molekul

Artikel

Transesteri fi kasi Sintesis Kloramfenikol Ester dengan Lipase

dari
Bacillus amyloliquefaciens

Fengying Dong 1, Lingmeng Li 1, Lin Lin 2, Dannong Dia 2, Jingwen Chen 3, Wei Wei 1, *
dan Dongzhi Wei 1, *

1 Negara Kunci Laboratorium Bioreactor Teknik, NewWorld Institut Bioteknologi, Cina Timur Universitas

Sains dan Teknologi, 130 Meilong Road, Shanghai 200237, Cina; fengyingdong16@163.com (FD); 18993965077@163.com (LL)

2 Laboratorium Penelitian Fungsional nanomaterial, Pusat Penelitian Teknik Nasional

Nanoteknologi, Shanghai 200.241, Cina; linlin21023@163.com (LL); hdnbill@sh163.net (DH)

3 Departemen Patologi, Mikrobiologi dan Imunologi, Sekolah kedokteran, University of South Carolina,

6311 Garners Ferry Rd, Columbia, SC 29209, USA.; linye@mailbox.sc.edu

* Korespondensi: weiwei@ecust.edu.cn (WW); dzhwei@ecust.edu.cn (DW); Tel./Fax: + 86-21-6425-1803

(WW); Tel./Fax: + 86-21-6425-2078 (DW) Diterima: 24 Juli 2017; Diterima: 4 September 2017; Diterbitkan: 19

September 2017

Abstrak: Karya ini menyajikan rute sintetis untuk menghasilkan ester kloramfenikol dengan mengambil keuntungan enantio- tinggi dan
regio-selektivitas lipase. Serangkaian ester kloramfenikol yang disintesis menggunakan kloramfenikol, donor asil dari berbagai panjang
rantai karbon dan lipase Bibir BA ( lipase kloning dari Bacillus amyloliquefaciens). Di antara donor asil dengan panjang rantai karbon yang
berbeda, vinil propionat ditemukan untuk menjadi yang terbaik. The pengaruh-pengaruh pelarut organik yang berbeda, suhu reaksi, waktu
reaksi, enzim bongkar kadar air pada sintesis ester kloramfenikol dipelajari. Sintesis kloramfenikol propionat (0,25 M) dengan

4.0 g L - 1 Lip BA pemuatan memberikan konversi ~ 98% dan kemurnian ~ 99% dalam waktu 8 jam pada 50 ◦ C di 1,4-dioksan sebagai
pelarut. Rasio mol optimum dari vinil propionat terhadap kloramfenikol meningkat menjadi 5: 1. Ini adalah laporan pertama dari B.
amyloliquefaciens lipase yang digunakan dalam sintesis kloramfenikol ester dan studi rinci sintesis kloramfenikol propionat menggunakan
reaksi ini. Aktivitas enzim yang tinggi dan selektivitas membuat lipase Bibir BA katalis yang menarik untuk sintesis kimia hijau molekul
dengan struktur yang kompleks.

Kata kunci: katalisis enzimatik; regioselectivity; kloramfenikol ester; kimia hijau;

Bacillus amyloliquefaciens

1. Perkenalan

Dalam beberapa tahun terakhir, enzim telah diterapkan untuk mensintesis turunan kloramfenikol, yang telah menimbulkan minat
yang luas karena aktivitas yang tinggi, kondisi katalitik moderat, dan ramah lingkungan. Hal ini karena fakta bahwa pendekatan enzimatik
menghindari kebutuhan untuk prosedur perlindungan dan deproteksi untuk membedakan antara kelompok hidroksil yang tersedia berbeda
dalam kloramfenikol, sebagai substituen kloramfenikol pada kelompok hidroksil primer cepat dihidrolisis in vivo dengan obat biologis aktif [ 1 ].
Selain itu, langkah-langkah pemisahan untuk menghilangkan kotoran yang memiliki sifat fisik dan kimia dekat dengan hasil senyawa target
di konversi yang lebih rendah fi nal, biaya yang lebih tinggi, waktu-dan konsumsi energi dan kelebihan pembuangan limbah. Dalam hal ini,
katalisis enzimatik dengan enantio- dan regioselectivity tinggi menarik untuk sintesis hijau senyawa kimia.

molekul 2017, 22, 1523; doi: 10,3390 / molecules22091523 www.mdpi.com/journal/molecules

molekul 2017, 22, 1523 2 dari 11

Kloramfenikol adalah antibiotik alami dengan spektrum yang luas dari aktivitas antimikroba terhadap bakteri Gram-positif dan
Gram-negatif [ 2 - 4 ]. Baru-baru ini, kloramfenikol telah diberikan dalam meningkatkan dosis karena meningkatnya kejadian resistensi
antibiotik [ 5 ]. Sayangnya, hal itu juga dapat menghasilkan penghambatan fungsi hati dan ginjal, sindrom bayi abu-abu, anemia aplastik dan
sebagainya. Sementara itu pahitnya kloramfenikol tidak dapat diterima oleh kebanyakan orang [ 6 ], Turunan kloramfenikol begitu berbeda
telah diproduksi meminimalkan kepahitan ini [ 1 ] Seperti kloramfenikol suksinat atau kloramfenikol palmitat ester yang dihasilkan dengan
cara regioor stereoselektif kimia [ 7 ] Dan metode enzimatik [ 8 ]. Di antara semua enzim katalitik, lipase mengkatalisis reaksi fi kasi transesteri
pada gugus hidroksil dengan regioselectivity tinggi dan kondisi reaksi ringan [ 9 - 11 ]. Daugs et al. melaporkan lipase-dimediasi Esteri fi kasi
kloramfenikol palmitat dalam toluena dan DMF [ 12 ]. Bizerra et al. melaporkan bahwa Candida antarctica jenis lipase B (CAL-B) dikatalisasi
sintesis kloramfenikol palmitat (0,15 M) mencapai 99% konversi di 24 jam pada 50 ◦ C [ 8 ]. Menggunakan Nanogel lipase non-tercetak dan
lipase dari Thermomyces lanuginosus [ 13 ], Wang et al. diproduksi kloramfenikol palmitat dengan konversi 99% dalam waktu 20 jam pada 20 ◦
C. Ottolina et al. melaporkan lipase G adalah yang terbaik agen biocatalytic, memberikan konversi yang sangat baik untuk ester yang
sesuai pada 45 ◦ C setelah 24-72 jam [ 14 ]. Selanjutnya, Ottolina et al. melaporkan lipase-dimediasi Esteri fi kasi kloramfenikol untuk sintesis
beberapa turunan dalam aseton anhidrat untuk mengeksplorasi efek tri berbeda fl uoroethyl ester. Dalam penelitian ini sebagian besar
penelitian telah difokuskan pada sintesis ester kloramfenikol tunggal, dilakukan pada suhu rendah yang tidak diinginkan, dengan
konsentrasi substrat rendah dan waktu reaksi yang lama.

Sebelumnya, kelompok kami melaporkan lipase Bibir BA ( nomor aksesi: KF040967) kloning dari
Bacillus amyloliquefaciens dan sifat-sifat enzimatik rinci dari enzim rekombinan [ 15 ]. Selain itu, dalam laporan kami sebelumnya, enzim ini
digunakan dalam Biocatalysis dan cinnamyl ester yang disintesis menggunakan lipase (Bibir BA) melalui rute fi kasi transesteri dalam sistem
non-berair dengan vinil propionat sebagai yang terbaik asil donor [ 16 ]. Dalam studi ini, kami telah mengembangkan sintesis kloramfenikol
ester dengan menggunakan rantai karbon donor panjang asil yang berbeda [ 17 ]. Di antara donor asil dengan panjang rantai karbon yang
berbeda, vinil propionat dipilih untuk bertindak sebagai yang terbaik asil donor. Melalui percobaan faktor tunggal, sintesis enzimatik
kloramfenikol propionat ester dipelajari secara rinci untuk pertama kalinya, dengan faktor-faktor yang berbeda yang mempengaruhi konversi
efisiensi. Selain itu, fi kasi hasil reaksi transesteri pada konsentrasi substrat yang tinggi (0,25 M) adalah yang tertinggi, dan waktu reaksi (8
jam) adalah yang terpendek pada konsentrasi ini (0,25 M) di sebelumnya dilaporkan sastra. Menggunakan 0,25 M konsentrasi substrat,
hasil yang sangat baik kloramfenikol propionat disediakan (98%) dan kemurnian (99%) dalam waktu 8 jam pada 50 ◦ C di 1,4-dioksan
sebagai pelarut. Karena sifat enzimatik seperti konsentrasi tinggi substrat, tingkat konversi yang tinggi, hasil produk yang tinggi dan
kemurnian, lipase ini memiliki nilai potensial dalam aplikasi industri, terutama untuk sintesis kloramfenikol propionat.

2. Hasil dan Pembahasan

2.1. Sintesis dari Kloramfenikol propionate Ester

Reaksi fi kasi transesteri kloramfenikol dengan vinil propionat dilakukan dengan menggunakan Bibir BA di 1,4-dioksan. Produk
tersebut puri fi ed dengan kromatografi silika gel dan ditandai dengan 13 C-NMR dan 1 analisis H-NMR. Seperti Yoshimoto [ 18 ] Didirikan,
asilasi dari gugus hidroksil gula menghasilkan pergeseran lapangan bawah dari puncak sesuai dengan HAI- terasilasi karbon dan
pergeseran lapangan sampai puncak sesuai dengan karbon tetangga. Karakterisasi ester kloramfenikol oleh 13 C-NMR mengungkapkan
bahwa sinyal untuk R 1 ester kloramfenikol yang bergeser turun lapangan dan posisi C-2 digeser ke atas lapangan (Gambar 1 A),
dibandingkan dengan kloramfenikol (Gambar 1 C), menunjukkan kloramfenikol diganti pada R 1 posisi. Hampir tidak ada pergeseran puncak
sesuai dengan alkohol sekunder dalam produk diamati, dibandingkan dengan kloramfenikol (Gambar 1 C). Selain itu, 1 H-NMR menunjukkan
dua hidrogen pada kelompok metilen kelompok kloramfenikol ester sebagai puncak karakteristik i dan j pada 4,36 dan 4,24 ppm (Gambar 1 B),
molekul 2017, 22, 1523 3 dari 11

masing-masing, dengan yang signifikan shift lapangan, dibandingkan dengan 3,80, 3,71 ppm untuk kloramfenikol (Gambar 1 D). 1 H-NMR
molekul 2017, 22, 1523 3 dari 11
juga menunjukkan bahwa hidrogen pada kelompok methine dan alkohol sekunder dari kelompok kloramfenikol ester memberikan puncak
karakteristik
kelompok f dan e di 5,267
kloramfenikol dan
ester 5,368 ppm (Gambar
memberikan 1 B), dan ini mengalami
puncak karakteristik pergeseran
f dan e di 5,267 kecil,ppm
dan 5,368 dibandingkan
(Gambar dengan kloramfenikol
1B), dan pada
ini mengalami
5,137 dan 5,373
pergeseran kecil,ppm (Gambar 1 dengan
dibandingkan D). 1 H-NMR juga con fipada
kloramfenikol rmed5,137
asilasidan
regioselective
5,373 ppmdi(Gambar
gugus hidroksil primer (R
1D). 1 HNMR 1). menegaskan asilasi
juga
regioselective di gugus hidroksil primer (R 1). Hasil ini semua mengkonfirmasi bahwa Bibir BA menunjukkan regioselectivity efektif dalam
Hasil ini semua con
transesterifikasi fi rm bahwadengan
kloramfenikol Bibir BA vinil
menunjukkan regioselectivity efektif dalam fi kasi transesteri kloramfenikol dengan vinil propionat.
propionat.

Gambar 1. spektrum
Gambar 1. spektrumNMR
NMRkloramfenikol
kloramfenikol propionat
propionat ester
ester dan dan kloramfenikol.
kloramfenikol. ( SEBUAH)
( SEBUAH) 13 spektrum C-NMR kloramfenikol propionat
13 spektrum C-NMR kloramfenikol propionat ester di

ester
(CD 3)di2 BERSAMA;
(CD 3) 2 BERSAMA; ( B) 1 spektrum
( B) 1 spektrum H-NMR kloramfenikol
H-NMR kloramfenikol propionat
propionat ester ester
di (CD 3) di (CD 3) 2 BERSAMA; ( C) 13 spektrum C-NMR
2 BERSAMA; ( C) 13 spektrum C-NMR kloramfenikol di (CD 3) 2 BERSAMA;

kloramfenikol
( D) 1 spektrumdiH-NMR
(CD 3) 2kloramfenikol
BERSAMA; di( D)
(CD1 spektrum H-NMR kloramfenikol di (CD 3) 2 BERSAMA.
3) 2 BERSAMA.

