Machine Translated by Google

Lihat diskusi, statistik, dan profil penulis untuk publikasi ini di: https://www.researchgate.net/publication/316937135

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan

mengacu pada Km dan Vmax: gambaran umum

Pesan · Mei 2017

KUTIPAN BACA

1 11,619

4 penulis, antara lain:

Jiby John Mathew Prem Jose Vazhachrickal

Mar Augusthinose College Ramapuram, Kottayam, Kerala, India Mar Augusthinose College, Ramapuram

71 PUBLIKASI 74 KUTIPAN 202 PUBLIKASI 165 KUTIPAN

LIHAT PROFIL LIHAT PROFIL

Sajeshkumar NK
Perguruan Tinggi Mar Augusthinose

71 PUBLIKASI 121 KUTIPAN

LIHAT PROFIL

Beberapa penulis publikasi ini juga mengerjakan proyek terkait ini:

Kepuasan pelanggan Lihat proyek

KUALITAS LAYANAN DI BANK Lihat proyek

Semua konten yang mengikuti halaman ini diunggah oleh Prem Jose Vazhacharikal pada tanggal 15 Mei 2017.

Pengguna telah meminta peningkatan file yang diunduh.

Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan

mengacu pada Km dan Vmax: gambaran umum

Prem Jose Vazhacharikal, Sajeshkumar NK, Jiby John Mathew

dan Twinkle Jose
Machine Translated by Google

ucapan terima kasih

UCAPAN TERIMA KASIH

Pertama-tama kami panjatkan puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang selalu melimpahkan rahmat dan

hidayahnya kepada kami sehingga kami dapat menyelesaikan pekerjaan proyek ini dengan baik.

Kami ingin mengucapkan terima kasih kepada Manajer kami tercinta Rev. Fr. Dr. George
Njarakunnel, Kepala Sekolah yang Terhormat Dr. Joseph VJ, Wakil Kepala Sekolah Fr. Joseph Allencheril,
Bursar Shaji Augustine dan Manajemen untuk menyediakan semua fasilitas yang diperlukan dalam melaksanakan
studi. Kami mengucapkan terima kasih yang tulus kepada Bapak Binoy A Mulanthra (penanggung jawab lab,
Departemen Bioteknologi) atas dukungannya. Pekerjaan penelitian ini tidak akan mungkin dilakukan dengan
kerjasama banyak petani.

Kami berterima kasih kepada guru, orang tua, saudara dan teman-teman kami yang selalu ada
untuk membantu kami dalam proyek ini.

Prem Jose Vazhacharikal*, Sajeshkumar NK, Jiby John Mathew dan Twinkle Jose

*Alamat korespondensi
Asisten profesor
Departemen Bioteknologi
Perguruan Tinggi Mar Augusthinose
Ramapuram-686576
Kerala, India
premjosev@gmail.com

Foto halaman sampul atas izin: Wikipedia. Alfa amilase saliva manusia

ii
Machine Translated by Google

Daftar Isi

Daftar Isi
Daftar Isi............................................... ........................................................ ............aku aku aku

Tabel gambar ................................................................... ........................................................ ............... iv

Tabel tabel................................................................ ........................................................ ................. v

Daftar Singkatan ............................................... ........................................................ .......vi

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km

dan Vmax: ikhtisar............................................................ ........................................................ .... 7

Abstrak................................................. ........................................................ ........................ 7

1. Perkenalan ............................................... ........................................................ ................ 8

1.1 Penggunaan alfa amilase untuk industri............................................ ................................. 10

1.2 Kimia klinis dan pentingnya ............................................................ ......................... 10

1.3 Tujuan ........................................................ ........................................................ .......... 11

2. Tinjauan Pustaka.................................................. ........................................................ ..... 12

2.1 Alfa amilase saliva .................................................. ........................................ 12

2.2 Uji alfa amilase .................................................. ................................................... 14

3. Hipotesis ................................................................... ........................................................ ............... 16

4. Bahan dan Metode............................................................. ................................................... 16

4.1 Wilayah studi............................................................... ........................................................ ........... 16

4.2 Pengumpulan sampel............................................................... ........................................................ 17

4.3 Reagen................................................................ ........................................................ ............ 17

4.4 Prosedur pengujian ................................................................... ........................................................ .18

4.5 Analisis statistik............................................................... ................................................... 20

5. Hasil dan Pembahasan ............................................................ ........................................................ 29

6. Kesimpulan........................................................ ........................................................ ............... 31

Ucapan Terima Kasih ................................................................... ........................................................ .... 31

Referensi................................................. ........................................................ .................. 32

aku aku aku

Machine Translated by Google

Tabel gambar

Tabel gambar

Gambar 1. Hubungan tulang punggung gula. Sumber foto: Wikipedia. ............................... 21

Gambar 2. Deskripsi kelenjar ludah pada mulut manusia. Sumber foto:

Wikipedia............................................................ ........................................................ .................. 21

Gambar 3. Deskripsi graf standar maltosa........................................ .... 22

iv
Machine Translated by Google

Meja meja

Meja meja

Tabel 1. Protokol untuk pembuatan graf standar maltosa ........................ 23

Tabel 2. Protokol penentuan Km dan Vmax amilase saliva.......... 24

Tabel 3. Aktivitas - Amilase saliva dirangsang oleh suhu yang berbeda............ 25

Tabel 4. Aktivitas - Amilase saliva dirangsang oleh rasa yang berbeda. ........................ 26

Tabel 5. Rata-rata sampel dan Standar deviasi Km untuk sampel yang berbeda dari
amilase saliva................................ ........................................................ .................... 27

Tabel 6. Sampel mean dan Standar deviasi dari Vmax untuk sampel yang
berbeda dari salivary-amilase. ........................................................ ................................. 28

v
Machine Translated by Google

Daftar Singkatan

Daftar Singkatan

% : Persentase
°C : Derajat Celsius
B : Kosong

DNS : 3, asam 5-dinitrosalisilat

EB : Enzim kosong
EC : Komisi enzim
EDTA : Asam etilendiamin tetraasetat
G : gram
IU : Satuan Internasional

km : Konstanta kinetik
L : liter
M : Molar
mg : miligram
ml : Mililiter
mM : Milimol
n : Normalitas
NaCl : Natrium klorida
NS : Nelson-Somogyi
SB : Substrat kosong

SD : Standar deviasi
T : Uji

Vmax : Kecepatan reaksi maksimum

g : Mikrogram
l : Mikroliter
M : Mikromol

vi
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax: gambaran
umum

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan

mengacu pada Km dan Vmax: gambaran umum

Prem Jose Vazhacharikal1 *, Sajeshkumar N.K1 , Jiby John Mathew1 dan Twinkle Jose1

* premjosev@gmailcom

1Departemen Bioteknologi, Mar Augusthinose College, Ramapuram, Kerala, India-686576

