Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Biomedis & Farmakoterapi 113 (2019) 108780

Daftar isi tersedia diScienceDirect

Biomedis & Farmakoterapi

halaman utama jurnal:www.elsevier.com/locate/biopha

Artikel asli

Captopril melemahkan gagal jantung yang diinduksi TAC melalui penghambatan

jalur Wnt3a/β-catenin dan Jak2/Stat3
Yu Zhang1, Ling Zhang1, Xiaoxue Fan, Weiwei Yang, Boyang Yu, Junping Koukan, Fang Likan
Laboratorium Kunci Jiangsu untuk Evaluasi dan Penelitian Translasi TCM, Sekolah Farmasi Tradisional Tiongkok, Universitas Farmasi Tiongkok, Nanjing, Tiongkok

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Captopril (Cap) sebagai angiotensin-converting enzyme inhibitor (ACEi) umumnya digunakan untuk mengobati
kaptopril hipertensi dan beberapa jenis gagal jantung kongestif. Namun, beberapa penelitian melaporkan apakah Cap
Penyempitan aorta transversal memberikan efek perlindungan pada apoptosis miokard yang diinduksi oleh penyempitan aorta transversal (TAC).
Apoptosis
Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki kemungkinan mekanisme Cap pada apoptosis miokard yang diinduksi
Hipertrofi
oleh kelebihan beban tekanan. Hasil menunjukkan bahwa Cap secara signifikan menurunkan rasio berat jantung ke
Wnt3a/β-katenin
tubuh (HBWR). Cap meningkatkan fungsi jantung secara nyata, dan mengurangi diameter dalam aorta asenden (Asc
Jak2/Stat3
Ao) pada tikus TAC seperti yang ditunjukkan oleh ekokardiografi. Hasil uji imunosorben terkait enzim (ELISA)
menunjukkan bahwa pengobatan Cap juga secara nyata menurunkan tingkat peptida natriuretik tipe pro-B
Nterminal (NT-proBNP), peptida natriuretik atrial (ANP), tumor necrosis factor-α (TNF-α) dan interleukin-6 (IL-6).
Perubahan patologis jantung dan fibrosis telah membaik setelah pengobatan Cap seperti yang ditunjukkan oleh
pewarnaan hematoxylin-eosin (H&E) dan pewarnaan trichrome Masson. Selain itu, hasil pewarnaan Terminal
deoxynucleotidyl transferase-mediated dexoxyuridine triphosphate nick-end labeling (TUNEL) menunjukkan
pengobatan Cap juga secara signifikan menghambat apoptosis jantung. Hasil Western Blot menunjukkan bahwa
Cap jelas menurunkan ekspresi cleaved capase-3, Bax, fosforilasi Jak2 (p-Jak2), Stat3 terfosforilasi (p-Stat3), Wnt3a
dan protein -catenin, serta meningkatkan ekspresi Bcl-2. Sebagai kesimpulan, Cap menunjukkan efek perlindungan
pada apoptosis jantung yang diinduksi TAC, yang dapat dikaitkan dengan penghambatan jalur pensinyalan Wnt3a/
β-catenin.

1. Perkenalan
Gagal jantung (HF) adalah penyakit yang sulit diobati, yang dianggap sebagai
proses progresif dan ireversibel yang ditandai dengan kegagalan pompa jantung
dan remodeling jantung.1-3]. Hipertrofi jantung, apoptosis jantung, dan fibrosis
jantung adalah mekanisme penting dari remodeling jantung.4]. Telah diterima
secara luas bahwa apoptosis memainkan peran penting dalam hilangnya sel
selama banyak proses fisiologis dan patologis.5]. Apoptosis jantung adalah
mekanisme penting dari kematian sel yang diinduksi rangsangan patologis dan
juga faktor utama yang mendasari disfungsi jantung dan penyakit kardiovaskular
yang diinduksi oleh tekanan berlebih.6,7]. Dengan demikian, strategi terapeutik
yang bertujuan untuk mencegah atau menunda apoptosis jantung dapat menjadi
pilihan yang disarankan untuk menekan gagal jantung.
Jalur Wnt/β-catenin berpartisipasi dalam banyak proses biologis
seluler, seperti proliferasi sel, diferensiasi, migrasi, dan kematian
berbagai jenis sel.8]. Terutama, jalur Wnt/β-catenin
adalah salah satu jalur pensinyalan penting yang terlibat dalam apoptosis
jantung. Selain itu, penelitian telah menunjukkan bahwa ekspresi Wnt3a
meningkat pada tikus dengan hipertrofi miokard dan berkorelasi positif
dengan apoptosis kardiomiosit.9,10]. -catenin adalah pengatur penting
proliferasi dan kelangsungan hidup sel melalui gen yang ditargetkan seperti
Bcl-2 dan caspase-3 [11]. Selain itu, jalur Jak/Stat merupakan salah satu jalur
vital yang berkaitan dengan apoptosis jantung. Beberapa penyelidikan
menunjukkan bahwa jalur pensinyalan Jak2/Stat3 berpartisipasi dalam
mencegah apoptosis miokard yang disebabkan oleh cedera iskemia
reperfusi (IR).12,13]. Selain itu, banyak penelitian telah melaporkan bahwa
terjadinya hipertrofi jantung disertai dengan aktivasi jalur pensinyalan Jak/
Stat [14–16].
Angiotensin-converting enzyme inhibitor (ACEi) telah umum
digunakan untuk mengobati gagal jantung dan hipertensi. Biasanya,
konversi angiotensin I menjadi angiotensin II diblokir oleh ACEi.
Namun, kaptopril (Cap) telah ditemukan menekan Fas-induced