2.2. Transesterifikasi Kloramfenikol dengan berbeda Asil Donor

2.2. Transesteri fi kasi Kloramfenikol dengan berbeda Asil Donor

percobaan faktor tunggal dilakukan dalam penelitian kami. Pertama, transesterifikasi kloramfenikol dengan donor asil
percobaan faktor tunggal dilakukan dalam penelitian kami. Pertama, transesteri fi kasi kloramfenikol dengan donor asil yang berbeda
yang berbeda diselidiki. Ini adalah vinil asetat, vinil propionat, vinil butirat, vinil neononanoate, vinil decanoate dan vinyl laurat,
diselidiki. Ini adalah vinil asetat, vinil propionat, vinil butirat, vinil neononanoate, vinil decanoate dan vinyl laurat, masing-masing. studi
masing-masing. studi eksperimental baru pada sintesis ester kloramfenikol oleh katalisis enzimatik yang tercantum dalam
eksperimental baru pada sintesis kloramfenikol ester oleh katalisis enzimatik tercantum dalam Tabel 1 . Penyusunan ester kloramfenikol
Tabel 1. Penyusunan ester kloramfenikol melalui transesterifikasi ditunjukkan pada Gambar 2A. Data ini mengungkapkan
melalui transesteri fi kasi ditunjukkan pada Gambar 2 A. Data ini mengungkapkan bahwa lipase dapat diterapkan dalam sintesis ester
bahwa lipase dapat diterapkan dalam sintesis ester kloramfenikol dengan donor asil sebagai substrat transesterifikasi. Di
kloramfenikol dengan donor asil sebagai transesteri fi substrat kasi. Di antara berbagai donor asil vinil propionat menyebabkan kuantitatif
antara berbagai donor asil vinil propionat menyebabkan kuantitatif dan tinggi konversi (81%) dengan ester kloramfenikol yang
dan tinggi konversi (81%) dengan ester kloramfenikol yang sesuai di bawah kondisi reaksi yang sama (Tabel 2 , Kondisi reaksi: enzim
sesuai di bawah kondisi reaksi yang sama (Tabel 2, kondisi reaksi: enzim memuat 4.0 g L -1; kloramfenikol 0,25 M dalam
memuat 4.0 g L - 1; kloramfenikol 0,25 M dalam etanol; asil donor / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ◦ C; 4 jam dan 200 rpm). Tren ini showes
etanol; asil donor / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ° C; 4 jam dan 200 rpm). Tren ini showes bahwa Bibir BA memberikan konversi
bahwa Bibir BA memberikan konversi yang lebih tinggi dengan rantai pendek daripada menengah dan donor rantai panjang. Kloramfenikol
yang lebih tinggi dengan rantai pendek daripada menengah dan donor rantai panjang. Kloramfenikol memberikan konversi
memberikan konversi yang lebih rendah ( ≤ 55%) untuk ester menggunakan donor asil lain karena reaktivitas miskin donor asil ini. Perlu
yang lebih rendah (≤55%) ke ester menggunakan donor asil lain karena reaktivitas miskin donor asil ini. Perlu dicatat bahwa
dicatat bahwa senyawa yang diacylated b (R 3 = COOCH 2 CH 3, R 1 = H, Gambar 2 ) Dan c (R 1 = R 3 = COOCH 2 CH 3, Angka 2 ) Tidak terdeteksi
senyawa yang diacylated b (R 3 = COOCH 2 CH 3, R 1 = H, Gambar 2) dan c (R 1 = R 3 = COOCH 2 CH 3, Gambar 2) tidak terdeteksi setelah
setelah 8 jam. Hasil eksperimen konsisten dengan laporan dari Bizerra dan Daugs [ 8 . 12 ]. Efek ini dapat dijelaskan karena diacylated
8 jam. Hasil eksperimen konsisten dengan laporan dari Bizerra dan Daugs [8,12]. Efek ini dapat dijelaskan karena senyawa
senyawa b dan c tidak bisa benar fi t di situs aktif Bibir BA. Prestasi di atas
diacylated b dan c tidak bisa benar muat di situs aktif Bibir BA. Prestasi di atas menunjukkan Bibir BA lipase adalah katalis ideal
untuk asilasi regioselective kloramfenikol, menunjukkan selektivitas yang sangat baik untuk asilasi dari alkohol primer [8,17].
Rasio molar kloramfenikol untuk vinil propionat memiliki dampak yang signifikan terhadap konversi produk. Konversi miskin
(69%) diperoleh pada perbandingan molar kloramfenikol untuk vinyl propionat dari 1: 1. Kapan
molekul 2017, 22, 1523 4 dari 11

menyarankan Bibir BA lipase adalah katalis ideal untuk asilasi regioselective kloramfenikol, menunjukkan selektivitas yang sangat baik untuk
asilasi primer alkohol [ 8 . 17 ]. Rasio molar kloramfenikol untuk vinil propionat memiliki efek yang signifikan pada konversi produk. Konversi
miskin (69%) diperoleh pada perbandingan molar kloramfenikol untuk vinyl propionat dari 1: 1. Bila rasio molar vinil propionat terhadap
kloramfenikol meningkat menjadi 5: 1, konversi kloramfenikol adalah 81% (Tabel 2 ). Tidak ada signifikan peningkatan lebih lanjut dalam
menghasilkan produk dengan peningkatan lebih lanjut dalam jumlah vinil propionat digunakan, sehingga rasio molar vinil propionat
terhadap kloramfenikol digunakan adalah 5: 1.

Tabel 1. Studi eksperimen terbaru di kloramfenikol ester sintesis oleh enzimatik katalisis.

Ester kloramfenikol Sumber enzim Konsentrasi t (h) Pelarut Referensi

CAL-B C. antarctica lipase 0,15 M 40 1,4-dioksan, [8]

kloramfenikol asetat
KUCING S. aureus 0,0015 M 12 dapar fosfat [ 19 ]

Kloramfenikol propionat CAL-B C. antarctica lipase 0,15 M 6 1,4-dioksan, [8]

KUCING S. aureus 0,0015 M 12 dapar fosfat [ 19 ]

kloramfenikol butirat KUCING S. aureus 0,0015 M 12 dapar fosfat [ 19 ]

kloramfenikol suksinat NR - - - - -

kloramfenikol pivalat NR - - - - -

Kloramfenikol decanoate NR - - - - -

Chlor5amphenicol laurat CAL-B C. antarctica lipase 0,15 M 24 1,4-dioksan [8]

Kloramfenikol sinamat NR - - - - -
molekul 2017, 22, 1523 4 dari 11
kloramfenikol palmitat CAL-B C. antarctica lipase 0,15 M 24 1,4-dioksan [8]

Nanogel T. lanuginosus 0,15 M 20 asetonitril [ 13 ]

perbandingan molar vinil propionat terhadap kloramfenikol meningkat menjadi 5: 1, konversi kloramfenikol adalah 81% (Tabel 2). Tidak
lipase
ada peningkatan lebih lanjut yang signifikan -
dalam 70dengan
menghasilkan produk mM 120
peningkatan lebihtoluena [ 17propionat
lanjut dalam jumlah vinil ]

digunakan, sehingga
Kloramfenikol propionat BA molar vinil propionat B.amyloliquefaciens
Liprasio terhadap kloramfenikol 0,25
digunakan
M adalah8 5: 1. 1,4-dioksan -

NR: tidak dilaporkan.

Gambar
Gambar2. 2.
Lipase-dimediasi Esteri
Lipase-dimediasi fi kasi kloramfenikol
esterifikasi kloramfenikol menggunakan
menggunakan vinyl
vinyl propionat
propionat dalam
dalam pelarut
pelarut organik.
organik. (( SEBUAH)
SEBUAH) Persiapan
Persiapan
kloramfenikol propionat
kloramfenikol melalui
propionat transesteri
melalui fi kasi; ((B)
transesterifikasi; B)analisis
analisisTLC
TLCproduk;
produk;((C)
C)Kromatogram
Kromatogramkloramfenikol
kloramfenikoldan
dankloramfenikol-3-propionat.
kloramfenikol-3-propionat.
Kondisi
Kondisiujiuji
digambarkan dalam
digambarkan bahan
dalam dan
bahan metode.
dan metode.

Tabel 1. Studi eksperimen terbaru di kloramfenikol ester sintesis oleh enzimatik katalisis.

ester kloramfenikol Sumber enzim Konsentrasi t (h) Solvent Referensi

CAL-B C. antarctica lipase 0,15 M 40 1,4-dioksan, [8]
kloramfenikol asetat
KUCING S. aureus 0,0015 M 12 dapar fosfat [19]
Kloramfenikol propionat CAL-B C. antarctica lipase 0,15 M 6 1,4-dioksan, [8]
 molekul 2017, 22, 1523 5 dari 11