Abstrak
Amilase adalah enzim yang mengkatalisis hidrolisis ikatan (1, 4)-glikosidik dalam amilosa (bentuk linier pati),

amilopektin (bentuk bercabang pati) dan glikogen menjadi

molekul karbohidrat sederhana seperti oligosakarida atau disakarida. alfa-amilase

adalah bentuk utama amilase yang ditemukan pada manusia, paling menonjol dalam jus pankreas dan

air liur. Amilase saliva adalah enzim amilolitik, yang dapat bekerja pada makanan yang dimasak atau direbus

pati dan mengubahnya menjadi maltosa. Sehingga menjadi menarik untuk mempelajari perilaku

amilase saliva, ketika disekresikan sebagai hasil dari rangsangan yang berbeda. Dan dengan demikian mulai belajar

efek dari lima suhu stimulasi yang berbeda, dan juga efek dari empat rasa pada

perilaku amilase saliva. Untuk mempelajari efek stimulasi suhu pada saliva

amilase, lima suhu yang berbeda dipilih (4, 27, 37, 55 dan 75 ° C). Dan juga empat

rasa juga dipilih (manis, asam, asin dan pahit). Metode DNS dilakukan di keduanya

tes untuk mendapatkan absorbansi pada 520 nm. Sampel diambil dari tiga orang, yaitu:

sebaya. Air liur dikumpulkan pada saat yang sama, setelah satu setengah jam sarapan mereka

untuk menjaga kondisi terkontrol untuk penelitian ini. Dalam setiap kasus inkubasi

suhu juga disimpan sebagai variabel (4, 27, 37, 55 dan 75 ° C). Penelitian ini juga bertujuan untuk

menentukan perilaku amilase saliva dengan mengacu pada parameter kinetik seperti Km dan Vmax alfa

amilase saliva dengan menginkubasi enzim (dirangsang oleh berbagai

kondisi stimulasi suhu dan rasa) dengan berbagai konsentrasi substrat. Itu

Studi mengungkapkan konsistensi dalam parameter kinetik seperti Km dan Vmax dari alpha amilase saliva yang

disekresikan sebagai respons terhadap berbagai rangsangan.

Kata kunci: Amilase; Vmaks; km; 3, metode asam 5-dinitrosalisilat; Lingkungan.

7
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

1. Perkenalan
Amilase - salah satu dari kelompok enzim amilolitik yang mengkatalisis hidrolisis
pati menjadi molekul karbohidrat yang lebih sederhana. Ada tiga bentuk amilase:
enzim. -amilase EC 3.2.1.1 terjadi pada air liur, jus pankreas, malt, dan
bakteri tertentu. Itu juga hadir dalam biji yang mengandung pati sebagai cadangan makanan, dan
disekresikan oleh banyak jamur. Ini mengkatalisis hidrolisis ikatan alfa besar, alpha
polisakarida terkait, seperti pati dan glikogen, menghasilkan glukosa dan maltosa.
-amilase EC 3.2.1.1 terjadi pada biji-bijian, sayuran, malt, dan bakteri, adalah
terlibat dalam hidrolisis pati menjadi maltosa. Namun semua amilase adalah hidrolase glikosida
dan bekerja pada ikatan -1, 4-glikosidik.
Alfa-amilase adalah bentuk utama amilase yang ditemukan pada manusia dan mamalia lainnya.
Meskipun ditemukan di banyak jaringan, amilase paling menonjol dalam jus pankreas dan
air liur. Masing-masing memiliki isoform -amilase manusia sendiri. Mereka berperilaku
berbeda pada pemfokusan isoelektrik, dan juga dapat dipisahkan dalam pengujian dengan menggunakan

antibodi monoklonal spesifik. Pada manusia, semua isoform amilase terhubung ke

kromosom1p21 (Mandel et al., 2010) Alpha-amilase adalah salah satu protein utama
komponen air liur. Di antara protein lain, alfa-amilase disintesis dan
disekresikan oleh sel asinar, setelah stimulasi neurotransmiter (Baum, 1993). asinar
Sel-sel dipersarafi oleh cabang simpatis dan parasimpatis dari sistem saraf otonom
sistem saraf (Emmelin et al., 1981).
Fungsi utama alfa-amilase saliva adalah pencernaan enzimatik pati menjadi
maltosa dan dekstrin. Bentuk amilase ini juga disebut "ptyalin". Ptyalin bekerja pada ikatan
glikosidik (1, 4) linier dan, itu akan memecah molekul pati yang besar dan tidak larut
menjadi pati larut (amilodekstrin, eritrodekstrin, dan akrodekstrin) menghasilkan
pati berturut-turut lebih kecil dan akhirnya maltosa. Amilase saliva tidak aktif
di lambung oleh asam lambung. Dalam jus lambung yang disesuaikan dengan pH 3,3, ptyalin benar-benar

dinonaktifkan dalam 20 menit pada 37°C. Sebaliknya, 50% aktivitas amilase tetap ada setelahnya
150 menit paparan jus lambung pada pH 4,3 (Fried et al., 1987). Itu juga
penting untuk kekebalan mukosa di rongga mulut, karena menghambat kepatuhan dan
pertumbuhan bakteri (Bosch et al., 2002).
Gen amilase saliva telah mengalami duplikasi selama evolusi, dan DNA
studi hibridisasi menunjukkan banyak individu memiliki beberapa pengulangan tandem dari
gen. Jumlah salinan gen berkorelasi dengan tingkat amilase saliva, sebagai
8
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

diukur dengan tes protein blot menggunakan antibodi terhadap amilase manusia. salinan gen

Jumlah ini dikaitkan dengan paparan evolusioner yang jelas terhadap diet tinggi pati. Untuk

contoh, seorang individu Jepang memiliki 14 salinan gen amilase (satu alel dengan

10 salinan, dan alel kedua dengan empat salinan). Diet Jepang secara tradisional

mengandung pati beras dalam jumlah besar. Sebaliknya, seorang individu Biaka membawa enam

salinan (tiga salinan pada setiap alel). Biaka adalah pemburu-pengumpul hutan hujan yang

secara tradisional mengkonsumsi diet rendah pati. Jadi variasi asupan pati

berkorelasi dengan jumlah salinan gen amilase saliva dan amilase

air liur pada populasi manusia. Peningkatan jumlah salinan gen amilase saliva

mungkin telah meningkatkan kelangsungan hidup bertepatan dengan pergeseran ke diet bertepung selama manusia

evolusi (Perry et al., 2007).

Pankreas juga membuat amilase (alfa amilase) untuk menghidrolisis pati makanan menjadi

disakarida dan trisakarida yang diubah oleh enzim lain menjadi glukosa

untuk memasok tubuh dengan energi. -amilase pankreas secara acak memotong (1-4)

ikatan glikosidik amilosa untuk menghasilkan dekstrin, maltosa, atau maltotriosa. Ini mengadopsi

mekanisme perpindahan ganda dengan retensi konfigurasi. Gen yang

bertanggung jawab untuk produksi amilase alfa saliva adalah AMY1A, AMY1B dan

AMY1C. Gen yang bertanggung jawab untuk produksi amilase pankreas adalah AMY2A

dan AMY2B (Perry et al., 2007).

Bentuk lain dari amilase, -amilase (EC 3.2.1.2) (nama alternatif: 1, 4-ÿ-D

glukan maltohidrolase; glikogenase; sakarogen amilase) juga disintesis oleh

bakteri, jamur, dan tumbuhan. Bekerja dari ujung non-pereduksi, -amilase mengkatalisis hidrolisis

ikatan -1, 4 glikosidik kedua, memotong dua unit glukosa

(maltosa) pada suatu waktu. Selama pematangan buah, -amilase memecah pati menjadi

maltosa, menghasilkan rasa manis dari buah matang.

Baik -amilase dan -amilase hadir dalam biji; -amilase hadir dalam

bentuk tidak aktif sebelum perkecambahan, sedangkan -amilase dan protease muncul sekali

perkecambahan telah dimulai. Amilase biji-bijian sereal adalah kunci untuk produksi malt. Banyak

mikroba juga menghasilkan amilase untuk mendegradasi pati ekstraseluler. Jaringan hewan lakukan

tidak mengandung -amilase, meskipun mungkin ada dalam mikroorganisme yang terkandung

dalam saluran pencernaan. PH optimum untuk -amilase adalah 4,0-5,0.

Gamma-Amylase (EC 3.2.1.3 ) (nama alternatif: Glukan 1, 4-ÿ-glukosidase;

amiloglukosidase; Exo-1, 4-ÿ-glukosidase; glukoamilase; 9 1, 4-ÿ-D-

Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

glucanglucohydrolase) akan memotong ikatan (1-6) glikosidik, serta terakhir (1-

4) ikatan glikosidik pada ujung amilosa dan amilopektin yang tidak mereduksi, menghasilkan

glukosa. -amilase memiliki pH optimum paling asam karena paling aktif

sekitar pH3.

