Jurnal Analisis Farmasi dan Biomedis

600
31 (2003) 597 / www.elsevier.com/locate/jpba

Komunikasi singkat

Penentuan deksametason asetat dalam krim oleh HPLC

CV Garcia *, AR Breier, M. Steppe, EES Schapoval, TP Oppe
Departamento de Produc¸a˜oe Controle de Medicamentos, Faculdade de Farma´cia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul,
Av. Ipiranga, 2752, Porto Alegre 90610-000, RS, Brasil

Diterima 31 Januari 2002; diterima dalam bentuk revisi 5 September 2002; diterima 10 Oktober 2002

Abstrak

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memvalidasi metode kromatografi cair kinerja tinggi untuk penentuan kuantitatif
deksametason asetat yang terkandung dalam sediaan krim. Kolom MetaSil octadecyl silane (250 /4,6 mm, 5 mm), fase
gerak metanol: air (65:35; v/v) (1,0 ml min 1) dan detektor UV (ditetapkan pada 254 nm) digunakan untuk mengevaluasi
parameter: linearitas, presisi, akurasi, spesifisitas, serta, batas kuantisasi dan deteksi. Kurva kalibrasi menunjukkan
koefisien korelasi sebesar 0,9999. Presisi ditunjukkan oleh deviasi standar relatif (RSD) sebesar 0,53. Tes pemulihan
menghasilkan rata-rata 97,85%, yang mengkonfirmasi keakuratan metode ini. Kuantisasi dan deteksi batas yang
ditentukan adalah 1,41 dan 0,47 mg ml 1,masing-masing. Uji spesifisitas menunjukkan tidak ada gangguan pada puncak
obat.
# 2003 Elsevier Science BV Hak cipta dilindungi undang-undang.

Kata kunci: Deksametason; Validasi metode; HPLC; Kontrol kualitas

1. Pendahuluan metode tografik untuk penentuan zat curah

Deksametason adalah glukokortikoid sintetik
yang sering digunakan dalam diagnosis penyakit
adrenal selain banyak proses inflamasi dan
imunologi [1].dalam European Pharmacopoeia
(2002) [2]Dimasukkan, dimana metode spec
trophotometric digunakan untuk penentuannya.
Namun, metode ini tunduk pada banyak gangguan.
Farmakope Amerika Serikat (2002) [3] dan
Farmakope Jepang (1996) [4] menunjukkan kroma
cair kinerja tinggi
* Penulis yang sesuai. Telp.: /51-331-65214; faks: /51- 331-
65378.
Alamat email: cassiavi@starinfo.net (CV Garcia).
deksametason asetat (DA) dan suspensi injeksi [3]
. Yang pertama menggunakan kolom fenil dan
air:asetonitril sebagai fase gerak, yang terakhir,
kolom oktadesil silan dan fase gerak yang sama,
tetapi tidak satu pun dari kode resmi ini yang
menunjukkan metode apa pun untuk pembuatan
krim.
Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) adalah
alat yang berguna untuk menganalisis sampel yang
bersifat kompleks, seperti salep dan krim, karena
tidak hanya memberikan pemisahan dan
penentuan, tetapi juga menghilangkan sebagian
besar masalah gangguan [5].
Dalam literatur, beberapa metode HPLC
diusulkan untuk analisis DA dalam krim [8], salep
[9] dan tablet [10]. Berbeda dengan dua