molekul 2017, 22, 1523 5 dari 11

molekul 2017, 22, 1523 5 dari 11
molekul 2017, 22, 1523
Meja 2. Efeknya asil donor pada hasil kloramfenikol. kondisi reaksi: enzim memuat 5 dari 11
molekul 2017, 22, 1523 5 dari 11
molekul 2017, 22, 1523 5 dari 11
molekul 2017, 22, 1523 5 dari 11
4.022,
molekul 2017, g 1523
L - 1; kloramfenikol 0,25 M dalam etanol; asil donor / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ◦ C; 4 jam dan 200 rpm. 5 dari 11
molekul Meja 2. Asil
Asil donor
donor berpengaruh
berpengaruh pada
pada hasil
hasil kloramfenikol.
kloramfenikol. kondisi
kondisi reaksi:
reaksi: enzim
enzim memuat
2017, 22, 1523 5 dari 11
Meja22,
molekul 2017,
Meja 2. 2. 1523
2. Asil
Asil donor
donor berpengaruh
berpengaruh padapada hasil
hasil kloramfenikol.
kloramfenikol. kondisi
kondisi reaksi: memuat
reaksi: enzim
enzim memuat
memuat
5 dari 11
Meja
Meja
4.0
4.0 g
gLL2.
L -1; Asil donor berpengaruh
kloramfenikol
kloramfenikol 0,25 M
0,25 M pada
dalam
M dalam
dalam hasilasil
etanol;
etanol; kloramfenikol.
asil donor kondisi reaksi:
donor /// kloramfenikol
kloramfenikol
kloramfenikol = 5:
= 5: 1;
5: 1; Tenzim
T
1; T = 50 °°°memuat
50
= 50 C;
C; 44 jam
4 jam dan
jam dan 200
dan 200 rpm.
200 rpm.
rpm.
Meja
4.0 g 2.-1;
-1; Asil donor berpengaruh
kloramfenikol 0,25 pada hasilasil
etanol; kloramfenikol.
donor kondisi reaksi:
= enzim
= memuat
C;
Meja
4.0 2. Asil
g L2.-1; Asil donor
kloramfenikol berpengaruh pada
0,25 M dalam hasil
etanol; kloramfenikol.
asil kondisi
donor / kloramfenikol reaksi: enzim
= 5: 1; Tenzim memuat
= 50 °memuat
C; 4 jam dan 200 rpm.
Meja
4.0 g L2.-1;Asil
Meja donor
kloramfenikol
donor berpengaruh
berpengaruh pada
0,25 M dalam
pada hasil
etanol;
hasil kloramfenikol.
asil kondisi
donor / kloramfenikol
kloramfenikol. kondisi reaksi:
= 5: 1; T
reaksi: = 50 °memuat
enzim C; 4 jam dan 200 rpm.
4.0 g L -1; kloramfenikol
Senyawa 0,25 M dalam etanol; asil donorkimia
Struktur / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ° C; 4 jam dan
Perbandingan 200 rpm.
Waktu (h) Konversi Sebuah
4.0 g LSenyawa
-1; kloramfenikol 0,25 M dalam etanol; asil donor / kloramfenikol = 5: 1; T = 50
Struktur ° C; 4 jam dan 200 rpm.(h)
Waktu Konversi
donor /kimia
Perbandingan
4.0
Senyawa
4.0 gg LLSenyawa
-1; kloramfenikol 0,25 M dalam etanol; asil
-1; kloramfenikol 0,25 M dalam etanol; asil
Struktur
donor / kloramfenikol
kloramfenikol =
kimia = 5:
5: 1;
1; TT=
= 50
50 °° C;
C; 44 jam
jam dan
Perbandingandan 200
200 rpm.(h)
Waktu
rpm.
Waktu (h) Konversi Sebuah
Konversi
Sebuah
Sebuah
Senyawa Struktur
Struktur kimia
kimia
Perbandingan
Perbandingan Waktu (h) Konversi Sebuah
Senyawa Struktur kimia Perbandingan Waktu (h) Konversi Sebuah
Senyawa Struktur kimia Perbandingan Waktu (h) Konversi Sebuah
Senyawa
vinil asetat
vinil asetat Struktur kimia Perbandingan Waktu
4 4 (h)
(h) Konversi
55%55%
Senyawa 5: 1 Sebuah
vinil
Senyawaasetat Struktur kimia
kimia 5: 1Perbandingan
5: 1 Waktu
Waktu 4 (h) Konversi
55%Sebuah
Konversi Sebuah
vinil
vinil asetat
asetat Struktur Perbandingan
5: 1
5: 1
4
4 55%
55%
vinil asetat 5: 1 4 55%
vinil asetat 5: 1 4 55%
vinil asetat HAI
5: 1 4 55%
vinil asetat
asetat
HAI
vinil
HAI 5: 1
44 55%
55%
vinyl
vinyl propionat
propionat
vinyl propionat
HAI
HAI
5: 1
5:
5:
1
1
4
4 81%
81%
81%
vinyl propionat
vinyl propionat HAI
5: 1 5: 1
5: 1
4 4
4 81%
81%
vinyl propionat
HAI
HAI
HAI HAI 5: 1 4 81%
vinyl propionat HAI HAI 5: 1 4 81%
vinyl propionat HAI 5: 1 4 81%
vinyl
vinyl propionat
propionat
HAI 5: 1
44 81%
81%
vinyl
vinyl butirat
butirat
HAI
HAI
5: 1
5:
5:
1
1
4
4 30%
30%
vinyl butirat
vinyl butirat
vinyl butirat HAI
HAI
5: 1 5: 1
5: 1 4 4
4 30%30%
30%
vinyl butirat 5: 1 4 30%
vinyl butirat 5: 1 4 30%
vinyl butirat 5: 1 4 30%
vinyl butirat
vinyl butirat 5: 1
5: 1 44 30%
30%
vinyl neononanoate
vinyl neononanoate 5: 1
5: 1
4
4 23%
23%
vinyl neononanoate
vinyl neononanoate 5: 1 4 23%
23%
vinyl neononanoate 5: 1 5: 1 4 4 23%
vinyl neononanoate 5: 1 4 23%
vinyl neononanoate 5: 1 4 23%
vinyl neononanoate 5: 1 4 23%
vinyl
vinyl neononanoate
neononanoate
vinyl decanoate
decanoate 5: 1
5: 1 44 23%
23%
20%
vinyl
vinyl decanoate 5: 1
5: 1
4
4 20%
20%
vinyl decanoate 5: 1 4 20%
vinyl decanoate
vinyl decanoate 5: 1 5: 1 4 4 20%20%
vinyl decanoate 5: 1 4 20%
vinyl decanoate 5: 1 4 20%
vinyl
vinyl
vinyl
vinyl decanoate
laurat
decanoate
laurat 5: 1
5: 1
4
4 20%
8%
20%
8%
vinyl laurat
vinyl laurat 5: 1
5: 1
4
4 8%
8%
vinyl laurat 5: 1 4 8%
vinyl lauratvinyl laurat 5: 1 5: 1 4 4 8%8%
vinyl laurat 5: 1 4 8%
vinyl
vinyl
vinyl laurat
propionat
laurat 5: 11
5: 44 8%
69%
8%
vinyl propionat
vinyl propionat 5: 1
5: 1
4
4 69%
69%
vinyl propionat 5: 1 4 69%
vinyl propionat 5: 1 4 69%
vinyl propionat 5: 1 4 69%
vinyl propionat
vinyl propionat 5: 1 5: 1 4 4 69% 69%
vinyl propionat
vinyl propionat
propionat 5: 1
44 69%
69%
vinyl
vinyl propionat
5: 11
10:
10: 1
4
4 82%
82%
vinyl propionat
vinyl propionat 10: 1
10: 1
4
4 82%
82%
vinyl propionat 10: 1 4 82%
vinyl propionat 10: 1 4 82%
vinyl propionat 10: 1 4 82%
vinyl propionat
vinyl propionat
vinyl propionat 10: 1
10: 1 10: 4
44 82%82%
82%
vinyl
vinyl propionat
propionat 15: 1
15: 1
1 4
4 84%
84%
vinyl propionat
vinyl propionat 15: 1
15: 1
4
4 84%
84%
vinyl propionat 15: 1 4 84%
vinyl propionat
Ditentukan dengan HPLC dan mengacu pada konsentrasi awal kloramfenikol. 15: 1
Konversi 4
ditentukan oleh HPLC 84% 4
setelah
Sebuahvinyl propionat
Ditentukan dengan HPLC
HPLC dan
dan mengacu
mengacu padapada konsentrasi
konsentrasi awal awal kloramfenikol.
kloramfenikol.15: 15: 1
Konversi 4
ditentukan oleh HPLC 84% 4
HPLC setelah
setelah
Sebuahvinyl
vinyl propionat
Ditentukan
propionat
vinyl dengan
propionat Konversi
1
44
ditentukan oleh 84%
84% 4
84%
Sebuah Ditentukan dengan HPLC dan mengacu pada konsentrasi awal kloramfenikol. Konversi ditentukan oleh HPLC setelah 4
15: 1
Sebuah 15: 1 4
Sebuah Ditentukan dengan HPLC dan mengacu pada konsentrasi awal kloramfenikol. Konversi ditentukan oleh HPLC setelah 4
jam
jam reaksi.
Ditentukan dengan HPLC dan mengacu pada konsentrasi awal kloramfenikol. Konversi ditentukan oleh HPLC setelah 4
Sebuahreaksi.
jam Ditentukan dengan HPLC dan mengacu pada konsentrasi awal kloramfenikol. Konversi ditentukan oleh HPLC setelah 4
Sebuahreaksi.
jam Ditentukan dengan
Sebuahreaksi.
Ditentukan dengan HPLC
HPLC dan
dan mengacu
mengacu padapada konsentrasi
konsentrasi awal awal kloramfenikol.
kloramfenikol. Konversi
Konversi ditentukan oleh oleh HPLC
HPLC setelah
setelah 4 4
jamSebuah
Sebuah reaksi.
Ditentukan dengan HPLC dan mengacu pada konsentrasi awal kloramfenikol. Konversi ditentukan oleh HPLCditentukan
setelah 4 jam reaksi.
jam reaksi.
jam reaksi.
jam reaksi.
2.3. Pengaruh
Pengaruh
jam reaksi. Pelarut Berbeda
Berbeda
2.3.
2.3. Pengaruh Pelarut
Pengaruh Pelarut Pelarut Berbeda
Berbeda
2.3.
2.3. Pengaruh Pelarut Berbeda
2.3. Pengaruh
2.3. PengaruhPengaruh
Pengaruh Pelarut
pelarut
Pelarut Berbeda
pada
Berbeda reaksi enzimatik sangat penting untuk media non-air [20]. pelarut mempengaruhi kekuatan katalitik
2.3. Pengaruh
Pengaruh pelarut
Pelarut
pelarut pada reaksi
Berbeda
pada reaksi enzimatik
enzimatik sangat sangat penting
penting untuk untuk media
media non-airnon-air [20].[20]. pelarut
pelarut mempengaruhi
mempengaruhi kekuatan kekuatan katalitik katalitik
2.3. 2.3. Pengaruh
Pengaruh
Pengaruh Pelarut
Pelarut
pelarutBerbeda
Berbeda
pada reaksi enzimatik sangat penting untuk media non-air [20]. pelarut mempengaruhi kekuatan katalitik
enzim Pengaruh
dengan pelarut pada
mengubah reaksi enzimatik
konformasi tiga dimensisangat penting
protein, dan untuk
karena mediaitu non-air
secara [20]. pelarut
signifikan mengubah mempengaruhi
konversi kekuatan
[21]. Hal katalitik
ini
enzim Pengaruh
enzim dengan mengubah
dengan
Pengaruh pelarut
pelarut pada
mengubah reaksi
reaksi enzimatik
konformasi
konformasi
pada tiga dimensi
tiga
enzimatik dimensisangat
sangat penting
protein,
protein,
penting danuntuk
dan karena
karena
untuk mediaitu
media non-air
itu secara
secara
non-air [20].
[20]. pelarut
signifikan
signifikan mengubah
mengubah
pelarut mempengaruhi
konversi kekuatan
konversi
mempengaruhi [21]. Hal
[21].
kekuatan Hal ini katalitik
ini
katalitik
enzim dengan
Pengaruh mengubah
pelarut konformasi
pada reaksi tiga
enzimatik dimensisangat protein,
penting dan karena
untuk itu
media secara
non-air signifikan
[20]. mengubah
pelarut konversi
mempengaruhi [21].
kekuatan Hal ini katalitik
enzim Pengaruh
melaporkan dengan
Pengaruh mengubah
bahwa pelarut
enzim
pelarut konformasi
pada reaksi
memiliki
pada reaksi tiga dimensi
enzimatik
stabilitas
enzimatik yangsangat
sangat protein,
lebih penting
baik
penting dan
dan karena
untuk
untuk mediaitu secara
kompatibilitas
non-berair non-air signifikan
dalam
menengah [20].pelarut
[ 20 mengubah
pelarut]. non-polar
pelarut konversi
mempengaruhi dibandingkan
mempengaruhi [21].
kekuatan Hal
dalam
kekuatan ini
katalitik
pelarut
katalitik
enzim
melaporkan
melaporkan
enzim dengan
dengan mengubah
bahwa
bahwa enzim
enzim
mengubah konformasi
memiliki
memiliki
konformasi tiga
stabilitas
stabilitas
tiga dimensi
yang
yang
dimensi protein,
lebih
lebih
protein,baik
baik dan
dan
dan
dan karena itu
kompatibilitas
kompatibilitas
karena itu secara
secara signifikan
dalam
dalam pelarut
pelarut
signifikan mengubah
non-polar
non-polar
mengubah konversi
dibandingkan
dibandingkan
konversi [21].
[21]. Hal
dalam
dalam
Hal ini
ini pelarut
pelarut
melaporkan
enzim dengan bahwa enzim konformasi
mengubah memiliki stabilitas
tiga yang lebih
dimensi protein,baikdan dankarena
kompatibilitas
itu secara dalam pelarut
signifikan non-polarkonversi
mengubah dibandingkan [21]. dalam
Hal ini pelarut
melaporkan
enzim
polar,
enzim
melaporkan dengan
karena
dengan
karenabahwa
bahwa
mengubah
fakta enzim konformasi
pelarut
mengubah
enzim
memiliki
polar stabilitas
dengan
