Machine Translated by Google

Percobaan 5 1

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

HIDROLISIS pati OLEH amilase saliva

I. TUJUAN DAN LATAR BELAKANG

Amilase, enzim yang ada dalam air liur, mengkatalisis hidrolisis ikatan glikosidik dalam pati. Pengaruh
konsentrasi enzim, konsentrasi substrat, suhu, pH, dan kation logam berat terhadap aktivitas enzim
ini akan diselidiki.

Metabolisme
Reaksi kimia yang berlangsung dalam organisme hidup, dan yang penting untuk pertumbuhan,
reproduksi, gerakan, dan semua fungsi vital lainnya, secara individual dan kolektif disebut sebagai
metabolisme. Ribuan proses metabolisme seperti itu terjadi terus-menerus bahkan dalam bentuk
kehidupan yang paling sederhana sekalipun.

Enzim adalah protein yang bertindak sebagai katalis untuk reaksi metabolisme. Mereka meningkatkan
laju reaksi, tetapi tidak mempengaruhi jenis atau jumlah produk yang terbentuk. Secara umum, setiap
reaksi metabolisme harus dikatalisis dalam organisme hidup oleh enzim khusus sendiri.

Keberadaan enzim dalam bahan biologis dapat ditunjukkan oleh efek yang ditimbulkannya. Dalam
percobaan ini, enzim pencernaan yang mampu memecah polisakarida seperti pati akan dipelajari.

Bahan makanan harus dipecah oleh pencernaan sebelum dapat diserap dan dimanfaatkan oleh
tubuh. Akibatnya, jika suatu organisme tidak memiliki enzim yang mampu menyerang jenis
karbohidrat, protein, atau lemak tertentu, zat tertentu itu tidak akan memiliki nilai makanan bagi
organisme tersebut. Karbohidrat dan lemak dapat dipecah oleh asam atau basa kuat. Namun, enzim
pencernaan dapat menyelesaikan pemecahan yang sama dalam kondisi yang sesuai dengan
kehidupan, yaitu pada suhu sedang dan rentang pH fisiologis.

Pati
Reservoir nutrisi pada tanaman adalah pati, yang sebenarnya merupakan campuran
dari dua polisakarida. Amilosa, jenis pati yang tidak bercabang , terdiri dari residu glukosa dalam -
l,4 hubungan.
Machine Translated by Google

Percobaan 5
2

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

Amilopektin, bentuk bercabang , memiliki sekitar satu -l,6 1 tinta per tiga puluh -l,41 tinta.

Amilase
Hidrolisis pati merupakan proses pencernaan. Enzim yang disebut amilase hanya mengkatalisis
hidrolisis ikatan -1,4 glikosidik dalam komponen amilosa dan amilopektin pati. Hidrolisis tidak
berlangsung langsung dari polisakarida ke unit monomer; sebaliknya, produk hidrolisis parsial
dengan ukuran sedang diperoleh. Produk-produk tersebut adalah maltosa dan dekstrin. Maltosa
terdiri dari dua unit glukosa dalam ikatan -1,4; dekstrin terdiri dari beberapa unit glukosa yang
dihubungkan oleh ikatan -1,6 selain ikatan -1,4.

Enzim amilase hadir dalam air liur, sehingga pencernaan karbohidrat dimulai di mulut.
Pencernaan berlangsung sebentar di lambung sampai pH turun terlalu rendah, dan kemudian
diselesaikan di usus oleh serangan amilase lain.

Konversi kimia pati menjadi dekstrin dan maltosa adalah bagian penting dari langkah pembuatan bir
dalam produksi bir. Enzim amilase ditambahkan ke dalam campuran biji-bijian sebagai brewer's malt.
Sekitar sepertiga kalori dalam bir biasa disumbangkan oleh sisa karbohidrat dalam bir setelah
fermentasi. Karbohidrat tetap ada karena amilase tidak mampu memecah ikatan -l,6 glikosidik di
bagian amilopektin pati. Untuk membuat "bir ringan", lebih sedikit pati yang digunakan pada langkah
pembuatan bir awal dan enzim kedua, amiloglukosidase, yang dapat memotong ikatan -1,6 glikosidik
dalam amilopektin, ditambahkan pada langkah fermentasi. Bir ringan akan memiliki komposisi
karbohidrat yang lebih rendah karena penambahan amiloglukosidase, dan kandungan alkohol yang
lebih rendah karena pengurangan pati dalam campuran fermentasi awal.