⁎Penulis yang sesuai di: Jiangsu Key Laboratory of TCM Evaluation and Translational Research, China Pharmaceutical University, 639 Longmian Road, Nanjing, 211198,
PR China.
Alamat email:junpingkou@cpu.edu.cn (J.Kou),lifang@cpu.edu.cn (F.Li).
1Kedua penulis ini memberikan kontribusi yang sama.

https://doi.org/10.1016/j.biopha.2019.108780
Diterima 19 Desember 2018; Diterima dalam bentuk revisi 28 Februari 2019; Diterima 13 Maret 2019
0753-3322/ © 2019 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier Masson SAS. Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND (http://
creativecommons.org/licenses/BY-NC-ND/4.0/).
Y.Zhang, dkk.
apoptosis pada sel T teraktivasi manusia [17], sel epitel paru [18] dan
apoptosis otak [19], efek kardioprotektif Cap pada penyempitan aorta
transversal (TAC) yang diinduksi apoptosis miokard belum diverifikasi.
Menurut temuan ini, penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki apakah Cap
akan memberikan perlindungan terhadap apoptosis yang diinduksi TAC dan
mengeksplorasi mekanisme yang mendasarinya.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Hewan
Tikus jantan C57BL/6J (8 minggu) diperoleh dari Pusat Hewan
Eksperimental Universitas Yangzhou (Yangzhou, Cina). Mereka
ditempatkan secara individual di kandang dalam kondisi higienis dan
ditempatkan dalam suhu konstan (23 ± 1 °C), kelembaban (30% 40%)
dan dipelihara di ruang siklus terang/gelap 12 jam. Semua prosedur
dioperasikan sesuai dengan National Institutes of Health Guide untuk
Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium, dan protokol yang
digunakan juga sesuai dengan Komite Etika Hewan Universitas Farmasi
China, Universitas Farmasi China, Nanjing, China.
Setelah 1 minggu masa adaptasi, mencit secara acak dibagi menjadi tiga
kelompok: kelompok Sham, kelompok Model, dan kelompok Cap. Kelebihan
tekanan diinduksi melalui TAC, seperti yang dijelaskan sebelumnya [20].
Tikus dibius dan menjalani operasi palsu atau TAC dengan jarum 27-gauge
selama 4 minggu. Setelah operasi, tikus dalam kelompok Sham dan Model
diberikan salin normal dengan volume yang sama melalui injeksi
intraperitoneal. Cap (Sigma, St. Louis, MO, USA) yang dilarutkan dalam
normal saline diberikan secara intraperitoneal (20 mg/kg/hari). 12 tikus di
setiap kelompok dirawat selama empat minggu (sekali sehari).
2.2. Ekokardiografi
Setelah 4 minggu perawatan, ekokardiografi dilakukan dalam
kondisi terbius menggunakan sistem pencitraan Vevo2100
(VisualSonics Inc., Toronto, ON, Kanada) dengan probe 30 MHz [21,22].
Gambar mode-M direkam. Diameter dalam aorta asendens (Asc Ao),
fraksi ejeksi (EF), pemendekan fraksional (FS), ketebalan septum
ventrikel kiri; diastol (IVS;d), volume ventrikel kiri; sistolik (LV Vol;s),
ketebalan dinding posterior ventrikel kiri; diastol (LVPW; d) dan massa
ventrikel kiri diperoleh.
2.3. Analisis Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Setelah perawatan, sampel darah dikumpulkan. Tingkat serum
Nterminal pro-B-type natriuretic peptide (NT-proBNP), atrial natriuretic
peptide (ANP), tumor necrosis factor-α (TNF-α) dan interleukin-6 (IL-6)
diukur dengan Kit ELISA yang sesuai (Nanjing Yifeixue Biotech Co., Ltd.,
Nanjing, China), sesuai dengan instruksi pabrik.
2.4. Hematoxylin-eosin jantung (H&E) dan pewarnaan trichrome Masson
Pewarnaan trichrome H&E dan Masson dilakukan seperti deskripsi
sebelumnya [23–25]. Setelah tikus dikorbankan, sampel jantung
dipisahkan dan difiksasi dalam formalin buffer fosfat 10% selama 24
jam, kemudian disematkan dalam parafin, diiris (4–5 μm). Bagian
histologis jaringan diwarnai dengan trikrom H&E dan Masson. Bagian-
bagian tersebut digambarkan di bawah NanoZoomer Digital Pathology
RS. Rata-rata luas penampang dan fibrosis kardiomiosit dinilai dengan
planimetri terkomputerisasi.
2.5. Pewarnaan TUNEL untuk apoptosis
Setelah mencit dikorbankan, sampel jantung dipisahkan dan
difiksasi dalam formalin buffer fosfat 10% selama 24 jam, selanjutnya
2
Biomedis & Farmakoterapi 113 (2019) 108780
tertanam dalam parafin, diiris (4–5 μm). Terminal deoxynucleotidyl
transferase-mediated dexoxyuridine triphosphate nick-end labeling
(TUNEL) pewarnaan dilakukan menggunakan TUNEL BrightGreen