konformasi tiga dimensi
tinggi
dimensi E
yang lebih
protein,baik
nilai-nilai
Tprotein,
E TT lebih dan dandan kompatibilitas
karena
menunjukkan
karena itu itu secara dalam
kompatibilitas
secara signifikan pelarut
signifikan burukmengubah
mengubah non-polar
dengan
konversi dibandingkan
konversi
molekul[ 21 [21].
enzim
]. Hal inidalam
Hal
yang ini
melaporkan pelarut
mengarah
polar,
polar,
melaporkan
polar,
melaporkan
karena
karena fakta
bahwa
fakta
bahwa enzim memiliki
fakta pelarut
pelarut
pelarut
enzim
polar dengan
polar
memiliki
polar
memiliki
stabilitas
dengan
stabilitas
dengan
tinggi
tinggi
tinggi
stabilitas
yang
E
yang
E
yang lebih
T lebih
baik
nilai-nilai
nilai-nilai dan
dan kompatibilitas
menunjukkan
menunjukkan
baikmenunjukkan
nilai-nilai
baik dan kompatibilitas
kompatibilitas
dalam
dalam pelarut
kompatibilitas
kompatibilitas
kompatibilitas
dalam
buruknon-polar
buruk
pelarut
buruk
pelarut
dengan molekul
dengan
non-polar
dengan
non-polar
dibandingkan
molekul
dibandingkan
molekul
dibandingkan
enzim dalam
enzim
enzim
yang mengarah
yang
dalam
yang
dalam
pelarut
mengarah
pelarut
mengarah
pelarut
polar,
melaporkan
ke bahwa
polar,
ke
karena
aktivitas
karena
aktivitas enzim fakta
bahwa
berkurang
fakta
berkurang
pelarut
enzim
memiliki [22].
pelarut
[22].
polar
memiliki
stabilitas
Dalam
polar
Dalam
dengan
yangstabilitas
studi
dengan
studilebih tinggi
ini, yang
baik E
dan
polaritas
tinggi
ini, E
polaritas
nilai-nilai
T lebih
mediabaik
kompatibilitas
T nilai-nilai
media
menunjukkan
dan
reaksi kompatibilitas
dalam
dipilih
menunjukkan
reaksi dipilih
kompatibilitas
pelarut
sesuai dalam
non-polar
dengan
kompatibilitas
sesuai dengan
buruknon-polar
pelarut
dibandingkan
parameter
buruk
parameter
dengan
dengan
molekul
dalam dibandingkan
polaritas
molekul
polaritas pelarutenzim
empiris
enzim
empiris E
polar,
E yang
dalam
T (karena
yang 30) mengarah
T ( 30)mengarah
pelarut
fakta
ke
polar,
ke
polar,
aktivitas
karena
aktivitas
karena
berkurang
fakta pelarut
berkurang
fakta
[22]. polar
pelarut
[22]. Dalam
Dalam
polar
studi ini,
dengan
studi
dengan
ini,
tinggi E TT nilai-nilai
polaritas
polaritas
tinggi E media reaksi
nilai-nilai
media reaksi dipilih sesuai
menunjukkan
dipilih
menunjukkan
sesuai dengan parameter
kompatibilitas
dengan
kompatibilitas
parameter
buruk dengan
buruk denganpolaritas
molekul
polaritas
molekul
empiris
enzim
empiris
enzim
E TTyang
E ( 30) mengarah
( 30) mengarah
yang
ke
polar,aktivitas
pelarut
dijelaskan karena berkurang
polar
oleh fakta
dengan
Reichardt [22].
pelarut
tinggi Dalam
polar
untuk studi
dengan
pelarut ini,
tinggidan
murni E T diadaptasi
polaritas
dan media
nilai-nilai
diadaptasi reaksi
menunjukkandipilih
oleh Castillo
Castillo sesuai dengan
kompatibilitas
et al.
al. [23-25].
[23-25]. parameter
buruk dengan molekul polaritas empiris E
enzim yang T ( 30) mengarah
ke
ke aktivitas
dijelaskan
dijelaskan
ke aktivitasoleh
dijelaskan
aktivitas
berkurang
oleh
oleh Reichardt
Reichardt
berkurang
Reichardt
berkurang
[22].
[22].
[22].
Dalam
untuk
untuk
Dalam
untuk
Dalam
studi
pelarut
pelarut ini,
studimurni
pelarut
studi ini, polaritas
murni
murni
ini, polaritas
dan
polaritas
media
media reaksi
dan diadaptasi
diadaptasi
media
oleh
oleh
reaksi
oleh
reaksi
dipilih
dipilih sesuai
Castillo
Castillo
dipilih
et
et
sesuai
et
sesuai
dengan
dengan parameter
al. [23-25].
al. [23-25].
dengan parameter polaritas
parameter polaritas empiris
polaritas empiris E
empiris E TTT ((( 30)
E 30)
30)
ke Eaktivitas
dijelaskan oleh
T nilai-nilai Reichardt
menunjukkan
berkurang [22]. untuk
Dalam pelarut
kompatibilitas
studi murni
buruk
ini, dan
dengan
polaritas diadaptasi
molekul
media oleh
enzim
reaksi Castillo
yangsesuai
dipilih et al. [23-25].
mengarah denganke aktivitas
parameter berkurang
polaritas ]. DalamE
[ 22empiris studi
T ( 30) ini, polaritas
dijelaskan
dijelaskan oleh oleh Reichardt
Reichardt untuk untuk pelarut
pelarut murnimurni dan dan diadaptasi
diadaptasi oleh oleh Castillo
Castillo et et al.
al. [23-25].
[23-25].
dijelaskan
E Tmedia
dijelaskan oleh
reaksi
oleh
( 30) memperhitungkan
Reichardt
dipilih sesuai
Reichardt untuk
dengan
untuk pelarut
pelarut
interaksi murni
parameter
murni
pelarut-zat dan
polaritas
dan diadaptasi
empiris
diadaptasi
terlarut padaoleh oleh Castillo
Castillo
tingkat molekul et
et al.
al. [23-25].
[23-25].
[26]. Pengaruh media yang berbeda (toluena,
E
E T ( 30) memperhitungkan interaksi pelarut-zat terlarut pada tingkat molekul [26]. Pengaruh media yang berbeda (toluena,
T ( 30) memperhitungkan interaksi pelarut-zat terlarut pada tingkat molekul [26]. Pengaruh media yang berbeda (toluena,
E
E T ( 30) memperhitungkan interaksi pelarut-zat terlarut pada tingkat molekul [26]. Pengaruh media yang berbeda (toluena,
TE ( 30) memperhitungkan interaksi pelarut-zat terlarut danpada tingkat molekul [26].
et al.Pengaruh E T33,9
media
33,9yang berbeda ke(toluena,
T ( 30)
diklorometana, dijelaskan oleh Reichardt
tertrahydrofuran, untuk
1,4-dioksan,pelarut asetonitril,
murni diadaptasi
aseton danoleh Castillomulai
etanol) [ 23 -E25
dari ].30) ( 30) (non-polar)
memperhitungkan ke E interaksi
30) akun
51,9
E
diklorometana,
E TTT ((( 30)
30) memperhitungkan
diklorometana, tertrahydrofuran,
tertrahydrofuran,
memperhitungkan interaksi
interaksi1,4-dioksan,
pelarut-zat
1,4-dioksan, asetonitril,
terlarut
terlarut pada
asetonitril,
pelarut-zatasetonitril, pada aseton
aseton danmolekul
tingkat
dan
tingkat etanol) mulai
etanol)
molekul mulai
[26]. dari E
[26]. Pengaruh
dari
Pengaruh E TTT ((( 30)
30)
media
33,9
media (non-polar)
yang berbeda
(non-polar)
yang berbeda ke E TTT ((( 30)
(toluena,
E
(toluena, 30) 51,9
51,9
diklorometana,
E 30)
diklorometana, tertrahydrofuran,
memperhitungkan
tertrahydrofuran, interaksi1,4-dioksan,
pelarut-zat
1,4-dioksan, terlarut
asetonitril, padaaseton
aseton dan
tingkat
dan etanol)
molekul
etanol) mulai
[26].
mulai dari
Pengaruh
dari E
E T ( 30)
T ( 30)
33,9
media
33,9 (non-polar)
yang berbeda
(non-polar) ke
ke E
(toluena,
E T ( 30) 51,9
T ( 30) 51,9
E Tpelarut-zat
( 30) dipelajari
(kutub) terlarut
memperhitungkan pada tingkat
dengan vinil molekul
interaksi
propionat [ 26
pelarut-zat ]. Pengaruh
sebagai terlarut
asil media
pada
donor yang
tingkat
(Tabel berbeda
3).molekul (toluena,
Kondisi [26].
reaksi diklorometana,
Pengaruh
adalah mediatertrahydrofuran,
sebagai yang berbeda
berikut: enzim1,4-dioksan,
(toluena,
memuat
(kutub)
diklorometana,
(kutub)
diklorometana, dipelajari
dipelajari dengan vinil
dengan vinil propionat
tertrahydrofuran,
tertrahydrofuran, propionat
1,4-dioksan,
1,4-dioksan, sebagai
sebagai asil donor
asetonitril,
asil donor
asetonitril, (Tabel
aseton
(Tabel
aseton dan
dan3).etanol)
3). Kondisimulai
Kondisi
etanol) reaksi
reaksi
mulai E
adalah
dari
adalah
dari sebagai
E TTT ((( 30)
30) 33,9 berikut: enzim
33,9 (non-polar)
sebagai berikut:
(non-polar) enzimke E
ke memuat
T ( 30) 51,9
memuat
E T ( 30) 51,9
(kutub)
diklorometana,
(kutub)
asetonitril,dipelajari
dipelajari
aseton dengan
dengan vinil
tertrahydrofuran,
vinil
dan etanol) propionatdari Esebagai
1,4-dioksan,
propionat
mulai sebagai asil
asetonitril,
asil
T ( 30)asetonitril,
33,9 donor
donor
(non-polar) (Tabel
aseton
(Tabel
kedanE3).
dan3). Kondisi
etanol)
Kondisi
30) reaksi
mulai
reaksi
51,9mulai
(kutub) adalah
dari
adalahE
dipelajari sebagai
30) 33,9
sebagai
dengan berikut:
(non-polar)
berikut: enzim
vinil propionatenzimke memuat
E T ( 30)
memuat
sebagai 51,9
asil donor
diklorometana,
4.0
4.0
(kutub) gL
g L -1;
-1; tertrahydrofuran,
kloramfenikol
kloramfenikol
dipelajari dengan vinil 1,4-dioksan,
propionat sebagai asil donor aseton
(Tabel
T (etanol)
3). Kondisi reaksi dari E
adalah T ( 30) 33,9
sebagai (non-polar)
berikut: enzimke E T ( 30)
memuat 51,9
4.0
(kutub)
4.0 g
g L
L -1; kloramfenikol
dipelajari
kloramfenikol dengan vinil propionat sebagai asil donor (Tabel 3). Kondisi reaksi adalah sebagai berikut: enzim memuat
(kutub)
4.0 gM dipelajari
-1; dengan vinil propionat sebagai asil donor (Tabel 3). Kondisi reaksi adalah sebagai berikut: enzim memuat
ML
(Tabel
(kutub) 3kloramfenikol
). Kondisi
dipelajari reaksi
dengan adalah
vinil sebagai
propionat berikut:
sebagai enzim memuat
asil donor 4.0 g 3).
(Tabel L - 1;Kondisi
kloramfenikol
reaksi 0.25M dalam pelarut organik yang berbeda;
memuat vinil
0,25
4.0 dalam
-1; pelarut organik yang berbeda; vinil propionat // kloramfenikol = 5: 1; T = 50 adalah
50 °° C; 4 jamsebagai
dan 200 berikut:
rpm. enzim
Dari hasil,
4.0 g
0,25
0,25
0,25 M
gM L -1; kloramfenikol
dalam
dalam
Ldalam pelarut
pelarut
-1; kloramfenikol
pelarut
organik
organik
organik
yang
yang berbeda;
berbeda; vinil propionat
vinil propionat kloramfenikol
// kloramfenikol
kloramfenikol = 5:
= 5: 1;
1; T T= = 50
50 °° C;
C; 4
C; 4 jam jam dan 200
dan 200 rpm. Dari
rpm. Dari hasil,
hasil,
4.0
0,25
4.0 g
g
1,4-dioksanM L
propionat
L -1; kloramfenikol
dalam / kloramfenikol
pelarut
-1; kloramfenikol
adalah organik
yang = 5:yang
terbaik
berbeda;
1;pelarut
yang T= berbeda; C; 4vinil
50 ◦organik jam
vinil
propionat
dan 200 rpm.
propionat
dan memberikan / Dari
kloramfenikol
konversi
=
=
5: 1;
hasil, 1,4-dioksan
5: 1;
tertinggi
T=
T = adalah
50
(89%) ° C;
dari
4 jam
pelarut
4 jam
dan
organik
dan
kloramfenikol
200terbaik
200
rpm.
rpm.
ester
Dari
dan hasil,
Dari memberikan
hasil,
(kloramfenikol
1,4-dioksan
0,25 adalah yang terbaik pelarut organik dan memberikan konversi tertinggi
tertinggi (89%) dari kloramfenikol ester (kloramfenikol
(kloramfenikol
0,25 M
1,4-dioksan
1,4-dioksan
0,25 M dalam
M dalam
dalam
pelarut
adalah
pelarut
adalah
pelarut
organik
yang
yang terbaik
organik
terbaik
organik
yang
yang
yang
berbeda;
pelarut
pelarut organik
berbeda;
organik
berbeda;
vinil propionat
dan
vinildan
vinil
memberikan
propionat
memberikan
propionat
// kloramfenikol
konversi
kloramfenikol
konversi
/ kloramfenikol