0731-7085/03/$ - lihat materi depan # 2003 Elsevier Science BV Hak cipta dilindungi
undang-undang. PII: S 0 7 3 1 - 7 0 8 5 ( 0 2 ) 0 0 6 9 5 - 7
598 CV Garcia et al. / J. Farmasi. Bioma. dubur. 31 (2003) 597/600
metode ini [8,9],metode dilaporkan di sini memiliki
persiapan sampel sederhana, tanpa ekstraksi
bentuk chloro [9] atau langkah-langkah penguapan
[8],dan meskipun demikian, itu dibuktikan sensitif
dan efisien. Selanjutnya, metode sebelumnya [8,9]
menggunakan air:asetonitril sebagai kolom fase
gerak dan oktadesil silan, sedangkan metode
tablet [10] menggunakan fase gerak air:metanol
dan kolom yang sama dilaporkan di atas. Fase
gerak ini diuji dalam pekerjaan ini.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
memvalidasi metode HPLC yang sederhana dan
cepat untuk penentuan kuantitatif DA dalam krim,
karena masih belum ada yang resmi. Prosedur
validasi akan mengikuti pedoman ICH [6].
Parameter validasi yang dievaluasi adalah
linearitas, spesifisitas, presisi, akurasi dan batas
kuantitasi dan deteksi.
fase empedu yang digunakan adalah metanol:air
(65:35; v/v), pada laju alir 1,0 ml min 1. Instrumen
dioperasikan pada suhu lingkungan dan
sensitivitas detektor yang digunakan adalah 0,05
AUFS.
3. Metode
3.1. Persiapan kurva kalibrasi
Aliquots 1,0; 2.0; 4.0; 6.0; 8.0; 10,0 dan 12,0 ml
larutan 0,5 mg ml 1 DA standar dipindahkan ke labu
ukur 100 ml dan diencerkan sampai volume
dengan metanol. Konsentrasi akhir yang diperoleh
adalah 5,0; 10.0; 20.0; 30.0; 40.0; 50,0 dan 60,0
mg ml 1, masing-masing. Setiap larutan disiapkan
tiga kali. Volume yang disuntikkan adalah 20 ml.

2. Bahan 3.2. Persiapan sampel

2.1. Sampel Sejumlah krim komersial yang mengandung

setara dengan 3 mg DA ditimbang dan
dipindahkan ke labu ukur 100 ml, dengan 20 ml
Krim yang tersedia secara komersial
metanol. Diencerkan sampai volume dengan
mengandung DA 0,1% (Globo, Belo Horizonte,
pelarut yang sama dan dikocok selama 10 menit.
Brazil).
Jadi, larutan ini disaring dan 20 ml disuntikkan ke
dalam kolom HPLC. Prosedur ini dilakukan enam
2.2. Bahan Kimia kali untuk mengevaluasi ketepatan metode.

Metanol yang digunakan untuk pembuatan fase 3.3. Uji pemulihan

gerak, dan sebagai pengencer, adalah kelas
kromatografi cair (Merck, Darmstadt, Jerman). Air
Untuk menentukan akurasi metode, alikuot 1,0,
dimurnikan menggunakan sistem Millipore (Sa˜o
Paulo, Brasil). DA, 100,28% (Valquı´mica, Sa˜o 2,0 dan 3,0 ml larutan standar 1,5 mg ml 1 DA
Paulo, Brasil) digunakan sebagai standar (masing-masing 1,5 mg, 3,0 mg dan 4,5 mg,
eksternal. Eksipien krim plasebo, Emulgade † sesuai dengan 50,0, 100,0 dan 150,0% dari
konsentrasi sampel) ditambahkan ke tiga larutan
(campuran cetearyl alkohol, ceteareth-20, stearet
sampel komersial, masing-masing, disiapkan
sorbitan, POE 20 sorbitan oleat) (Henkel, Sa~o
seperti dikutip dalam Bagian 3.2. Setiap larutan
Paulo, Brasil), setostearil alkohol, octyldodecanol,
disiapkan dalam rangkap dua dan disuntikkan tiga
oktil stearat, diazolidinyl urea, propylene glycol,
kali.
methylpara ben, propylparaben dan butylated
hydroxyto luene, semuanya diperoleh dari Galena
(Sa˜o Paulo, Brazil).
3.4. Uji
2.3. Kondisi instrumentasi dan spesifisitas CV Garcia et al. / J. Farmasi. Bioma. dubur. 31 (2003)
597 /600 599
kromatografi Kromatografi

