10/22/2013

Latar belakang

FIKSASI
NITROGEN

Pembuatan pupuk N pada Industri (Haber Bosch) membutuhkan

tekanan dan suhu tinggi
CH4

200 atm ; 450 o C

H2

N2 + 3H2

2 NH3

Untuk menciptakan kondisi tekanan dan suhu yang tinggi diperlukan

bahan bakar sehingga menyebabkan pupuk buatan pabrik menjadi
mahal harganya

Pemanfaatan potensi alami :

Fiksasi N2 secara Biologi

~ adalah reduksi nitrogen bebas (N2) bebas menjadi
amonia (NH 3) oleh kegiatan jasad prokariotik , baik
yang bersimbiotik maupun yang non simbiotik dengan
fungi tertentu seperti lumut, gymnospermae, atau
tumbuhan tingkat tinggi.

Jasad prokariotik= jasad yang tidak mempunyai

membran inti sel (bakteri)

Sejarah pemanfaatan :
Roma Legum
China Azolla
Rhizobium Simbiotik aerob (M. Beijerinck)
Clostridium nonsimbiotik ; anaerob (S.
Winogradsky)

Kandungan gas N2 di atmosfer kurang lebih 78%.

Pemanfaatan mikroorganisme pemfiksasi (penambat) Nitrogen (N2)
dari udara secara biologi sebagai alternatif permasalahan tsb.

Bakteri pemfiksasi nitrogen

Penambat Nitrogen non-simbiotik:
Azotobacter, hidup di rhizosfer tanaman di lahan kering
Clostridium, hidup di tanah tergenang/ tanah sawah
Azospirillum, hidup di permukaan / dalam akar
Cyanobacteria, BGA, hidup di tanah tergenang /tanah
sawah

Penambat Nitrogen simbiotik:

Rhizobium- hidup dalam bintil akar leguminosae
Anabaena azollae-hidup dalam daun Azolla pinnata

10/22/2013

Fisiologi penambatan
N
Pembentukan
ATP

Free living

Sumber
energi

Asosiatif

Pembawa
elektron
(Reduktan)

Simbiotik
karbohidrat

enzim nitrogenase

Na 2S2O4
Donor non
fisiologis

Mg
ATP

Mg ADP
Pi
ATP

N2

Kompleks enzim

Nitrogenase

C2 H2
H3 O+
N3
CN
N2 O

C 2 H4
H
NH3 + H2
CH4 + NH3
N2 + H 2 O

Substrat

Produk

NH3

Mekanisme Fiksasi N

Proses reduksi N 2 menjadi NH 3 melibatkan enzim

nitrogenase yang dihasilkan oleh jasad prokariotik.
Sifat enzim nitrogenase :
Sensitif terhadap O
2

Komponen enzim terdiri dari 2 protein :

Sub-unit protein yang mengandung Mo, Fe, S
yang
bersifat labil terhadap asam
Sub-unit protein yang mengandung Fe (sensitif
terhadap O 2 ) (Fe-protein)

10/22/2013

Syarat yang harus dipenuhi agar aktivitas

nitrogenase berjalan

Ada substrat : N2, N2O, C2H2, HCN,

Ada sumber energi : ATP, Mg
Ada Reduktan :

Ferredoxin (Clostridium, Azotobacter)

Flavoprotein (Azotobacter)
Fe-S (bakteriod)

kondisi yang harus dipenuhi agar

terjadi fiksasi N

Penambatan Non Simbiotik

Azotobacter

aerobik

Clostridium

anaerobic

Azosprillium

Berasosiasi dengan
rumput.Paspalum notatum

Derxia dan Beijerinckia

Tanah asam

Klebsiella danBacillus

Phyllosphere

Azotobacter

Adanya populasi jasad penambat yang besar yang

berkaitan dengan kecepatan fiksasi N
Pembentukan selnya cepat yang menunjukkan bahwa
fiksasi N berkaitan dengan pertumbuhan
N atmosfer , dan bukan organik maupun anorganik.