Studi Aktivitas Enzim Untuk

mengikuti aksi enzim, perlu untuk menguji munculnya produk atau hilangnya reaktan selama periode
waktu yang terukur. Dalam reaksi amilase dengan pati, Anda akan menguji hilangnya pati dengan
mereaksikan sampel campuran reaksi dengan yodium. Awalnya, larutan pati yang tidak terhidrolisis
bereaksi dengan yodium untuk memberikan warna biru-hitam. Amilase mengkatalisis hidrolisis ikatan
-1,4 glikosidik, membentuk maltosa dan dekstrin. Setelah pati dihidrolisis, warna biru-hitam yang
dihasilkan dengan yodium tidak lagi diamati, dan hanya warna merah atau emas dari larutan yodium.
Machine Translated by Google

Percobaan 5 3

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

terlihat. Semakin cepat amilase menghidrolisis pati, semakin cepat kegagalan warna biru-hitam untuk
muncul diamati. Jika warna biru-hitam terus muncul setiap kali diuji, dapat disimpulkan bahwa enzim tidak
lagi aktif dan tidak terjadi hidrolisis pati.

Aktivitas enzim tergantung pada beberapa faktor, antara lain konsentrasi enzim, konsentrasi substrat,
pH, suhu, dan keberadaan kation logam berat. Air liur Anda sendiri yang mengandung enzim amilase
akan digunakan untuk percobaan ini, meskipun kadar amilase sangat bervariasi dari satu orang ke
orang lain. Setiap percobaan harus diatur waktunya. Saat Anda melanjutkan dengan setiap percobaan,
Anda akan memeriksa aktivitas enzim dengan mereaksikan beberapa tetes campuran reaksi dengan
yodium. Waktu di mana warna biru-hitam pati tidak muncul akan dicatat dalam setiap percobaan.

Waktu yang diperlukan untuk hidrolisis pati akan berkorelasi dengan aktivitas enzim relatif. Ketika
aktivitas enzim tinggi, waktu untuk pati terhidrolisis akan sangat
pendek. Ketika enzim beroperasi dengan buruk atau tidak bekerja sama sekali, aktivitasnya rendah, dan
lebih banyak waktu yang dibutuhkan untuk pati terhidrolisis. Dalam beberapa kasus, enzim akan
sepenuhnya dinonaktifkan dan warna biru-hitam dari pati dan yodium akan bertahan selama seluruh
percobaan. Grafik akan disiapkan menunjukkan efek konsentrasi, pH, suhu, dan kation logam berat pada
aktivitas enzim relatif.

II. PROSEDUR

A. Pengaruh Konsentrasi Enzim

1. Kumpulkan sekitar 5 mL saliva dalam tabung reaksi medium.

2. Tempatkan 2 penetes penuh larutan kanji 1% di masing-masing 5 tabung reaksi sedang. Nomor
tabung reaksi 1-5.

3. Tempatkan tabung dalam penangas air 37-40 °C. Setelah 5 menit, tambahkan jumlah air liur berikut
ke tabung reaksi secepat mungkin, campur setiap larutan secara menyeluruh, dan kemudian kembalikan
tabung ke penangas air. Jangan memanaskan bak mandi terlalu lama atau Anda akan menonaktifkan
enzim.

Tabung reaksi jumlah tetes air liur

1

2 12
3

4 5
5 10 20
Machine Translated by Google

Percobaan 5
4

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

4. Siapkan plat noda untuk pengujian keberadaan pati dalam sampel dengan menempatkan satu tetes reagen
yodium di masing-masing lima lekukan pada plat noda.