cair terdiri dari Shi madzu LC-10 A

dengangelombang variabel SPD-10A Tabel 1
detektor UV panjang(ditetapkan pada 254 nm), Hasil penentuan kuantitatif DA dalam krim dengan HPLC Spesifisitas
integrator C-R6A, pompa pengiriman pelarut LC- dievaluasi dengan menguji jumlah krim plasebo
10AS dan Rheodyne katup injeksi dengan loop 20 yang mengandung eksipien yang sama dengan
ml (Shimadzu, Kyoto, Jepang). Kolomnya adalah produk komersial, dikutip dalam Bagian 2.2. Solusi
MetaSil octadecyl silane 250 /4,6 mm, 5 mm disiapkan dengan cara yang sama dilakukan untuk
(MetaChem Technologies, Torrance, USA). Mo sampel komersial (Bagian 3.2).
4. Hasil dan pembahasan 1 124,7 125,4 0,53 2 125,3
3 125,6
4 126,9
Tujuan utama dari validasi prosedur analitis 5 124,8
adalah untuk menunjukkan bahwa prosedur 6 125,4
tersebut sesuai dengan tujuan yang dimaksudkan
[6]. Ada beberapa karakteristik validasi yang perlu
dievaluasi, yaitu: linearitas, spesifisitas, akurasi, 1. Ditemukan kelebihan 25,0% dalam jumlah yang
presisi, batas deteksi dan kuantisasi, dan berlabel, namun, karena tidak ada nilai referensi
robustness. Tidak perlu mengevaluasi semua resmi untuk krim, sulit untuk mengatakan bahwa
parameter ini. Merupakan tanggung jawab analis
sampel ini ditolak. Standar deviasi relatif (RSD)
untuk memilih yang dianggap relevan untuk setiap
yang rendah sebesar 0,53 menunjukkan ketepatan
prosedur pengujian [7].
metode yang dikembangkan. Gambar 1
Dalam karya ini, fase gerak metanol:air dipilih
karena kelarutan DA yang tinggi dalam pelarut ini menunjukkan kromatogram representatif dari
dan risiko toksikologi yang lebih rendah, bila larutan sampel komersial. Waktu retensi DA adalah
dibandingkan dengan asetonitril. Jadi, dua proporsi sekitar 8,5
dipelajari: 70:30 (v/v) seperti penelitian yang
dilaporkan sebelumnya [10] dan 65:35 (v/v).
Alternatif kedua terbukti lebih baik, karena
meningkatkan pemisahan puncak dalam sampel
kroma togram dan mempertahankan waktu retensi
yang besar untuk puncak obat.
Di bawah kondisi percobaan dijelaskan, kurva
kalibrasi standar DA dibangun dan itu
menunjukkan untuk menjadi linear pada rentang
tion Concentra 5/60mg ml 1.Koefisien korelasi yang
diperoleh untuk garis tersebut adalah 0,9999,
menunjukkan linearitas yang baik. Persamaan
linier representatif adalah: y /14 785x /25 834 di
mana x adalah konsentrasi dalam mg ml 1 dan y
adalah luas puncak dalam mV s. Data divalidasi
dengan analisis varians, yang menunjukkan regresi
linier signifikan dan deviasi linier tidak signifikan
(PB/0,05). Kuantisasi dan deteksi batas yang
ditentukan adalah 1,41 dan 0,47 mg ml 1,masing-
masing. Nilai yang rendah ini menunjukkan
sensitivitas metode HPLC ini.
Hasil yang diperoleh dalam penentuan DA
dalam sampel yang tersedia secara komersial ada
di Tabel Gambar 1. Kromatogram krim yang mengandung deksametason
asetat. Kondisi kromatografi: MetaSil octadecyl silane (250 /4,6
Jumlah Sampel deksametason asetat (1 mg g 1 krim) % Rata- mm; 5 mm); fase gerak: metanol: air (65:35 v/v); laju aliran: 1,0
rata RSD ml menit 1; volume injeksi: 20,0 ml; deteksi UV 254 nm dan suhu
lingkungan. (A) Metilparaben; (B) propilparaben; (C) DA.
600 CV Garcia dkk. / J. Farmasi. Bioma. dubur. 31 (2003) 597 /600