kloramfenikol
=
= 5:
5: 1;
1; T
tertinggi
= 5: 1;
=
= 50
T(89%)
T = 50 °°°dari
(89%)
50
C;
C; 4
dari
C;
jam
jam dan
dan 200
kloramfenikol
4kloramfenikol
4 jam dan 200 rpm.
200 rpm. Dari
ester
ester
rpm. Dari
Dari
hasil,
hasil,
(kloramfenikol
hasil,
konversi
1,4-dioksan
0,25
propionat) M dalam tertinggi
adalah
(Tabel pelarut
3,(89%)
yang dari3).
terbaik
organik
Gambar kloramfenikol
yangpelarut organik
berbeda;
Hasil pada ester
vinil
Tabel (kloramfenikol
dan memberikan
propionat
3 menunjukkan / propionat)
konversi
bahwa (Tabel
=
Bibir 5: 3memiliki
tertinggi
1; ,TGambar
(89%)
= 50 ° 3 ).4
dari
C;
stabilitas Hasil
jam pada200
kloramfenikol
dan
operasionalTabel ester
rpm. 3 menunjukkan
yang (kloramfenikol
Dari hasil,
lebih baik Lip
dan yang BA memiliki
propionat)
1,4-dioksan
propionat) (Tabel
adalah
(Tabel 3, yang
3, Gambar
Gambar terbaik3). Hasil
3). Hasil
pelarut pada
organik
pada Tabeldan
Tabel 33 menunjukkan
menunjukkan
memberikan bahwa Bibir
konversi
bahwa Bibir BA memiliki
BA
tertinggi (89%)
BA memiliki
stabilitas
dari
stabilitas operasional
kloramfenikol
operasional yang
ester
yang lebih baik
(kloramfenikol
lebih baik dandan
1,4-dioksan
propionat)
1,4-dioksan adalah
(Tabel
adalah 3, yang
Gambar
yang terbaik
terbaik3). pelarut
Hasil
pelarut padaorganik
organikTabel dan
3
dan memberikan
menunjukkan
memberikan konversi
bahwa
konversi tertinggi
Bibir (89%)
BA memiliki
tertinggi (89%) dari
stabilitas
dari kloramfenikol
operasional
kloramfenikol ester
yang
ester (kloramfenikol
lebih
(kloramfenikol baik dan
stabilitas
propionat) operasional
(Tabel 3,yang yang
Gambar lebih
3). baik
Hasil dan
pada toleransi
Tabel (67% aktivitasSelanjutnya,
enzim sisa setelah 12 h) di 1,4-dioksan. Selanjutnya, kedua kloramfenikol
1,4-dioksan
toleransi
toleransi
propionat) (67%
(67% adalah
(Tabel aktivitas
aktivitas
3, terbaik
enzim
enzim pelarut
sisa
sisa setelah
setelah organik12
12 h) di3
h)dan
di menunjukkan
memberikan
1,4-dioksan.
1,4-dioksan. bahwa
konversi
Selanjutnya, Bibir BA memiliki
tertinggi
kedua
kedua (89%) stabilitas
dari
kloramfenikol
kloramfenikol operasional
kloramfenikol
dan
dan vinil esteryang
propionat
vinil propionat
propionat lebih
(kloramfenikol
memiliki
memiliki baik dan
toleransi
propionat)
toleransi
propionat)
(67%
(67%(Tabel
(Tabel 3, Gambar
aktivitas
aktivitas
3,
enzim
Gambar
enzim
Gambar
3). Hasil
sisa
3).
sisa
3).
pada
setelah
Hasil pada12
setelah
Hasil pada
Tabel
12 h)
Tabel
h)
Tabel
di
di
3 menunjukkan
1,4-dioksan.
31,4-dioksan.
3 menunjukkan
menunjukkan
bahwa
bahwa Bibir
Selanjutnya,
Selanjutnya,
bahwa
BA memiliki
kedua
Bibirkedua
Bibir BA memiliki
memiliki
stabilitas
kloramfenikol
stabilitasdan
kloramfenikol
stabilitas
operasional
dan vinil
operasional
vinil
operasional
yang
yang lebih
propionat
yang
memiliki
lebih
memiliki
lebih
baik
baik dan
baik dan
dan
dan
toleransi
propionat)
kelarutan vinil(67%propionat
(Tabel
yang aktivitas
baik memiliki
3, dan enzim
Gambar
dan kelarutan
sisa
3). Hasil
kompatibilitas yang
setelah
pada baik
12 h)
Tabel
di 1,4-dioksan.
1,4-dioksan.dan
di kompatibilitas
1,4-dioksan.
31,4-dioksan.
menunjukkan
Ini adalah di 1,4-dioksan.
Selanjutnya,
bahwa Bibirkedua
adalah Selanjutnya,
menguntungkan BA Ini
kedua adalah
BA memiliki
untuk menguntungkan
kloramfenikol
stabilitas
reaktan dan vinil
operasional
organik dekat untuk
propionatreaktan
yangaktif
situs lebih
aktif organik
memiliki baik dan
katalis dekat
(Lip
kelarutan
toleransi
kelarutan yang
(67%
yang baik
aktivitas
baik dan kompatibilitas
enzim sisa
kompatibilitas setelahdi
di 12 h)
1,4-dioksan. di Ini
Ini adalah menguntungkan
menguntungkan untuk
untuk reaktan
kloramfenikol
reaktan organik
dan
organik dekat
vinil
dekat situs
propionat
situs katalis
memiliki
aktif katalis (Lip
(Lip
BA),
BA),
toleransi
kelarutan
toleransi (67%
yang
(67% aktivitas
baik dan
aktivitas enzim
enzim sisa
kompatibilitas
sisa setelah
setelahdi 12
12 h)
1,4-dioksan.
h) di
di 1,4-dioksan.
Ini adalah
1,4-dioksan. Selanjutnya,
menguntungkan
Selanjutnya, kedua
kedua untukkloramfenikol
reaktan
kloramfenikol dan
organik
dan vinil
dekat
vinil propionat
situs
propionat memiliki
aktif katalis
memiliki (Lip BA),
BA),
situs
kelarutan
toleransi
yang aktif
secara yang
(67% katalis
baik(Lip
dan
aktivitas
efektif enzimyangsisa
mempromosikan
BA), secara
kompatibilitas setelahefektif
di
terjadinya 12 mempromosikan
1,4-dioksan.
h) di
reaksi. Ini adalah
1,4-dioksan.
Oleh terjadinya
karenaSelanjutnya,
itu reaksi.kedua
menguntungkan
1,4-dioksan Oleh karena
untuk itu 1,4-dioksan
reaktan
kloramfenikol
terpilih sebagai organik
dan vinil
pelarut terpilih
dekat propionat
reaksi sebagai
situs aktif pelarut
katalis
memiliki
optimum. Dalam reaksi
(Lip BA),
yang
kelarutan secara yang efektif
baik mempromosikan
dan terjadinya reaksi. Ini Oleh karena itu 1,4-dioksan
1,4-dioksanuntuk terpilih sebagai pelarut reaksi optimum. Dalam
yang
kelarutan
yang secara
secara yang efektif dan kompatibilitas
mempromosikan
baikmempromosikan
efektif kompatibilitas di
di 1,4-dioksan.
terjadinya reaksi.
1,4-dioksan.
terjadinya reaksi. Oleh
Ini
Oleh
adalah
adalahkarena
karena
menguntungkan
itu
menguntungkan terpilih
untuk reaktan
sebagai
reaktan organik
pelarut
organik dekat
dekatreaksisitus aktif
aktif katalis
optimum.
situs katalis Dalam (Lip
(Lip BA),
Mitu 1,4-dioksanuntuk terpilih sebagai pelarut reaksi optimum. Dalam BA),
kelarutan
yang optimum.
kelarutan
studi secara
ini, di yang
Dalam
yang
bawah baik
efektif
baik dan
studi
dan
kondisi kompatibilitas
ini, di bawah
mempromosikan
kompatibilitas
reaksi yang di
kondisi
di
sama, 1,4-dioksan.
terjadinya reaksi
1,4-dioksan.
0,15 yang
reaksi.
M Ini
Ini adalah
sama,
Olehadalah
kloramfenikol 0,15
karena menguntungkan
itukloramfenikol
dapat 1,4-dioksan
menguntungkan sepenuhnya dapat
terpilih
untuk reaktan
sepenuhnya
sebagai
reaktan
dikonversi organik
pelarut
organik
menjadi dekat
dikonversi
dekatreaksi situs
menjadi
situs
kloramfenikol aktif
optimum.
aktif katalis
kloramfenikol
katalis
propionat.Dalam (Lip
(Lip BA),
studi
yang
studi ini,
secara
ini, di bawah
di bawah
efektif kondisi
kondisi reaksi yang
mempromosikan
reaksi yangterjadinya
sama, 0,15
sama, 0,15 M kloramfenikol
reaksi.
M kloramfenikol
Oleh karena dapat
itu
dapat sepenuhnya
1,4-dioksan
sepenuhnya dikonversi
terpilih sebagai
dikonversi menjadi
pelarut
menjadi kloramfenikol
reaksi
kloramfenikoloptimum. propionat.
propionat.Dalam BA),
yang
studi
yang secara
ini,
secaradi efektif
bawah mempromosikan
kondisi
efektifkondisi reaksi
mempromosikan yang terjadinya
sama,
terjadinya 0,15reaksi.
M
reaksi. Oleh
kloramfenikol
Oleh karena itu
dapat
karenadapat 1,4-dioksan
itu dan sepenuhnya
1,4-dioksan terpilih sebagai
dikonversi
terpilih sebagai pelarut
menjadi
pelarut reaksi
kloramfenikol
reaksi optimum.
optimum. propionat.Dalam
Dalam
studi
yang
0,25 propionat.
Mini,
secaradi bawahefektif
kloramfenikol dapatreaksi
mempromosikan yangterjadinya
sepenuhnya sama, 0,15
dilarutkan Mdalam
reaksi. kloramfenikol
dalam Oleh karena
1,4-dioksan itu sepenuhnya
1,4-dioksan
memberikan dikonversi
terpilih sebagai
konversi menjadi
pelarut
yang lebih kloramfenikol
reaksi
tinggioptimum. propionat.
dibandingkan Dalam
0,25
studi Mini,kloramfenikol
di dapat sepenuhnya dilarutkan 1,4-dioksan dan memberikan konversi yang lebih tinggi dibandingkan
0,25
studiM
0,25
studi
M
ini, di bawah
di bawah kondisi
kloramfenikol
ini,kloramfenikol
bawah
dapat
kondisi
dapat
kondisi
reaksi yang
yang sama,
sepenuhnya
reaksi
sepenuhnya
reaksi yang
0,15
0,15 M
dilarutkan
sama,
dilarutkan
sama, 0,15 M
M
kloramfenikol
dalam
dalam 1,4-dioksan
kloramfenikol
1,4-dioksan
kloramfenikol
dapat
dapat
dapat
dan
dan
sepenuhnya
memberikan
sepenuhnya
memberikan
sepenuhnya
dikonversi
konversi
dikonversi
konversi
dikonversi
menjadi
yang
menjadi
yang
menjadi
lebih
lebih
kloramfenikol
tinggi
kloramfenikol
tinggi
kloramfenikol
propionat.
dibandingkan
propionat.
dibandingkan
propionat.
0,25 M
studi
dengan
dengan ini,kloramfenikol
di bawah
0,5
0,5 M (Gambar
M (Gambar
(Gambar dapat
kondisi 3), sepenuhnya
3),reaksi
sehingga
sehingga yang0,25
0,25 dilarutkan
sama, M 0,15 Mdalam
adalah
M adalah
adalah 1,4-dioksan
kloramfenikol
konsentrasi
konsentrasi yang
yangdapat dansepenuhnya
ideal
ideal memberikan
untuk optimasi
untuk optimasi
optimasi konversi
dikonversi
kondisimenjadi
kondisi yang
reaksi
reaksilebih
lebih
lebih tinggi
kloramfenikol
lanjut.
lanjut.dibandingkan
propionat.
0,25
0,25 M
dengan M kloramfenikol
0,5 M
kloramfenikol dapat
3),
dapat sepenuhnya
sehingga
sepenuhnya 0,25 dilarutkan
M
dilarutkan dalam 1,4-dioksan
konsentrasi
dalam 1,4-dioksan yang dan
dan memberikan
ideal untuk
memberikan konversi
kondisi
konversi yang
reaksi
yang lebih
lebih
lebih tinggi
lanjut.
tinggi dibandingkan
dibandingkan
dengan
0,25 M 0,5 M
kloramfenikol(Gambar 3),
dapat sehingga
sepenuhnya 0,25 M adalahdalam
dilarutkan konsentrasi
1,4-dioksan yang ideal
dan untuk
memberikanoptimasi kondisi
konversi reaksi
yang lebih
lebih lanjut.
tinggi dibandingkan
dengan
0,25 M 0,5 M (Gambar
kloramfenikol 3), sehingga
dapat sepenuhnya 0,25dilarutkan
M adalahdalam konsentrasi
1,4-dioksan yang idealdan untuk optimasi
memberikan kondisiyang
konversi reaksi lebih
lebih lanjut.
tinggi dibandingkan
dengan
dengan 0,5 0,5 M M (Gambar
(Gambar 3), 3), sehingga
sehingga 0,25 0,25 M M adalah
adalah konsentrasi
konsentrasi yang yang ideal
ideal untuk
untuk optimasi
optimasi kondisikondisi reaksi reaksi lebih
lebih lanjut.
lanjut.
dengan
0,25 M0,5
dengan 0,5 M
M (Gambar
kloramfenikol
(Gambar 3),
dapat
3), sehingga
sepenuhnya
sehingga 0,25
0,25 M
dilarutkan
M adalah konsentrasi
dalamkonsentrasi
adalah 1,4-dioksan dan yang
yang ideal
memberikan
ideal untuk
untuk optimasi
konversi
optimasi kondisi
yangkondisi
lebih tinggi reaksi lebih
dibandingkan
reaksi lebih lanjut.
lanjut.dengan 0,5 M (Gambar 3

