Terjemahan Microbiology Application

Machine Translated by Google
3
Saya
VERSI LENGKAP
milik Benson
Aplikasi Mikrobiologi
Pedoman Laboratorium Mikrobiologi Umum
Edisi Keempat Belas
Alfred E. Brown Profesor
Emeritus, Universitas Auburn
Heidi R. Smith Front
Range Community College
4
ii
APLIKASI MIKROBIOLOGI BENSON: PEDOMAN LABORATORIUM DALAM MIKROBIOLOGI UMUM, LENGKAP

VERSI, EDISI KEEMPAT BELAS
Diterbitkan oleh McGraw-Hill Education, 2 Penn Plaza, New York, NY 10121. Hak Cipta © 2017 oleh McGraw-Hill Education. Seluruh hak cipta.
Dicetak di Amerika Serikat. Edisi sebelumnya © 2015, 2012, dan 2009. Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau didistribusikan dalam bentuk apa pun
atau dengan cara apa pun, atau disimpan dalam database atau sistem pengambilan, tanpa izin tertulis sebelumnya dari McGraw-Hill Education, termasuk, namun tidak
terbatas pada, dalam jaringan apa pun atau penyimpanan atau transmisi elektronik lainnya, atau siaran untuk pembelajaran jarak jauh.
Beberapa tambahan, termasuk komponen elektronik dan cetak, mungkin tidak tersedia untuk pelanggan di luar Amerika Serikat.
Buku ini dicetak di atas kertas bebas asam.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 RMN 21 20 19 18 17 16
ISBN 978-1-259-91979-4
MHID 1-259-91979-X
Chief Product Officer, SVP Produk & Pasar: G. Scott Virkler Wakil Presiden,
Manajer Umum, Produk & Pasar: Marty Lange Direktur Pelaksana: Lynn
Breithaupt Manajer Merek: Marija Magner
Direktur, Pengembangan Produk:
Rose Koos Pengembang Produk: Darlene M.
Schueller Direktur Konten Digital: Michael G.
Koot, PhD Analis Produk Digital: Jake Theobald Koordinator
Pengembangan Produk: Andrea Eboh Manajer
Pemasaran: Kristine Rellihan Direktur, Desain &
Pengiriman Konten: Linda Meehan-Avenarius
Manajer Proyek Konten: Mary Jane Lampe (Core) / Keri Johnson (Penilaian)
Spesialis Lisensi Konten: Melissa Homer (Gambar) / Lorraine Buczek (Teks)

Pembeli: Laura Fuller
Desainer: Matt Backhaus
Gambar Sampul: © Shutterstock/ angellodeco; Oleh R Parulan Jr./ Getty Images
Penyusun: MPS Limited, Perusahaan Macmillan Jenis
Huruf: STIX MathJax Main 11/12 Printer:
RR Donnelley
Semua kredit yang muncul di halaman atau di akhir buku dianggap sebagai perpanjangan dari halaman hak cipta.
Alamat Internet yang tercantum dalam teks akurat pada saat publikasi. Dimasukkannya situs web tidak menunjukkan dukungan dari penulis atau McGraw-Hill Education, dan
McGraw-Hill Education tidak menjamin keakuratan informasi yang disajikan di situs-situs tersebut.
www.mhhe.com
5
aku aku aku
Tentang Penulis
Alfred Brown
Profesor Emeritus Mikrobiologi Auburn

University BS
Mikrobiologi, California State

College, Long Beach Ph.D.
Mikrobiologi, UCLA
Mengajar Dr. Brown telah menjadi anggota American Society for Microbiology selama 50 tahun, dan dia telah mengajar berbagai
kursus mikrobiologi selama karir mengajar yang berlangsung lebih dari 30 tahun. Kursus telah mencakup mikrobiologi umum,
mikrobiologi medis, fisiologi mikroba, mikrobiologi terapan dan lingkungan, fotosintesis, metode mikrobiologi, dan kursus
pascasarjana seperti biomembran. Pada tahun 2008, Dr. Brown pensiun dari fakultas Universitas Auburn sebagai profesor
mikrobiologi emeritus.
Administrasi Selama masa jabatannya di Universitas Auburn, Dr. Brown menjabat sebagai direktur Fasilitas Mikroskop
Elektron Universitas. Dia juga menjabat sebagai ketua Departemen Botani dan Mikrobiologi dan ketua Departemen Ilmu Biologi.
Penelitian Penelitian saya berfokus pada fisiologi bakteri nonsulfur ungu. Ini telah melibatkan bagaimana sintesis membran
bakterioklorofil dan fotosintesis dikoordinasikan. Herbisida, seperti atrazin, telah digunakan untuk menentukan tempat pengikatan
ubikuinon dalam transpor elektron fotosintesis. Pengikatan terjadi pada subunit L, protein di pusat reaksi fotosintesis. Resistensi
terhadap atrazin melibatkan perubahan asam amino tunggal dalam subunit L yang mencegah herbisida mengikat protein dan
menghambat transpor elektron.
Ini sebanding dengan bagaimana atrazin menghambat transpor elektron pada tanaman dan bagaimana resistensi terhadap
herbisida ini berkembang. Laboratorium saya juga menyelidiki bagaimana herbisida sulfonilurea menghambat sintase asetolaktat,
enzim penting dalam jalur asam amino rantai cabang. Baru-baru ini, saya berkonsultasi dengan perusahaan yang memproduksi
sirap atap. Karena adanya kalsium karbonat pada herpes zoster, cyanobacteria dapat dengan mudah tumbuh di permukaannya,
menyebabkan masalah kontaminasi. Laboratorium saya mengisolasi berbagai spesies cyanobacteria yang terlibat dalam masalah
dan mengkarakterisasinya secara taksonomi. Kami juga menguji penghambat pertumbuhan yang mungkin digunakan dalam
kontrol mereka.
Brown dan istrinya telah banyak bepergian di Eropa sejak pensiun. Ketiga anaknya mengikutinya dalam sains, setelah
mendapatkan gelar doktor dalam fisika, kimia, dan anatomi.
Heidi Smith
Front Range Community College BA

Biologi/Pra-Kedokteran, Taylor University, IN MS Biology,
Bowling Green State University, OH
6
Heidi Smith adalah fakultas utama mikrobiologi di Front Range Community College di Fort Collins, CO, dan mengajar berbagai
kursus biologi setiap semester termasuk mikrobiologi, anatomi/fisiologi, dan bioteknologi. Heidi juga berperan sebagai penyelidik
utama pada program hibah federal yang dirancang untuk meningkatkan keberhasilan siswa dalam transfer dan penyelesaian gelar
STEM di universitas setempat. Dalam peran itu, Heidi bekerja langsung dengan mahasiswa untuk melatih dan mendukung mereka
melalui pengalaman penelitian sarjana musim panas.
Kesuksesan siswa adalah prioritas strategis di FRCC dan hasrat pribadi Heidi. Dia terus bekerja untuk berkembang secara
profesional dengan cara yang membantunya melakukan pekerjaan yang lebih baik untuk mencapai tujuan penting ini. Selama 7
tahun terakhir, Heidi berkesempatan berkolaborasi dengan fakultas di seluruh Amerika Serikat dalam mengembangkan perangkat
digital, seperti SmartBook, LearnSmart Labs, dan Connect, yang mengukur dan meningkatkan hasil pembelajaran siswa.
Pengalaman kolaboratif dengan alat-alat ini telah merevolusi pendekatannya untuk mengajar di kursus tatap muka dan hybrid.
Penggunaan teknologi digital telah memberi Heidi kemampuan untuk mengajar mata kuliah yang digerakkan oleh data siswa
secara real-time dan dengan fokus pada pembelajaran aktif dan aktivitas berpikir kritis.
Heidi adalah anggota aktif American Society for Microbiology. Dia telah mempresentasikan teknologi instruksional dan praktik
pengajaran online dan tatap muka terbaik pada banyak kesempatan di konferensi tahunan untuk pendidik sarjana. Dia juga
menjabat sebagai anggota Satuan Tugas ASM tentang Pedoman Kurikulum untuk Pendidikan Mikrobiologi Sarjana, membantu
dalam mengidentifikasi konsep inti mikrobiologi sebagai panduan untuk pengajaran sarjana.
Di luar kampus, Heidi menghabiskan waktu sebanyak mungkin menikmati alam bebas Colorado yang indah bersama suaminya
dan tiga anak kecil.
7
iv
Isi
Kata pengantar
Alat Digital untuk Kesuksesan Anda

Keselamatan Laboratorium Mikrobiologi Dasar
Tingkat Keamanan Hayati untuk Agen Infeksi Terpilih
Mikroorganisme yang Digunakan atau Diisolasi dalam Latihan Lab di Manual Ini
BAGIAN 1 Mikroskopi
1 Mikroskop Brightfield
2 Mikroskop Medan Gelap
3 Mikroskopi Fase-Kontras
4 Mikroskop Fluoresensi
5 Pengukuran Mikroskopis
BAGIAN 2 Survei Mikroorganisme
6 Mikrobiologi Air Tambak—Protista, Alga, dan Cyanobacteria
7 Di mana-mana Bakteri
8 Jamur: Jamur dan Ragi
BAGIAN 3 Manipulasi Mikroorganisme
9 Teknik Aseptik
10 Teknik Kultur Murni
BAGIAN 4 Pewarnaan dan Pengamatan Mikroorganisme
11 Persiapan Smear
12 Pewarnaan Sederhana
13 Pewarnaan Negatif
14 Pewarnaan Kapsul
Pewarnaan 15 Gram
16 Pewarnaan Spora: Dua Metode
17 Pewarnaan Tahan Asam: Metode Kinyoun

18 Penentuan Motilitas
BAGIAN 5 Metode Kultur
19 Persiapan Media Kultur

20 Persiapan Kultur Stok
21 Pencacahan Bakteri: Hitungan Lempeng Standar
22 Kultur Slide: Jamur
8
BAGIAN 6 Virus Bakteri

23 Penentuan Titer Bakteriofag
24 Kurva Pertumbuhan Bakteriofag Satu Langkah
25 Isolasi Fag dari Lalat
26 Pengetikan Fag
BAGIAN 7 Pengaruh Lingkungan dan Pengendalian Pertumbuhan Mikroba

27 Pengaruh Oksigen Terhadap Pertumbuhan
28 Suhu: Efek pada Pertumbuhan 29

pH dan Pertumbuhan Mikroba
30 Aktivitas Air dan Tekanan Osmotik
31 Sinar Ultraviolet: Efek Mematikan
32 Pengaruh Lisozim pada Sel Bakteri
33 Evaluasi Alkohol: Efektivitasnya sebagai Antiseptik
34 Pengujian Sensitivitas Antimikroba: Metode Kirby-Bauer
35 Evaluasi Antiseptik dan Disinfektan: Metode Filter Paper Disk
36 Efektivitas Hand Scrubbing
BAGIAN 8 Identifikasi Bakteri Tak Dikenal

37 Studi Morfologi Bakteri Tak Dikenal
38 Ciri Budaya
39 Karakteristik Fisiologis: Uji Oksidasi dan Fermentasi

40 Karakteristik Fisiologis: Reaksi Hidrolitik dan Degradatif
41 Karakteristik Fisiologis: Media Uji Berganda
42 Penggunaan Manual Bergey
BAGIAN 9 Sistem Multitest Miniatur

43 Enterobacteriaceae Identifikasi: Sistem API® 20E
44 Enterobacteriaceae Identifikasi: Sistem Tes EnteroPluri
45 Staphylococcus Identifikasi: Sistem Staph API®
BAGIAN 10 Keanekaragaman dan Mikrobiologi Lingkungan

46 Isolasi Produsen Antibiotik: Streptomyces
47 Siklus Nitrogen: Amonifikasi
ay
48 Fiksasi Nitrogen Simbiotik: Rhizobium

49 Fiksasi Nitrogen Hidup Bebas: Azotobacter
50 Denitrifikasi: Paracoccus denitrificans
51 Kolom Winogradsky
52 Bakteri Fotosintetik Nonsulfur Ungu
53 Bakteri Pereduksi Sulfat: Desulfovibrio
54 Komensalisme Bakteri
55 Sinergisme Bakteri
56 Antagonisme Mikroba
9
BAGIAN 11 Mikrobiologi Terapan

57 Jumlah Bakteri Makanan
58 Pemeriksaan Bakteriologi Air: Penentuan Angka yang Paling Mungkin
59 Pemeriksaan Bakteriologi Air: Metode Filter Membran
60 Uji Reduktase
61 Suhu: Efek Mematikan

62 Pembusukan Mikroba Makanan Kalengan
63 Mikrobiologi Fermentasi Alkohol
BAGIAN 12 Genetika dan Bioteknologi Bakteri

64 Memahami Resistensi Antibiotik: Pelapisan Replika
65 Reaksi Rantai Polimerase untuk Memperkuat DNA
66 Transformasi Bakteri
BAGIAN 13 Mikrobiologi Medis

67 Stafilokokus: Isolasi dan Identifikasi
68 Streptococci dan Enterococci: Isolasi dan Identifikasi
69 Patogen Usus Gram-Negatif
70 Epidemi Sintetik
BAGIAN 14 Imunologi dan Serologi

71 Slide Uji Aglutinasi: Tipe Serologis 72 Slide
Uji Aglutinasi S. aureus 73 Slide Uji
Aglutinasi Streptococcus 74 Enzyme-
Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
75 Pengelompokan
Darah Lampiran A
Tabel Lampiran B Indikator, Noda,
Reagen Lampiran
C Media Lampiran D Bagan
Identifikasi Lampiran E Metrik dan Setara Pengukuran Bahasa Inggris
Indeks
Menunjukkan aktivitas LearnSmart Lab® tersedia untuk semua atau sebagian dari latihan ini.
Untuk informasi lebih lanjut, kunjungi http://www.mhhe.com/LearnSmartLabsBiology/
10
11
vi
Kata pengantar
Aplikasi Mikrobiologi Benson telah menjadi standar emas manual laboratorium mikrobiologi selama lebih dari 35 tahun.
Manual ini memiliki sejumlah fitur menarik yang mengakibatkan pengadopsiannya di universitas, perguruan tinggi, dan
community college untuk berbagai macam kursus mikrobiologi. Fitur-fitur ini termasuk diagram yang ramah pengguna
yang dapat diikuti dengan mudah oleh siswa, instruksi yang jelas, dan serangkaian latihan yang andal yang cocok untuk
kursus mikrobiologi pemula atau lanjutan.
Dalam merevisi manual lab untuk edisi keempat belas, kami telah mencoba mempertahankan kekuatan manual yang
telah terbukti dan lebih jauh menyempurnakannya. Kami telah memperbarui materi pengantar dalam banyak latihan untuk
mencerminkan perubahan dalam informasi ilmiah dan meningkatkan relevansi bagi siswa. Pertanyaan berpikir kritis juga
telah ditambahkan untuk meningkatkan tingkat laporan laboratorium Bloom. Terakhir, nama dan tingkat biosafety
mikroorganisme yang digunakan dalam manual konsisten dengan yang digunakan oleh American Type Culture Collection.
Ini penting bagi para pengguna yang mengandalkan ATCC sebagai sumber budaya.
Tur Terpandu Melalui Latihan Lab
Hasil belajar
Setiap latihan dibuka dengan Hasil Pembelajaran, yang mencantumkan apa yang harus dapat dilakukan siswa setelah menyelesaikannya
latihan.
Perkenalan
Pendahuluan menjelaskan subjek latihan atau ide-ide yang akan diselidiki. Ini mencakup semua informasi yang diperlukan
untuk melakukan latihan laboratorium. Edisi keempat belas telah meningkatkan pesan relevansi siswa dalam pengantar
ini, menjelaskan kepada siswa mengapa mereka harus peduli dengan lab.
12
Periode Pertama dan Kedua
Dalam banyak kasus, instruksi disajikan untuk dua atau lebih periode kelas sehingga Anda dapat melanjutkan latihan
dengan cara yang tepat.
Bahan yang Dibutuhkan
Bagian ini mencantumkan bahan laboratorium yang diperlukan untuk menyelesaikan latihan.
Prosedur
Prosedur dan metode menyediakan satu set instruksi rinci untuk menyelesaikan laboratorium yang direncanakan
kegiatan.
vi
Ilustrasi
Ilustrasi memberikan instruksi visual untuk melakukan langkah-langkah dalam prosedur atau digunakan untuk mengidentifikasi
bagian instrumen atau spesimen.
13
Laporan Laboratorium
Laporan Laboratorium yang harus diselesaikan oleh siswa segera mengikuti sebagian besar latihan. Laporan Laboratorium ini
dirancang untuk memandu dan memperkuat pembelajaran siswa dan menyediakan tempat yang nyaman untuk merekam data.
Laporan ini mencakup berbagai jenis kegiatan tinjauan, tabel untuk mencatat pengamatan dan hasil eksperimen, serta
pertanyaan yang berkaitan dengan analisis data tersebut.
Sebagai hasil dari kegiatan ini, siswa akan meningkatkan keterampilan mereka dalam mengumpulkan informasi dengan
observasi dan eksperimentasi. Dengan menyelesaikan semua penilaian di Laporan Laboratorium, siswa akan dapat
menentukan apakah mereka mencapai semua hasil pembelajaran.
14
Keamanan
Dalam edisi keempat belas, kami telah mengikuti rekomendasi terbaru dari American Society for Microbiology mengenai tingkat biosafety
organisme yang digunakan dalam latihan di manual laboratorium ini. Bagian Keselamatan Mikrobiologi Dasar di halaman pengantar
manual lab telah sepenuhnya direvisi agar selaras dengan Pedoman ASM untuk Keamanan Hayati di Laboratorium Pendidikan yang
dirilis pada tahun 2012. Klasifikasi BSL dari semua organisme yang digunakan dalam setiap latihan telah diperbarui menurut ATCC. Jika
memungkinkan, organisme BSL-1 menggantikan organisme BSL-2 dalam banyak latihan. Namun, dalam viii
beberapa latihan, perlu menggunakan organisme BSL-2 seperti stafilokokus spesifik, streptokokus, dan beberapa Enterobacteriaceae
karena tes, pewarnaan, dan konsep spesifik yang melibatkan organisme ini. Untuk latihan ini, kami merekomendasikan agar prosedur
keselamatan diikuti seperti yang disarankan oleh ASM, seperti penggunaan lemari biosafety.
Perubahan pada Edisi Ini
15
Latihan
•
Banyak foto dan beberapa diagram telah diganti, ditingkatkan, atau direvisi agar lebih jelas.
•
Bahkan jika prosedurnya sendiri tidak berubah, teksnya direvisi untuk mengklarifikasi bidang-bidang di mana siswa biasanya kesulitan
melalui latihan.
•
Pertanyaan berpikir kritis baru telah ditambahkan di akhir banyak latihan.
Bagian 2 Survei Mikroorganisme

