomassa/massa Sel
1. Perhitungan massa sel secara langsung:
Dilakukan dg menimbang seluruh sel. Biomassa sel bisa berkorelasi dg jumlah sel dg
mengacu pd kurva standar. Berat basah atau berat kering dapat digunakan untuk estimasi
jumlah sel
a) Volumetrik : metode analisis kuantitatif suatu zat atau komponen yang telah diketahui
dengan cara mengukur volume larutan setelah melalui proses pemisahan
b) Gravimetrik : metode analisis kuantitatif suatu zat atau komponen yang telah diketahui
dengan cara menimbang berat residu
c) Turbidimetri : menghitung kekeruhan dengan spetrofotometer
2. Perhitungan massa sel secara tidak langsung:
• Analisis komponen sel (protein, DNA, lipopolisakarida, klorofil)
• Analisis produk katabolisme (metabolit primer atau metabolit sekunder)
• Analisis konsumsi nutrient (oksigen, karbon, nitrogen,mineral, asam amino)
Penghitungan massa sel secara langsung:
Turbidimetri

• Jumlah sel bakteri dihintung dengan cara

mengetahui kekeruhan
• Semakin keruh, semakin banyak jumlah sel
• Metode ukur kekeruhan (turbidimetri)
dengan spektrofotometer
• Prinsip :
üJika cahaya mengenai sel, sebagian cahaya
diserap dan sebagian cahaya diteruskan.
üJumlah cahaya yg diserap berbanding lurus
dg jumlah sel bakteri atau jml cahaya yg
diteruskan berbanding terbalik dg jumlah sel
bakteri. Semakin banyak sel, semakin
sedikit cahaya yg diteruskkan.
THANK YOU