5. Dua menit setelah penambahan saliva, pindahkan satu tetes dari masing-masing tabung reaksi (menggunakan
pipet yang berbeda untuk setiap tabung) ke setetes yodium yang terpisah di pelat bercak. Perhatikan warna
yang dihasilkan untuk masing-masing. Ingatlah bahwa kompleks yang dibentuk oleh pati dan yodium adalah biru
nila. Jika warna larutan iodium tetap merah atau emas setelah ditambahkan larutan kanji, pati tersebut telah
terhidrolisis sempurna.

6. Segera setelah salah satu larutan kanji Anda terhidrolisis, gunakan untuk mulai menyiapkan larutan untuk
Bagian B dan C di bawah ini. Lanjutkan menguji sisa larutan kanji yang belum terhidrolisis.

7. Bersihkan plat noda dan kemudian siapkan untuk pengujian berikutnya dengan menempatkan satu tetes reagen
yodium di masing-masing dari lima depresi.

8. Ulangi pengujian pada 5 menit setelah penambahan saliva, dan pada interval 5 menit setelahnya. Lanjutkan
pengujian selama 20 menit, atau sampai warna biru-hitam tidak lagi muncul untuk setiap sampel.

9. Catat waktu yang diperlukan untuk hidrolisis pati di setiap sampel.

B. Uji Benedict untuk Gugus yang Mudah Teroksidasi

Reagen Benedict adalah oksidator ringan yang terdiri dari ion Cu+2 dan ion poliatomik sitrat (C6H6O7 -2)
dalam larutan basa. Ion Cu+2 membentuk kompleks dengan sitrat; itu dibungkus oleh dan dilindungi dalam ion
sitrat. Perlindungan ini memungkinkan ion Cu+2 untuk tetap larut dalam larutan basa (jika tidak, Cu(OH)2 yang
sangat tidak larut akan terbentuk). Ketika senyawa yang mudah teroksidasi ditambahkan ke pereaksi Benedict,
dan larutan dihangatkan, ion Cu+2 direduksi menjadi ion Cu+1 . Ion-ion ini tidak dapat dilindungi dari OH oleh sitrat,
dan mengendap sebagai tembaga(I) oksida (Cu2O). Reagen Benedict memiliki warna biru cerah yang disebabkan
oleh ion Cu+2 , tetapi Cu2O adalah padatan merah bata. Bukti nyata dari uji Benedict positif adalah hilangnya
warna biru larutan, dan munculnya endapan merah bata. Monosakarida dan disakarida yang mengandung aldehida
atau -

hidroksi keton akan memberikan uji Benedict positif, karena gugus ini mudah teroksidasi menjadi asam
karboksilat.

Karbohidrat yang akan diuji: pati terhidrolisis dan larutan pati segar.

1. Di masing-masing dua tabung reaksi medium, tempatkan 2 penetes penuh reagen Benedict dan 1 mL larutan
kanji segar atau pati terhidrolisis dari Bagian A.
Machine Translated by Google

Percobaan 5 5

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

2. Kocok isi masing-masing tabung dengan baik, dan tempatkan kedua tabung secara bersamaan
dalam penangas air yang sedang mendidih. Panaskan dalam penangas air selama 3 menit. Pada
lembar laporan, catat setiap perubahan warna atau transparansi larutan, dan dalam pembentukan dan
warna endapan.

C. Uji Barfoed untuk Monosakarida

Seperti halnya uji Benedict, uji Barfoed bergantung pada adanya gugus yang mudah teroksidasi
untuk mereduksi ion Cu+2 menjadi ion Cu+1 untuk membentuk endapan merah bata dari Cu2O.
Namun, reagen Barfoed sedikit asam daripada basa; perbedaan ini memungkinkan selektivitas antara
monosakarida dan disakarida. Monosakarida akan dites positif dalam dua hingga tiga menit. Disakarida
dengan gugus yang dapat teroksidasi membutuhkan waktu sepuluh menit atau lebih sebelum menunjukkan
hasil yang positif.