•
Diagram yang diperbarui dari Domain Bakteri, Archaea, dan Eukarya.
Latihan 6 Mikrobiologi Air Tambak
•
Revisi bahan pengantar.
Bagian 3 Manipulasi Mikroorganisme
Latihan 10 Teknik Kultur Murni
•
Foto pelat tuang ditambahkan dengan deskripsi pertumbuhan koloni permukaan versus bawah permukaan.
Bagian 4 Pewarnaan dan Pengamatan Mikroorganisme
Latihan 14 Pewarnaan Kapsul
•
Foto baru noda kapsul menggantikan foto lama.
•
Materi pengantar direvisi untuk menjelaskan bagaimana setiap langkah proses pewarnaan bekerja untuk memungkinkan visualisasi
kapsul.
Latihan 16 Pewarnaan Spora: Dua Metode
•
Menambahkan foto baru noda spora.
•
Prosedur untuk berbagai metode pewarnaan disusun ulang dan direvisi untuk kejelasan yang lebih baik.
Bagian 7 Pengaruh Lingkungan dan Pengendalian Pertumbuhan Mikroba
Latihan 27 Pengaruh Oksigen pada Pertumbuhan
•
Gambar garis dan foto yang telah direvisi sepanjang latihan untuk mengklarifikasi klasifikasi oksigen.
Latihan 28 Suhu: Efek pada Pertumbuhan
•
Menambahkan gambar yang menggambarkan kelompok klasifikasi suhu mikroba.
•
Kisaran suhu yang diperbarui ke batas atas dan bawah yang paling diterima saat ini.
Latihan 31 Sinar Ultraviolet: Efek Mematikan
•
Gambar seni garis lampu UV diganti dengan foto pelat yang setengah tertutup kartu putih.
Bagian 8 Identifikasi Bakteri Tak Dikenal
Latihan 37 Studi Morfologi Bakteri Tak Dikenal
•
Bagan deskriptif baru yang mudah digunakan untuk identifikasi yang tidak diketahui.
•
Menambahkan figur baru kemungkinan posisi endospora dalam sel bakteri.
Latihan 39 Karakteristik Fisiologis: Tes Oksidasi dan Fermentasi
•
Menyusun ulang bagian prosedural dan gambar proses untuk memudahkan siswa menyelesaikan semua inokulasi yang diperlukan
untuk kontrol dan bakteri uji yang tidak diketahui.
•
Menambahkan bagan alur untuk menjelaskan langkah-langkah uji reduksi nitrat dan analisis yang benar setelah setiap langkah.
Latihan 40 Karakteristik Fisiologis: Reaksi Hidrolitik dan Degradatif
16
•
Gambar, foto, dan keterangan yang direvisi untuk memfasilitasi analisis hasil siswa yang lebih baik untuk setiap tes ini.
Latihan 41 Karakteristik Fisiologis: Media Uji Berganda

• Tes susu lakmus dihapus.
Bagian 9 Sistem Multitest Miniatur

®
Latihan 43 Enterobacteriaceae Identifikasi: API Sistem 20E

•
Menyederhanakan proses tabulasi dan memperbesar foto untuk memudahkan analisis dan identifikasi oleh siswa.
Latihan 44 Identifikasi Enterobacteriaceae : Sistem Tes EnteroPluri

•
Sepenuhnya menulis ulang latihan ini agar selaras dengan sistem pengujian baru yang tersedia dari Becton-Dickinson karena
penghentian sistem Enterotube II.
Bagian 11 Mikrobiologi Terapan
Latihan 58 Pemeriksaan Bakteriologi Air: Penentuan Angka yang Paling Mungkin

•
Pengantar latihan yang diperbarui.
•
Merevisi tabel MPN untuk memudahkan siswa menganalisis dan memahami hasilnya.
ix
Latihan 60 Tes Reduktase
•
Bagian pengantar latihan telah direvisi dan diperbarui.
Latihan 63 Mikrobiologi Fermentasi Alkohol

•
Pengantar latihan telah direvisi, menekankan sejarah fermentasi dan bagaimana fermentasi merupakan sarana untuk mengawetkan
makanan.
•
Menambahkan penjelasan tentang bagaimana rasa tidak enak yang dihasilkan oleh sulfida terjadi dalam fermentasi anggur dan
bagaimana hal itu dapat dipantau dengan strip timbal asetat yang ditempatkan di labu fermentasi.
Bagian 12 Genetika Bakteri dan Bioteknologi

•
Bagian ini sepenuhnya direvisi ke tingkat yang lebih sesuai untuk mahasiswa mikrobiologi umum. Latihan-latihan ini dapat dilakukan
secara individual atau teknik PCR, elektroforesis gel, dan transformasi bakteri dapat dilakukan sebagai rangkaian yang terhubung.
Figur dan foto baru ditambahkan agar selaras dengan perubahan di seluruh bagian ini.
Latihan 65 Reaksi Rantai Polimerase untuk Memperkuat DNA

•
Tulis ulang sepenuhnya latihan ini (pengantar, prosedur, dan Laporan Laboratorium), menggabungkan teknik PCR dan elektroforesis
gel untuk mengonfirmasi keberadaan gen GFP dalam plasmid pGLO.
Latihan 66 Transformasi Bakteri
•
Benar-benar menulis ulang latihan ini untuk menunjukkan relevansi teknologi DNA rekombinan untuk berkorelasi dengan latihan
sebelumnya hanya jika diinginkan, dan untuk secara jelas menguraikan proses transformasi kimiawi E. coli dengan plasmid pGLO.
Bagian 13 Mikrobiologi Medis
Latihan 67 Stafilokokus
•
Foto agar garam manitol yang ditingkatkan.
Latihan 68 Streptococci dan Enterococci: Isolasi dan Identifikasi
17
•
Foto yang ditingkatkan dari hemolisis lempeng agar darah.
Bagian 14 Imunologi dan Serologi
Latihan 74 Uji Imunosorben Terkait Enzim (ELISA)
•
Menambahkan latihan ini yang mensimulasikan tes skrining HIV yang umum digunakan.
Latihan 75 Pengelompokan Darah
•
Menambahkan gambar tabel untuk menjelaskan kelompok ABO dengan jelas.
•
Materi pengantar yang direvisi, menambahkan informasi tentang faktor Rh dan penggunaan RhoGAM pada ibu Rh-negatif untuk
mencegah penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.
•
Revisi prosedur penggunaan darah buatan yang tersedia dalam kit yang dapat dibeli dari perusahaan pemasok biologis. Penggunaan
tongkat jari oleh siswa untuk mengambil darah dan penggunaan darah manusia di laboratorium telah menjadi masalah keamanan yang
serius.
Kami ingin berterima kasih kepada semua orang di McGraw-Hill atas upaya dan dukungan mereka yang tak kenal lelah dalam proyek ini.
Mereka profesional dan kompeten dan selalu senang bekerja dengan manual ini. Terima kasih khusus dan mendalam kepada Darlene
Schueller, pengembang produk kami. Sekali lagi, dia menjaga agar proyek tetap fokus, memastikan kami memenuhi tenggat waktu, dan
memberikan saran yang menyempurnakan manual dalam banyak hal. Terima kasih juga kepada Marija Magner, manajer merek; Mary Jane
Lampe, manajer proyek konten; Kristine Rellihan, manajer pemasaran; Matt Backhaus, desainer; Keri Johnson, manajer proyek konten
penilaian; dan Melissa Homer dan Lorraine Buczek, spesialis lisensi konten dan banyak orang yang bekerja "di belakang layar".
18
Alat Digital untuk Kesuksesan Anda
McGraw-Hill Connect for Benson's Microbiological Applications Laboratory Manual in General Mikrobiologi memberikan solusi penugasan
dan penilaian, menghubungkan siswa Anda dengan alat dan sumber daya yang mereka perlukan untuk mencapai kesuksesan.
Pekerjaan Rumah dan Penilaian
Dengan Connect for Benson's Microbiological Applications Laboratory Manual in General Microbiology, Anda dapat memberikan tugas,
kuis, dan tes yang dinilai otomatis secara online. Pilih dari serangkaian pertanyaan dan aktivitas interaktif yang kuat menggunakan seni
berkualitas tinggi dari manual lab dan animasi. Konten yang dapat ditetapkan tersedia untuk setiap Hasil Pembelajaran dan dikategorikan
menurut Tujuan ASM. Sebagai instruktur, Anda dapat mengedit pertanyaan yang ada dan membuat pertanyaan yang benar-benar baru.
Sumber Daya Instruktur
Sesuaikan kuliah Anda dengan alat seperti animasi dan gambar. Manual instruktur juga tersedia.
Lecture Capture
®
McGraw-Hill Tegrity mencatat dan mendistribusikan kuliah kelas Anda hanya dengan satu klik tombol. Mahasiswa dapat melihat materi
kuliah ini kapan saja, dimana saja melalui komputer atau perangkat mobile. Materi diindeks saat Anda mencatat, sehingga siswa dapat
menggunakan kata kunci untuk menemukan dengan tepat apa yang ingin mereka pelajari.
LearnSmart Labs ®
adalah pengalaman lab simulasi adaptif opsional yang menghadirkan eksplorasi ilmiah yang bermakna bagi siswa.
Melalui serangkaian pertanyaan adaptif, LearnSmart Labs mengidentifikasi celah pengetahuan siswa dan menyediakan sumber daya
untuk menutup celah tersebut dengan cepat dan efisien. Setelah siswa menguasai keterampilan dan konsep dasar yang diperlukan,
mereka terlibat dalam pengalaman laboratorium simulasi yang sangat realistis yang memungkinkan kesalahan dan pelaksanaan metode
ilmiah. LearnSmart Labs saat ini digunakan sebagai tugas persiapan pra-lab atau sebagai pengganti lab penuh.
Belajar Cerdas Prep adalah alat pembelajaran adaptif yang mempersiapkan siswa untuk pekerjaan tingkat perguruan tinggi di bidang
®
Mikrobiologi, dan disertakan dengan pembelian Aplikasi Mikrobiologi Connect for Benson. LearnSmart Prep secara individual
mengidentifikasi konsep-konsep yang tidak sepenuhnya dipahami siswa dan menyediakan sumber belajar untuk mengajarkan konsep-
konsep penting sehingga dia memasuki kelas dengan persiapan. Laporan berbasis data menyoroti bidang-bidang yang menjadi kesulitan
siswa.
Hemat Waktu dengan Penilaian Bertingkat Otomatis. Kumpulkan Data Performa yang Kuat.
19
Laporan Rinci
Lacak kinerja masing-masing siswa—berdasarkan pertanyaan, tugas, atau terkait dengan kelas secara keseluruhan—dengan laporan
nilai mendetail. Integrasikan laporan nilai dengan mudah menggunakan Sistem Manajemen Pembelajaran (LMS) Anda.
Pelajari lebih lanjut di connect.mheducation.com.
20
xi
Keselamatan Laboratorium Mikrobiologi Dasar
Setiap siswa dan instruktur harus fokus pada kebutuhan akan keamanan di laboratorium mikrobiologi. Meskipun lab merupakan
lingkungan belajar yang menarik dan mengasyikkan, ada bahaya yang harus diketahui dan aturan yang harus diikuti untuk
mencegah kecelakaan dan kontaminasi mikroba. Pedoman berikut akan memberikan setiap anggota laboratorium informasi yang
diperlukan untuk memastikan lingkungan belajar yang aman.
Laboratorium mikrobiologi adalah lingkungan khusus, seringkali unik yang dapat menimbulkan risiko penyakit menular yang
dapat diidentifikasi kepada orang-orang yang bekerja di dalam atau di dekatnya. Infeksi telah dihubungi di laboratorium sepanjang
sejarah mikrobiologi. Laporan awal menggambarkan beberapa kasus tifus, kolera, brucellosis, dan tetanus terkait laboratorium.
Laporan terbaru telah mendokumentasikan kasus yang didapat di laboratorium pada pekerja laboratorium dan petugas kesehatan
yang melibatkan Bacillus anthracis, Bordetella pertussis, Brucella, Burkholderia pseudomallei, Campylobacter, Chlamydia, dan
racun dari Clostridium tetani, Clostridium botulinum, dan Corynebacterium diphtheriae. Pada tahun 2011, CDC melacak wabah
Salmonella ke beberapa laboratorium mikrobiologi sarjana, mendorong diskusi lebih lanjut tentang pedoman keselamatan untuk
pengaturan ruang kelas laboratorium.
Istilah "kontainmen" digunakan untuk menjelaskan metode dan prosedur yang aman untuk menangani dan mengelola
mikroorganisme di laboratorium. Prosedur laboratorium penting yang dipraktikkan oleh semua ahli mikrobiologi yang akan menjamin
penahanan adalah teknik aseptik, yang mencegah pekerja mengkontaminasi diri mereka sendiri dengan mikroorganisme,
memastikan bahwa orang lain dan area kerja tidak terkontaminasi, dan juga memastikan bahwa biakan mikroba tidak terkontaminasi
secara tidak perlu dengan bahan yang tidak diinginkan. organisme. Penahanan melibatkan personel dan lingkungan laboratorium
terdekat. Penahanan juga menjamin bahwa agen infeksius tidak keluar dari laboratorium dan mencemari lingkungan di luar
laboratorium. Oleh karena itu, penahanan bergantung pada teknik mikrobiologi dan protokol laboratorium yang baik serta
penggunaan peralatan keselamatan yang tepat.
Tingkat Keamanan Hayati (BSL)
Klasifikasi tingkat biosafety mikroorganisme mewakili potensi organisme untuk menyebabkan penyakit dan kondisi di mana
organisme harus ditangani dengan aman. Pusat Pengendalian Penyakit mengklasifikasikan organisme menjadi empat tingkatan,
yang memperhitungkan banyak faktor seperti virulensi, patogenisitas, pola resistensi antibiotik, ketersediaan vaksin dan pengobatan,
dan faktor lainnya. Keempat level biosafety tersebut dijelaskan pada tabel di halaman xii.
Semua mikroorganisme yang digunakan dalam latihan di manual ini diklasifikasikan sebagai BSL-1 atau BSL-2. Catatan:
Meskipun beberapa organisme yang akan dibudidayakan dan dikerjakan oleh siswa diklasifikasikan sebagai BSL-2, organisme ini
mungkin merupakan galur laboratorium yang tidak menimbulkan ancaman infeksi yang sama seperti isolat primer dari organisme
yang sama yang diambil dari pasien dalam sampel klinis. Oleh karena itu, strain laboratorium ini, dalam banyak kasus, dapat
ditangani dengan menggunakan prosedur dan peralatan normal yang ditemukan di sebagian besar laboratorium pengajaran siswa.
Namun, harus ditekankan bahwa banyak bakteri adalah patogen oportunistik, oleh karena itu semua mikroorganisme harus
ditangani dengan memperhatikan teknik dan tindakan pencegahan yang tepat.
Setiap tingkat keamanan hayati menunjukkan bahwa praktik dan teknik laboratorium tertentu, peralatan keselamatan, dan
fasilitas laboratorium harus digunakan saat bekerja dengan organisme dalam klasifikasi tersebut. Setiap kombinasi secara khusus
sesuai untuk operasi yang dilakukan dan rute transmisi yang terdokumentasi atau dicurigai
21
agen infeksius. Menanggapi wabah Salmonella di laboratorium sarjana, American Society for Microbiology menetapkan
untuk menetapkan seperangkat praktik keselamatan yang jelas untuk laboratorium berdasarkan penggunaan organisme
BSL-1 atau BSL-2. Pada tahun 2013, Pedoman Keamanan Hayati di Laboratorium Pendidikan diterbitkan dalam Journal of
Microbiology Education.
Praktik Laboratorium Standar (Berdasarkan Pedoman ASM untuk Keamanan Hayati di Laboratorium Pendidikan)
Pedoman BSL-1
Meskipun organisme BSL-1 menimbulkan risiko penyakit yang sangat kecil bagi siswa yang sehat, mereka masih mampu
menyebabkan infeksi dalam keadaan tertentu. Pedoman ini menunjukkan praktik terbaik yang direkomendasikan di
laboratorium untuk melindungi siswa dan masyarakat.
Perlindungan pribadi
•
Disarankan agar jas lab dipakai di laboratorium setiap saat. Jas lab dapat melindungi siswa dari kontaminasi
mikroorganisme yang bekerja dengannya dan mencegahnya
xii
Tingkat Keamanan Hayati untuk Agen Infeksi Terpilih
KEAMANAN BIOS
TINGKAT (BSL) RISIKO KHAS ORGANISME
BSL-1 Tidak mungkin menimbulkan risiko penyakit bagi orang dewasa yang sehat. Achromobacter
denitrificans
Alcaligenes faecalis
Bacillus cereus
Bacillus subtilis
Corynebacterium
pseudodiphtheriticum
Mikrokokus luteus
Neisseria sicca
Staphylococcus
epidermidis
Staphylococcus
saprophyticus
BSL-2 Menimbulkan risiko sedang untuk orang dewasa yang sehat; tidak mungkin menyebar Enterococcus faecalis
ke seluruh komunitas; pengobatan yang efektif tersedia. Klebsiella pneumoniae
Mycobacterium phlei
Salmonella enterica var.
Typhimurium
Shigella flexneri
Staphylococcus aureus
Streptococcus
pneumoniae
Streptococcus pyogenes
BSL-3 Dapat menyebabkan penyakit pada orang dewasa yang sehat; dapat menyebar ke Blastomyces dermatitidis
masyarakat; pengobatan yang efektif tersedia. Chlamydia trachomatis
Coccidioides immitis
22
Coxiella burnetii
Francisella tularensis
Histoplasma capsulatum
Mycobacterium bovis
Mycobacterium
tuberkulosis
Pseudomonas malei
Rickettsia canadensis
Rickettsia prowazekii
Yersinia pestis
BSL-4 Dapat menyebabkan penyakit pada orang dewasa yang sehat; menimbulkan risiko Filovirus
mematikan dan tidak menanggapi vaksin atau terapi antimikroba. Simia virus herpes
Virus lassa
Virus Marburg
Virus ebola
kontaminasi dari noda dan bahan kimia. Di akhir sesi laboratorium, jas lab biasanya disimpan di laboratorium dengan cara yang
ditentukan oleh instruktur.
•
Anda mungkin diminta untuk memakai sarung tangan saat melakukan latihan laboratorium. Mereka melindungi tangan dari
kontaminasi mikroorganisme dan mencegah tangan bersentuhan langsung dengan noda dan reagen lainnya. Ini sangat penting jika
Anda memiliki luka terbuka.
•
Cuci tangan Anda dengan sabun dan air sebelum dan sesudah menangani mikroorganisme.
•
Kacamata pengaman atau kaca mata harus dipakai saat Anda melakukan eksperimen dengan kultur cair, bahaya percikan, atau
saat menyebarkan pelapisan. Mereka juga harus dipakai saat bekerja dengan sinar ultraviolet untuk mencegah kerusakan mata
karena menghalangi sinar UV.
•
Sandal atau sepatu berujung terbuka tidak boleh dipakai di laboratorium. Jatuhnya benda atau biakan secara tidak sengaja dapat
mengakibatkan cedera serius atau infeksi.
•
Jas lab, sarung tangan, dan peralatan keselamatan tidak boleh dipakai di luar laboratorium kecuali didekontaminasi dengan benar
terlebih dahulu.
•
Siswa berambut panjang harus mengikat rambutnya ke belakang untuk menghindari kecelakaan saat bekerja dengan pembakar
Bunsen/api terbuka. Rambut panjang juga bisa menjadi sumber kontaminasi saat bekerja dengan kultur.
•
Hindari mengenakan perhiasan atau syal yang menjuntai ke lab.
•
Jika Anda mengalami gangguan kekebalan (termasuk kehamilan) atau memberikan perawatan untuk seseorang yang kekebalannya
terganggu, silakan berkonsultasi dengan dokter Anda tentang partisipasi Anda dalam latihan laboratorium ini.
Lingkungan dan Peralatan Laboratorium