1.1 Penggunaan alfa amilase untuk industri

Amilase alfa dan beta penting dalam pembuatan bir dan minuman keras yang terbuat dari gula

berasal dari pati. Dalam fermentasi, ragi mencerna gula dan mengeluarkan alkohol. Di dalam

bir dan beberapa minuman keras, gula yang ada pada awal fermentasi telah

diproduksi dengan menumbuk biji-bijian atau sumber pati lainnya (kentang). Dalam bir tradisional

pembuatan bir, jelai malt dicampur dengan air panas untuk membuat "mash", yang diadakan di a

suhu yang diberikan untuk memungkinkan amilase dalam biji-bijian malt untuk mengubah barley's

pati menjadi gula. Suhu yang berbeda mengoptimalkan aktivitas alfa atau beta

amilase, menghasilkan campuran yang berbeda dari gula yang dapat difermentasi dan yang tidak dapat difermentasi. Di dalam

memilih suhu tumbuk dan rasio butir-ke-air, pembuat bir dapat mengubah

kandungan alkohol, rasa di mulut, aroma, dan rasa dari bir yang sudah jadi.

Alpha-Amylase digunakan dalam produksi etanol untuk memecah pati dalam biji-bijian menjadi

gula yang dapat difermentasi. Langkah pertama dalam produksi sirup jagung fruktosa tinggi adalah

pengobatan tepung jagung dengan -amilase, menghasilkan rantai gula yang lebih pendek yang disebut

oligosakarida. Sebuah -amilase yang disebut "Termamyl", bersumber dari Bacillus

licheniformis, juga digunakan dalam beberapa deterjen, terutama pencuci piring dan pati

menghilangkan deterjen.

1.2 Kimia klinis dan pentingnya

Pengukuran aktivitas -amilase serum merupakan tes diagnostik yang penting untuk

pankreatitis dan serangan akut pankreatitis kronis. Laboratorium medis akan

biasanya mengukur baik amilase pankreas atau amilase total. Tes untuk amilase adalah

lebih mudah dilakukan daripada lipase, menjadikannya tes utama yang digunakan untuk mendeteksi dan

memantau pankreatitis. Amilase diukur pada Poin dengan dugaan pankreatitis; serum

dan kadar urin mencapai puncaknya 4-8 jam setelah timbulnya pankreatitis akut, dan menjadi normal dalam waktu

48-72 jam; parotitis akibat gondok atau terapi radiasi juga meningkatkan amilase serum;

dalam kasus peningkatan amilase serum tanpa pankreatitis atau parotitis, memerlukan:

kuantifikasi isoenzim amilase Rentang referensi Bervariasi menurut laboratorium; 25-90 U/L,

serum; 4-30 U/2 jam, urin; amilase meningkat pada pankreatitis akut, obstruksi

saluran empedu umum, saluran pankreas atau ampula Vater, cedera pankreas dari 10
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

ulkus peptikum perforasi dan penyakit kelenjar ludah akut. Amilase menurun pada

pankreatitis kronis, CA pankreas, sirosis, hepatitis dan eklampsia.

Dalam biologi molekuler, keberadaan amilase dapat berfungsi sebagai metode tambahan untuk

memilih untuk integrasi yang sukses dari konstruksi reporter selain antibiotik

perlawanan. Karena gen reporter diapit oleh daerah homolog dari struktur

gen untuk amilase, integrasi yang berhasil akan mengganggu gen amilase dan mencegah

degradasi pati, yang mudah dideteksi melalui pewarnaan yodium.

-amilase saliva telah digunakan sebagai biomarker untuk stres yang tidak memerlukan a

pengambilan darah (Noto et al., 2005). Studi sebelumnya mengungkapkan bahwa peningkatan yang nyata

dalam alfa-amilase saliva setelah stres psikososial atau tergantung stres

aktivasi alfa-amilase saliva (Kirschbaum et al., 1994). Riset terbaru

menunjukkan bahwa alfa-amilase terkait dengan emosi dan kesehatan kita. Dalam pertumbuhan

bidang penelitian amilase, penelitian terbaru telah menggarisbawahi kegunaan

saliva alpha-amilase dalam hal ini. Namun, beberapa masalah metodologis harus

diselesaikan untuk mengintegrasikan pengukuran alfa-amilase saliva sebagai

alat standar ke dalam penelitian psiko-fisiologis (Rohleder et al., 2006).

1.3 Tujuan

Tujuan dari penelitian ini adalah Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui apakah atau

tidak pengaruh suhu stimulasi yang berbeda dan rasa berkorelasi dengan

aktivitas enzim amilase dan dipelajari oleh hidrolisis pati oleh saliva

amilase dalam berbagai kondisi stimulasi (suhu dan rasa). Aktivitas

amilase saliva ditentukan dengan metode DNS (Bernfeld, 1955). Itu

absorbansi yang terbaca pada aktivitas 520 nm pada berbagai kondisi dihitung dari

absorbansi menggunakan grafik standar maltosa.

Penelitian ini juga bertujuan untuk mengetahui Km dan Vmax alfa amilase saliva

dengan menginkubasi enzim (dirangsang oleh kondisi stimulasi yang berbeda dari

suhu dan rasa) dengan berbagai konsentrasi substrat. Dan tiga inkubasi

suhu (27°C, 37°C, dan 55°C) diatur untuk setiap rangkaian reaksi di mana

Sekresi alfa amilase saliva dirangsang sebagai respons terhadap stimulasi yang berbeda

kondisi. Dengan menganalisis nilai Vmax dan Km yang diperoleh, dimungkinkan untuk

memahami kecepatan konversi substrat oleh amilase saliva pada berbagai

kondisi reaksi dan juga afinitas enzim dengan substratnya di bawah

berbagai kondisi reaksi.
11
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Dan dengan demikian menganalisis perilaku alfa amilase saliva yang disekresikan sebagai respons terhadap

berbagai jenis rangsangan memiliki perubahan perilaku ketika mengalami perubahan yang berbeda

lingkungan reaksi (suhu).

Ruang lingkup penelitian ini adalah untuk memberikan, informasi dasar tentang kinetika

parameter seperti Vmax dan Km amilase alfa saliva yang disekresikan sebagai respons terhadap

berbagai rangsangan di bawah lingkungan reaksi yang berbeda, untuk pengembangan enzim

sistem in vitro untuk berbagai aplikasi penelitian dan kepentingan komersial di

masa depan.

2. Tinjauan literatur

2.1 Saliva alfa amilase

Amilase adalah enzim yang bergantung pada kalsium yang menghidrolisis karbohidrat kompleks

pada ikatan (1, 4)-glikosidik untuk membentuk maltosa dan glukosa. Amilase adalah yang utama

komponen air liur manusia, berperan dalam pencernaan awal pati. Makanan yang

mengandung banyak pati tetapi sedikit gula, seperti nasi dan kentang, rasanya agak manis

mereka dikunyah karena amilase mengubah sebagian pati mereka menjadi gula di

mulut. Ini mungkin juga terlibat dalam kolonisasi bakteri yang terlibat dalam penyakit gigi awal

pembentukan plak. Amilase saliva juga memiliki tempat yang cocok untuk mengikat

permukaan email dan menyediakan tempat potensial untuk pengikatan adhesin bakteri.