Karbohidrat yang akan diuji: pati terhidrolisis dan larutan pati segar.

1. Di masing-masing dua tabung reaksi medium, tempatkan 1 penetes penuh reagen Barfoed dan 1 mL
larutan kanji segar atau pati terhidrolisis dari Bagian A.

2. Kocok isi masing-masing tabung dengan baik, dan tempatkan kedua tabung secara bersamaan ke
dalam penangas air yang sedang mendidih. Panaskan dalam penangas air selama 5 menit (tidak lagi).
Selama periode ini, amati tabung dengan cermat dan catat setiap perubahan warna atau kejernihan larutan.

D. Pengaruh pH

1. Tempatkan 2 penetes penuh larutan kanji 1% di masing-masing 4 tabung reaksi sedang.

Tambahkan berikut ini ke tabung reaksi:

Tabung reaksi
1 5 mL buffer pH 3 5 mL
2 buffer pH 5
3 5 mL buffer pH 6 5 mL
4 buffer pH 9 5 mL buffer
5 pH 11

2. Tempatkan tabung dalam penangas air 37 -40 °C. Setelah 5 menit, tambahkan 5 tetes air liur ke masing-
masing tabung reaksi secepat mungkin, campur setiap larutan secara menyeluruh, dan kemudian kembalikan
tabung ke penangas air. Jangan terlalu panas mandi atau Anda akan menonaktifkan enzim.

3. Siapkan pelat bercak untuk pengujian keberadaan pati dalam sampel dengan menempatkan satu tetes
reagen yodium di masing-masing lima lekukan pada pelat bercak.
Machine Translated by Google

Percobaan 5 6

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

4. Dua menit setelah penambahan saliva, pindahkan satu tetes dari masing-masing tabung reaksi (menggunakan pipet
yang berbeda untuk setiap tabung) ke setetes yodium yang terpisah di pelat bercak. Perhatikan warna yang dihasilkan
untuk masing-masing.

5. Bersihkan plat noda dan kemudian siapkan untuk pengujian berikutnya dengan menempatkan satu tetes reagen
yodium di masing-masing dari lima depresi.

6. Ulangi pengujian pada 5 menit setelah penambahan saliva, dan pada interval 5 menit setelahnya. Lanjutkan
pengujian selama 20 menit, atau sampai warna biru-hitam tidak lagi muncul untuk setiap sampel.

7. Catat waktu yang diperlukan untuk hidrolisis pati.

8. Plot aktivitas enzim relatif (waktu untuk pati terhidrolisis) versus pH sampel.

E. Penghambatan Aktivitas Enzim

1. Tempatkan 2 penetes penuh larutan kanji 1% di masing-masing 4 tabung reaksi sedang. Tambahkan berikut
ini ke tabung reaksi:

Tabung reaksi
12 1 mL 0,1 M AgNO3 + 4 mL air 1 mL 0,1 M
NaCl + 4 mL air
3 5 mL etanol 5 mL air
4

2. Tempatkan tabung dalam penangas air 37 -40 °C. Setelah 5 menit, tambahkan 5 tetes air liur ke masing-masing
tabung reaksi secepat mungkin, campur setiap larutan secara menyeluruh, dan kemudian kembalikan tabung ke penangas
air. Jangan terlalu panas mandi atau Anda akan menonaktifkan enzim.

3. Siapkan pelat bercak untuk menguji adanya pati dalam sampel dengan menempatkan satu tetes reagen yodium di
masing-masing empat lekukan pada pelat bercak.