Apoptosis Detection Kit (Vazyme Biotech Co., Ltd., Nanjing, China)
mengikuti instruksi pabrik. Inti apoptosis diberi label dengan
pewarnaan fluorescein hijau dan inti kardiomiosit total ditandai dengan
DAPI. Gambar jaringan jantung dilihat dengan mikroskop confocal
(LSM700, Zeiss, Jena, Jerman). Tingkat apoptosis ditampilkan sebagai
rasio inti TUNEL positif terhadap inti bernoda DAPI.
2.6. analisis noda barat
Analisis Western blot dilakukan seperti deskripsi sebelumnya [26,27]. Secara singkat, jaringan jantung dilisiskan
dengan buffer RIPA yang dilengkapi dengan protease inhibitor. Total protein lisat disentrifugasi pada 12.000 rpm
selama 10 menit pada suhu 4 °C dan konsentrasi protein dianalisis dengan metode BCA (Beyotime Institude of
Biotechnology, Shanghai, China). Jumlah protein yang sama dipisahkan menggunakan SDS/PAGE dan dipindahkan ke
membran PVDF dengan elektroblotting. Membran diblokir dengan 3% BSA selama 2 jam pada suhu kamar dan
kemudian diinkubasi semalaman pada suhu 4 ° C dengan antibodi primer. Level protein caspase-3, Bax, Bcl-2, Wnt3a,
-catenin, Jak2, Stat3, fosforilase Jak2 (p-Jak2) dan fosforilase Stat3 (p-Stat3) yang terbelah dilakukan menggunakan
antibodi primer spesifik seperti di bawah ini: anti-kelinci Bax, (pengenceran 1:1000; Teknologi Pensinyalan Sel); kelinci
anti-Bcl-2, (pengenceran 1:1000; Teknologi Pensinyalan Sel), kelinci anti-cleaved caspase-3, (pengenceran 1:1000;
Teknologi Pensinyalan Sel); kelinci anti-Jak2 (pengenceran 1:1000; Teknologi Pensinyalan Sel); kelinci anti-p-Jak2
(pengenceran 1:500; Millipore); kelinci anti-p-Stat3 (pengenceran 1:1000; Teknologi Pensinyalan Sel); kelinci anti-Stat3,
(pengenceran 1:2000; Teknologi Pensinyalan Sel); kelinci anti-Wnt3a (pengenceran 1:1000; Teknologi Sinyal Sel); kelinci
anti-β-Catenin (pengenceran 1:800; Bioworld). Setelah dicuci, membran diperiksa dengan antibodi sekunder
terkonjugasi peroksidase pada suhu kamar selama 2 jam. Sinyal protein dideteksi menggunakan reagen ECL dan
divisualisasikan oleh ChemiDoc Teknologi Pensinyalan Sel); kelinci anti-Stat3, (pengenceran 1:2000; Teknologi
Pensinyalan Sel); kelinci anti-Wnt3a (pengenceran 1:1000; Teknologi Sinyal Sel); kelinci anti-β-Catenin (pengenceran
1:800; Bioworld). Setelah dicuci, membran diperiksa dengan antibodi sekunder terkonjugasi peroksidase pada suhu
kamar selama 2 jam. Sinyal protein dideteksi menggunakan reagen ECL dan divisualisasikan oleh ChemiDoc Teknologi
Pensinyalan Sel); kelinci anti-Stat3, (pengenceran 1:2000; Teknologi Pensinyalan Sel); kelinci anti-Wnt3a (pengenceran
1:1000; Teknologi Sinyal Sel); kelinci anti-β-Catenin (pengenceran 1:800; Bioworld). Setelah dicuci, membran diperiksa
dengan antibodi sekunder terkonjugasi peroksidase pada suhu kamar selama 2 jam. Sinyal protein dideteksi
menggunakan reagen ECL dan divisualisasikan oleh ChemiDoc™Sistem MP (Bio-Rad) dan dianalisis menggunakan Lab
Gambar™Perangkat lunak (versi 4.1, Bio-Rad).
2.7. Analisis statistik
Analisis statistik data dilakukan dengan menggunakan one-way analysis
of variance (ANOVA) dilanjutkan dengan uji post hoc Dunnett untuk
beberapa perbandingan menggunakan GraphPad Prism 6.0 (La Jolla, CA,
USA). Semua data dalam teks dan gambar dinyatakan sebagai mean ± SD.P <
0,05 dianggap signifikan.
3. Hasil
3.1. Tutup perubahan morfologi dan histologis yang diperbaiki pada tikus TAC
Hipertrofi jantung pada tikus yang mengalami TAC dinilai. Pertama, kami
mengevaluasi rasio berat jantung-ke-tubuh (HBWR). HBWR meningkat
secara signifikan pada hewan model, sedangkan pada tikus yang diobati
dengan Cap, HBWR berkurang secara nyata (Gambar Tambahan 1A). Seperti
yang ditunjukkan pada Gambar Tambahan. 1B, Asc Ao jelas meningkat pada
kelompok model. Setelah pengobatan Cap, Asc Ao menurun dibandingkan
dengan tikus yang diberi TAC.
3.2. Cap memperbaiki disfungsi jantung pada TAC Mice
Untuk menilai fungsi jantung pada tikus, ekokardiografi mode-M dilakukan.
Gambar 1A, yang menunjukkan ekokardiografi Mmode representatif dalam tiga
kelompok, menunjukkan bahwa dilatasi LV ada pada tikus TAC dan bahwa Cap
mencegah perkembangan dilatasi LV pada tikus TAC. Secara khusus, seperti yang