Pankreas juga membuat amilase (alfa amilase) untuk menghidrolisis pati makanan menjadi

disakarida dan trisakarida yang diubah oleh enzim lain menjadi glukosa

untuk memasok tubuh dengan energi. Lebih mengejutkan lagi, -amilase juga ditemukan dalam darah,

keringat dan air mata, mungkin untuk aktivitas anti-bakteri Tumbuhan dan beberapa bakteri juga

menghasilkan amilase. Protein amilase spesifik (isoform enzim) ditunjuk oleh:

huruf Yunani yang berbeda (ÿ, , –amilase). Semua amilase adalah glikosida hidrolase dan

bekerja pada ikatan -1, 4-glikosidik.

-amilase (EC 3.2.1.1) (nama alternatif: 1, 4-ÿ-D-glukan glukanohidrolase; glikogenase) adalah metalloenzim

kalsium, sama sekali tidak dapat berfungsi dalam

tidak adanya kalsium. Dengan bertindak di lokasi acak di sepanjang rantai pati, -amilase

memecah karbohidrat rantai panjang, akhirnya menghasilkan maltotriosa dan maltosa

dari amilosa, atau maltosa, glukosa dan "batas dekstrin" (oligo sakarida) dari

amilopektin. Karena dapat bekerja di mana saja pada substrat, -amilase cenderung

12
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

bekerja lebih cepat daripada -amilase. Pada hewan, ini adalah enzim pencernaan utama, dan

pH optimum adalah 6,7-7,0.

Secara in vitro, -Amylase juga mampu menghidrolisis ikatan (1,4) dalam glikogen, tetapi memiliki

tidak ada aktivitas pada hubungan (1,6) yang bertanggung jawab atas struktur yang lebih bercabang

dari glikogen. Struktur bercabang ini juga mengurangi aktivitas -Amylase

menuju glikogen dengan membatasi aksesibilitas target ikatan (1, 4)-glukan.

Jumlah amilase yang ada dalam air liur bervariasi dengan komposisi makanan dan

hadir dalam jumlah terbesar ketika diet mengandung sejumlah besar

karbohidrat yang dihidrolisis oleh enzim ini. Tingkat amilase saliva

ditemukan dalam garis keturunan manusia enam sampai delapan kali lebih tinggi pada manusia daripada di

simpanse, yang sebagian besar pemakan buah dan menelan sedikit pati dibandingkan dengan manusia.

Enzim pertama yang ditemui makanan di mulut kita disebut amilase saliva. Dia

dilepaskan oleh kelenjar ludah dan merupakan enzim yang paling melimpah dalam air liur

(Ramasubbu et al., 1996). Ada tiga pasang utama kelenjar ludah - parotis

kelenjar, kelenjar submandibular (juga disebut kelenjar submaxillary) dan

kelenjar sublingual. Selain itu, ada antara enam ratus dan seribu anak di bawah umur

kelenjar ludah yang terletak di mulut, tenggorokan dan bibir.

Kelenjar parotis adalah kelenjar ludah terbesar. Satu kelenjar parotis terletak di

setiap pipi, di depan telinga. Kelenjar parotis menghasilkan cairan encer yang mengandung

protein. Kedua kelenjar submandibular (atau kelenjar submaxillary) terletak di bawah

dasar mulut. Kelenjar ini menghasilkan cairan yang merupakan campuran air dan lendir. Kedua kelenjar

sublingual terletak di bawah lidah, di depan

kelenjar submandibular, menghasilkan cairan yang mengandung lebih banyak lendir daripada

sekresi kelenjar ludah lainnya. Air liur meninggalkan kelenjar dalam tabung yang disebut

saluran air liur. Lebih banyak air liur dibuat ketika mulut mengandung pedas, asam atau asam
13
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

makanan. Ketika indera perasa dirangsang oleh bahan kimia ini, mereka memicu pelepasan
air liur.

Air liur adalah cairan kental, tidak berwarna dan berkilau yang terdiri dari sekitar 98% hingga 99% air.

Ini membunuh bakteri, membantu mencegah kerusakan gigi, memulai pencernaan makanan, membantu

berbicara dan membantu menelan makanan juga. Air liur juga mengandung banyak bahan kimia

air, termasuk lendir, garam, zat antibakteri (lisozim, laktoferin,

peroksidase dan imunoglobulin A), enzim, protein lain, dan agen penyangga

(Sodium bicarbonate) untuk menjaga pH pada tingkat yang benar di dalam mulut. Juga

mengandung sel bakteri, karena bakteri hidup di mulut kita, dan sel manusia ditumpahkan oleh

lapisan mulut, lidah dan gusi. Kelenjar ludah umumnya

membuat antara satu dan dua liter cairan sehari (antara dua dan empat liter). Selama

seumur hidup rata-rata mereka menghasilkan sekitar 10.000 galon air liur. Air liur dilepaskan

terus menerus dari kelenjar ludah, meskipun jumlahnya bervariasi pada siang hari.

Kuantitas meningkat ketika rasa, bau atau bahkan memikirkan makanan, serta ketika kita

makan jenis makanan tertentu, tetapi berkurang selama waktu tidur.

Air liur mengandung enzim yang disebut amilase saliva atau ptyalin, yang mencerna pati

menjadi gula yang disebut maltosa. (Maltosa kemudian dipecah menjadi molekul glukosa di

usus halus). Saat mengunyah, gigi memecah makanan menjadi lebih kecil secara fisik

potongan-potongan yang dapat ditindaklanjuti oleh enzim pencernaan. Enzim pertama yang menjadi makanan

pertemuan di mulut kita disebut amilase saliva. Ini dilepaskan oleh air liur kita

kelenjar dan merupakan enzim yang paling melimpah dalam air liur kita (Ramasubbu et. al, 1996).

2.2 Uji alfa amilase

Beberapa metode tersedia untuk penentuan aktivitas -amilase, dan

industri cenderung mengandalkan metode yang berbeda. Uji iodium pati, pengembangan dari

tes yodium, didasarkan pada perubahan warna, karena -amilase mendegradasi pati dan

umum digunakan dalam banyak aplikasi. Tes serupa tetapi diproduksi secara industri adalah

Uji amilase Phadebas, yang digunakan sebagai uji kualitatif dan kuantitatif dalam

banyak industri, seperti deterjen, berbagai tepung, biji-bijian, dan makanan malt, dan

biologi forensik. Nelson-Somogyi (NS) dan 3, 5-dinitrosalicylic acid (DNS)

tes untuk gula pereduksi banyak digunakan dalam pengukuran karbohidrase

aktivitas melawan polisakarida yang berbeda.

14
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Maltosa dapat digunakan sebagai standar untuk memperkirakan gula pereduksi yang tidak diketahui

sampel. Membangun kurva / grafik standar untuk maltosa membantu kita memperkirakan

konsentrasi gula pereduksi yang ada dalam sampel yang tidak diketahui dan untuk menentukan

aktivitas enzim amilase dalam percobaan yang akan datang. Kurva standar untuk

maltosa biasanya dibangun menggunakan DNS sebagai reagen. Maltosa mengurangi pucat

basa berwarna kuning 3, 5-Dinitro salicylic acid (DNS) hingga berwarna orange-merah,

3 amino, 5 nitro asam salisilat.

Aktivitas sakarolitik alfa -amilase diukur dengan metode DNS

(Bernfeld, 1955). Asam 3, 5-Dinitrosalicylic (DNS atau DNSA, nama IUPAC 2-

hidroksi-3, asam 5-dinitrobenzoat) adalah senyawa aromatik yang bereaksi dengan pereduksi

gula dan molekul pereduksi lainnya untuk membentuk asam 3-amino-5-nitrosalisilat, yang

menyerap cahaya dengan kuat pada 540 nm. Prosedur DNS menggunakan 1% pati larut sebagai

substrat.100 l enzim diinkubasi selama 30 menit pada suhu 37°C dengan 2,5ml

buffer fosfat (0,02 M, pH 7,1) dan 2,5 ml pati larut. Kosong tanpa

substrat tetapi dengan ekstrak -amilase dan kontrol yang tidak mengandung ekstrak -amilase

tetapi dengan substrat dijalankan bersamaan dengan campuran reaksi. Reaksinya

dihentikan dengan penambahan 0,5 ml DNS dan dipanaskan dalam air mendidih selama 5 menit sebelumnya

untuk membaca absorbansi pada 540 nm. Satu unit aktivitas -amilase didefinisikan sebagai

jumlah enzim yang diperlukan untuk menghasilkan 1 mg maltosa dalam 30 menit pada 37 °C.