•
Yang terpenting, baca latihan dan pahami protokol laboratorium sebelum datang ke laboratorium. Dengan cara ini, Anda akan
terbiasa dengan potensi bahaya dalam latihan. Kecuali diarahkan untuk melakukannya, jangan melakukan subkultur pada organisme
yang tidak dikenal
xiii
diisolasi dari lingkungan karena dapat menjadi patogen potensial.

•
Siswa harus menyimpan semua buku dan bahan yang tidak digunakan di laboratorium di area atau wadah yang ditunjuk untuk
tujuan itu. Hanya bahan-bahan yang diperlukan seperti buku catatan laboratorium dan manual laboratorium yang harus dibawa ke
area kerja siswa. Gunakan hanya alat tulis yang disediakan institusi.
•
Hindari memegang barang-barang pribadi seperti ponsel dan kalkulator saat melakukan latihan laboratorium.
Siswa juga harus menghindari memegang lensa kontak atau merias wajah saat berada di laboratorium.
•
Makan, minum (termasuk air), permen karet, mengunyah tembakau, dan merokok tidak diperbolehkan di laboratorium.
•
Ketahui lokasi pintu keluar dan peralatan keselamatan seperti tempat cuci mata dan pancuran, kotak P3K, dan alat pemadam
kebakaran jika terjadi kecelakaan yang memerlukan penggunaan peralatan ini.
•
Pintu laboratorium harus tetap tertutup, dan hanya mahasiswa yang terdaftar yang boleh masuk
23
kelas laboratorium.
•
Sebelum memulai aktivitas hari itu, area kerja harus dibersihkan dengan disinfektan yang disediakan untuk itu. Demikian pula, ketika
pekerjaan selesai pada hari itu, area kerja harus diperlakukan dengan disinfektan untuk memastikan bahwa segala kontaminasi dari latihan
yang dilakukan telah dimusnahkan. Untuk menghindari kontaminasi pada permukaan kerja, jangan letakkan pipet, loop/jarum, atau penyeka
yang terkontaminasi pada permukaan kerja.
•
Selalu gunakan prosedur pelabelan yang benar pada semua wadah.
•
Jika memungkinkan, gunakan microincinerator atau loop sekali pakai untuk memindahkan mikroorganisme dari satu wadah ke wadah
lainnya. Jika ini tidak tersedia, harap berhati-hati saat bekerja dengan nyala api terbuka dari pembakar Bunsen. Nyala api seringkali sulit
dilihat.
•
Perhatian sangat penting saat bekerja dengan alkohol dan api terbuka. Alkohol sangat mudah terbakar, dan kebakaran dapat dengan
mudah terjadi saat menggunakan batang kaca yang telah dicelupkan ke dalam alkohol.
•
Selalu pastikan gas dimatikan sebelum meninggalkan laboratorium.
•
Pemipetan melalui mulut dilarang di laboratorium. Semua pemipetan harus dilakukan dengan bantuan pipet.
•
Gunakan rak tabung reaksi saat memindahkan biakan ke seluruh laboratorium.
•
Anda mungkin diminta untuk menandatangani perjanjian keselamatan yang menyatakan bahwa Anda telah diberi tahu tentang masalah
keselamatan dan tindakan pencegahan serta sifat berbahaya dari mikroorganisme yang mungkin Anda tangani selama kursus laboratorium.
Pedoman BSL-2
Organisme BSL-2 menimbulkan risiko infeksi sedang, tetapi penyakit yang disebabkan oleh organisme ini dapat diobati dan biasanya tidak serius.
Sebelum bekerja dengan organisme ini, siswa harus sudah menunjukkan kemahiran dalam mengikuti semua pedoman untuk organisme BSL-1.
Tindakan pencegahan tambahan yang harus dilakukan saat bekerja dengan organisme BSL-2 meliputi:
•
Kenakan pelindung wajah atau masker, serta pelindung mata yang tepat, saat bekerja dengan prosedur yang melibatkan potensi bahaya
percikan. Alternatifnya, lakukan semua pekerjaan dengan organisme ini dalam lemari keamanan biologis.
•
Jas laboratorium diperlukan saat bekerja dengan organisme ini.
•
Gunakan mikroinsinerator atau loop sekali pakai daripada pembakar Bunsen.
Darurat
•
Segera laporkan semua tumpahan, kecelakaan, atau cedera ke instruktur laboratorium.
•
Jangan pegang pecahan kaca dengan tangan Anda.
•
Ikuti kebijakan institusional dalam mendokumentasikan semua cedera dan situasi darurat lainnya.
Pembuangan Bahan Laboratorium

Buang semua bahan yang terkontaminasi dengan benar dan dalam wadah yang sesuai. Instruktur Anda akan memberikan instruksi khusus untuk
kelas laboratorium Anda.
•
Wadah Biohazard—Wadah Biohazard harus dilapisi dengan kantong biohazard yang ditandai dengan jelas; piring agar-agar sekali pakai,
sarung tangan bekas, dan bahan apa pun seperti handuk kertas yang terkontaminasi harus dibuang dalam wadah ini; barang pecah belah,
tabung reaksi, atau benda tajam tidak boleh dibuang ke dalam wadah biohazard.
•
Wadah benda tajam—Benda tajam, jarum, dan pipet Pasteur harus dibuang dalam wadah ini.
•
Rak, troli, atau tempat autoklaf—Tabung biakan yang terkontaminasi dan peralatan gelas yang digunakan untuk menyimpan media dan
peralatan gelas lainnya harus ditempatkan di area ini untuk dekontaminasi dan pencucian.
•
Tempat sampah—Bahan, kertas, atau sampah yang tidak terkontaminasi harus dibuang di wadah ini. Dalam keadaan apa pun limbah
laboratorium tidak boleh dibuang di tong sampah.
•
Slide dan pecahan kaca dapat dibuang dalam wadah benda tajam, gelas kimia berisi desinfektan, atau kotak karton berlabel. Dengarkan
baik-baik arahan instruktur Anda untuk barang-barang ini. xiv
Mikroorganisme yang Digunakan atau Diisolasi dalam Latihan Lab di Manual Ini
ORGANISME GRAM STAIN HABITAT LATIHAN LAB BSL
24
DAN
MORFOLOGI
Alkaligen Batang negatif Organik yang membusuk 1 29, 42
faecalis bahan, kotoran

ATCC 8750
Azotobakter Batang negatif Air tanah 1 49
nigricans
ATCC 35009
Azotobakter Batang negatif Air tanah 1 49
vinelandii
ATCC 478
Bacillus coagulans Batang positif Makanan manja, silase 1 62
ATCC 7050
Basil Batang positif Air tanah 1 12, 13, 15, 16, 31, 61
megaterium
ATCC 14581
Bacillus mycoides Batang positif masuk Tanah 1 56
ATCC 6462 rantai
Bacillus subtilis Batang positif Tanah, membusuk organik 1 27, 40

ATCC 23857 urusan
Candida glabrata Ragi Rongga mulut manusia 1 29
ATCC 200918
Chromobacterium Batang negatif Tanah dan air; oportunistik 2 10
violaceum patogen pada manusia

ATCC 12472
Citrobacter Batang negatif Manusia, hewan, air tanah; 1 69
freundii limbah oportunistik

ATCC 8090 patogen
Clostridium Batang positif Tanah 1 27
beijerinckii
ATCC 25752
Clostridium Batang positif Tanah, kotoran hewan 1 27, 54, 62
sporogenes
ATCC 3584
Corynebacterium Batang positif, Konjungtiva, kulit 1 12
xerosis berbentuk gada

ATCC 373
Desulfovibrio Negatif, melengkung Tanah, limbah, air 1 53
desulfurikan batang
25
ATCC 27774D
Enterobacter Batang negatif Kotoran manusia dan hewan 1 27, 39, 42, 58
aerogen
ATCC 13048
Enterococcus Kokus positif masuk Air, limbah, tanah, produk 2 27, 42, 68, 73
faecalis berpasangan, rantai pendek susu

ATCC 19433
Enterococcus Kokus positif masuk Kotoran manusia dan hewan 2 68, 73
tinja berpasangan, rantai pendek
ATCC 19434
Escherichia coli Batang negatif Limbah, saluran usus 1 9, 10, 15, 21, 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30,
ATCC 11775 hewan berdarah panas 32, 34, 39, 40, 41, 42, 55, 56, 58, 61, 62,
64, 65, 66
xv
Geobacillus batang gram positif Tanah, makanan busuk 1 28, 62
stearothermophilus
ATCC 12980
Halobacterium salinarium Memberikan gram negatif Ikan asin, kulit, daging 1 30
ATCC 33170 reaksi; batang
Klebsiella pneumoniae Batang negatif Saluran usus manusia; 2 14, 42
ATCC 13883 patogen pernapasan dan
usus pada manusia
Lactococcus lactis Cocci positif dalam rantai Susu dan produk susu 1 12
ATCC 19435
Mikrokokus luteus Kokus positif yang terjadi padaKulit mamalia 1 10, 18, 32, 42
ATCC 12698 berpasangan
Moraxella catarrhalis Kokus negatif yang sering Faring manusia 1 15
ATCC 25238 terjadi berpasangan dengan

sisi rata
Mycobacterium smegmatis Batang positif; mungkin Smegma manusia 1 17
ATCC 19420 berbentuk Y atau bercabang
Paracoccus denitrificans Sel bulat negatif atau Tanah 1 50
ATCC 17741 batang pendek
Penicillium chrysogenum Jamur berfilamen Tanah 1 56
ATCC 10106
Proteus vulgaris Batang negatif Usus manusia, dan hewan; 2 18, 34, 40, 41, 42, 55, 69
ATCC 29905 tanah dan air yang tercemar
26
Pseudomonas aeruginosa Batang negatif Tanah dan air; patogen 2 15, 34, 35, 39, 42
ATCC 10145 oportunistik pada manusia
Pseudomonas fluorescens Batang negatif Tanah, air, makanan busuk; spesimen 1 56
ATCC 13525 klinis
Saccharomyces cerevisiae Ragi Buah, digunakan dalam bir, anggur, dan 1 29
ATCC 18824 roti
Salmonella enterica subsp. Batang negatif Agen paling sering dari 2 42, 69, 71
enterica serovar Salmonella
Typhimurium gastroenteritis pada manusia