ditunjukkan padaGambar 1B-G, EF dan FS pada kelompok Model menurun secara
signifikan, serta peningkatan LV Vol;s, IVS;d, LV PW;d dan massa LV, sehingga
menunjukkan gagal jantung pada
Y.Zhang, dkk.
Gambar 1.Cap meningkatkan fungsi jantung pada tikus TAC. (A) Ekokardiografi mode-M representatif dalam kelompok Sham, Model, dan Cap, menunjukkan bukti gagal
jantung dengan dilatasi LV pada tikus TAC; Cap mencegah perkembangan gagal jantung pada tikus TAC. Pengaruh Cap pada EF (B), FS (C), LV Vol;s (D), IVS;d (E), LVPW;d (F),
perubahan massa LV (G) pada tikus yang dilakukan TAC. Hasil disajikan sebagai mean ± SD.#P <0,05,##P <0,01 vs. Grup palsu,*P <0,05,**P <0,01 vs. Grup model. n=6.
kelompok Model. Setelah pengobatan dengan Cap, EF dan FS pulih secara
signifikan, serta LV Vol;s, IVS;d, LVPW;d dan massa LV jelas meningkat.
Pemeriksaan ekokardiografi menunjukkan bahwa Cap secara nyata
meningkatkan disfungsi jantung pada tikus TAC.
3.3. Tutup perubahan patologis struktural jantung yang diperbaiki dan indikator
biokimia serum pada tikus TAC
Gambar 2A menunjukkan gambar bagian jantung dengan pewarnaan
trichrome H&E dan Masson. Bagian jaringan jantung dari kelompok Model
menunjukkan kerusakan morfologis dan fibrosis yang parah. Perawatan topi
memulihkan kerusakan histopatologis jantung dan mengurangi luas
penampang kardiomiosit, serta penurunan fibrosis pada tikus TAC (Gambar
2A-C). Untuk mengevaluasi gagal jantung yang disebabkan oleh TAC,
konsentrasi NT-proBNP dan ANP dianalisis dalam serum. NTproBNP dan
ANP meningkat secara signifikan pada kelompok Model (Gambar 2D–E).
Namun, Cap secara nyata menurunkan kadar serum NTproBNP dan ANP.
Selain itu, Cap secara signifikan menurunkan TNF- αdan kandungan IL-6 (
Gambar 2F–G), yang menunjukkan bahwa Cap dapat meringankan cedera
peradangan pada tikus TAC.
3.4. Cap mengurangi apoptosis jantung pada tikus TAC
Untuk mengevaluasi efek Cap pada apoptosis jantung pada tikus TAC,
pewarnaan TUNEL pada bagian jantung dilakukan. Beberapa sel positif TUNEL
terdeteksi pada kelompok Sham, sedangkan sel TUNEL-positif meningkat secara
signifikan pada kelompok Model, menunjukkan apoptosis jantung yang jelas;
namun, penurunan signifikan pada sel TUNEL-positif diamati setelah pengobatan
Cap (Gambar 3A-B). Selain itu, hasil Western Blot (Gambar 3C – D) menunjukkan
kelompok Model memiliki tingkat ekspresi protein Bax dan caspase-3 yang lebih
tinggi, dan tingkat ekspresi protein yang lebih rendah
3
Biomedis & Farmakoterapi 113 (2019) 108780
dari Bcl-2, yang menunjukkan apoptosis jantung yang jelas. Sebaliknya,
kelompok Cap telah sangat menurunkan tingkat ekspresi Bax dan
membelah caspase-3, dan meningkatkan tingkat ekspresi Bcl-2, yang
menunjukkan penurunan apoptosis jantung.
3.5. Cap menghambat aktivasi jalur Jak2/Stat3 dan Wnt3a/β-catenin pada
tikus TAC
Hasil Western blot (Gambar 4A – D) menunjukkan bahwa p-Jak2, p-Stat3,
Wnt3a dan β-catenin diregulasi ke atas dalam kelompok Model. Tutup
pengobatan secara signifikan menurunkan ekspresi p-Jak2, p-Stat3, Wnt3a
dan β- catenin. Hasil ini menyarankan Cap menghambat jalur pensinyalan
Wnt3a/β-catenin dan Jak2/Stat3.
4. Diskusi
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi mekanisme potensial
Cap pada HF yang diinduksi TAC pada tikus. Hasil kami menunjukkan bahwa
pengobatan dengan Cap dapat melindungi terhadap disfungsi jantung, apoptosis,
dan hipertrofi yang diinduksi TAC. Selain itu, kami juga mengamati bahwa Cap
dapat menghambat jalur Jak2/Stat3 dan Wnt3a/β-catenin.
ACEi Cap memblokir konversi angiotensin I menjadi angiotensin
II. Cap memiliki sifat mengobati hipertensi, HF dan mengatur berbagai
fungsi imunomodulator. Dalam penelitian ini, Cap diperoleh dari Sigma
(St. Louis, MO, USA, Kode: C4042). Menurut analisis HPLC, kemurnian
Cap lebih besar dari atau sama dengan 98%. Ketersediaan hayati Cap
adalah 91 persen pada subjek puasa normal setelah pemberian obat
100 mg [28]. Ketika diberikan Cap berlabel radioaktif pada subjek
normal, pada tmaks, bentuk Cap dalam darah tidak berubah Cap (52%),
dimer tidak berubah (10%), dan sisanya sebagai metabolit polar [29].
Dalam plasma, Cap sebagian teroksidasi pada sulfhidril
Y.Zhang, dkk. Biomedis & Farmakoterapi 113 (2019) 108780