Kurva standar absorbansi terhadap jumlah maltosa yang dilepaskan adalah

dibangun untuk memungkinkan perhitungan jumlah maltosa yang dilepaskan selama

tes amilase. Aktivitas amilase dapat didefinisikan dalam satuan internasional (IUB) dari

mikromol produk/menit per liter air liur. Ini pertama kali diperkenalkan sebagai metode untuk

mendeteksi zat pereduksi dalam urin dan sejak itu telah banyak digunakan, misalnya,

untuk mengukur kadar karbohidrat dalam darah. Ini terutama digunakan dalam pengujian alfa amilase.

Namun, metode enzimatik biasanya lebih disukai karena kurangnya DNS

kekhususan (Miller, 1959).

Kajian tentang aktivitas amilase saliva, peran dan konsentrasinya dalam saliva

sekarang hari banyak dikenakan berbagai bidang studi dan penelitian bekerja.

Amilase saliva sekarang digunakan sebagai biomarker untuk stres. konsentrasinya

variasi dalam air liur dianggap sebagai kondisi penyakit. Sejumlah besar studi

15
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

dilaporkan tentang amilase saliva hari demi hari. Dan kebanyakan dari mereka adalah tentang

hubungan antara stres dan peningkatan konsentrasi amilase saliva. 'Itu

peningkatan stres psikososial dalam alpha-amilase saliva tidak tergantung pada
Laju aliran saliva adalah salah satu jenis penelitian yang dilakukan oleh Rohleder et al. (2006) dan
Kirschbaum dkk. (1994). Mereka melaporkan bahwa laju aliran bukanlah pembaur stres
menginduksi aktivasi amilase saliva.

Mehrabadi dan Bandani (2009) menguji aktivitas -Amylase berdasarkan Bernfeld

metode dengan prosedur DNS. Aktivitas -amilase pada kelenjar ludah adalah
0,050 U/serangga. pH dan suhu optimum untuk aktivitas enzim adalah
ditentukan menjadi 6,5-7 dan 30-35ºC, masing-masing. Aktivitas enzim terhambat
dengan penambahan EDTA (Ethylenediamine tetraacetic acid) urea, CaCl2, MgCl2 dan SDS
tetapi Mg2+, NaCl dan KCl meningkatkan aktivitas enzim.

Ramasubbu dkk. (1996) menyimpulkan bahwa residu aromatik di sekitar senyawa aktif
situs -amilase saliva manusia memainkan peran penting dalam pengikatan substrat, enzim
aktivitas dan katalisis. Perry dkk. (2007), melakukan penelitian tentang 'Diet and the evolution of
variasi nomor salinan gen amilase manusia' Mereka menemukan nomor salinan
Gen amilase saliva (AMY1) berkorelasi positif dengan protein amilase saliva

tingkat dan bahwa individu dari populasi dengan diet tinggi pati memiliki, rata-rata,
lebih banyak salinan AMY1 dibandingkan dengan diet tradisional rendah pati.

3. Hipotesis
Pekerjaan penelitian saat ini didasarkan pada hipotesis berikut:
1) Suhu dan rangsangan lingkungan mempengaruhi aktivitas saliva

amilase.
2) Nilai Vmax dan Km amilase saliva bervariasi dengan stimulus.

4. Bahan dan Metode

4.1 Wilayah studi

Negara bagian Kerala meliputi area seluas 38.863 km2 dengan kepadatan penduduk 859 per km2

dan tersebar di 14 kecamatan. Iklim dicirikan oleh tropis basah dan kering
dengan curah hujan tahunan rata-rata sebesar 2.817 ± 406 mm dan rata-rata tahunan
suhu 26,8°C (rata-rata dari 1871-2005; Krishnakumar et al., 2009).

16
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Curah hujan maksimum terjadi dari Juni hingga September terutama karena Barat Daya

Musim hujan dan suhu tertinggi terjadi pada bulan Mei dan November.

4.2 Koleksi sampel

Sampel dikumpulkan dari tiga individu sehat dengan usia yang sama. Itu

sampel dikumpulkan setelah satu setengah jam, selama asupan makanan. sampel

dikumpulkan dengan memberikan kondisi stimulasi masing-masing (suhu dan rasa).

Sebelum mengumpulkan sampel, satu menit diperbolehkan untuk mengeluarkan air liur sebagai respons terhadap:

kondisi stimulasi yang diberikan. Kemudian segera keluarkan zat perangsang

dan air liur dikumpulkan dengan mencampurkan dengan 2 ml air suling pada saat

air liur. Kemudian sampel 2ml ini dicampur dengan 23 ml air suling, sehingga dibuat a

1/25 sampel pengenceran. Untuk suhu sebagai kondisi stimulasi, 2ml

air suling dengan derajat suhu masing-masing diberikan ke dalam mulut, dan

sampel dikumpulkan segera setelah satu menit dari rangsangan yang diberikan. Dan ini 2

ml sampel dicampur dengan 23 ml air suling, dan dengan demikian membuat pengenceran 1/25

sampel yang digunakan untuk uji enzim.

4.3 Reagen

4.3.1 Buffer Fosfat (0,2 M; pH-7)

Solusi A: Siapkan 31,2 gram Dihidrogen natrium fosfat (156,1 MW) dalam 1000
ml air suling.

Solusi B: Siapkan 28,392 gram Dinatrium hidrogen fosfat (102 MW) dalam 1000
ml air suling.

Penyangga kerja: Dibuat dengan mencampurkan 170 ml larutan A dengan 152,2 ml larutan B,

(pH.7).

4.3.2 Larutan standar maltosa

Siapkan 100 mg larutan maltosa dalam labu standar dan dicukupkan hingga 100 ml dengan

air suling (1 mg/ml).

4.3.3 Reagen DNS

Siapkan 1 gram asam 3, 5-dinitrosalisilat (DNS) dalam 30 gram natrium kalium

tartarat dan dilarutkan dalam 20 ml NaOH 2N. Solusi ini dibuat hingga 100ml
dengan air suling dan disimpan dalam botol berwarna kuning.

17
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

4.3.4 1% larutan kanji

Siapkan 1 gram pati dalam 100 ml air suling, dan larutkan larutan dengan pemanasan.

4.3.5 1% larutan NaCl

Siapkan 1 gram NaCl dalam 100 ml air suling, dan larutkan larutan dengan cara diaduk.

4.3.6 NaOH 2N
Siapkan 8 gram NaCl dalam 100 ml air suling, dan larutkan larutan dengan cara diaduk.

4.3.7 Solusi enzim

Disiapkan dengan mengambil 2 ml air suling ke dalam mulut dan tunggu selama 1 menit kemudian
campurkan 2 ml saliva ini dengan 23 ml akuades dan disimpan dalam keadaan dingin.

4.4 Prosedur pengujian

4.4.1 Pembuatan grafik standar maltosa

1. Pipet larutan maltosa standar dalam kisaran 0,6, 1,2, 1,8, 2,4 dan 3 ml,

ke dalam 5 tabung reaksi terpisah.

2. Tabung reaksi yang berisi larutan blanko juga disiapkan.

3. Dengan menggunakan aquades, ditepatkan volumenya hingga 3 ml pada masing-masing tabung reaksi, termasuk:

tabung reaksi yang berisi larutan blanko.