ATCC 700720
Serratia marcescens Batang negatif Patogen oportunistik di 1 10, 28, 42, 70
ATCC 13880 manusia
Shigella flexneri Batang negatif Patogen manusia 2 69
ATCC 29903
Staphylococcus aureus Kokus positif, tidak teratur Kulit, hidung, saluran pencernaan 2 12, 15, 26, 27, 32, 34, 35,
ATCC 12600 cluster manusia, patogen 39, 40, 41, 54, 55, 56, 61,
67, 68, 72
xvi
Staphylococcus epidermidis Kokus positif yang terjadi padaKulit manusia, hewan; patogen oportunistik 1 13, 15, 17, 29, 30,
ATCC 14990 berpasangan dan tetrad 31, 42, 47, 67
Staphylococcus saprophyticus Kokus positif yang terjadi kulit manusia; patogen oportunistik di 1 67
ATCC 15305 tunggal dan berpasangan saluran kemih
Streptococcus agalactiae Kokus positif; terjadi pada Saluran pernapasan atas dan vagina 2 68, 73
ATCC 13813 rantai panjang manusia, ternak; patogen
Streptococcus bovis Kokus positif; berpasangan dan Sapi, domba, babi; patogen 1 68, 73
ATCC 33317 rantai sesekali pada manusia
Streptococcus dysagalactiae Cocci positif dalam rantai Mastitis pada sapi 2 68
subsp. equisimilis
ATCC 12394
Streptococcus mitis Kokus positif berpasangan dan Rongga mulut manusia 2 68
ATCC 49456 rantai
Streptococcus mutans Kokus positif berpasangan dan Permukaan gigi manusia, penyebabnya 1 68
ATCC 25175D-5 rantai karies gigi
Streptococcus pneumoniae Kokus positif berpasangan Patogen manusia 2 68
ATCC 33400
Streptococcus pyogenes Kokus positif berantai Saluran pernapasan manusia; patogen 2 68, 73
ATCC 12344
Streptococcus salivarius Cocci positif singkatnya dan Lidah dan air liur 1 68
27
ATCC 19258 rantai panjang
Termoanaerobakterium Batang negatif; sel tunggal Tanah, makanan kaleng manja 1 62
termosakarolitikum atau berpasangan
ATCC 7956
28
BAGIAN 1
Mikroskopi
Meskipun ada banyak jenis mikroskop yang tersedia untuk ahli mikrobiologi saat ini, hanya empat jenis yang
akan dijelaskan di sini untuk kita gunakan: mikroskop medan terang, medan gelap, kontras fase, dan fluoresensi.
Jika Anda telah mempelajari mikroskop secara ekstensif dalam kursus sebelumnya, unit ini mungkin tidak
terlalu bermanfaat bagi Anda; namun, jika studi tentang mikroorganisme merupakan bidang studi baru bagi
Anda, ada banyak informasi yang perlu Anda peroleh tentang penggunaan yang tepat dari instrumen ini.
Mikroskop di laboratorium perguruan tinggi merupakan investasi yang cukup besar dan memerlukan
perawatan khusus untuk mencegah kerusakan pada lensa dan bagian mekanis. Mikroskop dapat digunakan
oleh beberapa orang pada siang hari dan dipindahkan dari area kerja ke penyimpanan, yang menghasilkan
kemungkinan kerusakan instrumen yang jauh lebih besar daripada jika mikroskop hanya digunakan oleh satu orang.
Kompleksitas beberapa mikroskop yang lebih mahal juga mengharuskan penyesuaian tertentu dilakukan
secara berkala. Mengetahui cara melakukan penyesuaian ini agar peralatan berfungsi dengan baik sangatlah
penting. Sebuah usaha dilakukan dalam lima latihan unit ini untuk memberikan bantuan yang diperlukan untuk
mendapatkan hasil maksimal dari peralatan.
Mikroskopi harus sama menariknya bagi pemula seperti halnya bagi profesional yang sudah lama berdiri;
namun, hanya dengan pemahaman yang cerdas seorang pemula dapat mendekati pencapaian yang terjadi
dengan pengalaman bertahun-tahun.
29
30
LATIHAN
Mikroskop Brightfield 1
Hasil belajar
Setelah menyelesaikan latihan ini, Anda harus bisa
1. Identifikasi komponen dasar mikroskop medan terang dan pahami fungsi masing-masing komponen dalam pengamatan spesimen yang tepat.
2. Periksa spesimen menggunakan lensa berdaya rendah, kering tinggi, dan perendaman minyak.
3. Memahami penggunaan, perawatan, dan penyimpanan mikroskop yang tepat.
Mikroskop yang memungkinkan sinar cahaya melewati langsung ke mata tanpa dibelokkan oleh pelat buram di kondensor disebut
mikroskop medan terang. Ini adalah jenis instrumen konvensional yang ditemui oleh siswa di awal kursus biologi; itu juga jenis pertama
yang digunakan di laboratorium ini.
Semua mikroskop brightfield memiliki kesamaan tertentu, namun agak berbeda dalam operasi mekanis.
Persamaan dan perbedaan dari berbagai merek dibahas dalam latihan ini sehingga Anda akan mengetahui cara menggunakan
instrumen yang tersedia untuk Anda. Sebelum mengikuti sesi laboratorium pertama yang menggunakan mikroskop, bacalah latihan ini
dan jawab semua pertanyaan di Laporan Laboratorium. Instruktur Anda mungkin meminta agar Laporan Laboratorium diserahkan
sebelum melakukan pekerjaan laboratorium apa pun.
Perawatan Instrumen
Mikroskop merupakan investasi yang cukup besar dan dapat rusak dengan mudah jika tindakan pencegahan tertentu tidak diperhatikan.
Saran berikut mencakup sebagian besar bahaya.
Transportasi Saat membawa mikroskop Anda dari satu bagian ruangan ke bagian lain, gunakan kedua tangan untuk memegang
instrumen, seperti yang diilustrasikan pada gambar 1.1. Jika dibawa hanya dengan satu tangan dan dibiarkan menjuntai di sisi Anda,
selalu ada bahaya benturan dengan furnitur atau benda lain. Dan, dalam keadaan apa pun seseorang tidak boleh mencoba membawa
dua mikroskop sekaligus.
31
Gambar 1.1 Mikroskop harus dipegang erat dengan kedua tangan saat dibawa.
Clutter Jaga workstation Anda rapi saat melakukan mikroskop. Jauhkan buku dan materi lain yang tidak perlu dari
area kerja Anda. Area kerja yang jelas meningkatkan efisiensi dan menghasilkan lebih sedikit kecelakaan.
Mikroskop Kabel Listrik telah diketahui jatuh dari atas meja ketika siswa terjerat kabel listrik yang menjuntai.
Jangan biarkan kabel listrik pada mikroskop Anda menjuntai sedemikian rupa sehingga berisiko tersangkut kaki.
Perawatan Lensa Di awal setiap periode laboratorium, periksa lensa untuk memastikan kebersihannya. Di akhir
setiap sesi lab, pastikan untuk menyeka minyak imersi dari lensa imersi jika telah digunakan. Lebih spesifik tentang
perawatan lensa diberikan nanti dalam latihan
ini. 4
32
Gambar 1.2 Mikroskop majemuk.

© Charles D. Winters/Sumber Sains
Perlindungan Debu Di sebagian besar laboratorium, penutup debu digunakan untuk melindungi instrumen selama penyimpanan.
Jika tersedia, letakkan di atas mikroskop pada akhir periode.
Komponen
Sumber Cahaya Di dasar kebanyakan mikroskop ditempatkan semacam sumber cahaya. Idealnya, lampu harus memiliki pengatur
intensitas cahaya untuk memvariasikan intensitas cahaya. Mikroskop pada gambar 1.2 memiliki roda bergerigi di sisi kanan alasnya
untuk mengatur voltase yang dialirkan ke bola lampu.
Kebanyakan mikroskop memiliki beberapa ketentuan untuk mengurangi intensitas cahaya dengan filter densitas netral. Filter
semacam itu sering dibutuhkan untuk mengurangi intensitas cahaya di bawah batas bawah yang diizinkan oleh kontrol tegangan.
Pada mikroskop seperti Olympus CH2, seseorang cukup menempatkan filter densitas netral di atas sumber cahaya di alasnya.
Pada beberapa mikroskop, filter dipasang di alasnya.
Sistem Lensa Semua mikroskop majemuk memiliki tiga sistem lensa: okuler, objektif, dan kondensor. Gambar 1.3 mengilustrasikan
jalur cahaya melalui ketiga sistem ini.
Okular, atau eyepiece, adalah bagian yang rumit, terletak di bagian atas instrumen, yang terdiri dari dua atau lebih lensa
internal dan biasanya memiliki perbesaran 10x. Sebagian besar mikroskop modern (gambar 1.2) memiliki dua lensa okuler
(binokular).
5
33
Gambar 1.3 Jalur cahaya mikroskop.
Tiga atau lebih tujuan biasanya ada. Perhatikan bahwa mereka terpasang ke penutup hidung yang dapat diputar, yang
memungkinkan untuk memindahkannya ke posisinya di atas slide. Objektif pada sebagian besar mikroskop laboratorium memiliki
perbesaran 10x, 40x, dan 100x, masing-masing ditetapkan sebagai daya rendah, kering tinggi, dan perendaman minyak. Beberapa
mikroskop akan memiliki tujuan keempat untuk pemindaian cepat bidang mikroskopis yang hanya berukuran 4x.
Perbesaran total mikroskop majemuk ditentukan dengan mengalikan kekuatan lensa okuler dengan kekuatan lensa objektif
yang digunakan. Jadi, perbesaran mikroskop yang menggunakan lensa imersi minyak adalah:
10 × 100 = 1000
Objek tersebut sekarang diperbesar 1000 kali ukuran sebenarnya. Sistem lensa ketiga adalah kondensor yang terletak di
bawah panggung. Itu mengumpulkan dan mengarahkan cahaya dari lampu ke slide yang sedang dipelajari. Berbeda dengan
lensa okuler dan lensa objektif, lensa kondensor tidak mempengaruhi daya pembesar mikroskop majemuk. Kondensor dapat
digerakkan ke atas dan ke bawah dengan kenop di bawah panggung. Diafragma di dalam kondensor mengatur jumlah cahaya
yang mencapai slide. Mikroskop yang tidak memiliki kontrol tegangan pada sumber cahaya bergantung sepenuhnya pada
diafragma untuk mengontrol intensitas cahaya. Pada mikroskop Olympus CH2 pada gambar 1.2, diafragma dikontrol dengan
memutar cincin bergerigi. Pada beberapa mikroskop, terdapat tuas diafragma. Gambar 1.2 mengilustrasikan letak kondensor dan
diafragma.
Kenop Fokus Tombol penyesuaian kasar dan halus yang diatur secara konsentris di sisi mikroskop digunakan untuk memfokuskan
objek saat mempelajari objek pada slide. Pada beberapa mikroskop, kenop ini tidak diposisikan secara konsentris seperti yang
ditunjukkan di sini.
34
Penyesuaian Mata Pada mikroskop binokular, seseorang harus dapat mengubah jarak antara okuler dan membuat perubahan diopter untuk
perbedaan mata. Pada kebanyakan mikroskop, jarak interokular diubah hanya dengan menarik atau mendorong okuler secara bersamaan.
Untuk melakukan penyesuaian dioptri, pertama-tama fokuskan dengan mata kanan saja. Tanpa menyentuh kenop pemfokusan, penyetelan
dioptri kemudian dilakukan pada mata kiri dengan memutar cincin penyetel dioptri bergerigi (gambar 1.2) di okuler kiri hingga terlihat bayangan
yang tajam. Seseorang seharusnya sekarang dapat melihat gambar yang tajam dengan kedua mata.
Resolusi
Tampaknya perbesaran mikroskop hanya dibatasi oleh kekuatan perbesaran sistem lensa.
Namun, pada kenyataannya, batas untuk sebagian besar mikroskop cahaya adalah 1000x, yang ditentukan oleh sifat intrinsik lensa yang
disebut daya pisah. Resolving power lensa adalah kemampuannya untuk sepenuhnya memisahkan dua objek dalam bidang mikroskopis.
Resolving power diberikan oleh rumus d = 0,5 ÿ/NA. Batas resolusi, d, atau jarak antara dua objek, adalah fungsi dari dua sifat: panjang
gelombang cahaya yang digunakan untuk mengamati spesimen, ÿ, dan sifat lensa yang disebut apertur numerik, atau NA. Bukaan numerik
adalah ekspresi matematis yang menggambarkan bagaimana lensa kondensor memusatkan dan memfokuskan sinar cahaya dari sumber
cahaya. Nilainya dimaksimalkan ketika sinar cahaya difokuskan ke kerucut cahaya yang kemudian melewati spesimen ke lensa objektif.
Namun, karena sebagian cahaya dibiaskan atau dibelokkan ketika melewati kaca ke udara, sinar cahaya yang dibiaskan hilang, dan akibatnya
6
Gambar 1.4 Minyak imersi, memiliki indeks bias yang sama dengan kaca, mencegah hilangnya cahaya akibat pembiasan.
aperture numerik berkurang (gambar 1.4). Semakin besar hilangnya cahaya yang dibiaskan, semakin rendah bukaan numerik. Hasil akhirnya
adalah resolving power sangat berkurang.
Untuk setiap mikroskop cahaya, batas resolusinya adalah sekitar 0,2 ÿm. Ini berarti bahwa dua objek yang lebih dekat dari 0,2 ÿm tidak
akan terlihat sebagai dua objek berbeda. Karena sel bakteri berukuran sekitar 1 ÿm, sel dapat dilihat dengan mikroskop cahaya, tetapi tidak
demikian halnya dengan struktur internal sel bakteri yang lebih kecil dari 0,2 ÿm.
Untuk memaksimalkan daya penyelesaian dari sistem lensa, hal berikut harus dipertimbangkan:
•
Filter biru harus ditempatkan di atas sumber cahaya karena panjang gelombang yang lebih pendek dari cahaya yang dihasilkan akan
memberikan resolusi maksimum.
•
Kondensor harus dijaga pada posisi tertinggi yang memungkinkan jumlah maksimum cahaya masuk ke lensa objektif dan karena itu
membatasi jumlah cahaya yang hilang akibat pembiasan.
•
Diafragma tidak boleh berhenti terlalu banyak. Sementara menutup diafragma meningkatkan kontras, ini juga mengurangi apertur numerik.
•
Minyak imersi harus digunakan antara slide dan lensa objektif 100x. Ini adalah oli khusus yang memiliki indeks bias yang sama dengan
kaca. Saat ditempatkan di antara spesimen dan lensa objektif, minyak membentuk sistem lensa kontinu yang membatasi hilangnya
cahaya akibat pembiasan.
Intinya adalah agar perbesaran meningkat, resolusi juga harus meningkat. Dengan demikian, lebih besar
pembesaran tidak dapat dicapai hanya dengan menambahkan lensa okuler yang lebih kuat.
35
Perawatan Lensa
Menjaga lensa mikroskop Anda bersih adalah perhatian konstan. Kecuali semua lensa bebas dari debu, minyak, dan kontaminan lainnya,
lensa tidak dapat mencapai tingkat resolusi yang diinginkan. Pertimbangkan saran berikut untuk membersihkan berbagai komponen lensa:
Gambar 1.5 Saat okuler dilepas untuk dibersihkan, tutupi bukaan okuler dengan tisu lensa. Ledakan dari alat suntik udara atau
tabung gas menghilangkan debu dan serat.
Membersihkan Jaringan Hanya jaringan yang bebas serabut dan aman secara optik yang boleh digunakan untuk membersihkan lensa.
Tissue yang bebas dari grit abrasif termasuk dalam kategori ini. Buklet jaringan lensa paling banyak digunakan untuk tujuan ini. Meskipun
beberapa jenis tisu kotak juga aman, gunakan hanya jenis tisu yang direkomendasikan oleh instruktur Anda (gambar 1.5).
Pelarut Berbagai cairan dapat digunakan untuk membersihkan lensa mikroskop. Sabun hijau dengan air hangat bekerja dengan sangat
baik. Xylene diterima secara universal. Alkohol dan aseton juga direkomendasikan, tetapi seringkali dengan reservasi. Aseton adalah
pelarut kuat yang mungkin dapat melarutkan semen pemasangan lensa di beberapa lensa objektif jika digunakan terlalu bebas. Ketika
digunakan harus digunakan dengan hemat. Instruktur Anda akan memberi tahu Anda tentang pelarut apa yang dapat digunakan pada
lensa mikroskop Anda.
Mata Cara terbaik untuk menentukan apakah lensa mata Anda bersih adalah dengan memutarnya di antara ibu jari dan telunjuk saat
Anda melihat melalui mikroskop. Pola yang berputar akan menjadi bukti adanya kotoran.
Jika membersihkan lensa bagian atas okular dengan jaringan lensa gagal untuk menghilangkan kotoran, seseorang harus mencoba
membersihkan lensa bagian bawah dengan jaringan lensa dan meniup kelebihan serat dengan alat suntik udara atau tabung gas. Setiap
kali okuler dikeluarkan dari mikroskop, sepotong jaringan lensa harus diletakkan di atas ujung terbuka mikroskop seperti yang diilustrasikan
pada Gambar 1.5.
7
Objektif Lensa objektif sering menjadi kotor oleh bahan dari slide atau jari. Sepotong jaringan lensa yang dibasahi dengan sabun dan air
hijau, atau salah satu pelarut yang dapat diterima yang disebutkan sebelumnya, biasanya akan menghilangkan apa pun yang ada di
lensa. Terkadang kapas dengan pelarut akan bekerja lebih baik daripada tisu lensa. Kapan pun gambar pada slide tidak jelas atau
mendung, asumsikan segera bahwa lensa objektif yang Anda gunakan kotor.
Debu Kondensor sering menumpuk di permukaan atas kondensor; oleh karena itu, menyekanya sesekali dengan tisu lensa sangat
diinginkan.
Prosedur
Jika mikroskop Anda memiliki tiga tujuan, Anda memiliki tiga opsi perbesaran: (1) daya rendah, atau perbesaran total 100x, (2) perbesaran
kering tinggi, yaitu total 400x dengan tujuan 40x, dan (3) 1000 × total
36
perbesaran dengan lensa objektif 100x minyak imersi.