Gambar 2.Tutup perubahan patologis struktural jantung yang diperbaiki dan indikator biokimia serum pada tikus TAC. ( A ) Foto representatif dari bagian ventrikel kiri
dengan pewarnaan trichrome H&E dan Masson pada kelompok Sham, Model, dan Cap (Bar = 50 μm). ( B ) Kuantifikasi luas penampang kardiomiosit dari bagian yang
diwarnai H&E. ( C ) Kuantifikasi area fibrosis jantung dari bagian bernoda Trichrome Masson. n = 5. Cap mengurangi NT-proBNP (D), ANP (E), TNF- (F) dan kandungan IL-6
(G) dalam serum tikus TAC. n = 12. Hasil disajikan sebagai rata-rata ± SD.##P <0,01 vs. Grup palsu,*P <0,05,**P <0,01 vs. Grup model.

membentuk beberapa metabolit, seperti dimer disulfida dari Cap,
disulfida Cap-sistein, dan disulfida campuran lainnya dengan senyawa
tiol endogen [30].
Selain itu, Cap berhasil menghambat peradangan pada schistosomiasis,
penyakit lupus eksperimental dan ensefalomielitis autoimun eksperimental
(EAE) [31–33]. Penelitian sebelumnya menunjukkan beberapa sifat ini
mungkin tidak tergantung pada efeknya pada sistem renin angiotensin [34,
35]. Seperti Cap telah ditemukan untuk menghambat apoptosis yang
diinduksi Fas pada sel T yang diaktifkan manusia [17], sel epitel paru [18]
dan apoptosis otak [19], kami berhipotesis bahwa pencegahan apoptosis
miokard dapat menjadi salah satu mekanisme yang menginduksi
kemanjuran kardioprotektif Cap. Dalam penelitian ini, kami mengamati
bahwa Cap menghambat apoptosis jantung melalui pengurangan sel
TUNEL-positif, penurunan Bax, ekspresi caspase-3 yang terbelah dan
peningkatan ekspresi Bcl-2 pada tikus TAC.
Sebagai jaringan pensinyalan yang dilestarikan secara evolusioner, jalur Jak/
Stat terlibat dalam berbagai proses seluler, seperti peradangan, apoptosis, kontrol
dan pengembangan siklus sel. Banyak penyelidikan menyarankan jalur
pensinyalan Jak/Stat telah diidentifikasi sebagai jalur kelangsungan hidup intrinsik
pada jantung yang mengalami infark.36–38]. Saat Stat3
diaktifkan oleh Jak2, sinyal sitoprotektif dan kelangsungan hidup dalam
sel dapat dirangsang.39,40]. Namun, kami mengamati Cap
menghambat fosforilasi Jak2 / Stat3 dengan peningkatan Bcl-2 anti-
apoptosis dan penurunan caspase-3 yang dibelah pro-apoptosis.
Dengan demikian, hasil ini menunjukkan bahwa Cap menghambat
apoptosis miokard tidak melalui jalur Jak2/Stat3 pada tikus TAC. Jadi
kami menganalisis penyebab fenomena ini. Banyak penelitian telah
melaporkan bahwa terjadinya hipertrofi jantung disertai dengan
aktivasi jalur pensinyalan Jak/Stat.14–16]. Selain itu, ketika Jak2
dihambat melalui inhibitor farmakologis, penelitian telah menunjukkan
bahwa fosforilasi Jak2 dan Stat3 sangat berkurang, dan perkembangan
hipertrofi diblokir selama tekanan yang berlebihan [41,42]. Oleh karena
itu, Cap jelas mengurangi ekspresi protein Jak2 dan Stat3 terfosforilasi,
yang menyarankan Cap menghambat hipertrofi jantung melalui jalur
Jak2/Stat3 selama kelebihan tekanan.
Selanjutnya, kami mengeksplorasi kemungkinan mekanisme yang
mendasari Cap menghambat apoptosis jantung yang diinduksi TAC. Studi
telah melaporkan bahwa pensinyalan Wnt/β-catenin terlibat dalam berbagai
proses seluler dan biologis yang berbeda, termasuk respon inflamasi.43],
perkembangan kanker, diferensiasi sel, proliferasi dan

4
Y.Zhang, dkk. Biomedis & Farmakoterapi 113 (2019) 108780

Gambar 3.Cap mengurangi apoptosis jantung pada tikus TAC. (A) Foto representatif pewarnaan TUNEL di bagian jantung (Bar = 20 m). (B) Analisis kuantitatif pewarnaan
TUNEL di bagian jantung. (C) Analisis Western blot dari ekspresi Bcl-2 dan Bax terdeteksi di jantung. (D) Kadar protein cleaved-caspase 3 di jantung dideteksi
menggunakan analisis Western blot. Bercak representatif yang dinormalisasi ke ekspresi -Actin disajikan. Hasil disajikan sebagai rata-rata ± SD.##P < 0,01 vs. Grup palsu,**
P <0,01 vs. Grup model. n=3.

