ELEKTROFORESISI PROTEIN

Kelompok 3

ELEKTROFORESIS
Suatu teknik pemisahan berdasarkan pergerakan molekul bermuatan dalam suatu medan listrik,dimana kecepatan pergerakan molekul tergantung dari muatan,bentuk serta ukuran.dan teknik ini dapat digunakan untuk separasi(pemisahan molekul) protein dan DNA

Tujuan dan Prinsip

Prinsip Analisis Suatu metode untuk memisahkan makromolekul seperti asam nukleat dan protein berdasarkan ukuran muatan istrik dan cirifisik Tujuan Mengetahui prinsip dasar pemisahan protein dengan metode elektroforesis Menentukan berat molekul kasein

Aplikasi

Alat dan Bahan

Alat : Seperangkat alat elektroforesis Mikropipet Tip Beker glass 100 ml Beker glas 50 ml Eppendorf Shaker

Bahan
Sampel Kasein Buffer Bufer Tris-Cl 0,5 M pH 6,8 ; SDS 2% ; Merkaptoetanol 0,05% Larutan stock Akrilamid 30% 29.2 gram akrilamid ditambah 0.8 gram NN-bismethylene acrylamid dalam 100 ml aquades

Bahan
Larutan SDS 10 % Amonium persulfat (APS) 10% (di buat setiap akan digunakan) TEMED Larutan Pewarna (Staining) 0.1 % commasie blue dalam larutan metanol : air : asam asetat (5:5:2) Larutan Pembilas (destaining) metanol : air : asam asetat (5:5:2) Aquades

1. Elektroforesis Vertikal

Berdasarkan posisi matrik penyangga elektroforesis terdiri :

Dimana posisi gel(matrik )penyangga berdiri tagak lurus. 2. Elektriforesis horisontal Posisi gel (matrik)penyangga dalam posisi mendatar.

vertikal

horizontal

Bagian bagian alat elektroforesis protein

keterangan
tutup elektroconection rendah Chamber apper Chamber Grease untuk spacer Sisir piring untuk membentuk sampel sumur Cam untuk melampirkan kaset untuk pengecoran berdiri pengatur jarak klem pelat kaca Casting Berdiri koil pendingin

Menagapa SDS-PAGE
Pemisahan berdasarkan ukuran. -Protein berikatan Artikel Baru SDS menjadi bermuatan negatif. -SDS = natrium dodesil sulfat => anionik deterjen (muatan negatif) -Protein bergerak melalui matriks gel ke anoda (kutub listrik dengan muatan positif). -The RATE mereka bergerak didasarkan pada ukuran. -Baik untuk menentukan komposisi protein, kemurnian, dan perkiraan berat molekul.

Elektroforesis SDS-PAGE
Protein mempunyai muatan positif dan negatif Muatan listrik menyebabkan protein bergerak ke elektroda melewati gel poliakrilamid Gel memisahkan molekul berdasarkan : 1. Ukuran 2. Bentuk molekul 3. Kekuatan medan listrik 4. Sifat hidrofobik relatif sampel 5. Kekuatan ionik. Poliakrilamid memisahkan Protein MW 0,5-250 kDa memisahkan DNA 5-2000 bp

Isoelectric Point (pI)

Setiap protein memiliki (pI), kondisi dimana protein tidak bermuatan sehingga tidak terjadi perpindahan. pH dimana protein tidak bermuatan Protein dikatakan basa, asam atau netral tergantung pada muatan protein pada pH fisiologis Nilai pH dibawah pI protein berpindah sebagai kation(-) meningkatnya mobilitas dengan penurunan pH Nilai pH diatas pI protein berpindah sebagai anion(+), meningkatnya mobilitas dengan eningkatan pH

Media untuk Elektroforesis

Kertas Strip Selulosa asetat Agar Pati gel poliakrilamida (PAGE) pengayak molekul digunakan untuk keuntungan besar. PAGE Ukuran, bentuk dan mobilitas elektroforesis, resolusi Peningkatan