Tabel 2 5. Kesimpulan
Pemulihan larutan standar yang ditambahkan ke sampel yang
tersedia secara komersial
Metode HPLC yang diusulkan menunjukkan
Jumlah yang ditambahkan (mg) RSD spesifik dan sensitif. untuk menentukan
(mg)
Persentase pemulihana menjadi sederhana, Ini dapat digunakan DA dalam
Jumlah yang ditemukan linier, akurat, tepat,
1,50 1,48 98,70 1,72 3,00 2,95 98,24 0,38 4,51 4,35 96,60 0,07 menit Ini adalah nilai yang baik untuk prosedur
a rutin dalam kontrol kualitas dan memungkinkan
Setiap nilai adalah rata-rata dari dua penentuan.
untuk menganalisis sejumlah besar sampel pada
hari yang sama. Dua puncak lainnya dalam
kromatogram adalah metilparaben pengawet dan
propilparaben, dalam urutan ini.
Tes pemulihan menghasilkan 97,85% pemulihan
rata-rata dengan RSD rendah (kurang dari 2,0%).
Data pengujian ini dapat dilihat pada Tabel 2. Nilai-
nilai ini menunjukkan keakuratan metode yang
besar, yang merupakan parameter penting dalam
penentuan metode.
Uji spesifisitas menunjukkan tidak ada gangguan
pada puncak obat. Kromatogram yang diperoleh
tidak menunjukkan puncak lain selain dari bahan
pengawet yang terdapat dalam kromatogram
sampel. Jadi, terbukti bahwa puncak pada 8,5
menit tidak mengalami gangguan dari eksipien lain.
Spesifisitas sangat penting, karena krim adalah
matriks yang kompleks dan mengandung banyak
eksipien yang dapat menyebabkan masalah
dengan resolusi puncak. Omong-omong, ada
peringatan tentang eksipien berminyak yang dapat
membahayakan analisis dengan menyumbat
kolom [5]. Selama pengembangan penelitian ini, itu
tidak diamati.
krim, karena tidak ada metode resmi untuk obat ini
dalam bentuk farmasi itu.

Ucapan Terima Kasih

Penulis berterima kasih kepada FATEC melalui

dukungan keuangan dan LEPCQ.

Referensi

[1] A. Goldfien, Adrenocorticoestero´ides e antagonistas co´r

tico-supra-renais, dalam: BG Katzung (Ed.), Farmacologia
Ba´sica e Clı´nica, edisi keenam, Guanabara Koogan, Rio
de Janeiro, 1995, hlm. 450 /461.
[2] European Pharmacopoeia, edisi keempat, Council of
Europe, Strasbourg, 2002.
[3] United States Pharmacopeia, edisi ke-25, United States
Pharmacopeial Convention, Rockville, 2002, hlm. 511 /515. [4]
The Japanese Pharmacopoeia, 13th ed., Society of Japa nese
Pharmacopoeia, Tokyo, 1996.
[5] P. Williams, E. Biehl, J. Pharm. Sci. 70 (1981) 530 /534. [6]
Konferensi Internasional tentang Harmonisasi Persyaratan
Teknis untuk Pendaftaran Farmasi untuk Penggunaan Manusia
(ICH) Q2B: Pedoman Validasi Prosedur Analitis* /Metodologi,
1996.
[7] J. Ermer, J Farmasi. Bioma. dubur. 24 (2001) 755 /767. [8]
H. Tokunaga, T. Kimura, J. Kawamura, Chem. Farmasi.
Banteng. 32 (1984) 4012 /4016.
[9] F. Belliardo, A. Bertolino, J. Liq. Kromatografi 4 (1981) 293 /
298.
[10] M. Santoro, E. Govato, E. Hackmann, Anal. Lett. 26 (1993)
925/935.