apoptosis [44–46]. Pensinyalan Wnt bersifat statis dalam kondisi fisiologis
normal. Padahal, rangsangan berbahaya akan mengaktifkan pensinyalan
Wnt dan memicu berbagai efek biologis [47]. Mengacu pada penelitian
sebelumnya, apoptosis terkait dengan aktivasi abnormal pensinyalan Wnt [
48]. Aktivasi pensinyalan Wnt/β-catenin dapat memicu jalur apoptosis
mitokondria dan mempromosikan apoptosis dengan meningkatkan aktivitas
caspase-3 dan menekan ekspresi protein Bcl-2 anti-apoptosis dalam
berbagai sel [49–51]. Selanjutnya, pensinyalan Wnt/β-catenin diaktifkan
pada tikus TAC yang selanjutnya memediasi apoptosis miokard melalui gen
yang ditargetkan seperti Bcl-2 dan caspase-3 [7]. Oleh karena itu, aktivasi
kondisional jalur Wnt/β-catenin menginduksi apoptosis dengan mengatur
ekspresi beberapa protein terkait apoptosis seperti caspase3, Bcl-2 dan Bax.
52,53]. Ada 19 protein berbeda dalam keluarga Wnt [54]. Hebatnya,
dilaporkan bahwa Wnt3a menyebabkan retardasi pertumbuhan yang
dramatis dalam garis sel yang tidak berubah dari fibroblas embrionik tikus,
dengan meningkatkan aktivitas β-catenin/TCF [55].
Selain itu, Wnt3a pada tikus dengan hipertrofi miokard meningkat
secara signifikan dan berkorelasi positif dengan apoptosis jantung.9,10
]. Dalam studi saat ini, tingkat ekspresi Wnt3a dan β-catenin meningkat
secara signifikan pada miokardium dari tikus TAC. Selanjutnya, tingkat
ekspresi protein pro-apoptosis, yaitu cleaved caspase-3 dan Bax
ditemukan meningkat secara dramatis. Tingkat ekspresi protein anti-
apoptosis, yaitu Bcl-2 ditemukan menurun pada tikus TAC. Oleh karena
itu, Cap menunjukkan efek perlindungan pada apoptosis jantung yang
diinduksi TAC, yang dapat dikaitkan dengan penghambatan jalur
Wnt3a/β-catenin.
Sebagai kesimpulan, hasil ini menunjukkan bahwa Cap memberikan efek
kardioprotektif pada HF yang diinduksi TAC, dan mekanisme potensial dapat
dikaitkan dengan penghambatan apoptosis jantung yang dimediasi jalur Wnt3a /
β-catenin dan hipertrofi jantung yang dimediasi jalur Jak2 / Stat3. Studi ini
mengungkapkan mekanisme lain dari Cap pada HF yang disebabkan oleh
kelebihan tekanan, dan memberikan referensi pada aplikasi klinis

5
Y.Zhang, dkk. Biomedis & Farmakoterapi 113 (2019) 108780

Gambar 4.Cap menghambat jalur Jak2/Stat3 dan Wnt3a/β-catenin pada tikus TAC. Ekspresi Jak2, p-Jak2 (A), Stat3, p-Stat3 (B), Wnt3a (C) dan -catenin (D) dideteksi
menggunakan analisis Western blot. Bercak representatif yang dinormalisasi ke ekspresi -Actin disajikan. Hasil disajikan sebagai rata-rata ± SD.#P <0,05,
##
P <0,01 vs. Grup palsu,*P <0,05,**P <0,01 vs. Grup model. n=3.

Topi.
Konflik kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan.
Pendanaan
Pekerjaan penelitian ini didukung oleh National Science Science
Foundation of China (nomor hibah 81573719, 81774150, 81603328),
Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam Provinsi Jiangsu (nomor hibah
BK20160761), dan Dana Inovasi Pascasarjana Huahai Pharmaceutical
(nomor hibah HHCX17S-011) .
Lampiran A. Data tambahan
Materi tambahan terkait artikel ini dapat ditemukan, dalam versi
online, di doi:https://doi.org/10.1016/j.biopha.2019.108780.
Referensi
[1]G. Corrao, AP Maggioni, Epidemiologi gagal jantung, G. Ital. Cardiol. 15.2 (Sup 2)
(2014) 10S.
[2]M. Jessup, WT Abraham, DE Casey, et al., Focused Update: accf/aha guidelines for the
diagnosis and management of heart failure in adults: a report of the american
college of cardiology founda, Circulation 92 (2001) (2009) 2764.
[3]J. Hou, YJ Kang, Regresi hipertrofi jantung patologis: jalur pensinyalan dan target
terapi, Pharmacol. Ada. 135 (2012) 337–354.
[4]JN Cohn, R. Ferrari, N. Sharpe, remodeling jantung-konsep dan implikasi klinis:
makalah konsensus dari forum internasional tentang remodeling jantung. Atas
nama Forum Internasional tentang Remodeling Jantung, J. Am. Kol. Cardiol. 35
(2000) 569–582.
[5]G. Majno, I. Joris, Apoptosis, onkosis, dan nekrosis. Tinjauan tentang kematian sel, Am.
J. Pathol. 146 (1995) 3–15.
[6]X. Gao, W. Liu, L. Huang, et al., HSP70 menghambat apoptosis kardiomiosit yang
diinduksi stres dengan mengikat secara kompetitif FAF1, Cell Stress Chaperon. 20
(2015) 653–661.
[7]S. Pan, X. Zhao, X. Wang, et al., Sfrp1 melemahkan disfungsi jantung yang diinduksi TAC dengan
menghambat jalur pensinyalan Wnt yang dimediasi apoptosis miokard pada tikus,
Lipid Kesehatan Dis. 17 (2018) 202.
[8]MDA Ziki, A. Mani, Wnt signaling, jalur baru yang mengatur tekanan darah? Tinjauan
mutakhir, Aterosklerosis 262 (2017) 171–178.
[9]J. He, Y. Cai, R. Wang, Ekspresi wnt dan ncx1 dan korelasinya dengan apoptosis
kardiomiosit pada tikus dengan hipertrofi miokard, Pac Asia. J. Trop.
Med. 8 (2015) 930–936.
[10]Z. Zhang, AZ Deb, A. Pachori, et al., Protein terkait kusut yang disekresikan 2 melindungi sel
dari apoptosis dengan memblokir efek kanonik wnt3a, J. Mol. Sel. Cardiol.
46 (2009) 370–377.
[11]L. Zhang, H. Cheng, Y. Yue, et al., H19 knockdown menekan proliferasi dan menginduksi
apoptosis dengan mengatur miR 148b/WNT/betacatenin dalam sel otot polos pembuluh
darah yang distimulasi ox-LDL, J. Biomed. Sains. 25 (2018) 11.
[12]G. Heusch, J. Musiolik, N. Gedik, A. Skyschally, Aktivasi STAT3 Mitokondria dan
proteksi kardio oleh postconditioning iskemik pada babi dengan miokard regional