Apakah Anda menggunakan objektif berdaya rendah atau objektif imersi minyak akan bergantung pada berapa banyak perbesaran
yang diperlukan. Secara umum, bagaimanapun, yang terbaik adalah memulai dengan objektif berdaya rendah dan maju ke perbesaran
yang lebih tinggi seiring kemajuan studi Anda. Pertimbangkan saran berikut untuk menyiapkan mikroskop Anda dan melakukan
pengamatan mikroskopis.
Ujian Daya Rendah Alasan utama untuk memulai dengan tujuan daya rendah adalah untuk memungkinkan Anda menjelajahi slide untuk
mencari objek yang akan Anda pelajari. Setelah Anda menemukan apa yang Anda cari, Anda dapat melanjutkan ke perbesaran yang lebih
tinggi. Gunakan langkah-langkah berikut saat menjelajahi slide dengan objektif berdaya rendah:
1. Posisikan slide di atas panggung dengan materi yang akan dipelajari di permukaan atas slide. Gambar 1.6 mengilustrasikan
bagaimana slide harus ditahan di tempatnya oleh tuas penahan panggung mekanis.
Nyalakan sumber cahaya, gunakan voltase minimum . Jika perlu, posisikan ulang kaca objek sehingga bahan 2. yang diwarnai pada
kaca objek tepat berada di tengah sumber cahaya.
3. Periksa kondensor untuk melihat apakah sudah dinaikkan ke titik tertinggi. 4.
Jika sasaran daya rendah tidak langsung di atas tengah panggung, putar ke posisinya. Pastikan bahwa saat Anda memutar tujuan
ke posisinya, ia mengklik ke posisi terkunci.
Putar kenop penyesuaian kasar untuk menurunkan objektif hingga berhenti. Stop bawaan akan mencegah 5. tujuan menyentuh slide.
6. Sambil melihat ke bawah melalui okuler (atau okuler), fokuskan objek dengan memutar kenop pemfokusan penyesuaian halus.
Jangan menyetel ulang kenop penyetelan yang kasar. Jika Anda menggunakan mikroskop binokular, Anda juga perlu menyesuaikan
jarak interokular dan penyesuaian diopter agar sesuai dengan
mata.
Gambar 1.6 Slide harus diposisikan dengan benar saat tuas penahan dipindahkan ke kanan.
Untuk tampilan optimal, perlu untuk memfokuskan kondensor dan menyesuaikannya untuk penerangan maksimal. 7. Prosedur ini
harus dilakukan setiap kali lensa objektif diganti. Naikkan diafragma iris ke posisi tertinggi. Tutup diafragma iris sampai tepi gambar
diafragma tampak buram. Turunkan kondensor menggunakan kenop penyetelannya hingga ujung-ujung diafragma menjadi fokus
tajam. Anda sekarang harus melihat dengan jelas sisi diafragma melebar di luar bidang pandang. Fokuskan ulang spesimen
menggunakan penyesuaian halus. Perhatikan bahwa saat Anda menutup diafragma iris untuk mengurangi intensitas cahaya,
kontrasnya meningkat dan kedalaman bidang meningkat. Kedalaman bidang didefinisikan sebagai rentang jarak di depan dan di
belakang gambar terfokus di mana objek lain akan tampak jelas dan tajam. 8.
Setelah gambar terlihat, gerakkan slide untuk mencari apa yang Anda cari. Slide digerakkan dengan memutar kenop yang
menggerakkan tahap mekanis.
Periksa kebersihan okular, menggunakan prosedur yang diuraikan sebelumnya. 9.
10. Setelah Anda mengidentifikasi struktur yang akan dipelajari dan ingin meningkatkan perbesaran, Anda dapat melanjutkan ke
perbesaran high-dry atau perbesaran perendaman minyak. Namun, sebelum mengubah tujuan, pastikan untuk memusatkan objek
yang ingin Anda amati.
Pemeriksaan High-Dry Untuk melanjutkan dari perbesaran daya rendah ke daya tinggi, semua yang diperlukan adalah memutar lensa
objektif kering tinggi ke posisinya dan sedikit membuka diafragma. Penyetelan kecil mungkin perlu dilakukan dengan kenop penyetelan
halus untuk mempertajam gambar, tetapi kenop penyetelan kasar tidak boleh disentuh.
Mikroskop modern berkualitas baik biasanya parfocal dan parcentral. Ini berarti bahwa
37
gambar akan tetap berada di tengah dan dalam fokus saat mengubah dari lensa objektif berdaya rendah ke berdaya tinggi.
Saat menambah pencahayaan, pastikan untuk membuka diafragma terlebih dahulu daripada menaikkan voltase pada lampu Anda;
alasannya adalah masa pakai lampu sangat panjang bila digunakan pada voltase rendah. Jika medan tidak cukup terang setelah
membuka diafragma, jangan ragu untuk menambah voltase. Poin terakhir: Pertahankan kondensor pada titik tertinggi.
Teknik Perendaman Minyak Nama lensa perendaman minyak berasal dari fakta bahwa minyak mineral khusus ditempatkan di antara
spesimen dan lensa objektif 100x. Seperti yang dinyatakan sebelumnya, ini mengurangi refraksi cahaya dan memaksimalkan apertur
numerik untuk meningkatkan resolusi. Penggunaan minyak dengan cara ini meningkatkan kekuatan resolusi mikroskop. Gambar 1.4
mengungkapkan fenomena ini.
Dengan tujuan parfokal seseorang dapat langsung menuju ke perendaman minyak baik dari daya rendah atau kering tinggi. Namun,
pada beberapa mikroskop, beralih dari daya rendah ke daya tinggi dan kemudian ke perendaman minyak lebih baik. Setelah mikroskop
dibawa ke fokus pada satu perbesaran, lensa minyak imersi dapat diputar ke posisinya tanpa takut membentur slide.
Namun, sebelum memutar lensa imersi oli ke posisinya, setetes oli imersi harus diletakkan di atas kaca objek. Lensa perendaman
minyak tidak boleh digunakan tanpa minyak. Kebetulan, jika oli tampak keruh, sebaiknya dibuang.
Saat menggunakan lensa perendaman minyak, lebih banyak cahaya diperlukan untuk memvisualisasikan gambar secara memadai.
Membuka diafragma meningkatkan kekuatan resolusi mikroskop pada perbesaran yang lebih tinggi. Dengan demikian, diafragma iris
harus dibuka lebih lebar saat menggunakan oil immersion lens. Selain itu, jangan lupa untuk memfokuskan kembali kondensor saat
berpindah dari tujuan daya rendah ke daya tinggi. Beberapa mikroskop juga menggunakan filter biru atau hijau pada rumah lampu untuk
meningkatkan daya urai.
Karena lensa celup minyak akan digunakan secara ekstensif dalam semua penelitian bakteriologis, sangat penting bagi Anda untuk
mempelajari cara menggunakan lensa ini dengan benar. Menggunakan lensa ini memerlukan sedikit latihan karena kesulitan yang
biasa ditemui dalam memanipulasi pencahayaan. Penting bagi semua siswa pemula untuk menyadari bahwa jarak kerja sebuah lensa,
jarak antara lensa dan slide mikroskop, berkurang secara signifikan dengan bertambahnya perbesaran lensa (tabel 1.1). Sehingga
potensi kerusakan lensa oil imersi akibat benturan dengan slide mikroskop sangat besar. Komentar penting terakhir: Pada akhir periode
laboratorium, bersihkan semua minyak imersi dari ujung lensa dengan tisu lensa.
Tabel 1.1 Hubungan Jarak Kerja dengan Pembesaran
LENSA PEMBESARAN PANJANG FOKUS (mm) JARAK KERJA (mm)
Daya rendah 10× 16.0 7.7
Sangat kering 40× 4.0 0,3
Perendaman minyak 100x 1.8 0,12
Menyingkirkannya
Saat Anda mengambil mikroskop dari kabinet pada awal periode, Anda mengharapkannya bersih dan dalam kondisi kerja yang baik.
Orang berikutnya yang menggunakan instrumen setelah Anda menggunakannya akan mengharapkan pertimbangan yang sama.
Perawatan beberapa saat di akhir periode akan memastikan kondisi ini. Periksa daftar item berikut pada akhir setiap periode sebelum
Anda mengembalikan mikroskop ke lemari.
Hapus slide dari panggung. 1.

2. Jika minyak imersi telah digunakan, bersihkan lensa dan panggung dengan tisu lensa. Pastikan juga tidak ada minyak imersi pada
lensa objektif 40x. Lensa ini sering terkontaminasi minyak akibat kesalahan yang dilakukan oleh siswa pemula. (Jangan menyeka
minyak dari slide yang ingin Anda simpan. Cukup masukkan ke dalam kotak slide dan biarkan oli mengalir.)
Putar objektif berdaya rendah ke posisinya. 3. 4.

Jika mikroskop sudah miring, kembalikan ke posisi tegak.
Jika mikroskop memiliki lampu bawaan yang dapat dipindahkan, naikkan lampu ke posisi tertinggi.
5. 6.Jika mikroskop memiliki kabel listrik yang panjang, lilitkan di sekeliling alasnya.
Sesuaikan tingkat mekanis sehingga tidak menonjol terlalu jauh di kedua sisi. 7.
38
Ganti penutup debu. 8.

9. Jika mikroskop memiliki trafo terpisah, kembalikan ke tempat yang telah ditentukan.
Kembalikan mikroskop ke tempatnya yang benar di lemari. 10.
Sebelum mikroskop digunakan di laboratorium, jawab semua pertanyaan pada Laporan Laboratorium 1.
Persiapan di pihak Anda sebelum pergi ke laboratorium akan sangat memudahkan pemahaman Anda. Instruktur Anda mungkin
ingin mengumpulkan laporan ini di awal periode pada hari pertama penggunaan mikroskop di kelas.
Murid:______________________________________
Laporan Laboratorium 1 Tanggal:______ Bagian:___________________________
1 Mikroskop Brightfield
A. Pertanyaan Jawaban Singkat
1.
Jelaskan posisi tangan Anda saat membawa mikroskop ke dan dari meja laboratorium Anda.
2.
Bedakan antara batas resolusi mikroskop cahaya biasa dan batas resolusi mata manusia tanpa bantuan.
3.
(a) Apa dua penyetelan yang dapat dilakukan pada kondensor? (b) Apa pengaruh penyesuaian ini terhadap gambar?
4.
Mengapa penyesuaian kondensor umumnya lebih disukai daripada penggunaan kontrol intensitas cahaya?
5.
Saat menggunakan lensa celup oli, empat prosedur apa yang dapat diterapkan untuk mencapai resolusi maksimum?
6.
Mengapa disarankan untuk memulai terlebih dahulu dengan lensa berdaya rendah saat melihat slide?
39
Mengapa perlu menggunakan oli bersamaan dengan lensa imersi oli dan bukan dengan tujuan lainnya?
7.
8.
Apa hubungan antara jarak kerja lensa objektif dan daya perbesarannya?
10
B. Menjodohkan Pertanyaan
Cocokkan lensa (kondensor, kering tinggi, daya rendah, okular, atau perendaman oli) dengan deskripsinya. Pilihan dapat digunakan lebih dari sekali.
1.
Lensa objektif ini memberikan perbesaran tertinggi.
2.
Lensa objektif ini memberikan perbesaran tertinggi kedua.
3.
Lensa objektif ini memberikan perbesaran terendah.
4.
Lensa objektif ini memiliki jarak kerja terpendek.
5.
Kenop fokus kasar harus disesuaikan hanya saat menggunakan lensa objektif ini.
6.
Lensa ini mengumpulkan dan memfokuskan cahaya dari lampu ke spesimen pada slide.
7.
Lensa ini, juga dikenal sebagai eyepiece, sering kali berpasangan.
8.
Penyesuaian diopter dapat dilakukan pada lensa ini.
9.
Diafragma digunakan untuk mengatur cahaya yang melewati lensa ini.
C. Benar-Salah
1.
Aseton adalah pelarut paling aman untuk membersihkan lensa objektif.
2.
Hanya jaringan yang bebas serabut dan aman secara optik yang boleh digunakan untuk menyeka lensa mikroskop.
3.
Kemampuan perbesaran total mikroskop cahaya hanya dibatasi oleh kekuatan perbesaran sistem lensa.
4.
Kenop fokus kasar dapat digunakan untuk mengatur fokus saat menggunakan salah satu lensa objektif.
5.
Setelah fokus tercapai pada satu perbesaran, lensa objektif berkekuatan lebih tinggi dapat diputar ke posisinya tanpa takut
membentur slide.
D.Pilihan Ganda
Pilihlah jawaban yang paling melengkapi pernyataan-pernyataan berikut.
1.
Resolving power mikroskop adalah fungsi dari kekuatan
A. pembesar lensa. bukaan numerik lensa.
B. panjang gelombang cahaya.
C.
D. Keduanya (a) dan (b) benar.

e. Keduanya (b) dan (c) benar.
2.
Kenop fokus kasar dan halus menyesuaikan jarak antara
A. lensa objektif dan okuler. lensa
B. okuler. lensa okuler
C. dan mata Anda. panggung dan lensa
D. kondensor. panggung dan lensa objektif.
e.
3.
Mikroskop yang mempertahankan fokusnya ketika perbesaran objektifnya diperbesar disebut
A. berkenaan dgn
B. teropong.
C. lamur. parfokal.
40
D. bias. tegas.
e.
JAWABAN
Cocok
1. ____________________
2. ____________________
3. ____________________
4. ____________________
5. ____________________
6. ____________________
7. ____________________
8. ____________________
9. ____________________
Benar salah
1. ____________________
2. ____________________
3. ____________________
4. ____________________
5. ____________________
Pilihan ganda
1. ____________________
2. ____________________
3. ____________________
11
4.
Perbesaran total yang dicapai saat menggunakan lensa perendaman minyak 100x dengan eyepieces teropong 10x adalah
A. 10×.
B. 100×.
C. 200×.
D. 1000×.
e. 2000×.
5.
Penyesuaian yang paling berguna untuk meningkatkan kontras gambar dalam perbesaran daya rendah adalah
A. menutup diafragma. menutup satu
B. mata. membuka
C. diafragma. menempatkan
D. setetes minyak pada slide.
e. menggunakan filter biru.
6.
Sebelum lensa oil imersi diputar ke tempatnya, Anda harus memusatkan
A. objek yang diinginkan pada lensa sebelumnya. turunkan
B. tingkat dengan menggunakan kenop penyesuaian fokus kasar.
41
C. tempatkan setetes minyak pada slide.

D. Keduanya (a) dan (c) benar.
e. Semua benar.
4. ____________________
5. ____________________
6. ____________________
42
13
LATIHAN
Mikroskop Medan Gelap 2
Hasil belajar
1. Visualisasikan spesimen menggunakan mikroskop medan gelap.
2. Pahami perbedaan antara sistem iluminasi untuk mikroskop darkfield dan mikroskop brightfield.
Organisme hidup transparan yang halus dapat lebih mudah diamati dengan mikroskop medan gelap dibandingkan
dengan mikroskop medan terang konvensional. Metode ini sangat berguna ketika mencoba untuk mengidentifikasi
spirochaetes dalam eksudat dari lesi sifilis. Gambar 2.1 mengilustrasikan penampakan organisme ini di bawah
pencahayaan tersebut. Efek ini dapat dihasilkan dengan menempatkan stop medan gelap di bawah kondensor biasa
atau dengan mengganti kondensor dengan kondensor yang dibuat khusus.
Aplikasi lain dari mikroskop medan gelap adalah mikroskop fluoresensi (Latihan 4). Meskipun
fluoresensi dapat dilihat tanpa medan gelap, sangat ditingkatkan dengan aplikasi ini.
Untuk mencapai efek medan gelap perlu mengubah sinar cahaya yang mendekati tujuan sedemikian rupa sehingga
hanya sinar miring yang mengenai objek yang dilihat. Kemiringan sinar harus sangat ekstrim sehingga jika tidak ada
objek di lapangan, latar belakangnya benar-benar bebas cahaya. Objek di lapangan menjadi terang benderang oleh sinar
yang dipantulkan melalui sistem lensa mikroskop.
Gambar 2.1 Citra medan gelap Treponema pallidum, bakteri penyebab sifilis.
Sumber: Susan Lindsley/Pusat Pengendalian dan Pencegahan Penyakit
Meskipun ada beberapa metode berbeda untuk menghasilkan medan gelap, hanya dua perangkat yang akan
dijelaskan di sini: diafragma bintang dan kondensor kardioid. Ketersediaan peralatan akan menentukan metode yang
akan digunakan di laboratorium ini.
Diafragma Bintang
Salah satu cara paling sederhana untuk menghasilkan efek medan gelap adalah dengan memasukkan diafragma bintang ke slot
filter rumah kondensor, seperti yang ditunjukkan pada gambar 2.2. Perangkat ini memiliki cakram buram di tengahnya yang
menghalangi sinar cahaya pusat. Gambar 2.3 mengungkapkan efek penghentian ini pada sinar cahaya yang melewati kondensor. Jika seperti itu
43
perangkat tidak tersedia, dapat dibuat dengan memotong cakram bundar dari kertas buram dengan ukuran berbeda yang disemen ke cakram
seluloid transparan yang akan masuk ke dalam slot. Jika mikroskop biasanya memiliki piringan difusi pada slot ini, yang terbaik adalah
menggantinya dengan seluloid atau kaca bening yang kaku.
Modifikasi yang menarik dari teknik ini adalah dengan menggunakan penghenti seluloid berwarna sebagai pengganti kertas buram.
Latar belakang biru, merah, atau warna apa pun dapat dihasilkan dengan cara ini.
Gambar 2.2 Penyisipan diafragma bintang ke slot filter kondensor akan menghasilkan medan gelap yang cocok untuk perbesaran
rendah. © Layanan Fotografi McGraw-
Hill Education/Auburn University
14
Gambar 2.3 Diafragma bintang memungkinkan hanya sinar cahaya perifer yang melewati kondensor. Metode ini membutuhkan
pencahayaan maksimal.
Dalam menyiapkan iluminasi medan gelap jenis ini, hal-hal berikut perlu diingat:
1. Batasi teknik ini untuk mempelajari organisme besar yang dapat dilihat dengan mudah dengan perbesaran daya rendah.
Resolusi yang baik dengan tujuan berdaya tinggi sulit dilakukan dengan metode ini.
Biarkan diafragma terbuka lebar dan gunakan cahaya sebanyak mungkin. Jika mikroskop memiliki pengatur tegangan, 2. Anda akan
menemukan bahwa tegangan yang lebih tinggi akan memberikan hasil yang lebih baik.
3. Pastikan untuk memusatkan pemberhentian setepat mungkin.
4. Gerakkan kondensor ke atas dan ke bawah untuk menghasilkan efek terbaik.
Kondensor Cardioid
Kesulitan yang dihasilkan dari penggunaan diafragma bintang atau cakram kertas buram dengan tujuan perendaman minyak dan kering tinggi
adalah bahwa sinar miring tidak diukur dengan hati-hati seperti yang diperlukan untuk perbesaran yang lebih tinggi. Kondensor khusus seperti tipe
cardioid atau paraboloid harus digunakan. Karena tipe cardioid adalah yang paling sering
44
jenis yang digunakan, penggunaannya akan dijelaskan di sini.
Gambar 2.4 mengilustrasikan jalur cahaya melalui kondensor tersebut. Perhatikan bahwa sinar cahaya yang memasuki elemen bawah
kondensor pertama-tama dipantulkan dari permukaan cermin cembung dan kemudian dari permukaan cekung kedua untuk menghasilkan
sinar cahaya miring yang diinginkan. Setelah kondensor dipasang di mikroskop, langkah-langkah berikut harus diikuti untuk menghasilkan
pencahayaan yang ideal.
Bahan
•
slide dan kaca penutup dengan kualitas yang sangat baik (slide dengan ketebalan 1,15–1,25 mm dan kaca penutup No. 1)
1. Sesuaikan permukaan atas kondensor ke ketinggian tepat di bawah level panggung.