4. Tambahkan 3 ml reagen DNS ke setiap tabung dan tutup tabung reaksi dengan aluminium
menggagalkan.

5. Panaskan isi tabung reaksi dalam penangas air mendidih selama 10 menit.

6. Dinginkan tabung reaksi hingga suhu kamar, setelah mengeluarkannya dari air
mandi.

7. Kemudian tambahkan 1 ml air suling ke masing-masing tabung reaksi dan aduk rata.

8. Ambil 3 ml dari masing-masing tabung reaksi ke dalam kuvet yang berbeda dan masukkan masing-masing kuvet ke dalam

kolorimeter dan catat intensitas warna merah jingga tua pada 520 nm as
'penyerapan' atau OD.

9. Buatlah grafik dengan jumlah maltosa pada sumbu X Vs OD pada 520 nm pada sumbu Y.

4.4.2 Uji –amilase

1. Siapkan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, beri label blanko 'B', blanko enzim 'EB',
substrat kosong 'SB' dan uji 'T'.

2. Pipet 2,5 ml buffer fosfat 0,2M (pH 7,0) ke dalam semua tabung reaksi.

18
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

3. Tambahkan 2,5 ml larutan kanji 1% ke tabung reaksi berlabel 'EB' dan 'T' dan campur

dengan baik.

4. Tambahkan 1 ml larutan NaCl 1% ke keempat tabung, aduk rata, lalu inkubasi

semua tabung pada suhu kamar selama 5 menit.

5. Pipet 2,5 ml air suling ke tabung reaksi berlabel 'B' dan 'SB'.
6. Tambahkan 0,1 ml saliva encer ke dalam tabung berlabel 'SB' dan 'T' dan aduk rata.

7. Kemudian tambahkan 0,1 ml air suling ke dalam tabung reaksi berlabel 'B' dan 'EB', aduk rata

dan inkubasi pada suhu 37ÿC selama 15 menit dalam penangas air.

8. Tambahkan 0,5 ml NaOH 2N ke semua tabung, setelah dikeluarkan dari penangas air
dan aduk rata.

9. Kemudian tambahkan 0,5 ml DNS ke semua tabung, aduk rata dan inkubasi sampai mendidih

penangas air selama 5 menit. Dinginkan tabung reaksi sampai suhu kamar, setelah diminum
keluar dari bak air.

10. Ambil 3 ml dari masing-masing tabung reaksi ke dalam kuvet yang berbeda dan masukkan masing-masing kuvet ke dalam

kolorimeter dan catat intensitas warna merah jingga tua pada 520 nm as

'absorbansi' atau OD dan aktivitas amilase saliva dihitung.

Konsentrasi maltosa (dalam mol) yang dibebaskan dihitung dengan menggunakan rumus;

berat dalam gram/ml × volume yang diambil × 10ÿÿ

Mol maltosa =
Berat molekul maltosa

4.4.3 Penentuan nilai Km

1. Siapkan dua belas – bersihkan dan keringkan tabung reaksi dan beri label sebagai

T1,C1,T2,C2,T3,C3,T4,C4,

T5, C5 dan T6, C6.

2. Tabung reaksi yang berisi larutan blanko juga disiapkan.

3. 0,5 ml larutan substrat 0,5%, 1%, 1,5% 2%, 2,5% dan 3% ditambahkan ke dalam

ke T1, C1,T2, C2,T3,C3,T4,C4,T5, C5 dan T6, C6 masing-masing.

4. Tambahkan 1 ml larutan NaCl 1% ke semua tabung, aduk rata, lalu tambahkan 4.ml

buffer fosfat (pH 7.0) ke dalam tabung berlabel kosong 'B'.

5. Pipet keluar 1,5 ml buffer fosfat (pH 7,0) ke T1, C1, T2, C2, T3, C3, T4,

C4, T5, C5 dan T6, C6. Aduk rata dan inkubasi pada suhu 37ÿC selama 5 menit dalam penangas air.
19
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

6. Tambahkan 0,1 ml saliva encer ke dalam tabung berlabel T1,T2, T3, T4, T5 dan T6. Mencampur

dengan baik dan tambahkan 0,1 ml aquades ke dalam C1,C2, C3, C4,C5 dan C6.

7. Pipet 2 ml air suling ke semua tabung reaksi, kecuali blanko. Campur dengan baik
dan inkubasi pada suhu 37ÿC selama 15 menit dalam penangas air.

8. Tambahkan 1 ml NaOH 2N ke dalam semua tabung, setelah dikeluarkan dari penangas air
dan aduk rata.

9. Kemudian tambahkan 1 ml DNS ke semua tabung, aduk rata dan inkubasi sampai mendidih

penangas air selama 5 menit. didinginkan tabung reaksi ke suhu kamar, setelah mengambil
mereka keluar dari bak air.

10.Kerapatan optik diukur pada 520 nm terhadap reagen kosong.

11.Jumlah maltosa yang dibebaskan dihitung dengan menggunakan grafik standar

maltosa.

Kecepatan reaksi pada masing-masing tabung reaksi dihitung dengan menggunakan rumus;

(µÿ)
kecepatan = ÿÿÿÿÿÿÿÿÿÿ ÿÿÿÿ.

4.5 Analisis statistik

Hasil survei dianalisis dan statistik deskriptif dilakukan dengan menggunakan SPSS

12.0 (SPSS Inc., sebuah Perusahaan IBM, Chicago, AS) dan grafik dihasilkan

menggunakan Sigma Plot 7 (Systat Software Inc., Chicago, USA).

20
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Gambar 1. Hubungan tulang punggung gula. Sumber foto: Wikipedia.

Gambar 2. Deskripsi kelenjar ludah pada mulut manusia. Sumber foto: Wikipedia.

21
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Gambar 3. Deskripsi grafik standar maltosa.

22
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Tabel 1. Protokol pembuatan graf standar maltosa

B S1 S2 S3 S4 S5

Volume
standar 0.6 1.2 1.8 2.4 3.0
_

larutan (ml)

Konsentrasi standar

_ 0.6 1.2 1.8 2.4 3.0

larutan (mg/ml)

Volume dari
suling
3.0 2.4 1.8 1.2 0.6 _

air (ml)

Volume DNS (ml)

3 3 3 3 3 3

Aduk rata dan simpan dalam penangas air mendidih selama 10 menit.

Volume sulingan
1 1 1 1 1 1
air (ml)

Kepadatan optik
0 0.32 0,64 0,96 1.28 1.60
pada 520 nm

23
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Tabel 2. Protokol penentuan Km dan Vmax amilase saliva.

Enzim Substrat
Nomor seri Kosong Uji
kosong kosong

0,2 M buffer fosfat

2.5 2.5 2.5 2.5
(ml)

1% Pati (ml) ____ 2.5 ____ 2.5

1% NaCl (ml) 1 1 1 1

Inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit

Air suling (ml) 2.5 ____ 2.5 ____

Air liur encer (ml) ____ ____ 1 1

Air suling (ml) 1 1 ____ ____

Diinkubasi pada Suhu Masing-masing selama 15 menit

2N NaOH (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5

Reagen DNS (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5

Inkubasi pada penangas air mendidih selama 5 menit

OD pada 520 nm ___ ___ ___ ___

24
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Tabel 3. Aktivitas - Amilase saliva dirangsang oleh suhu yang berbeda.