6
Y.Zhang, dkk.
iskemia/reperfusi, sir. Res. 109 (2011) 1302–1308.
[13]RF Kelly, KT Lamont, S. Somers, et al., Ethanolamine adalah agen kardioprotektif
yang bergantung pada STAT-3, Basic Res. Cardiol. 105 (2010) 763–770.
[14]J. Lammerding, RD Kamm, RT Lee, Mekanotransduksi pada miosit jantung, Ann. NY
Acad. Sci. 1015 (2004) 53–70.
[15]E. Mascareno, MAQ Siddiqui, Peran pensinyalan Jak/STAT dalam sistem renin-
angiotensin jaringan jantung, Mol. Sel. Biokimia. 212 (2000) 171–175.
[16]JJ Jacoby, A. Kalinowski, MG Liu, et al., KO STAT3 yang dibatasi oleh kardiomiosit menghasilkan
sensitivitas yang lebih tinggi terhadap peradangan, fibrosis jantung, dan gagal jantung
dengan usia lanjut, Proc. Natl. Acad. Sci. AS 100 (2003) 12929–12934.
[17]O. Deas, C. Dumont, B. Mollereau, et al., penghambatan pensinyalan apoptosis FAS dan CD2
yang dimediasi tiol dalam sel T perifer manusia yang diaktifkan, Int. kekebalan. 9 (1997)
117–125.
[18]BD Uhal, C. Gidea, R. Bargout, et al., Captopril menghambat apoptosis pada sel epitel
paru-paru manusia: mekanisme antifibrotik potensial, Am. J. Fisiol. 275 (1998) 1013–
1017.
[19]IY Saglam, EN Ozdamar, E. Demiralay, et al., Efek kaptopril pada apoptosis otak
setelah luka bakar pada tikus, Turk. Bedah saraf. 23 (2013) 366–371.
[20]E. Takimoto, HC Champion, M. Li, et al., Penghambatan kronis siklik GMP
phosphodiesterase 5A mencegah dan membalikkan hipertrofi jantung, Nat. Med.
11 (2005) 214–222.
[21]Y. Joki, K. Ohashi, D. Yuasa, et al., FGF21 melemahkan remodeling miokard patologis
setelah infark miokard melalui mekanisme yang bergantung pada adiponektin,
Biochem. Biofisika. Res. komuni. 459 (2015) 124-130.
[22]WL Mo, CZ Chai, JP Kou, et al., Sheng-Mai-San melemahkan disfungsi kontraktil dan
kerusakan struktural yang disebabkan oleh hipoksia intermiten kronis pada tikus, Chin.
J.Nat. Kedokteran 13 (2015) 743–750.
[23]Z. Ping, CZ Wen, DL Lin, et al., Total glukosida Danggui Buxue Tang melemahkan fibrosis paru
yang diinduksi BLM melalui pengaturan stres oksidatif dengan menghambat NOX4, Oksid.
Med. Sel. Panjang. 2015 (2015) 1–10.
[24]Z. Zhang, J. Qu, C. Zheng, et al., Jalur antioksidan Nrf2 menekan transisi epithelial-
mesenchymal Numbmediated selama fibrosis paru, Cell Death Dis. 9 (2018) 83.
[25]W. Zhou, X. Mo, W. Cui, et al., Nrf2 menghambat transisi epitel-mesenkim dengan
menekan ekspresi siput selama fibrosis paru, Sci. Rep.6 (2016) 38646.
[26]F. Li, XJ Zheng, XX Fan, et al., Injeksi bubuk Yiqifumai melemahkan apoptosis miokard
yang diinduksi oleh iskemia/ reperfusi melalui aktivasi ampk, Rejuv. Res. 19 (2015)
50-50.
[27]LC Li, DL Li, L. Xu, et al., Grup mobilitas tinggi kotak 1 memediasi transisi epitel-
tomesenkimal pada fibrosis paru yang melibatkan transformasi pensinyalan
Faktor-β1/Smad2/3 pertumbuhan, J. Pharmacol. Eks. Ada. 354 (2015) 302–309.
[28]SM Singhvi, DN Mckinstry, JM Shaw, et al., Pengaruh makanan pada bioavailabilitas
kaptopril pada subyek sehat, J. Clin. farmasi. 22 (1982) 135–140.
[29]KJ Kripalani, DN Mckinstry, SM Singhvi, dkk., Disposisi kaptopril pada subjek
normal, Clin. Pharmacol. Ada. 27 (1980) 636–641.
[30]SH Kubo, RJ Cody, Farmakokinetik klinis penghambat enzim pengonversi angiotensin.
Ulasan, Klinik. Pharmacok. 10 (1985) 377–391.
[31]JV Weinstock, MN Ehrinpreis, DL Boros, et al., Pengaruh SQ 14225, penghambat enzim
pengubah angiotensin I, pada respons granulomatosa terhadap telur Schistosoma
mansoni pada tikus, J. Clin. Menginvestasikan. 67 (1981) 931–936.
[32]H. Herlitz, A. Tarkowski, C. Svalander, et al., Efek menguntungkan dari kaptopril pada penyakit seperti
lupus eritematosus sistemik pada tikus MRL lpr/lpr, Int. Lengkungan. Alergi
Aplikasi kekebalan. 85 (1988) 272–277.
[33]CS Constantinescu, E. Ventura, B. Hilliard, et al., Pengaruh angiotensin converting
enzyme inhibitor captopril pada percobaan autoimun en-
sefalomielitis, imunofarmakol. Imunotoksikol. 17 (1995) 471–491.