4. Lima menit setelah penambahan saliva, pindahkan satu tetes dari masing-masing tabung reaksi (menggunakan pipet
yang berbeda untuk setiap tabung) ke setetes iodin yang terpisah di pelat bercak. Perhatikan warna yang dihasilkan
untuk masing-masing.
Machine Translated by Google

Percobaan 5 7

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

Lembar Laporan: Eksperimen 5

Nama Tanggal

Nama pasangan Inisial Instruktur

A. Pengaruh Konsentrasi Enzim

Tabung reaksi Tetes dari Waktu Mulai Waktu Warna Biru Waktu (min.)
Air liur Gagal Muncul untuk Hidrolisis Pati
1 1
2 2

3 5
4 10
5 20

Grafik: Aktivitas Enzim (Waktu Hidrolisis Pati) vs Konsentrasi Enzim (Tetesan Saliva)

5
Waktu (min.)
untuk hidrolisis pati

10

15

20
0 5 10 15 20

tetes air liur

Machine Translated by Google

Percobaan 5 8

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

Pertanyaan:

1. Bagaimana aktivitas enzim berubah ketika konsentrasinya meningkat?

2. Apa saja alasan untuk perubahan aktivitas ini?

B. Uji Benedict untuk Gula Pereduksi

Pengamatan Kesimpulan

terhidrolisis
Pati

pati segar

C. Uji Barfoed untuk Monosakarida

Pengamatan Kesimpulan

terhidrolisis
Pati

pati segar
Machine Translated by Google

Percobaan 5 9

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

Pertanyaan:
1. Apakah hasil tes Benedict dan Barfoed seperti yang Anda harapkan? Jelaskan jawaban Anda dengan
memberikan struktur dan nama produk hidrolisis enzimatik lengkap pati.

D. Pengaruh pH

pH Waktu Mulai Waktu Warna Biru Waktu (min.)

Gagal Muncul untuk Hidrolisis Pati
3

9
11

Pertanyaan:
1. Apa pengaruh pH terhadap aktivitas enzim?

2. Apa sajakah alasan untuk pengaruh pH?

Machine Translated by Google

Percobaan 5 10

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

E. Pengaruh Inhibitor

Ditambahkan Pengamatan Setelah 5 Menit Kesimpulan

Reagen

AgNO3

NaCl

etanol

air

Pertanyaan:
1. Manakah dari senyawa yang ditambahkan ke tabung reaksi yang menghambat aktivitas enzim?

2. Jelaskan bagaimana senyawa yang Anda sebutkan di atas menghambat aktivitas enzim.

Pertanyaan Tambahan:
Selulosa (ditunjukkan di bawah) adalah polisakarida yang paling melimpah di alam; itu adalah bahan struktural pada
tanaman. Apakah selulosa bernilai gizi bagi manusia; dengan kata lain, dapatkah selulosa digunakan sebagai sumber
energi? Jelaskan mengapa atau mengapa tidak. Konsultasikan buku teks Anda atau internet untuk bantuan dalam
menjawab pertanyaan ini. Petunjuk: jawaban Anda harus mencakup diskusi tentang jenis ikatan antara unit glukosa
dalam selulosa.
Machine Translated by Google

Percobaan 5 11

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

Catatan Laboratorium
Hidrolisis Pati oleh Amilase Saliva
Kimia 116

• Gunakan hanya tabung reaksi yang disediakan oleh ruang penyimpanan untuk percobaan ini - ambil 10 tabung per
kelompok. Anda tidak perlu menggunakan peralatan gelas Anda sendiri untuk mengumpulkan air liur atau melakukan
eksperimen dengan air liur, tetapi jika Anda melakukannya, sterilkan peralatan gelas Anda dengan larutan pemutih
5% dan bilas sampai bersih dengan air sebelum pergi. .

• Sebisa mungkin, orang yang mendonorkan air liur untuk eksperimen harus menjadi satu-satunya
orang yang menangani larutan uji yang mengandung air liur. Sarung tangan sekali pakai disediakan
sebagai tindakan pencegahan.

• Semua larutan yang mengandung air liur dapat dituangkan ke bak cuci dengan banyak
air. SEMUA PIPA BEKAS HARUS DITEMPATKAN DI TEMPAT LIMBAH YANG TEPAT.
SEMUA TABUNG UJI DAN SPOT PLAT BEKAS HARUS DITEMPATKAN DALAM TRAY
PLASTIK YANG TEPAT.