2. Tempatkan slide kaca bening pada posisinya di atas kondensor. 3.
Fokuskan objektif 10x di bagian atas kondensor hingga cincin terang menjadi fokus.
Gambar 2.4 Sebuah kondensor kardioid memberikan konsentrasi cahaya yang lebih besar untuk penerangan miring daripada
diafragma bintang.
4. Pusatkan cincin terang sehingga konsentris dengan tepi medan dengan menyesuaikan sekrup pemusatan pada kondensor medan
gelap. Jika kondensor memiliki sumber cahaya yang terpasang di dalamnya, kondensor juga perlu dipusatkan untuk mencapai
penerangan yang merata.
5. Lepaskan slide kaca bening. 6.
Jika tersedia penghenti corong untuk lensa objektif celup oli, lepaskan objektif celup oli dan masukkan penghenti corong. (Penghentian
ini berfungsi untuk mengurangi bukaan numerik dari tujuan perendaman minyak ke nilai yang lebih kecil dari nilai kondensor.)
Tempatkan setetes minyak imersi pada permukaan atas kondensor dan tempatkan slide di atas minyak. 7. Prasyarat berikut dalam
penggunaan slide harus dipatuhi:
•
Slide dan kaca penutup harus sempurna secara optik. Goresan dan ketidaksempurnaan akan menyebabkan difraksi sinar cahaya
yang mengganggu.
•
Slide dan kaca penutup harus bebas dari kotoran atau minyak apapun.
•
Kaca penutup harus selalu digunakan.
Jika akan menggunakan lensa celup oli, teteskan oli pada kaca penutup. 8.
9. Jika bidang tidak terlihat gelap dan kurang kontras, kembali ke objektif 10x dan periksa konsentrisitas cincin dan konsentrasi sumber
cahaya. Jika kontras masih kurang setelah penyesuaian ini, spesimen mungkin terlalu tebal.
Jika fokus yang tajam sulit dicapai dengan perendaman minyak, coba gunakan kaca penutup yang lebih tipis dan tambahkan lebih
banyak minyak 10. ke bagian atas kaca penutup dan bagian bawah slide.
Latihan ini dapat digunakan bersamaan dengan Bagian 2 saat mempelajari berbagai jenis organisme. Setelah membaca latihan ini dan
mengerjakan tugas khusus yang dibuat oleh instruktur Anda, jawablah pertanyaan di Laporan Laboratorium 2 tentang mikroskop medan gelap.
45
15
Murid:______________________________________
2 Mikroskop Medan Gelap

1.
Untuk jenis spesimen manakah mikroskop medan gelap lebih disukai daripada mikroskop medan terang?
2.
Jika kondensor medan gelap menyebabkan semua sinar cahaya melewati tujuan, dari mana datangnya cahaya yang
membuat objek terlihat di medan gelap?
3.
Apa keunggulan kondensor kardioid dibandingkan diafragma bintang?
4.
Jika aksesori untuk mikroskop medan gelap tidak tersedia, bagaimana Anda membuat diafragma bintang sederhana?
46
17
LATIHAN
Mikroskopi Fase-Kontras 3
Hasil belajar
1. Pahami bagaimana mikroskop fase-kontras memanfaatkan perbedaan densitas dalam konstituen sel untuk menghasilkan gambar.
2. Gunakan mikroskop kontras fase dengan benar untuk mendapatkan gambar sel hidup.
3. Sejajarkan mikroskop fase-kontras.
Jika seseorang mencoba untuk mengamati sel tanpa menggunakan pewarnaan, kontras atau detail yang sangat sedikit dapat
dilihat karena sel tampak transparan terhadap media berair di mana mereka biasanya tersuspensi. Pewarnaan meningkatkan
kontras antara sel dan media sekitarnya, memungkinkan pengamat untuk melihat lebih detail sel, termasuk beberapa inklusi
dan berbagai organel. Namun, pewarnaan biasanya menyebabkan kematian sel, yang berarti kita tidak dapat mengamati sel
hidup atau aktivitasnya, dan pewarnaan juga dapat menyebabkan artefak yang tidak diinginkan.
Mikroskop yang mampu membedakan struktur protoplasma transparan dan meningkatkan kontras antara sel dan
sekitarnya, tanpa perlu pewarnaan, adalah mikroskop kontras fase. Mikroskop ini dikembangkan oleh fisikawan Belanda Frits
Zernike pada tahun 1930-an. Untuk penemuan mikroskop fase-kontras, dia dianugerahi Hadiah Nobel pada tahun 1953. Saat
ini, ini adalah mikroskop pilihan untuk melihat sel-sel hidup dan aktivitasnya seperti motilitas. Gambar 3.1 mengilustrasikan
gambar kontras fase dari bakteri pembentuk endospora. Dalam latihan ini, Anda akan belajar menggunakan mikroskop
kontras fase dan mengamati aktivitas sel hidup.
Untuk memahami cara kerja mikroskop fase-kontras, perlu meninjau beberapa sifat fisik cahaya dan bagaimana
interaksinya dengan materi seperti bahan biologis. Energi cahaya dapat direpresentasikan sebagai bentuk gelombang yang
memiliki amplitudo dan panjang gelombang karakteristik (ilustrasi 1, gambar 3.2). Beberapa objek dapat mengurangi
amplitudo gelombang cahaya, dan objek tersebut akan tampak sebagai objek gelap di mikroskop. Sebaliknya, cahaya dapat
melewati materi tanpa mempengaruhi amplitudo, dan benda-benda ini akan tampak transparan di mikroskop.
Akan tetapi, saat cahaya melewati beberapa objek transparan, cahaya dapat diperlambat oleh panjang gelombang,
menghasilkan pergeseran fasa dari panjang gelombang cahaya (ilustrasi 2, gambar 3.2). Untuk sel, pergeseran fasa tanpa
pengurangan amplitudo menyebabkan sel memiliki indeks bias yang berbeda dari lingkungannya. Namun, pergeseran fasa
yang disebabkan oleh bahan biologis biasanya terlalu kecil untuk dilihat sebagai perbedaan kontras pada mikroskop medan
terang. Oleh karena itu, dalam mikroskop medan terang, sel tampak transparan daripada buram terhadap lingkungannya.
Karena bahan biologis tidak memiliki kontras yang berarti, sel perlu diwarnai dengan berbagai pewarna untuk mempelajarinya.
Namun, Zernike memanfaatkan pergeseran fase panjang gelombang untuk meningkatkan perbedaan kontras yang kecil di
berbagai komponen yang terdiri dari sel, membuatnya terlihat di mikroskopnya. Ini melibatkan manipulasi sinar cahaya yang
bergeser dan yang tidak berubah saat muncul dari bahan biologis.
47
Gambar 3.1 Gambar fase-kontras dari bakteri pembentuk endospora. ©

Stephen Durr
Dua Jenis Sinar Cahaya
Sinar cahaya yang melewati objek transparan muncul sebagai sinar langsung atau difraksi. Sinar-sinar yang melewati lurus
tanpa dipengaruhi oleh medium disebut 18
Gambar 3.2 Pemanfaatan sinar cahaya dalam mikroskop fase-kontras.
sinar langsung. Mereka tidak berubah dalam amplitudo dan fase. Sinar yang dibelokkan karena dihambat oleh medium
(karena perbedaan kerapatan) muncul dari benda sebagai sinar yang dibiaskan. Sinar cahaya spesifik inilah yang merupakan
panjang gelombang terbelakang. Ilustrasi 3, gambar 3.2, menunjukkan kedua jenis sinar cahaya ini.
Jika gelombang cahaya langsung dan difraksi dibawa ke fase yang sama satu sama lain, hasilnya adalah kebetulan
dengan amplitudo yang dihasilkan dari gelombang konvergen menjadi jumlah dari dua gelombang. Peningkatan amplitudo ini
48
akan menghasilkan peningkatan kecerahan objek di lapangan. Sebaliknya, jika dua gelombang cahaya dengan amplitudo yang sama
berada dalam fase terbalik (panjang gelombang mati), amplitudonya akan saling meniadakan untuk menghasilkan objek gelap. Ini
disebut interferensi. Ilustrasi 4, gambar 3.2, menunjukkan kedua kondisi tersebut.
Mikroskop Fase-Kontras
Dalam membangun mikroskop kontras fase pertamanya, Zernike bereksperimen dengan berbagai konfigurasi diafragma dan berbagai
bahan yang dapat digunakan untuk memperlambat atau memajukan sinar cahaya langsung. Gambar 3.3 mengilustrasikan sistem
optik mikroskop fase-kontras modern yang khas. Ini berbeda dari mikroskop brightfield konvensional dengan memiliki (1) jenis
diafragma yang berbeda dan (2) pelat fase.
Diafragma terdiri dari penghenti annular yang memungkinkan hanya kerucut berongga sinar cahaya melewati kondensor ke
spesimen pada slide. Pelat fase adalah cakram optik khusus yang terletak di lensa objektif di dekat bidang fokus belakangnya. Ini
memiliki cincin fase yang memajukan atau memperlambat panjang gelombang sinar cahaya langsung.
Perhatikan pada gambar 3.3 bahwa sinar langsung bertemu pada cincin fase menjadi panjang gelombang maju atau mundur.
Sinar ini muncul sebagai garis padat dari objek pada slide. Cincin pada pelat fasa ini dilapisi dengan bahan yang akan menghasilkan
pergeseran fasa yang diinginkan. Difraksi sinar, di sisi lain, yang telah terbelakang panjang gelombang oleh objek fase pada slide,
benar-benar kehilangan cincin fase dan tidak terpengaruh oleh pelat fase. Harus jelas bahwa tergantung pada jenis mikroskop fase-
kontras, konvergensi sinar difraksi dan sinar langsung pada bidang gambar akan menghasilkan gambar yang lebih terang (penjumlahan
amplitudo) atau gambar yang lebih gelap (interferensi amplitudo atau fase balik ) . ). Yang pertama disebut sebagai mikroskop fase
terang ;
19
49
Gambar 3.3 Sistem optik mikroskop kontras fase.
yang terakhir sebagai mikroskop fase gelap . Kecerahan atau kegelapan yang tampak, kebetulan, sebanding dengan kuadrat
amplitudo; dengan demikian, gambar akan menjadi empat kali lebih terang atau lebih gelap daripada yang terlihat melalui
mikroskop medan terang.
Perlu ditambahkan di sini bahwa pelat fase dari beberapa mikroskop memiliki lapisan untuk mengubah fase sinar yang
dibiaskan. Bagaimanapun, hasil akhirnya akan sama: untuk mencapai kebetulan atau interferensi sinar langsung dan difraksi. 20
Penyesuaian Mikroskop
Jika annular stop di bawah kondensor mikroskop fase-kontras dapat dipindahkan dari posisinya, ini
50
instrumen juga dapat digunakan untuk studi medan terang. Meskipun lensa objektif kontras fase memiliki cincin fase yang terpasang pada
permukaan atas salah satu lensanya, keberadaan cincin tersebut tidak mengganggu resolusi lensa objektif saat digunakan dalam mode
medan terang. Karena alasan inilah produsen telah merancang mikroskop fase-kontras sedemikian rupa sehingga dapat dengan cepat
diubah menjadi operasi medan terang.
Untuk membuat mikroskop berfungsi secara efisien dalam situasi kontras fase dan medan terang, seseorang harus menguasainya
prosedur berikut:
•
melapisi cincin annular dan cincin fase sehingga konsentris sempurna, menyesuaikan sumber
•
cahaya sehingga iluminasi maksimum tercapai untuk penggunaan fase-kontras dan medan terang, dan mampu beralih bolak-balik
dengan
•
mudah dari mode fase-kontras ke medan terang . Saran-saran berikut ini akan sangat membantu dalam mengatasi masalah-masalah
ini.
Penyelarasan Annulus dan Cincin Fase Kecuali jika
cincin annular di bawah kondensor disejajarkan secara sempurna dengan cincin fase di setiap lensa objektif, citra kontras fase yang baik
tidak dapat dicapai. Gambar 3.4 mengilustrasikan perbedaan antara nonalignment dan alignment. Jika mikroskop hanya memiliki satu
tujuan kontras fase, hanya akan ada satu penghenti annular yang harus disejajarkan. Jika mikroskop memiliki dua atau lebih tujuan fase,
harus ada unit subtahap dengan penghenti annular terpisah untuk setiap tujuan fase, dan prosedur penyelarasan harus dilakukan secara
terpisah untuk setiap tujuan dan penghenti annularnya.
Karena objektif tidak dapat dipindahkan setelah dikunci pada posisinya, semua penyesuaian dilakukan pada annular stop.
Pada beberapa mikroskop penyesuaian dapat dilakukan dengan alat, seperti yang diilustrasikan pada Gambar 3.5. Pada mikroskop lain,
pada Gambar 3.6, cincin annular dipindahkan ke posisinya dengan kenop khusus pada unit subtahap. Karena metode penyesuaian
bervariasi dari satu merek mikroskop ke merek lainnya, seseorang harus mengikuti petunjuk yang diberikan oleh produsennya. Setelah
penyesuaian dilakukan, mereka diatur secara kaku dan tidak perlu diubah kecuali seseorang secara tidak sengaja mengganggu mereka.
Untuk mengamati keselarasan cincin, lensa okuler dapat diganti dengan teropong tengah, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3.7.
Dengan unit ini terpasang, kedua cincin dapat diarahkan ke fokus yang tajam dengan memutar cincin pemfokusan pada teleskop.
Pemfokusan ulang diperlukan untuk setiap tujuan dan perhentian annularnya yang cocok. Beberapa produsen menyediakan unit tampilan
apertur, yang memungkinkan seseorang untuk mengamati cincin tanpa menggunakan teleskop pemusatan. Mikroskop Zeiss memiliki unit
yang disebut Optovar, yang terletak di badan mikroskop.
Gambar 3.4 Gambar di sebelah kanan mengilustrasikan penampakan cincin ketika penyelarasan sempurna antara cincin fasa
dan diafragma annulus telah tercapai.
51
Gambar 3.5 Penjajaran diafragma annulus dan cincin fase dilakukan dengan sepasang obeng tipe Allen pada
mikroskop Optik Amerika ini.
© Harold Benson
Penyesuaian Sumber Cahaya
Untuk mode brightfield dan phase-contrast, pencahayaan optimal harus dicapai. Namun, untuk mikroskop objektif
multifase, ada lebih banyak penyesuaian yang perlu dilakukan.
21
Gambar 3.6 Penjajaran cincin annulus dan fase dicapai dengan menyesuaikan dua kenop seperti yang
ditunjukkan. © Layanan Fotografi McGraw-Hill Education/Auburn University
52
Gambar 3.7 Jika okuler mikroskop kontras fase diganti dengan teropong tengah, orientasi cincin fase dan cincin
cincin dapat dilihat. © Layanan Fotografi McGraw-Hill Education/Auburn
University
Beberapa saran yang menyoroti beberapa masalah dan solusinya adalah sebagai berikut:
Karena cahaya biru memberikan gambar yang lebih baik untuk mode fase-kontras dan medan terang, pastikan filter 1. biru
ditempatkan di penahan filter yang ditempatkan di jalur cahaya. Jika mikroskop tidak memiliki penahan filter, menempatkan filter di
atas sumber cahaya di alas akan membantu.
Kecerahan bidang di bawah fase-kontras dikendalikan dengan menyesuaikan voltase atau diafragma iris pada 2. dasar. Jauh lebih
banyak cahaya diperlukan untuk kontras fase daripada medan terang karena begitu banyak cahaya diblokir oleh penghentian annular.
Kerataan iluminasi pada beberapa mikroskop, seperti yang terlihat pada halaman ini, dapat diatur dengan melepas 3. rumah lampu
dari mikroskop dan memfokuskan titik cahaya pada selembar kertas putih transparan. Untuk langkah-langkah terperinci dalam
prosedur ini, seseorang harus berkonsultasi dengan manual instruksi yang disertakan dengan mikroskop.
Penyesuaian sumber cahaya seperti ini tidak diperlukan untuk jenis mikroskop yang lebih sederhana.
Prosedur Kerja
Setelah sumber cahaya benar dan elemen fase berada di tengah, Anda akhirnya siap untuk memeriksa preparat slide. Perlu diingat
bahwa mulai sekarang sebagian besar penyesuaian yang dijelaskan sebelumnya tidak boleh diubah; namun, jika ketidaksejajaran
terjadi karena kesalahan penanganan, perlu merujuk kembali ke prosedur penyelarasan. Pedoman berikut harus dipatuhi dalam semua
studi fase-kontras:
•
Gunakan hanya slide dan kaca penutup yang sempurna secara optik (tidak ada gelembung atau striae di kaca).
•
Pastikan slide dan kaca penutup benar-benar bebas dari minyak atau bahan kimia.
•
Gunakan slide mount basah sebagai pengganti persiapan drop drop. Yang terakhir meninggalkan banyak hal yang diinginkan.
Kaldu biakan yang mengandung bakteri atau suspensi protozoa ideal untuk tunggangan basah.
•
Secara umum, batasi pengamatan pada sel hidup. Dalam kebanyakan kasus, slide bernoda tidak memuaskan.
Pertama kali Anda menggunakan optik fase-kontras untuk memeriksa dudukan basah, ikuti saran berikut:
1. Tempatkan slide dudukan basah di atas panggung dan fokuskan materi, menggunakan optik brightfield dengan daya rendah
53
pembesaran.
2. Setelah gambar terfokus, alihkan ke optik fase dengan perbesaran yang sama. Ingat, perlu untuk menempatkan pada posisi annular
stop yang cocok.