), Sehingga 0,25 mwas konsentrasi yang ideal untuk optimasi kondisi reaksi lebih lanjut.
molekul 2017, 22, 1523 6 dari 11

molekul 2017, 22, 1523 6 dari 11

Gambar 3. Pengaruh kondisi reaksi atas konversi kloramfenikol. kondisi reaksi: Konsentrasi Kloramfenikol: 0,15, 0,25, 0,5 M; asil donor: 0:
Gambar 3. Pengaruh kondisi reaksi atas konversi kloramfenikol. kondisi reaksi: Konsentrasi Kloramfenikol: 0,15, 0,25, 0,5 M;
kontrol, 1: vinil asetat, 2: vinil propionat, 3: aseton, 4: vinyl neononanoate, 5: vinyl decanoate, 6: vinyl laurat; Pelarut reaksi: 1: etanol, 2:
asil donor: 0: kontrol, 1: vinil asetat, 2: vinil propionat, 3: aseton, 4: vinyl neononanoate, 5: vinyl decanoate, 6: vinyl laurat;
1,4-dioksan, 3: aseton, 4: asetonitril, 5: tetrahidrofuran, 6: diklorometana, 7: toluena; Suhu: 0: kontrol, T = 10, 20, 30, 40, 50, 60 ◦ C; enzim
Pelarut reaksi: 1: ethanol 2:
pemuatan = 0, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0, 8,0 g L - 1;
1,4-dioksan, 3: aseton, 4: asetonitril, 5: tetrahidrofuran, 6: diklorometana, 7: toluena; Suhu: 0: kontrol, T = 10, 20, 30, 40, 50,
60 ° C; enzim pemuatan = 0, 0,5, 1,0, 2,0, 4,0, 8,0 g L -1; kadar air = 0%,
kadar air = 0%, 0,5%, 1,0%, 2,0%, 4,0%; 8 jam dan 200 rpm.
0,5%, 1,0%, 2,0%, 4,0%; 8 jam dan 200 rpm.

Tabel 3. percobaan tunggal dalam reaksi sintesis kloramfenikol ester.

Tabel 3. percobaan tunggal dalam reaksi sintesis kloramfenikol ester.

Faktor
Faktor Pelarut
Pelarut E TE
( 30) Suhu Suhu WaktuWaktu
T ( 30) Konversi b (%) Kemurnian (%) b (%)
Konversi Kemurnian (%)

Pelarut
Pelarut Kontrol
Kontrol - - 4040
◦C°C 44hh 00 00
toluene
toluene 33,933,9 4040
◦C°C 44hh 50
50 ±± 1,2
1.2 50
50±±0,7
0,7
1,4-Dioxane
1,4-Dioxane 36,036,0 4040
◦C°C 44hh 89 ±± 2,1
89 2.1 95±±2,5
95 2,5
THFTHF 37,437,4 4040
◦C°C 44hh 70 ±± 2,3
70 2.3 85±±2,6
85 2.6
diklorometana 40,7 40 ◦ C 4h 60 ± 1,5 70 ± 1,5
diklorometana 40,7 40 ° C 4h 60 ± 1,5 70 ± 1,5
aseton 42.2 40 ◦ C 4h 72 ± 0,7 75 ± 1.2
aseton 42.2 40 ° C 4h 72 ± 0,7 75 ± 1,2
asetonitril 45,6 40 ◦ C 4h 80 ± 1.4 85 ± 0,9
asetonitril 45,6 40 ° C 4h 80 ± 1,4 85 ± 0,9
etanol 51,9 40 ◦ C 4h 81 ± 0,9 87 ± 0,5
etanol 51,9 40 ° C 4h 81 ± 0,9 87 ± 0,5
Suhu 1,4-Dioxane 36,0 20 ◦ C 4h 85 ± 1,7 93 ± 1.3
Suhu 1,4-Dioxane 36,0 20 ° C 4h 85 ± 1,7 93 ± 1,3
1,4-Dioxane 36,0 30 ◦ C 4h 87 ± 2.3 95 ± 2.1
1,4-Dioxane 36,0 30 ° C 4h 87 ± 2,3 95 ± 2,1
1,4-Dioxane 36,0 40 ◦ C 4h 89 ± 1,5 95 ± 2.8
1,4-Dioxane 36,0 40 ° C 4h 89 ± 1,5 95 ± 2,8
1,4-Dioxane 36,0 50 ◦ C 4h 91 ± 2.2 99 ± 1,9
1,4-Dioxane
1,4-Dioxane 36,036,0 6050
◦C°C 44hh 91
90 ±± 2.2
1,9 99
93±±1,9
2.4
1,4-Dioxane 36,0 60 ° C 4h 90 ± 1,9 93 ± 2,4
Waktu 1,4-Dioxane 36,0 50 ◦ C 8h 98 ± 0,6 99 ± 1,5
Waktu 1,4-Dioxane 36,0 50 ° C 8h 98 ± 0,6 99 ± 1,5
1,4-Dioxane 36,0 50 ◦ C 12 h 96 ± 1.8 90 ± 1.2
1,4-Dioxane
1,4-Dioxane 36,036,0 5050
◦C°C 12hh
16 96
92 ±± 1,8
2.1 90
85±±1,2
0,7
b Semua 1,4-Dioxane
reaksi dilakukan dalam 36,0 4,0 g L - 1 Bibir50
10 mL 1,4-dioksan mengandung BA,° 0.25M
C 16 hdan 1.25M Vinyl92propionat.
kloramfenikol, ± 2,1 Konversi ditentukan
85 ± dengan
0,7
Semua
bHPLC reaksi dilakukan
dan mengacu dalam
pada konsentrasi 10kloramfenikol.
awal mL 1,4-dioksan mengandung
Purity ditentukan 4,0 g L -1 Bibir
dengan kromatografi BA, 0,25 M kloramfenikol, dan 1,25 M Vinyl
abu fl.

propionat. Konversi ditentukan dengan HPLC dan mengacu pada konsentrasi awal kloramfenikol. Purity ditentukan dengan
kromatografi flash.
2.4. Pengaruh Suhu Reaksi

2.4. Pengaruh Suhu Reaksi

stabilitas enzim menurun dengan meningkatnya suhu dari kisaran tertentu. Pengaruh suhu reaksi pada Esteri fi kasi dipelajari pada
20, 30,stabilitas
40, 50 dan 60 ◦ Cmenurun
enzim selama 4 dengan
jam. Kondisi reaksi adalah
meningkatnya sebagai
suhu dari berikut:
kisaranenzim memuat
tertentu. 4.0 g L suhu
Pengaruh - 1; kloramfenikol
reaksi pada0,25 M di 1,4-dioksan;
esterifikasi
vinil propionat
dipelajari pada/ kloramfenikol = 5:dan
20, 30, 40, 50 1; waktu reaksi
60 ° C 4 jam4 dan
selama jam.200 rpm. Hasil
Kondisi penelitian
reaksi adalah menunjukkan bahwa
sebagai berikut: konversi
enzim (91%)4.0
memuat dangkemurnian
L -1; kloramfenikol
(99%)Mmencapai
0,25 nilai maksimum
di 1,4-dioksan; mereka pada
vinil propionat 50 ◦ C (Tabel
/ kloramfenikol 3 ,1;
= 5: Gambar
waktu 3reaksi
). Dengan meningkatnya
4 jam lanjut
dan 200 rpm. suhu,
Hasil konversi menunjukkan
penelitian dan kemurnian
menurunkonversi
bahwa secara bertahap.
(91%) danHasil penelitian (99%)
kemurnian menunjukkan
mencapai nilai maksimum mereka pada 50 ° C (Tabel 3, Gambar 3). Dengan
meningkatnya lanjut suhu, konversi dan kemurnian menurun secara bertahap. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
peningkatan suhu memfasilitasi reaksi substitusi nukleofilik saat suhu
molekul 2017, 22, 1523 7 dari 11

molekul 2017, 22, 1523 7 dari 11

bahwa meningkatnya suhu memfasilitasi reaksi substitusi nukleofilik ketika suhu dalam kisaran tertentu, sehingga meningkatkan laju reaksi.
adalah dalam kisaran tertentu, sehingga meningkatkan laju reaksi. Namun, suhu yang lebih tinggi secara bertahap tidak aktif enzim dan
Namun, suhu yang lebih tinggi secara bertahap tidak aktif enzim dan terdegradasi produk karena stabilitas produk yang buruk. Di sisi lain,
terdegradasi produk karena stabilitas produk yang buruk. Di sisi lain, itu juga mungkin bahwa suhu tinggi dipromosikan reaktivitas dari
itu juga mungkin bahwa suhu tinggi dipromosikan reaktivitas dari kelompok alkohol sekunder dan dengan demikian membawa dampak
kelompok alkohol sekunder dan dengan demikian membawa dampak negatif pada lipase efisien [27].
negatif pada lipase yang efisien [ 27 ].

