Metode Percobaan
Metode Percobaan
Dua langkah ekstraksi yang berurutan dan gabungan menggunakan file ATPS.
Semua ATPS dihomogenisasi secara vertikal selama 15 menit pada 15 rpm dan
selanjutnya disentrifugasi selama 5 menit pada 1000 rpm, untuk menyelesaikan
kesetimbangan pemisahan fasa dengan suhu konstan (22 ± 1 ◦ C). Terakhir, fase atas
dan bawah setiap sistem dipisahkan. Xilanolitik dan aktivitas enzimatik selulolitik,
adanya pigmen, mereduksi gula dan kandungan protein terlarut ditentukan pada setiap
fase sebagai dijelaskan di atas. Koefisien partisi didefinisikan sebagai
Kp = [P] T / [P] B,
Purification parameters
Persentase aktivitas enzimatik (R) dan faktor pemurnian (PF) dievaluasi pada setiap
tahap. Indikator ini dihitung menurut persamaan berikut:
Total activity ∈the purification stage
Recovery (%) = x 100
Total activity∈initial extract
Mass spectrometry
Fase atas dan bawah dari ekstraksi gabungan oleh ATPS dan elusi yang
diperoleh dari kromatografi pertukaran ion dianalisis dengan menggunakan
spektrometri massa. Untuk mendapatkan elektroforesis tunggal pita yang berisi
semua protein dan larutan enzimatik, dioperasikan Gel elektroforesis SDS-PAGE
hingga 1 cm setelah memasukkan resolusi gel, dilakukan pengamatan dengan
Coomassie brilian Blue. Kromatografi fase terbalik dilakukan dengan kolom EASY-
Spray Accucore (C18, 50 m × 150 mm, 2 μ partikel m, 100 Å pori ukuran, Thermo
Scientific) beroperasi pada 300 nL / menit pada 35 ℃.