Sesuaikan intensitas cahaya, pertama dengan diafragma dasar dan kemudian dengan pengatur tegangan. Dalam 3.
22
dalam banyak kasus, Anda perlu menambah jumlah cahaya untuk kontras fase. 4.
Beralih ke perbesaran yang lebih tinggi, sama seperti yang Anda lakukan untuk optik medan terang, kecuali Anda harus memutar
penghenti annular yang cocok ke posisinya.
Jika tujuan fase perendaman minyak digunakan, tambahkan minyak perendaman ke bagian atas kondensor serta 5. bagian atas kaca
penutup. 6.
Jangan terganggu oleh "efek halo" yang Anda amati dengan optik fase. Halo normal.
Latihan ini dapat digunakan bersamaan dengan Bagian 2 dalam mempelajari berbagai jenis organisme. Organel dalam protozoa dan alga
akan terlihat lebih jelas dibandingkan dengan optik medan terang. Setelah membaca latihan ini dan mengerjakan tugas khusus yang dibuat
oleh instruktur Anda, jawablah pertanyaan-pertanyaan di Laporan Laboratorium 3.
23
Murid:______________________________________
3 Mikroskopi Fase-Kontras
1.
Pewarnaan sel sering dilakukan untuk menyempurnakan gambar yang diperoleh dengan mikroskop medan terang. Mikroskop fase-
kontras tidak memerlukan pewarnaan sel. Mengapa ini menguntungkan?
2.
Ketika cahaya melewati objek transparan, bagaimana sinar cahaya langsung dan difraksi dihasilkan? Berapakah pergeseran fasa
yang terjadi?
3.
Bagaimana perbedaan kebetulan dan interferensi sinar cahaya? Jenis gambar apa yang dihasilkan masing-masing? Bagaimana
hal itu berkontribusi pada gambar yang lebih tajam?
4.
Bedakan antara mikroskop fase terang dan fase gelap dalam hal pergeseran fase.
5.
Manakah dua item yang dapat digunakan untuk memeriksa keselarasan cincin annulus dan fase?
54
B.Pilihan Ganda
1.
Mikroskop fase-kontras berbeda dari mikroskop brightfield dengan memiliki filter biru pada lensa
A. okuler. diafragma dengan stop
B. annular. pelat fase pada lensa objektif.
C.
D. Keduanya (b) dan (c) benar.

e. Semua benar.
JAWABAN
Pilihan ganda
1. ____________________
24
2.
Manakah dari berikut ini yang paling baik diamati untuk sel bakteri menggunakan mikroskop kontras fase?
A. Motilitas sel
B. nukleoid bakteri
C. Dinding sel
D. Glikokaliks
3.
Penjumlahan amplitudo terjadi pada optik fase-kontras ketika sinar langsung dan sinar difraksi
A. Dalam fase.
B. dalam fase terbalik.
C.
dari panjang gelombang.
D. Tidak ada yang benar.
4.
Mikroskop fase-kontras paling cocok untuk mengamati organisme hidup
A. dalam tetesan yang tidak tertutup pada slide. slide bernoda
B. dengan kaca penutup. organisme hidup
C. dalam preparat slide drop gantung. organisme hidup pada slide
D. dengan kaca penutup.
2. ____________________
3. ____________________
4. ____________________
55
25
LATIHAN
Mikroskop Fluoresensi 4
Hasil belajar
1. Memahami sifat mikroskop fluoresensi dan bagaimana mikroskop digunakan untuk menghasilkan rincian tentang sel dan konstituennya.
2. Gunakan mikroskop fluoresensi dengan benar untuk mengamati sel dengan label fluoresen.
Mikroskop fluoresensi adalah instrumen unik yang sangat diperlukan dalam penelitian dan beberapa prosedur diagnostik.
Misalnya, teknik imunofluoresensi telah membuat diagnosis laboratorium dari banyak penyakit seperti AIDS, penyakit
Legiuner, dan antraks jauh lebih sederhana dengan jenis mikroskop ini dibandingkan dengan mikroskop konvensional
yang dijelaskan dalam latihan sebelumnya dalam manual ini. Penggunaan antibodi berpenanda fluoresen juga
menyediakan sarana untuk mendeteksi lokasi protein spesifik di dalam sel atau di permukaannya (gambar 4.1). Namun,
mikroskop fluoresensi bukan tanpa jebakan. Sebelum seseorang dapat menggunakan mikroskop fluoresensi dan
memanipulasi noda fluoresen yang diperlukan untuk memvisualisasikan gambar, seseorang memerlukan pemahaman
dasar yang baik tentang metode, keterbatasannya, dan bahayanya. Salah satu bahaya terbesar adalah potensi cedera
mata yang serius, yang dapat terjadi dari sumber sinar UV jika instrumen tidak digunakan dengan benar.
Mikroskop fluoresensi berbeda dari mikroskop medan terang biasa dalam beberapa aspek. (Sebuah mikroskop
fluoresensi modern ditunjukkan pada Gambar 4.2.) Pertama, ia menggunakan sumber cahaya uap merkuri yang kuat yang
menghasilkan sinar ultraviolet. Kedua, kondensor darkfield biasanya digunakan sebagai pengganti kondensor Abbe
brightfield. Perbedaan ketiga adalah bahwa ia menggunakan kombinasi filter yang memilih sinar ultraviolet yang
menggairahkan senyawa fluoresen dalam spesimen tetapi hanya memungkinkan cahaya fluoresen yang dihasilkan
mencapai pengamat. Dalam latihan berikut, Anda akan mempelajari prinsip umum mikroskop fluoresensi dan cara menggunakan mikroskop.
Gambar 4.1 Noda antibodi fluoresen dari Candida albicans.

Sumber: Pusat Pengendalian Penyakit
56
26
Gambar 4.2 Mikroskop stereo neon canggih. © Anna Ivanova/

Getty Images
Prinsip Fluoresensi
Ketika sebuah molekul menyerap energi, elektronnya menjadi tereksitasi dan dipromosikan ke keadaan energi tinggi (singlet).
Ketika elektron kembali ke keadaan dasar berenergi rendah, energi yang diserap tidak hilang tetapi, seperti yang ditentukan
oleh Hukum Pertama Termodinamika, dapat muncul sebagai bentuk energi lain (gambar 4.3). Bentuk energi baru ini bisa
berupa panas, cahaya, atau energi kimia. Jika cahaya dipancarkan saat molekul kemudian kembali ke keadaan dasarnya, itu
disebut photoluminescence. Fotoluminesensi dapat berupa fluoresensi atau pendar. Jika molekul tereksitasi kembali ke
ÿ4
keadaan dasar dalam waktu kurang dari 10 detik, cahaya yang dipancarkan disebut fluoresensi, dan panjang gelombang
fluoresensi yang dipancarkan
57
Gambar 4.3 Spektrum penyerapan dan emisi cahaya.
27
selalu panjang gelombang lebih panjang dari cahaya menarik. Untuk pendar, bagaimanapun, molekul tereksitasi tidak segera
kembali ke keadaan dasar tetapi turun ke keadaan metastabil (triplet), berenergi tinggi dan kemudian meluruh ke keadaan dasar.
Interval waktu antara penyerapan radiasi eksitasi dan emisi cahaya pendar lebih besar dari 10 detik dan, karenanya, waktu paruh
ÿ4
pendar jauh lebih lama daripada fluoresensi. Phosphorescence adalah dasar untuk jam tangan yang bersinar dalam gelap.
Bahan mikrobiologi yang akan dipelajari dengan mikroskop fluoresensi harus secara intrinsik berpendar atau diwarnai dengan
pewarna khusus yang disebut fluorokrom. Seringkali, fluorochromes seperti auramine O, acridine orange, dan fluoroscein secara
kimia terkait dengan molekul biologis seperti antibodi, dan ini digunakan untuk menandai protein spesifik pada atau di dalam sel.
Molekul seperti bacteriochlorophyll dan beberapa kofaktor dalam bakteri metana secara alami berpendar saat tereksitasi. Akibatnya,
bakteri fotosintetik dan beberapa bakteri metana terlihat dalam mikroskop fluoresensi karena fluoresensi intrinsiknya. Struktur
molekul molekul serta beberapa parameter fisik sangat berkaitan dengan apakah molekul akan berfluoresensi. Salah satu masalah
yang lebih signifikan dengan fluoresensi adalah pendinginan. Dengan terus terpaparnya molekul fluoresen ke sinar ultraviolet,
fluoresensi pada akhirnya akan berkurang dan menghilang karena pendinginan fluoresensi. Akibatnya, objek menjadi lebih sulit
untuk dilihat. Senyawa kimia seperti asam dapat berkontribusi pada pendinginan.
Komponen Mikroskop
Gambar 4.4 mengilustrasikan, secara diagram, jalur cahaya mikroskop fluoresensi. Komponen penting adalah sumber cahaya, filter
panas, filter exciter, kondensor, dan filter penghalang. Karakteristik dan fungsi masing-masing item mengikuti.
Sumber Cahaya Komponen penting dari mikroskop fluoresensi adalah lampu busur uap merkuri. Bohlam seperti itu diperlukan
karena menghasilkan panjang gelombang cahaya yang lebih pendek (ultraviolet dan biru) yang diperlukan untuk fluoresensi yang
baik. Untuk menghasilkan busur dalam lampu uap merkuri, tegangan 18.000 volt diperlukan dan karenanya transformator catu daya
selalu digunakan.
Panjang gelombang yang dihasilkan oleh lampu ini meliputi kisaran ultraviolet, 200–400 nm, kisaran tampak, 400–780 nm, dan
panjang radiasi infra merah di atas 780 nm. Sinar ultraviolet adalah yang paling berbahaya karena dapat menyebabkan mutasi pada
DNA dan dapat menyebabkan kerusakan mata yang serius.
Lampu busur uap merkuri mahal dan bisa berbahaya. Karena lampu ini mengandung gas bertekanan, maka berpotensi meledak.
Selain itu, paparan langsung mata terhadap lampu ini dapat menyebabkan kerusakan serius.
Pengetahuan tentang bahaya ini sangat penting untuk pengoperasian mikroskop yang aman. Seseorang tidak boleh mencoba
menggunakan mikroskop fluoresensi tanpa pemahaman lengkap tentang operasinya. Namun, jika seseorang memahami dan
menggunakan tindakan pencegahan yang diperlukan, mikroskop fluoresensi dapat menjadi alat yang berharga bagi peneliti dan ahli diagnosa.
Filter Panas Sinar infra merah yang dihasilkan oleh lampu busur uap merkuri menghasilkan panas yang cukup besar.
Sinar ini tidak berguna dalam fluoresensi dan memberikan tekanan yang cukup besar pada filter di dalam sistem. Untuk
menghilangkan sinar ini, filter penyerap panas adalah elemen pertama di depan kondensor. Sinar ultraviolet, serta sebagian besar
spektrum yang terlihat, melewati filter ini tanpa hambatan.
Exciter Filter Setelah cahaya didinginkan oleh heat filter, ia melewati exciter filter, yang menyerap semua panjang gelombang
kecuali yang pendek diperlukan untuk mengeksitasi fluorochrome pada slide. Filter ini sangat gelap dan dirancang untuk hanya
membiarkan sinar hijau, biru, ungu, atau ultraviolet. Jika filter exciter dimaksudkan untuk transmisi cahaya tampak (biru, hijau, atau
ungu), itu juga akan memungkinkan transmisi ultraviolet.
Kondensor Untuk mencapai kontras terbaik dari objek fluoresen di bidang mikroskopis, digunakan kondensor medan gelap. Harus
diingat bahwa fluoresensi yang lemah dari suatu objek dalam medan terang akan sulit untuk dilihat. Latar belakang gelap yang
dihasilkan oleh kondensor darkfield memberikan kontras yang diinginkan. Bonus lain dari kondensor jenis ini adalah sebagian besar
sinar ultraviolet dibelokkan oleh kondensor, melindungi mata pengamat. Untuk mencapai ini, aperture numerik dari objektif selalu
0,05 lebih kecil dari kondensor.
Barrier Filter Filter ini terletak di antara lensa objektif dan okuler untuk menghilangkan semua sisa-sisa yang keluar
58
cahaya sehingga hanya fluoresensi yang terlihat. Ketika eksitasi ultraviolet digunakan dengan filter exciter yang sangat gelap
dan tampak hampir hitam, filter penghalang yang sesuai tampak hampir tidak berwarna. Di sisi lain, ketika filter exciter biru
digunakan, filter penghalang yang cocok memiliki warna kuning hingga oranye tua. Dalam kedua kasus, fakta penting adalah
bahwa filter penghalang harus memotong dengan tepat panjang gelombang exciter yang lebih pendek tanpa mempengaruhi
panjang gelombang fluoresensi
yang lebih panjang. 28
Gambar 4.4 Jalur cahaya mikroskop fluoresensi.
Penggunaan Mikroskop
Seperti halnya peralatan yang paling canggih dari jenis ini, yang terbaik adalah berkonsultasi dengan buku petunjuk produsen
sebelum menggunakannya. Meskipun pembuatan mikroskop fluoresensi yang berbeda pada dasarnya sama pada prinsipnya,
mereka mungkin sangat berbeda dalam hal pengoperasiannya. Karena tidak mungkin untuk secara eksplisit tentang
59
operasi semua merek, semua yang akan dicoba di sini adalah untuk menggeneralisasi.
29
Tindakan pencegahan
Untuk melindungi diri sendiri dan orang lain, ingatlah hal-hal berikut:
1. Ingatlah bahwa lampu busur merkuri bertekanan secara harfiah adalah bom potensial. Desain peralatan sedemikian rupa, bagaimanapun, bahwa dengan
penilaian yang baik, tidak ada cedera yang terjadi. Saat lampu ini dingin, lampu ini relatif aman, tetapi saat panas, tekanan di dalam meningkat menjadi
delapan atmosfer, atau 112 pon per inci persegi.
Hal yang perlu diingat adalah ini — jangan pernah mencoba memeriksa lampu saat masih panas. Biarkan dingin sepenuhnya sebelum membuka lampu
perumahan. Biasanya, waktu pendinginan 15 hingga 20 menit sudah cukup.
2. Jangan pernah memaparkan mata Anda ke sinar langsung dari lampu busur merkuri. Desain peralatan sedemikian rupa sehingga bohlam selalu terlindung
dari hamburan sinarnya. Ingatlah bahwa cahaya tanpa filter dari salah satu lampu ini kaya akan sinar ultraviolet dan infra merah—keduanya merusak mata.
Luka bakar retina yang parah dapat terjadi akibat paparan sinar busur merkuri.
3. Pastikan filter penghalang selalu terpasang saat melihat ke bawah melalui mikroskop. Penghapusan filter penghalang atau filter exciter atau kedua filter saat
melihat melalui mikroskop dapat menyebabkan cedera mata. Dimungkinkan untuk membuat kesalahan seperti ini jika seseorang tidak sepenuhnya terbiasa
dengan instrumennya. Ingat, fungsi filter penghalang adalah untuk mencegah jejak sinar ultraviolet mencapai mata tanpa menghalangi panjang gelombang
fluoresensi.
Periode Pemanasan Lampu pada mikroskop fluoresensi memerlukan periode pemanasan. Saat pertama kali dinyalakan, iluminasi sangat
rendah, tetapi meningkat hingga maksimal dalam waktu sekitar 2 menit. Penerangan optimal terjadi ketika peralatan telah beroperasi selama 30
menit atau lebih. Sebagian besar produsen merekomendasikan untuk membiarkan instrumen menyala selama satu jam atau lebih saat
menggunakannya. Menghidupkan dan mematikan instrumen beberapa kali dalam periode 2-3 jam dianggap tidak ekonomis.
Menyimpan Log Harapan hidup lampu busur merkuri adalah sekitar 400 jam. Sebuah log harus disimpan dari jumlah jam instrumen yang
digunakan sehingga inspeksi dapat dilakukan dari bohlam kira-kira 200 jam. Kartu atau selembar kertas harus disimpan dengan nyaman di
dekat instrumen sehingga orang yang menggunakan instrumen diingatkan untuk mencatat waktu saat instrumen dihidupkan dan dimatikan.
Pemilihan Filter Kombinasi filter yang paling sering digunakan adalah exciter Schott BG12 (AO #702) kebiruan dan filter barrier Schott OG1
yang kekuningan. Gambar 4.5 menunjukkan transmisi panjang gelombang dari masing-masing filter ini.
Perhatikan bahwa filter exciter memberikan emisi puncak cahaya di area spektrum 400 nm. Sinar ini berwarna ungu. Ini memungkinkan hampir
tidak ada panjang gelombang hijau atau kuning. Panjang gelombang terpendek yang dilewatkan oleh filter penghalang ini berwarna hijau hingga
kuning kehijauan.
Gambar 4.5 Transmisi spektral filter BG12 dan OG1.
Jika latar belakang yang lebih gelap diinginkan daripada yang dicapai dengan filter di atas, seseorang dapat menambahkan Schott BG38
biru pucat ke sistem. Ini dapat ditempatkan di kedua sisi filter panas, tergantung pada jenis peralatan yang digunakan. Jika ditempatkan di antara
lampu dan penyaring panas, itu juga akan berfungsi sebagai penyaring panas lainnya.
Pemeriksaan Saat mencari materi di slide, sebaiknya gunakan tujuan berkekuatan rendah atau tinggi. Mungkin diinginkan untuk memindahkan
iluminator dari posisinya dan menggunakan lampu pijar untuk fase pekerjaan ini. Setelah bidang yang diinginkan telah ditemukan, iluminator
busur uap merkuri dapat dipindahkan ke posisinya.
Perlu diingat bahwa tidak ada kontrol diafragma pada kondensor medan gelap. Beberapa instrumen disertakan
60
filter densitas netral untuk mengurangi intensitas cahaya. Namun, sistem kontrol iluminasi terbaik dicapai dengan tujuan yang
memiliki kontrol iris bawaan. Sasaran ini memiliki cincin knurled yang dapat diputar untuk mengontrol
kontras.
Untuk hasil optimal, minyak harus digunakan antara kondensor dan slide. Dan, tentu saja, jika menggunakan lensa celup
oli, oli juga harus ditempatkan di antara slide dan lensa objektif. Penting juga untuk menggunakan minyak imersi khusus
berfluoresensi rendah. Minyak imersi biasa harus dihindari.
Meskipun okuler mikroskop fluoresensi biasanya 10x, seseorang tidak perlu ragu untuk mencoba ukuran okuler lain jika
tersedia. Dengan mikroskop brightfield, secara umum diterima bahwa tidak ada yang diperoleh dengan melampaui perbesaran
1000x. Namun, dalam mikroskop fluoresensi, gambar dibentuk dengan cara yang sangat berbeda dari mitra medan terangnya,
meniadakan kebutuhan untuk mengikuti aturan 1000x. Satu-satunya kerugian dengan menggunakan perbesaran yang lebih
tinggi adalah kecerahan.
Laporan Laboratorium Lengkap 4.