[34]CS Constantinescu, DB Goodman, ES Ventura, Captopril dan lisinopril menekan
Biomedis & Farmakoterapi 113 (2019) 108780
produksi interleukin-12 oleh sel mononuklear darah tepi manusia, Immunol.
Lett. 62 (1998) 25–31.
[35]M. Fukuzawa, J. Satoh, M. Sagara, et al., Angiotensin converting enzyme inhibitors
menekan produksi tumor necrosis factor-alpha in vitro dan in vivo,
Immunopharmacology 36 (1997) 49–55.
[36]R. Schindler, CA Dinarello, KM Koch, Angiotensin-convertingenzyme inhibitors
menekan sintesis faktor nekrosis tumor dan interleukin 1 oleh sel mononuklear
darah tepi manusia, Sitokin 7 (1995) 526–533.
[37]J. McCormick, SP Barry, A. Sivarajah, et al., Pemulungan radikal bebas menghambat
fosforilasi STAT setelah cedera iskemia/ reperfusi in vivo, FASEB J. 20 (2006) 2115–
2117.
[38]T. Omura, M. Yoshiyama, F. Ishikura, dkk., Iskemia miokard mengaktifkan jalur JAK-
STAT melalui pensinyalan angiotensin II in vivo miokardium tikus, J. Mol.
Sel. Cardiol. 33 (2001) 307–316.
[39]K. Boengler, D. Hilfiker-Kleiner, G. Heusch, et al., Penghambatan pembukaan pori
transisi permeabilitas oleh STAT3 mitokondria dan perannya dalam iskemia /
reperfusi miokard, Res Dasar. Cardiol. 105 (2010) 771–785.
[40]YT Xuan, Y. Guo, H. Han, et al., Peran penting dari jalur JAK-STAT dalam prakondisi
iskemik, Proc. Natl. Acad. Sci. AS 98 (2001) 9050–9055.
[41]N. Meydan, T. Grunberger, H. Dadi, et al., Penghambatan leukemia limfoblastik akut
oleh penghambat Jak-2, Alam 379 (1997) 645.
[42]DL Beckles, E. Mascareno, MAQ Siddiqui, Penghambatan fosforilasi jak2
melemahkan tekanan hipertrofi jantung yang berlebihan, Vascul. farmasi. 45
(2006) 350–357.
[43]W. Cui, Z. Zhang, P. Zhang, et al., Nrf2 melemahkan respon inflamasi pada PPOK/
emfisema: crosstalk dengan jalur Wnt3a/β-catenin dan AMPK, J. Cell. Mol.
Kedokteran (2018).
[44]T. Reya, H. Clevers, Pensinyalan Wnt dalam sel punca dan kanker, Alam 434 (2005)
843–850.
[45]LM Eisenberg, CA Eisenberg, transduksi sinyal Wnt dan pembentukan miokardium,
Dev. Biol. 293 (2006) 305–315.
[46]R. Fodde, T. Brabletz, pensinyalan Wnt/beta-catenin dalam batang kanker dan
perilaku ganas, Curr. Opin. Bio Sel. 19 (2007) 150–158.
[47]S. Foulquier, EP Daskalopoulos, G. Lluri, et al., Pensinyalan Wnt pada penyakit jantung
dan pembuluh darah, Pharmacol. Wahyu 70 (2018) 68–141.
[48]ZF Zimmerman, RM Kulikauskas, K. Bomsztyk, dkk., Aktivasi pensinyalan Wnt/betacatenin
meningkatkan apoptosis pada sel melanoma yang diobati dengan jejak, PLoS One 8 (2013)
e69593.
[49]X. Wu, G. Deng, X. Hao, et al., Jalur yang bergantung pada caspase terlibat dalam pensinyalan Wnt/β-
catenin mempromosikan apoptosis pada Bacillus calmette-guerin yang terinfeksi
Makrofag RAW264.7, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 5045–5062.
[50]M. Ming, S. Wang, W. Wu, et al., Aktivasi pensinyalan protein Wnt / β-catenin menginduksi
apoptosis yang dimediasi mitokondria dalam sel progenitor hematopoietik, J. Biol. kimia
287 (2012).
[51]K. Kim, KM Pang, M. Evans, et al., Overekspresi -catenin menginduksi apoptosis
terlepas dari fungsi transaktivasinya dengan LEF-1 atau keterlibatan
Regulator siklus sel G1, Mol. Biol. Sel 11 (2000) 3509–3523.
[52]BS Xie, XX He, ZL Ai, et al., Keterlibatan beta-catenin dalam autophagy dan apoptosis yang
diinduksi matrine dalam sel WB-F344, Mol. Kedokteran Rep.9 (2014) 2547–2553.
[53]HA Juraver-Geslin, JJ Ausseil, M. Wassef, et al., Barhl2 membatasi pertumbuhan
primordium diencephalic melalui penghambatan aktivasi beta-catenin Caspase3,
Proc. Natl. Acad. Sci. AS 108 (2011) 2288–2293.
[54]RT Moon, JD Brown, JA Yang-Snyder, et al., Reseptor dan antagonis yang terkait secara
struktural lengkap untuk ligan Wnt yang disekresikan, Cell Mar. 8 (1997) 725–728.
[55]S. Nakagiri, A. Murakami, S. Takada, et al., Viral FLIP meningkatkan pensinyalan Wnt hilir beta-
catenin yang distabilkan, yang mengarah ke kontrol pertumbuhan sel, Mol. Sel. Biol. 25
(2005) 9249–9258.