• Bagikan pemandian air Anda dengan tim tetangga, jika perlu. Untuk menghemat waktu, lakukan
ini segera setelah Anda masuk ke lab. Pikirkan mengapa penting untuk menjaga bak air dalam
kisaran suhu yang disarankan. Pantau suhunya sesering mungkin, terutama jika Anda memiliki hot
plate tanpa pengatur suhu. Jika bak mandi menjadi terlalu panas, matikan kompor.

Bagian A: Pengaruh Konsentrasi Enzim

• Langkah 1: Kalibrasi tabung reaksi dengan mengukur 5 mL air dalam gelas ukur,
menuangkannya ke dalam tabung reaksi dan menandai level pada tabung dengan pena. Buang
airnya dan isi sampai tanda dengan air liur. Sementara satu orang mengumpulkan air liur,
pasangan lainnya dapat mengukur pati ke dalam tabung reaksi. Ingat: dua semprotan besar
dengan pipet plastik 5 mL. Tempatkan pipet terpisah di setiap tabung reaksi setelah menambahkan air liur.

• Hasil pencatatan pada lembar laporan: waktu mulai adalah waktu pada jam ketika Anda
menambahkan air liur ke tabung reaksi yang berisi pati. Waktu warna biru memudar adalah waktu
pada jam ketika Anda menambahkan setetes campuran air liur / pati ke larutan yodium di piring
noda dan warnanya tidak berubah menjadi biru. Waktu untuk hidrolisis pati adalah perbedaan
antara dua waktu ini.

• Hasil yang diharapkan: tabung reaksi mana yang akan terhidrolisis Bagaimana Anda akan tahu kapan?
lebih dulu? hidrolisis telah terjadi?
Machine Translated by Google

Percobaan 5 12

Eksperimen Laboratorium untuk Kimia GOB

__________________________________________________________________________________________

Bagian B: Tes Benedict

• Anda dapat melakukan tes ini dan tes berikutnya segera setelah Anda menentukan bahwa salah satu dari Anda
larutan kanji dari atas telah terhidrolisis. Untuk uji Benedict dan Barfoed, lakukan pengujian hanya pada salah
satu larutan pati terhidrolisis (dari Bagian A) dan larutan kanji segar.

• Anda mungkin perlu membiarkan isi tabung reaksi mengendap selama ~10 menit untuk melihat warna endapan pada
uji positif. Namun, jika warna larutan berubah dan menjadi lebih keruh, itu juga merupakan indikasi tes positif.

• Hasil yang diharapkan: Seperti apa hasil tes positif? larutan pati Apakah Anda mengharapkan
terhidrolisis untuk memberikan tes positif? Pati segar?

Bagian C: Uji Barfoed

• Hasil yang diharapkan: Seperti apa hasil tes positif? larutan pati Apakah Anda mengharapkan
terhidrolisis untuk memberikan tes positif? Pati segar?

Bagian D: Pengaruh pH

Abaikan bagian ini.

Bagian E: Penghambatan Aktivitas Enzim

• Langkah 6: Anda tidak perlu menghabiskan waktu 20 dua puluh menit penuh; segera setelah Anda
mengamati hidrolisis dalam tabung reaksi Anda yang berisi air (tabung 4), Anda selesai.

• Hasil yang diharapkan: Solusi mana yang Anda harapkan untuk menghambat hidrolisis?

Laporan lab:

• Isi lembar laporan di manual lab Anda (kecuali Bagian D), termasuk semua pertanyaan.
Lihat pengantar dan catatan pra-lab untuk membantu Anda menyelesaikan ini. Petunjuk untuk Pertanyaan
Tambahan: selulosa adalah komponen utama kertas. Makan kertas apa saja baru-baru ini? Petunjuk nomor
2: baca tentang selulosa di buku teks Anda.

4/11