31
Murid:______________________________________
4 Mikroskop Fluoresensi

1.
Bedakan antara fosforesensi dan fluoresensi.
2.
Jelaskan apa yang terjadi pada elektron molekul ketika molekul menyerap energi.
3.
Apa itu quenching?
4.
Jelaskan dua bahaya yang terkait dengan penggunaan lampu busur uap merkuri.
5.
Jelaskan panjang dan pentingnya periode pemanasan untuk lampu mikroskop fluoresensi.
6.
Apa dua keuntungan menggunakan kondensor medan gelap untuk mikroskop fluoresensi?
61
7.
Pertimbangan khusus apa yang harus dilakukan saat menggunakan lensa perendaman minyak untuk mikroskop fluoresensi?
8.
Jelaskan apa yang terjadi pada energi yang diserap ketika elektron kembali ke keadaan dasar.
32
B.Pilihan Ganda
1.
Protein spesifik pada atau di dalam sel dapat ditandai dengan fluorokrom yang telah dikaitkan secara kimiawi
A. antibodi.
B. klorofil. metana.
C.

e. Semua benar.
2.
Filter panas digunakan untuk menghilangkan sinar infra merah yang tidak berguna
A. dan menghasilkan
B. panas. sinar
C. ultraviolet. sinar spektrum tampak.
e. Semua benar.
3.
Sebelum mencapai mata, cahaya yang dihasilkan oleh lampu busur uap merkuri berjalan melalui filter penghalang,
A. filter panas, kondensor, slide, lensa objektif, dan kemudian filter exciter. filter exciter, filter
B. penghalang, slide, kondensor, lensa objektif, dan kemudian filter panas. filter exciter, kondensor,
C. filter panas, slide, lensa objektif, dan kemudian filter penghalang. filter panas, filter exciter,
D. kondensor, filter penghalang, slide, dan kemudian lensa objektif. filter panas, filter exciter,
e. kondensor, slide, lensa objektif, dan kemudian filter penghalang.
4.
Panjang gelombang sinar lampu neon adalah
A. selalu lebih panjang dari panjang gelombang yang menarik.
B. selalu lebih pendek dari panjang gelombang yang menarik.
C. kira-kira sama panjangnya dengan panjang gelombang yang
D. menarik. terkadang lebih pendek dan di lain waktu lebih panjang dari panjang gelombang yang menarik.
5.
Filter penghalang dalam mikroskop fluoresensi disimpan pada posisinya untuk
A. memblokir semua sinar cahaya agar tidak
B. masuk. memungkinkan sinar cahaya neon
C. melewatinya. menyaring sinar cahaya yang menarik.
JAWABAN
Pilihan ganda
1. ____________________
2. ____________________
3. ____________________
4. ____________________
5. ____________________
62
63
33
LATIHAN
Pengukuran mikroskopis 5
Hasil belajar
1. Kalibrasi mikrometer okular menggunakan mikrometer panggung.
2. Gunakan mikrometer okular untuk secara akurat mengukur dimensi sel yang diwarnai.
Gambar 5.1 Mikrometer okuler dengan cincin penahan dimasukkan ke dasar lensa okuler.
© Harold Benson
Dengan mikrometer okular yang dipasang dengan benar di lensa mata mikroskop Anda, mengukur ukuran mikroorganisme yang
terlihat di bidang mikroskopis adalah hal yang mudah. Sebuah mikrometer okular terdiri dari piringan kaca bundar yang terukir
pada permukaan atasnya. Graduasi ini tampak seperti pada ilustrasi (b), gambar 5.4. Pada beberapa mikroskop seseorang harus
membongkar okular sehingga piringan dapat ditempatkan pada rak di dalam tabung okuler di antara kedua lensa. Namun, pada
sebagian besar mikroskop, mikrometer okuler hanya dimasukkan ke bagian bawah okuler, seperti yang ditunjukkan pada Gambar
5.1. Sebelum seseorang dapat menggunakan mikrometer, perlu dilakukan kalibrasi untuk setiap tujuan dengan menggunakan
mikrometer panggung.
Tujuan utama dari latihan ini adalah untuk menunjukkan kepada Anda bagaimana mengkalibrasi mikrometer okuler untuk
berbagai tujuan pada mikroskop Anda.
Gambar 5.2 Mikrometer panggung diposisikan dengan memusatkan piringan kaca kecil di atas sumber cahaya.
64
© Harold Benson
Prosedur Kalibrasi
Jarak antara garis mikrometer okuler adalah nilai arbitrer yang memiliki arti hanya jika mikrometer okuler dikalibrasi
untuk tujuan yang digunakan. Mikrometer panggung (gambar 5.2), juga dikenal sebagai mikrometer objektif, memiliki
garis-garis tertulis di atasnya yang terpisah tepat 0,01 mm (10 ÿm). Ilustrasi (c), gambar 5.4, menunjukkan gradasi
tersebut.
Untuk mengkalibrasi mikrometer okular untuk tujuan tertentu, perlu untuk menempatkan dua skala dan menentukan
berapa banyak kelulusan okular yang bertepatan dengan satu kelulusan pada skala mikrometer panggung.
Ilustrasi (a) pada gambar 5.4 menunjukkan bagaimana kedua sisik tersebut terlihat ketika disejajarkan dengan benar
dalam bidang mikroskopis. Dalam hal ini, tujuh divisi okular cocok dengan divisi mikrometer satu tingkat 0,01 mm
untuk memberikan nilai okular 0,01/7, atau 0,00143 mm. Karena ada 1000 mikrometer dalam 1 milimeter, divisi ini
terpisah 1,43 ÿm.
Dengan informasi ini diketahui, mikrometer panggung diganti dengan slide organisme (gambar 5.3) yang akan
diukur. Ilustrasi (d), gambar 5.4, menunjukkan bagaimana bidang mikroorganisme dapat muncul dengan mikrometer
okular di lensa okuler. Maka, untuk menentukan ukuran suatu organisme, adalah hal yang sederhana untuk
menghitung kelulusan dan mengalikan angka ini dengan jarak yang diketahui antara kelulusan. Saat mengkalibrasi
tujuan mikroskop, lakukan sebagai berikut. 34
Gambar 5.3 Setelah kalibrasi selesai, mikrometer panggung diganti dengan slide untuk pengukuran.
© Harold Benson
65
Gambar 5.4 Kalibrasi mikrometer okular.
35
Bahan
•
mikrometer okuler atau lensa okuler yang berisi mikrometer
•
disk stage micrometer
1. Jika eyepieces tersedia yang mengandung mikrometer okular, ganti eyepiece di mikroskop Anda dengan salah satunya. Jika
perlu memasukkan mikrometer okuler ke lensa mata Anda, tanyakan kepada instruktur Anda apakah akan dimasukkan di
bawah lensa bawah atau ditempatkan di antara dua lensa di dalam lensa mata. Dalam kasus apa pun, Anda harus sangat
berhati-hati untuk menghindari menjatuhkan lensa mata atau memasang kembali lensa secara tidak benar. Hanya dengan
persetujuan instruktur Anda sebelumnya eyepieces dapat dibongkar. Pastikan gradasi berada di permukaan atas cakram kaca.
2. Tempatkan mikrometer panggung di atas panggung mikroskop dan pusatkan tepat di atas sumber cahaya.
Dengan objektif berdaya rendah (10×) pada posisinya, fokuskan gradasi mikrometer panggung, 3. menggunakan kenop
penyesuaian kasar. Kurangi pencahayaan. Catatan: Jika mikroskop memiliki penghenti otomatis, jangan gunakan seperti biasa
untuk slide mikroskop biasa. Slide mikrometer panggung terlalu tebal untuk memungkinkannya berfungsi dengan baik. 4.
Putar lensa mata sampai kelulusan mikrometer okular sejajar dengan garis panggung
mikrometer.
66
Jika objektif berdaya rendah adalah objektif yang akan dikalibrasi, lanjutkan ke langkah 8. 5.
6. Jika objektif dengan tingkat kekeringan tinggi akan dikalibrasi, ayunkan ke posisinya dan lanjutkan ke langkah 8.
Jika lensa minyak imersi akan dikalibrasi, letakkan setetes minyak imersi pada mikrometer panggung, ayunkan lensa 7. minyak imersi ke
posisinya, dan fokuskan garis; kemudian, lanjutkan ke langkah berikutnya.
Gerakkan mikrometer panggung secara menyamping hingga garis di salah satu ujungnya bertepatan. Kemudian cari garis lain pada 8.
mikrometer okuler yang bertepatan persis dengan garis pada mikrometer panggung. Kadang-kadang, satu tahap mikrometer divisi akan
mencakup genap divisi mata, seperti yang ditunjukkan pada ilustrasi (a) dari Gambar 5.4.
Namun, dalam kebanyakan kasus, beberapa tahap kelulusan akan dilibatkan. Dalam hal ini, bagi jumlah divisi mikrometer panggung
dengan jumlah divisi okular yang bertepatan. Angka yang Anda dapatkan akan menjadi bagian dari divisi mikrometer panggung yang
terlihat pada divisi okular. Nilai ini kemudian harus dikalikan dengan 0,01 mm untuk mendapatkan jumlah setiap divisi okular.
Contoh: 3 divisi mikrometer panggung berbaris dengan 20 divisi mikrometer okular.
Ganti mikrometer panggung dengan slide organisme yang akan diukur.
Tugas Mengukur
Organisme seperti protozoa, ganggang, jamur, dan bakteri dalam beberapa latihan berikutnya mungkin perlu diukur. Jika instruktur Anda
mengharuskan pengukuran dilakukan, Anda akan dirujuk ke latihan ini.
Nanti Anda akan bekerja dengan yang tidak diketahui. Dalam beberapa kasus, pengukuran organisme yang tidak diketahui akan dilakukan
berkaitan dengan identifikasi.
Jika pengukuran percobaan akan dilakukan saat ini, instruktur Anda akan membuat tugas yang sesuai.
Penting: Lepaskan mikrometer okular dari mikroskop Anda pada akhir periode laboratorium.
Jawablah pertanyaan di Laporan Laboratorium 5.

37
Murid:______________________________________
5 Pengukuran Mikroskopis
1.
Bagaimana perbedaan kelulusan antara mikrometer okular dan panggung?
2.
Jika 13 divisi okular berbaris dengan dua divisi mikrometer panggung, berapakah diameter (ÿm) sel yang membentang dari 16 divisi
okular?
3.
Mengapa seluruh prosedur kalibrasi harus dilakukan untuk setiap tujuan?
67

Terjemahan Microbiology Application

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Terjemahan Microbiology Application

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Machine Translated by Google

Alfred E. Brown Profesor

Emeritus, Universitas Auburn

Heidi R. Smith Front

Range Community College

APLIKASI MIKROBIOLOGI BENSON: PEDOMAN LABORATORIUM DALAM MIKROBIOLOGI UMUM, LENGKAP

Buku ini dicetak di atas kertas bebas asam.

Spesialis Lisensi Konten: Melissa Homer (Gambar) / Lorraine Buczek (Teks)

aku aku aku

Profesor Emeritus Mikrobiologi Auburn

Mikrobiologi, California State

Front Range Community College BA

Bowling Green State University, OH

Alat Digital untuk Kesuksesan Anda

BAGIAN 2 Survei Mikroorganisme

6 Mikrobiologi Air Tambak—Protista, Alga, dan Cyanobacteria

8 Jamur: Jamur dan Ragi

BAGIAN 3 Manipulasi Mikroorganisme

10 Teknik Kultur Murni

BAGIAN 4 Pewarnaan dan Pengamatan Mikroorganisme

16 Pewarnaan Spora: Dua Metode

17 Pewarnaan Tahan Asam: Metode Kinyoun

BAGIAN 5 Metode Kultur

19 Persiapan Media Kultur

22 Kultur Slide: Jamur

BAGIAN 6 Virus Bakteri

BAGIAN 7 Pengaruh Lingkungan dan Pengendalian Pertumbuhan Mikroba

28 Suhu: Efek pada Pertumbuhan 29

BAGIAN 8 Identifikasi Bakteri Tak Dikenal

39 Karakteristik Fisiologis: Uji Oksidasi dan Fermentasi

42 Penggunaan Manual Bergey

BAGIAN 9 Sistem Multitest Miniatur

BAGIAN 10 Keanekaragaman dan Mikrobiologi Lingkungan

48 Fiksasi Nitrogen Simbiotik: Rhizobium

BAGIAN 11 Mikrobiologi Terapan

61 Suhu: Efek Mematikan

BAGIAN 12 Genetika dan Bioteknologi Bakteri

BAGIAN 13 Mikrobiologi Medis

BAGIAN 14 Imunologi dan Serologi

Untuk informasi lebih lanjut, kunjungi http://www.mhhe.com/LearnSmartLabsBiology/

Tur Terpandu Melalui Latihan Lab

Periode Pertama dan Kedua

Bahan yang Dibutuhkan

Perubahan pada Edisi Ini

Bagian 2 Survei Mikroorganisme

Latihan 6 Mikrobiologi Air Tambak

Bagian 3 Manipulasi Mikroorganisme

Latihan 10 Teknik Kultur Murni

Bagian 4 Pewarnaan dan Pengamatan Mikroorganisme

Latihan 14 Pewarnaan Kapsul

Latihan 16 Pewarnaan Spora: Dua Metode

Bagian 7 Pengaruh Lingkungan dan Pengendalian Pertumbuhan Mikroba

Latihan 27 Pengaruh Oksigen pada Pertumbuhan

Latihan 28 Suhu: Efek pada Pertumbuhan

Latihan 31 Sinar Ultraviolet: Efek Mematikan

Bagian 8 Identifikasi Bakteri Tak Dikenal

Latihan 37 Studi Morfologi Bakteri Tak Dikenal

Latihan 39 Karakteristik Fisiologis: Tes Oksidasi dan Fermentasi

Latihan 40 Karakteristik Fisiologis: Reaksi Hidrolitik dan Degradatif

Latihan 41 Karakteristik Fisiologis: Media Uji Berganda

Bagian 9 Sistem Multitest Miniatur

Latihan 43 Enterobacteriaceae Identifikasi: API Sistem 20E

Latihan 44 Identifikasi Enterobacteriaceae : Sistem Tes EnteroPluri