Suhu Stimulasi (ÿC) Suhu

Sampel inkubasi
4 27 37 55 75 (ÿC)

0,0515 0,0509 0,0532 0,0555 0,0491 4

0,0555 0,0480 0,0538 0,0555 0,0509 27

Contoh-1 0,0416 0,0543 0,0520 0,0480 0,0538 37

0,0515 0,0515 0,0532 0,0543 0,0567 55

0,0497 0,0509 0,0515 0,0555 0,0486 75

(nilai
dtk)
mol
-4µ
10
s/

0,0555 0,0462 0,0543 0,0543 0,0497 4

0,0555 0,0538 0,0515 0,0555 0,0503 27

Aktivitas
amilase
murni
dalam
saliva
liur
air
Contoh-2 0,0410 0,0520 0,0526 0,0515 0,0532 37

0,0532 0,0491 0,0503 0,0549 0,0561 55

0,0538 0,0486 0,0532 0,0520 0,0486 75

0,0532 0,0480 0,0555 0,0555 0,0515 4

0,0538 0,0538 0,0543 0,0578 0,0491 27

Contoh-3 0,0410 0,0509 0,0532 0,0509 0,0526 37

0,0503 0,0543 0,0543 0,0543 0,0572 55

0,0549 0,0491 0,0503 0,0538 0,0509 75

25
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Tabel 4. Aktivitas - Amilase saliva dirangsang oleh rasa yang berbeda.

Sampel Stimulasi rasa Inkubasi

Suhu
Garam Manis asam Pahit
(ÿC)

0,0497 0,0538 0,0520 0,0515 27

(nilai
dtk)
mol
-4µ
10
s/ Contoh-1
0,0538 0,0567 0,0555 0,0486 37

0,0526 0,0555 0,0509 0,0538 55

0,0567 0,0555 0,0538 0,0555 27

Aktivitas
amilase
murni
dalam
saliva
liur
air

Contoh-2 0,0543 0,0555 0,0561 0,0486 37

0,0520 0,0538 0,0497 0,0474 55

0,0526 0,0567 0,0532 0,0526 27

Contoh-3 0,0543 0,0538 0,0555 0,0486 37

0,0520 0,0526 0,0520 0,0503 55

26
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Tabel 5. Rata-rata sampel dan Standar deviasi Km untuk sampel yang berbeda dari amilase
saliva.
Nilai Km Sampel Berarti
Standar
Nilai dari
deviasi
Sampel-1 Sampel-2 Sampel-3 sampel

27 0,5 0,52 0,5 0,50 0,01

Suhu
37 0,52 0,52 0,52 0,52 0
(ÿC)

55 0,50 0,47 0,50 0,49 0,01

Garam 0,47 0,50 0,50 0,49 0,01

Manis 0,50 0,50 0,52 0,50 0,01

Rasa
Kecut 0,50 0,55 0,55 0,53 0,02

Pahit 0,50 0,525 0,47 0,51 0,02

27
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Tabel 6. Sampel mean dan Standar deviasi dari Vmax untuk sampel yang berbeda dari salivary-
amilase.

Vmax Sampel Nilai

Standar
rata-rata
deviasi
Sampel-1 Sampel-2 Sampel-3 sampel

27 176 172 176 174.66 2.30

Suhu
37 192 190 192 191.33 1.15
(ÿC)
55 192 192 192 192.00 0

Garam 194 192 192 192,66 1.15

Manis 192 192 196 193.33 2.30

Rasa Kecut 192 190 192 191.33 1.15

Pahit 192 192 190 191.33 1.15

28
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

5. Hasil dan diskusi

Pengaruh suhu dan rasa stimulasi yang berbeda pada sifat kinetik dari

amilase alfa saliva dipelajari dengan tes DNS untuk mengurangi gula yang bereaksi

dengan gula pereduksi dan molekul pereduksi lainnya (yang dihasilkan oleh hidrolisis)

pati oleh amilase saliva di bawah berbagai kondisi stimulasi suhu

dan rasa) untuk membentuk asam 3-amino-5-nitrosalisilat, yang menyerap cahaya dengan kuat pada 520

nm. Analisis perilaku alfa amilase saliva yang disekresikan sebagai respons terhadap

berbagai jenis rangsangan dilakukan dengan dua pengujian. Pengujian pertama melibatkan

penentuan aktivitas amilase saliva yang dirangsang sebagai respons terhadap

rangsangan yang diberikan berbeda. Pengujian selanjutnya adalah menentukan Km dan Vmax dari

enzim dalam kondisi yang sama yang disediakan dalam pengujian pertama dan

perubahan perilaku dianalisis dari hasil yang diperoleh.

Grafik standar diplot menggunakan kerapatan optik yang diperoleh dari pengujian untuk

grafik standar maltosa. Sampel diambil dari tiga orang sehat

individu dengan usia yang sama. Sampel dikumpulkan setelah satu setengah jam

setelah asupan makanan. Pengambilan sampel dilakukan dengan cara memberikan stimulasi masing-masing

kondisi rasa dan suhu, sebelum pengumpulan sampel dan satu menit adalah

diperbolehkan untuk sekresi air liur di mulut sebagai respons terhadap kondisi stimulasi

asalkan. Air liur dikumpulkan ke dalam 2 ml air suling selama air liur. Kemudian

2 ml sampel dicampur dengan 23 ml akuades, sehingga menjadi sampel pengenceran 1/25.

Sampel ini disimpan dalam kondisi dingin dan digunakan untuk pengujian.
Rata-rata sampel dan simpangan baku dalam parameter kinetik seperti Km dan

Vmax amilase saliva, diperoleh pada kondisi stimulasi yang berbeda. Kapan

27ÿC diberikan sebagai stimulus untuk air liur, rata-rata sampel Km adalah 0,5083

mg% dengan standar deviasi 0,0144. Pada percobaan selanjutnya 55ÿC digunakan sebagai

stimulus untuk air liur, dan deviasi yang sama diperoleh, dengan rata-rata sampel

Km 0,491 mg%', bahkan jika Vmax 27ÿC (174,66 ± 2,309 g) menunjukkan besar

perbedaan dari Vmax 55ÿC (192 ± 0 g). Saat membandingkan deviasi Km in

55ÿC dan 27ÿC dengan Km yang diperoleh dari 37ÿC sebagai stimulus untuk air liur, the

simpangan baku Km (0,525 mg%) dengan 37ÿC sebagai stimulus (0) adalah nihil, tetapi Km pada

yang 37ÿC digunakan sebagai stimulus menunjukkan variasi yang besar dari Km di 55ÿC dan 27ÿC

dari rangsangan. Dan juga menunjukkan standar deviasi ±1,154 dalam Vmax (191,33 g), dari

29
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

nilai rata-rata dibandingkan dengan standar deviasi Vmax yang diperoleh dari 27ÿC as

rangsangan. Dari data suhu yang diperoleh di atas sangat jelas bahwa

amilase saliva yang distimulasi oleh 37ÿC menunjukkan afinitas substrat yang relatif tinggi

daripada dua suhu stimulasi lainnya, bahkan jika perbedaannya lebih kecil dengan

Vmax saliva dirangsang oleh 55ÿC dan 27ÿC.

Meskipun Vmax mewakili kecepatan aksi enzim dan Km adalah substrat

afinitas pada setengah kecepatan maksimal, amilase saliva memiliki relatif tinggi

afinitas terhadap substrat dan juga dengan kecepatan reaksi enzim yang relatif tinggi,

ketika dirangsang oleh 37ÿC, dari dua suhu lain yang digunakan untuk penelitian ini.