2.5. Pengaruh Waktu Reaksi

2.5. Pengaruh Waktu Reaksi

Studi waktu reaksi yang ditunjukkan kinerja enzim sebagai reaksi berlangsung. Selain itu, waktu reaksi membantu untuk
Studi waktu reaksi yang ditunjukkan kinerja enzim sebagai reaksi berlangsung. Selain itu, waktu reaksi membantu untuk menentukan
menentukan waktu terpendek yang diperlukan untuk mendapatkan konversi yang tinggi. Pengaruh waktu reaksi pada esterifikasi
waktu terpendek yang diperlukan untuk mendapatkan konversi yang tinggi. Pengaruh waktu reaksi pada Esteri fi kasi dipelajari pada 4, 6,
dipelajari pada 4, 6, 12 dan 16 jam. Kondisi reaksi adalah sebagai berikut: enzim memuat 4.0 g L -1; kloramfenikol 0,25 M di 1,4-dioksan;
12 dan 16 jam. Kondisi reaksi adalah sebagai berikut: enzim memuat 4.0 g L - 1; kloramfenikol 0,25 M di 1,4-dioksan; vinil propionat /
vinil propionat / kloramfenikol = 5: 1; suhu reaksi 50 ° C. Seperti ditunjukkan pada Tabel 3, ketika waktu itu meningkat menjadi 8 jam,
kloramfenikol = 5: 1; suhu reaksi 50 ◦ C. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 3 , Ketika waktu itu meningkat menjadi 8 jam, kloramfenikol
kloramfenikol hampir sepenuhnya dikonversi ke kloramfenikol propionat dengan konversi 98% dan kemurnian lebih dari 99% setelah
hampir sepenuhnya dikonversi ke kloramfenikol propionat dengan konversi 98% dan kemurnian lebih dari 99% setelah reaksi 8 jam pada
reaksi 8 jam pada 50 ° C (Tabel 3, Gambar 3) . Meningkatkan waktu reaksi hingga 16 jam menyebabkan penurunan di kedua konversi
50 ◦ C (Tabel 3 , Gambar 3 ). Meningkatkan waktu reaksi hingga 16 jam menyebabkan penurunan di kedua konversi (92%) dan kemurnian
(92%) dan kemurnian (85%). Hal ini mungkin disebabkan karena stabilitas miskin propionat kloramfenikol dan reaktivitas tinggi dari
(85%). Hal ini mungkin disebabkan karena stabilitas miskin propionat kloramfenikol dan reaktivitas tinggi dari kelompok alkohol sekunder
kelompok alkohol sekunder pada waktu yang lebih lama.
pada waktu yang lebih lama.

2.6. Pengaruh Enzim Memuat

2.6. Pengaruh Enzim Memuat
Enzim loading penting untuk setiap proses biokonversi. Dengan demikian, efek pembebanan enzim dipelajari untuk konsentrasi
Enzim loading penting untuk setiap proses biokonversi. Dengan demikian, efek pembebanan enzim dipelajari untuk konsentrasi
enzim yang berbeda seperti 0,5, 1,0, 2,0, 4,0 dan 8,0 g L -1 dari volume reaksi. Kondisi reaksi adalah sebagai berikut: kloramfenikol 0,25
enzim yang berbeda seperti 0,5, 1,0, 2,0, 4,0 dan 8,0 g L - 1 dari volume reaksi. Kondisi reaksi adalah sebagai berikut: kloramfenikol 0,25 M
M di 1,4-dioksan; vinil propionat / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ° C; 8 jam dan 200 rpm. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 4, konversi
di 1,4-dioksan; vinil propionat / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ◦ C; 8 jam dan 200 rpm. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 4 , Konversi
meningkat dengan Bibir BA memuat hingga 4.0 g L -1. Enzim memuat lebih 4,0 g L -1 tidak hanya menyebabkan tidak ada perbaikan dalam
meningkat dengan Bibir BA memuat hingga 4.0 g L - 1. Enzim memuat lebih 4,0 g L - 1 tidak hanya menyebabkan tidak ada perbaikan dalam
tingkat konversi, tetapi juga menyebabkan konversi yang lebih rendah dan kemurnian (Gambar 4). Hal ini mungkin disebabkan oleh
tingkat konversi, tetapi juga menyebabkan konversi yang lebih rendah dan kemurnian (Gambar 4 ). Hal ini mungkin disebabkan oleh
pembentukan agregat enzim yang menyebabkan penurunan luas permukaan terkena katalis untuk reaktan dan sesuai transfer massa
pembentukan agregat enzim yang menyebabkan penurunan luas permukaan terkena katalis untuk reaktan dan sesuai transfer massa
menurun. partikel enzim hadir di sisi dalam agregat yang tidak tersedia untuk bereaksi dengan substrat yang mengurangi daerah
menurun. partikel
antarmuka enzim hadir
keseluruhan di sisi
[20,28]. dalam
Data agregat yang bahwa
ini menunjukkan tidak tersedia
4,0 g Luntuk bereaksi dengan substrat yang mengurangi daerah
-1 enzim pemuatan adalah optimal untuk konversi dan kemurnian.

antarmuka keseluruhan [ 20 . 28 ]. Data ini menunjukkan bahwa 4,0 g L - 1 enzim pemuatan adalah optimal untuk konversi dan kemurnian.

Gambar 4. efek loading enzim pada konversi kloramfenikol. kondisi reaksi: kloramfenikol 0,25 M di 1,4-dioksan; vinil propionat /
Gambar 4. efek loading enzim pada konversi kloramfenikol. kondisi reaksi: kloramfenikol 0,25 M di 1,4-dioksan; vinil propionat / kloramfenikol
kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ° C; 8 jam dan 200 rpm.
= 5: 1; T = 50 ◦ C; 8 jam dan 200 rpm.
2.7. Pengaruh Konten Air

Kadar air sangat penting dalam setiap biosintesis organik untuk fleksibilitas enzim dan aktivitas katalitik yang optimal
[29]. Kadar air berpengaruh pada Bibir BA kegiatan awal diperiksa menggunakan konsentrasi air berkisar antara 0% sampai
molekul 2017, 22, 1523 8 dari 11
4,0% ( w / w) di 1,4-dioksan. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 5, kurang air dalam medium, semakin reaksi transesterifikasi
disukai. Aktivitas sintesis kloramfenikol propionat dengan Bibir BA berkurang secara signifikan pada kadar air hingga 2,0% ( w /
w), Dalam memengaruhi Konten Air
2.7.
yang konsisten dengan beberapa penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa aktivitas sintetis yang paling lipase optimal
Kadar air sangat penting dalam setiap biosintesis organik untuk enzim fleksibilitas dan untuk aktivitas katalitik yang optimal [ 29 ].
pada kadar air yang relatif rendah dalam sistem organik (biasanya di bawah 1% ( w / w)) [ 22]. Dalam reaksi ini, pengurangan
Kadar air berpengaruh pada Bibir BA kegiatan awal diperiksa menggunakan konsentrasi air berkisar antara 0% sampai 4,0% ( w / w) di
aktivitas sintesis akan terjadi karena jumlah yang lebih besar dari air dalam media organik. Air akan mengurangi kelarutan dan
1,4-dioksan. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 5 , Air kurang di media, semakin reaksi fi kasi transesteri disukai. Aktivitas sintesis
diffusibility dari substrat dan produk ester. Oleh karena itu, konversi akan menurun dengan meningkatnya kadar air [15,17,30].
kloramfenikol propionat dengan Bibir BA itu secara signifikan berkurang pada isi air hingga 2,0% ( w / w),

Akhirnya, menurut hasil percobaan faktor tunggal, kondisi reaksi optimum adalah sebagai berikut: donor asil: vinil
yang konsisten dengan beberapa penelitian sebelumnya yang menunjukkan bahwa aktivitas sintetis yang paling lipase optimal pada kadar
propionat; pelarut organik: 1,4-dioksan; suhu reaksi: 50 ° C; waktu reaksi: 8 jam; pemuatan enzim: 4.0 g L -1; konsentrasi
air yang relatif rendah dalam sistem organik (biasanya di bawah 1% ( w / w)) [ 22 ]. Dalam reaksi ini, pengurangan aktivitas sintesis akan
substrat: kloramfenikol 0,25 M, vinil propionat / kloramfenikol = 5: 1. Dalam kondisi ini, kloramfenikol hampir sepenuhnya
terjadi karena jumlah yang lebih besar dari air dalam media organik. Air akan mengurangi kelarutan dan diffusibility dari substrat dan produk
dikonversi ke kloramfenikol propionat dengan konversi 98% dan kemurnian lebih dari 99%.
ester. Oleh karena itu, konversi akan menurun dengan meningkatnya kadar air [ 15 . 17 . 30 ].

Gambar 5. Air efek konten pada konversi kloramfenikol. kondisi reaksi: enzim memuat 4.0 g L - 1; kloramfenikol 0,25 M di 1,4-dioksan; vinil
Gambar 5. Air efek konten pada konversi kloramfenikol. kondisi reaksi: enzim memuat
propionat / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ◦ C; 8 jam dan 200 rpm.
4.0 g L -1; kloramfenikol 0,25 M di 1,4-dioksan; vinil propionat / kloramfenikol = 5: 1; T = 50 ° C; 8 jam dan 200 rpm.

Akhirnya,
3. Bahan dan menurut
Metode hasil percobaan faktor tunggal, kondisi reaksi optimum adalah sebagai berikut: donor asil: vinil propionat; pelarut
organik: 1,4-dioksan; suhu reaksi: 50 ◦ C; waktu reaksi: 8 jam; pemuatan enzim: 4.0 g L - 1; konsentrasi substrat: kloramfenikol 0,25 M, vinil
propionat
3.1. bahan/ kloramfenikol = 5: 1. Dalam kondisi ini, kloramfenikol hampir sepenuhnya dikonversi ke kloramfenikol propionat dengan konversi
98% dan kemurnian lebih dari 99%.
Lipase Bibir BA diperoleh dari B. amyloliquefaciens Nsic8 seperti sebelumnya dilaporkan dalam tim penelitian kami, dan aktivitas
spesifik adalah 1750 ± 153 U mg -1 [ 15]. Satu unit (U) aktivitas enzim lipase didefinisikan sebagai jumlah enzim yang diperlukan
untuk
3. menghasilkan
Bahan dan Metode 1 umol produk per menit dalam kondisi assay pasti [31]. Kloramfenikol dan berbagai ester vinil yang dibeli
dari Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA). 1,4-Dioxane, etil asetat dan bahan kimia lainnya yang analitis reagen grade dan
3.1. bahan tanpa pemurnian lebih lanjut.
digunakan

Lipase Bibir BA diperoleh dari B. amyloliquefaciens Nsic8 seperti sebelumnya dilaporkan dalam tim penelitian kami, dan spesifik
aktivitas c 1750 ± 153 UMG - 1 [ 15 ]. Satu unit (U) aktivitas enzim lipase didefinisikan sebagai jumlah enzim yang diperlukan untuk
menghasilkan 1 μ mol produk per menit di bawah de fi kondisi assay ned [ 31 ]. Kloramfenikol dan berbagai ester vinil yang dibeli dari
Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA). 1,4-Dioxane, etil asetat dan bahan kimia lainnya yang analitis reagen grade dan digunakan tanpa puri
lanjut fi kasi.
molekul 2017, 22, 1523 9 dari 11

3.2. Enzimatik Sintesis cinnamyl Asetat dan Faktor Tunggal Percobaan

Katalis whole-sel yang berisi lipase Bibir BA disentrifugasi, dicuci sekali dengan 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), dan kemudian liofilisasi
oleh pembekuan vakum. Reaksi fi kasi transesteri dilakukan dalam 50 mL Eppendorf tabung dan 1,4-dioksan digunakan sebagai pelarut.
Untuk menentukan parameter reaksi optimum dalam reaksi sintesis kloramfenikol ester, percobaan faktor tunggal dilakukan dalam
penelitian ini. Pertama, donor asil yang berbeda (vinil asetat, vinil propionat, vinil butirat, vinil decanoate, vinil laurat dan vinyl palmitat) yang
digunakan. Kedua, efek dari pelarut organik yang berbeda (toluena, diklorometana, tertrahydrofuran, 1,4-dioksan, asetonitril, aseton dan
etanol) dengan berbagai E T ( 30) nilai-nilai, dipelajari. Ketiga, pengaruh suhu reaksi belajar di 20,

30, 40, 50 dan 60 ◦ C. Reaktor terguncang pada 200 rpm dan direndam dalam bak air termostatik untuk menjaga systemwithin yang ± 2 ◦ C
dari suhu yang diinginkan. Keempat, pengaruh waktu reaksi (4, 8, 12 dan 16 h) terdeteksi. Kelima, loading enzim dipelajari dalam kisaran
0,5-8,0 g L - 1.
Pengaruh konsentrasi air (mulai dari 0% menjadi 4,0% ( w / w)) adalah analisis. Semua percobaan dilakukan dalam atmosfir nitrogen.
Aliquots teratur dianalisis dengan HPLC dan reaksi dihentikan setelah konsumsi lengkap dari bahan awal. Akhirnya enzim tersebut disaring
off. Pelarut diuapkan pada tekanan rendah untuk mendapatkan total produk. Reaksi paralel di bawah kondisi yang sama tanpa
penambahan enzim yang digunakan sebagai kontrol. Semua percobaan dilakukan tiga kali.

3.3. Metode analisis

Kemajuan reaksi adalah dengan TLC menggunakan analyzer ZF-1 UV untuk memvisualisasikan tempat (254 nm) [ 19 ]. Sampel siap
yang terlihat ke silika gel TLC piring, dan kemudian piring ditempatkan dalam ruang yang berisi sistem pelarut n heksana dan etil asetat (7:
3). Setelah piring itu kering, produk band yang dicelup dengan yodium padat (Gambar 2 B). konversi dihitung dengan HPLC (Waters 2690
Talak Modul; Waters 2487 UV / Vis Ganda Absorbance Detector; Waters, Milford, MA, USA; pembacaan dibuat pada 280 nm, Gambar 2 C)
menggunakan kolom silika gel (Waters Symmetry TM, C8, 3,9 × 150 mm) dielusi dengan metanol / air (70:30), fl ow rate, 1 mL / menit [ 17 ].
Produk reaksi mentah puri fi ed dengan kromatografi silika gel dan ditandai dengan analisis NMR. Posisi asilasi di ester kloramfenikol
enzim-disiapkan didirikan oleh 1 H-NMR (400 MHz, (CD 3) 2 CO) dan 13 C-NMR (101 MHz, (CD 3) 2 CO) pada RESONANSI ECZ 400S
spektrometer (JEOL Resonansi Inc, Tokyo, Jepang). Deuterated aseton digunakan sebagai pelarut; trimethylsilane digunakan sebagai
referensi internal.

4. Kesimpulan

Dalam penelitian ini, efek dari berbagai parameter pada lipase yang (Bibir BA) dikatalisasi kloramfenikol transesteri fi kasi dengan
donor asil yang berbeda dalam pelarut organik dipelajari. Di antara donor asil yang berbeda, vinil propionat memiliki tertinggi konversi
efisiensi dalam 1,4-dioksan sebagai pelarut. Secara keseluruhan konversi 98% dan kemurnian 99% dicapai pada 8 h menggunakan 4.0 g L -
1 katalis pada 50 ◦ C. Rasio optimummole vinil propionat terhadap kloramfenikol adalah 5: 1. Pada penelitian ini, kami telah menunjukkan
bahwa lipase Bibir BA dengan mudah dapat digunakan sebagai fi sien biokatalis-sel seluruh ef untuk sintesis rantai pendek ester
kloramfenikol. Dalam media organik, Bibir yang BA menunjukkan konversi yang tinggi dan regio-selektivitas. Selanjutnya, biokatalis yang
ditampilkan fleksibilitas tinggi terhadap prekursor rantai pendek khas ester kloramfenikol. Hasil ini menunjukkan bahwa lipase Bibir BA dengan
aktivitas katalitik yang tinggi dan stereoselektivitas regio dan, memegang janji besar untuk sintesis hijau bahan kimia dengan struktur
kompleks media organik.

Ucapan Terima Kasih: Penelitian ini secara finansial didukung oleh National Science Foundation Alam Cina (No. C31570795), Sains dan Teknologi Proyek
Kerjasama Shanghai International (No. 14520720500), Kabupaten Minhang Memimpin Talent Project (No 201.541), dan Pengembangan Shanghai Talent
proyek (No. 201.531).
molekul 2017, 22, 1523 10 dari 11

Penulis Kontribusi: Fengying Dong dan Wei Wei dirancang penelitian dan menulis kertas; Fengying Dong, Lingmeng Li dan Lin Lin melakukan percobaan;
Dannong Dia dan Jingwen Chen kontribusi reagen dan alat analisis; Dongzhi Wei diawasi penelitian. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah fi nal.

Konflik Menarik: Para penulis menyatakan tidak ada konflik yang menarik.

Referensi

1. Ellis, GP; Epstein, C .; Raja, J. Kegiatan antibakteri dari beberapa ester kloramfenikol. J. Appl. Microbiol.

2010, 26, 498-501. [ CrossRef ]

2. Rebstock, MC; Crooks, HM; Controulis, J .; Bartz, QR Kloramfenikol (Chloromycetin) 1 IV. 1a studi kimia. Selai. Chem. Soc. 1949, 71, 2458-2462. [ CrossRef

3. Emam, DR; Alhajoj, AM; Elattar, KM; Kheder, NA; Fadda, Sintesis AA dan evaluasi analog kurkuminoid sebagai agen antioksidan dan antibakteri. molekul

2017, 22, 971. [ CrossRef ] [ PubMed ]

4. Siti Hajar, M .; Mahiran, B .; Masoumi, HRF; Roghayeh Abedi, K .; Emilia Abd, M .; Hamidon, B .; Ahmad Fuad, S. Formulasi optimalisasi minyak inti

sawit ester nanoemulsion-sarat dengan kloramfenikol cocok untuk pengobatan meningitis. Koloid Surf. B biointerfaces 2013, 112, 113-119.

5. Maillard, JY Biosida Penggunaan dan Resistensi antibiotik; Springer: Boston, MA USA, 2005; pp. 465-489.

6. Tomaszewski, T. Efek samping kloramfenikol dan aureomycin. Br. Med. J. 1951, 1, 388. [ CrossRef ] [ PubMed ]

7. Luckarift, HR; Nadeau, LJ; Spanyol, JC sintesis berkelanjutan dari Aminophenol dari senyawa nitroaromatic oleh kombinasi logam dan biokatalis. Chem.

Commun. 2005, 3, 383-384. [ CrossRef ] [ PubMed ]

8. Bizerra, AMC; Montenegro, TGC; Lemos, TLG; Oliveira, Mcfd; Mattos, MCD; Lavandera, saya .; Gotor-Fern Sebuah ndez, V .; Gonzalo, GD; Gotor, V.

enzimatik produksi regioselective ester kloramfenikol.

Segi empat 2011, 67, 2858-2862. [ CrossRef ]

9. Ge, J .; Lu, D .; Wang, J .; Liu, Z. Lipase Nanogel dikatalisasi transesteri fi kasi di anhidrat dimetil sulfoksida.

biomakromolekul 2009, 10, 1612. [ CrossRef ] [ PubMed ]

10. Park, HG; Jin, HD; Chang, HN Regioselective asilasi enzimatik senyawa multi-hidroksil dalam sintesis organik. Biotechnol. Bioproses Eng. 2003, 8, 1-8. [ CrossRef

11. Torres, P .; Poveda, A .; Jimenez-Barbero, J .; Ballesteros, A .; Plou, FJ Regioselective lipase-dikatalisis sintesis 3- HAI- turunan asil dari resveratrol dan

studi tentang sifat antioksidan mereka. J. Agric. Makanan Chem. 2010, 58,

807-813. [ CrossRef ] [ PubMed ]

12. Daugs, ED Persiapan dan isolasi kloramfenikol palmitat dalam toluena. Org. Proses Res. Dev.

2000, 4, 301-304. [ CrossRef ]

13. Wang, R .; Zhang, Y .; Huang, J .; Lu, D .; Ge, J .; Liu, Z. Substrat tercetak lipase Nanogel untuk sintesis satu langkah kloramfenikol palmitat. Hijau

Chem. 2013, 15, 1155-1158. [ CrossRef ]

14. Ottolina, G .; Carrea, G .; Riva, S. Sintesis turunan ester kloramfenikol oleh lipase-dikatalisis transesteri fi kasi dalam pelarut organik. J. Org. Chem. 1990, 55,

2366-2369. [ CrossRef ]

15. Cai, X .; Ma, J .; Wei, DZ; Lin, JP; Wei, W. ekspresi Fungsional dari lipase alkali diadaptasi novel

Bacillus amyloliquefaciens dari bau air garam tahu dan pengembangan enzim amobil untuk produksi biodiesel. Antonie Van Leeuwenhoek 2014, 106, 1049.
[ CrossRef ] [ PubMed ]

16. Cai, X .; Wang, W .; Lin, L .; Dia, D .; Shen, Y .; Wei, W .; Wei, DZ cinnamyl ester sintesis oleh lipase-dikatalisis transesteri fi kasi dalam sistem non-air. Catal.

Lett. 2017, 147, 946-952. [ CrossRef ]

17. Lv, DS; Xue, XT; Wang, N .; Wu, Q .; Lin, XF enzim katalis sintesis beberapa ester obat vinil di media organik. Persiapan. Biochem. Biotechnol. 2004, 34, 97.

[ CrossRef ] [ PubMed ]

18. Yoshimoto, K .; Itatani, Y .; Tsuda, Y. 13 resonansi magnetik C-nuklir (nmr) spektrum HAI- acylglucoses.

Aditivitas parameter pergeseran dan aplikasi untuk struktur penjelasannya. Chem. Pharm. Banteng. 1980,

28, 2065-2076. [ CrossRef ]

19. El-Kersh, TA; Plourde, JR Biotransformasi antibiotik. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1980, 10, 317-326.

[ CrossRef ]

20. Yadav, GD; Devendran, S. Lipase katalis sintesis cinnamyl asetat melalui transesteri fi kasi dalam medium non-air. Proses Biochem. 2012, 47, 496-502. [ CrossRef

]
molekul 2017, 22, 1523 11 dari 11

21. Jaeger, KE; Dijkstra, BW; Reetz, MT struktur tiga dimensi, dan biotechnologicalapplications dari lipase. Annu. Rev. Microbiol. 1999, 53, 315-351. [ CrossRef

] [ PubMed ]

22. Brault, G .; Shareck, F .; Hurtubise, Y .; L é pinus, F .; Doucet, N. Short-rantai sintesis fl avor ester di organik

media dengan e. Coli biokatalis seluruh sel mengekspresikan lipase heterolog baru ditandai. PLoS ONE

2014, 9, e91872. [ CrossRef ] [ PubMed ]

23. Reichardt, C. Pelarut dan efek pelarut: Sebuah pengantar. Org. Proses Res. Dev. 2007, 11, 105-113.

[ CrossRef ]

24. Priego, J .; Ort saya z-Nava, C .; Carrillo-Morales, M .; L Hai pez-Mungu saya A A.; Escalante, J .; Castillo, E. Solvent rekayasa: Sebuah alat yang efektif

untuk chemoselectivity langsung dalam michael Selain lipase-dikatalisis. Segi empat

2009, 65, 536-539. [ CrossRef ]

25. Reichardt, C. Solvatochromic pewarna sebagai indikator polaritas pelarut. Chem. Putaran. 1994, 94, 416-431. [ CrossRef ]

26. Sinkeldam, RW; Tor, Y. Untuk D atau tidak untuk D? Pada memperkirakan polaritas mikro rongga biomolekuler. Org. Biomol. Chem. 2007, 5, 2523. [ CrossRef

] [ PubMed ]

27. ROELENS, S. organotin-dimediasi sintesis poliester makrosiklik: Mekanisme dan selektivitas dalam reaksi dioxastannolanes dengan diklorida diasil. J.

Chem. Soc. Perkin Trans. 1988, 8, 1617-1625. [ CrossRef ]

28. Yang, T .; Rebsdorf, M .; Engelrud, U .; produksi Xu, X. enzimatik dari monoacylglycerols mengandung polyunsaturated asam lemak melalui sistem

glycerolysis yang efisien. J. Agric. Makanan Chem. 2005, 53, 1475. [ CrossRef ] [ PubMed ]

29. Klibanov, AM Meningkatkan enzim dengan menggunakan mereka dalam pelarut organik. Alam 2001, 409, 241-246. [ CrossRef ]

[ PubMed ]

30. Cao, X .; Manga-S Sebuah nchez, J .; Feng, F .; Adlercreutz, P. Asil migrasi di enzimatik interesteri fi kasi

triasilgliserol: Pengaruh lipase dari thermomyces lanuginosus dan Rhizopus oryzae, bahan pendukung, dan aktivitas air. Eur. J. Lipid Sci. Technol. 2016,

118, 1579-1587. [ CrossRef ]

31. Ohlhoff, CW; Kirby, BM; Zyl, LV; Mutepfa, DLR; Casanueva, A .; Huddy, RJ; Bauer, R .; Cowan, DA; Tuf fi n, M. Sebuah feruloyl biasa esterase milik

keluarga viii esterase dan menampilkan berbagai substrat yang luas. J. Mol. Catal. B Enzym. 2015, 118, 79-88. [ CrossRef ]

Ketersediaan sampel: Sampel dari propionat senyawa kloramfenikol dan kloramfenikol yang tersedia dari penulis.

© 2017 oleh penulis. Lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses terbuka didistribusikan di bawah

persyaratan dan ketentuan Creative Commons Atribusi (CC BY) lisensi (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).