Dan dalam hal rasa digunakan sebagai rangsangan untuk sekresi air liur, rasa seperti garam,

manis, dan pahit, menunjukkan standar deviasi yang sama (± 0,01443), dari mean
nilai Km yang sama dengan standar deviasi nilai Km yang diperoleh ketika

27ÿC dan 55ÿC digunakan sebagai rangsangan. Tetapi simpangan baku Km yang diperoleh

ketika asam (0,5333 ± 0,0288mg %) digunakan sebagai rangsangan, menunjukkan sedikit dan
perbedaan yang cukup besar dengan standar deviasi yang diperoleh dari selera lainnya. Dan

standar deviasi Vmax yang diperoleh dari garam, asam dan pahit juga sama

(192,66 ± 1,1547 g). Tetapi standar deviasi Vmax diperoleh saat manis

(193,33 ± 2,309 g) digunakan sebagai rangsangan, menunjukkan perbedaan kecil dari standar

penyimpangan dari Vmax yang diperoleh dari selera lain. Dengan menganalisis data yang diperoleh dari

aktivitas amilase saliva dirangsang oleh berbagai rasa, diamati bahwa

amilase saliva menunjukkan Vmax yang relatif tinggi (193,33 ± 2,3094 g), bila

dirangsang oleh rasa manis dan Km yang lebih rendah dibandingkan dengan rasa asam yang digunakan sebagai stimulus untuk

sekresi air liur.

Amilase saliva memiliki aktivitas yang relatif tinggi (iVmax) ketika asam dan

rasa manis digunakan sebagai rangsangan untuk air liur, dengan ini menunjukkan rasa asam

aktivitas maksimal. Afinitas substrat relatif lebih rendah dalam kasus pahit

sebagai perangsang untuk sekresi air liur. Sampel yang dirangsang dalam berbagai

suhu memiliki aktivitas maksimum ketika suhu stimulasi yang sama

diberikan sebagai suhu inkubasi. Dalam hal rasa, aktivitas maksimum adalah

ditunjukkan (dalam urutan) dengan manis, asam, asin dan pahit. Ketika suhu ekstrim seperti 75ÿC dan 4ÿC

diberikan untuk stimulasi air liur dan juga sebagai

30
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

suhu inkubasi selama pengujian, tidak ada perbedaan yang signifikan dalam

aktivitas air liur dirangsang pada suhu normal.

6. Kesimpulan

Fakta menarik yang diamati dalam penelitian ini adalah bahwa terlepas dari sampel, stimulasi

kondisi dan lingkungan reaksi; nilai Vmax dipertahankan pada level yang konstan

(191.33) dengan kisaran deviasi yang sempit ± 2.309) dan pada saat yang sama Km

nilai lebih konsisten; SD Km lebih kecil jika dibandingkan dengan Vmax.

Stimulus memiliki pengaruh kecil dalam aktivitas amilase saliva dengan referensi

untuk Km dan Vmax mereka. Meskipun Vmax amilase saliva pada rangsangan yang berbeda

berbeda, nilai Km dipertahankan dalam semua kasus dengan kisaran sempit

deviasi.

Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa aktivitas dan afinitas terhadap substrat

amilase saliva dipertahankan secara konsisten dengan kisaran deviasi yang sempit selama

berbagai kondisi stimulasi. Karena ekspresi amilase saliva secara genetik

dikendalikan dan sekresinya merupakan respons terhadap rangsangan, perubahan aktivitas

protein seperti amilase saliva sangat terkait dengan strukturnya juga. Jadi bisa

diasumsikan bahwa aktivitas yang konsisten selama kondisi lingkungan yang berbeda

disebabkan oleh ekspresi alelnya untuk membentuk isoform sebagai respons terhadap berbagai jenis
rangsangan.

Studi lebih lanjut tentang mekanisme genetik, molekuler dan biokimia terkait

ekspresi amilase saliva dalam menanggapi berbagai kondisi lingkungan, dapat

suplemen untuk memvalidasi temuan penelitian ini.

ucapan terima kasih

Penulis mengucapkan terima kasih atas kerjasama manajemen Mar

Perguruan tinggi Augusthinose untuk dukungan yang diperlukan. Bantuan teknis dari Binoy A

Mulanthra juga diakui.

31
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Referensi
Baum, BJ (1993). Prinsip sekresi air liur. Sejarah Akademi New York
Ilmu Pengetahuan, 694(1), 17-23.

Bernfeld, P. (1955). [17] Amilase, dan . Metode dalam enzimologi, 1, 149-158.

Bosch, JA, Ring, C., de Geus, EJ, Veerman, EC, & Amerongen, AVN
(2002). Stres dan kekebalan sekretori. Ulasan Internasional tentang
Neurobiologi, 52(1), 213-253.
Emmelin, NILS, Muda, JA, & Garrett, JR (1981). Kontrol saraf
Kelenjar Air Liur Mamalia. Transaksi Filosofis dari Royal Society of
London B: Ilmu Biologi, 296(1080), 27-35.
Goreng, M, Abramson, S, Meyer, JH (1987). Bagian dari amilase saliva melalui
perut pada manusia. Penyakit dan Ilmu Pencernaan 32(1), 1097-1103.
Ghalanbor, Z., Ghaemi, N., Marashi, SA, Amanlou, M., Habibi-Rezaei, M., Khajeh,
K., & Ranjbar, B. (2008). Pengikatan Tris ke Bacillus licheniformis??-Amylase can
mempengaruhi aktivitas hidrolisis patinya. Surat Protein dan Peptida, 15(2), 212-214.
Kirschbaum, C., Scherer, G., & Strasburger, CJ (1994). Hipofisis dan adrenal
respons hormon terhadap stimulasi farmakologis, fisik, dan psikologis
pada perokok biasa dan bukan perokok. Jurnal Kedokteran Molekuler, 72 (10), 804-
810.

Lide, David R. (1998). Buku Pegangan Kimia dan Fisika (87 ed.). Boca Raton,
FL: Pers CRC. hal 3–318.
Mandel, AL, des Gachons, CP, Plank, KL, Alarcon, S., & Breslin, PA (2010).
Perbedaan individu dalam jumlah salinan gen AMY1, kadar -amilase saliva, dan
persepsi pati oral. PloS Satu, 5(10), e13352.
Mehrabadi, M., & Bandani, AR (2009). Kajian kelenjar ludah -amilase pada kutu gandum
Eurygaster maura (Hemiptera: Scutelleridae). Jurnal Amerika
Ilmu Terapan, 6(4), 555-560.
Miller, GL (1959). Penggunaan reagen asam dinitrosalisilat untuk penentuan reduksi
Gula. Kimia Analitik, 31(3), 426-428.
Noto, Y., Sato, T., Kudo, M., Kurata, K., & Hirota, K. (2005). Hubungan
antara biomarker saliva dan skor inventaris kecemasan sifat-sifat di bawah mental
stres aritmatika: studi percontohan. Anestesi & Analgesia, 101(6), 1873-1876.
32
Machine Translated by Google

Perilaku amilase saliva di berbagai lingkungan reaksi dengan mengacu pada Km dan Vmax:
gambaran umum

Perry, GH, Dominy, NJ, Claw, KG, Lee, AS, Fiegler, H., Redon, R., & Carter,
NP (2007). Diet dan evolusi nomor salinan gen amilase manusia
variasi. Genetika Alam, 39(10), 1256-1260.
Ramasubbu, N., Paloth, V., Luo, Y., Brayer, GD, & Levine, MJ (1996). Struktur -amilase
saliva manusia pada resolusi 1,6 : implikasi untuk perannya dalam
rongga mulut. Acta Crystallographica Bagian D: Kristalografi Biologis, 52(3),
435-446.

Ramasubbu, N., Paloth, V., Luo, Y., Brayer, GD, Levine, MJ (1996). "Struktur -Amylase
saliva manusia pada resolusi 1,6 : implikasi untuk perannya dalam rongga mulut
rongga". Acta Crystallographica Bagian D Kristalografi Biologis, 52(3), 435–
446.

Rohleder, N., Serigala, JM, Maldonado, EF, & Kirschbaum, C. (2006). Itu
peningkatan stres psikososial yang diinduksi alfa-amilase saliva tidak tergantung pada
kecepatan aliran air liur. Psikofisiologi, 43(6), 645-652.
Voet, D., & Voet, JG (2005). Biochimie. (2e ed.). Bruxelles: De Boeck. 1583 hal.

33

Lihat statistik publikasi