10/22/2013

Azospirillium sp

Mekanisme penciptaan microsite anaerob

pada penambat N
Terdapat beberapa mekanisme yang digunakan untuk
membatasi O2 untuk menciptakan kondisi anaerob sebagai
syarat berlangsungnya proses penambatan N pada

Azotobacter
membatasi difusi dengan menghasilkan
kotoran/lumpur yang berlebihan

Mempercepat respirasi dan konsumsi O2

Melakukan perubahan reversible enzim
nitrogenase yang fungsional menjadi bentuk yang
tidak sensitif terhadap O2 .

Faktor yang mempengaruhi

fiksasi N non simbiotik
1.

Bakteri Tanah dan Nitrogen tersedia

Reaksi tanah (pH)

Azotobacter sensitif pada pH rendah

Beijerinkia & Derxia mempunyai kisaran

pH 3-9
Fosfor dan bahan organik (status nutrien)
3. Sumber energi tersedia
4. efisiensi
5. sekresi (eksudat) Azospirilium lipoferum
6. Inokulasi sengaja dengan kultur bakteri
panambat
nitrogen non simbiotik

N2

Atmosphere

N2

Soi
l

2.

N2

Nitrogenfixing
bacteria

Denitrifying
bacteria

Nitrate and
nitrogenous
organic
compounds
exported in
xylem to
shoot
system

H+

(From soil)

Soi
l

NH4

NH3

(ammonia
)

NH4

(ammo
nium)

Organic
material (humus)

Nitrifyin
g
bacteria

NO3
(nitrate)

Ammonifyin
g bacteria

Root

10/22/2013

Cross inoculation
group

Rhizobium sp

Cross inoculation
group

Rhizobium-Legum
Tipe Legum

Cross inoculation group Rhizobium

R. leguminosorum

Pea group

Pisum, Vicia

R. phaseoli

Bean group

Phaseolus

R. trifolii

Clover group

Trifolium

R. meliloti
R. lupini

Alfa-alfa group
Lupini group

Medicago, melilotus
Lupinus lotus

R. japonicum

Soybean group

Glycine

R. sp

Cowpea Group

Vigns (cowpea)

10/22/2013

Cyanobacteria

Cyanobacter merupakan jasad bebas diazotrof yang

memfiksasi hanya beberapa kg N/ha/tahun. Jasad ini
peranannya tidak sebesar jasad yang dlm keadaan
bersimbiotik pada daerah terestrial.

Cyanobacter kebanyakan hadir pada lingkungan akutik

dan air tawar Cyanobacter di ketemukan di
dipermukaan tanah, kadang di bawah permukaan tanah.
Secara morfologi bentuknya dibagi menjadi 3 yaitu:

Simbiosis Tanaman Azolla dan Anabaena azolae

Uniseluler (Chroococcus, Gleocapsa dan Microcystis)

Nonfilamentous (Plectonema)
Filamen (Anabaena, Nostoc)

Simbiosis Tanaman Azolla dan Anabaena azolae

Sel Heterosis

BGA
:Anabaena

Sel Vegetatif

10/22/2013

Nostoc

Fiksasi N pada Cyanobacter

N2
Glutamat

NH 4

Glutamin

NH 4 +

Enzim
nitrogenase

Heterosis

Sel vegetatif

Bakteri Penambat Nitrogen

Tipe/Sifat
10% acetylene

0,5 ml gas disuntikan ke dalm GC

Potong akar
Jumlah elektron
6 e-

pemisahan nodul

6 eN2

NH3
2 e-

C 2 H2
C2 H4
Pengukuran fiksasi N pada nodul legum pada tanaman dan potongan
akar dg akar
Nisbah elektron yang diperlukan untuk
mereduksi N2 dan C2H2 adalah 3 : 1

Asimbiotik/Asosiasi:
Bakteri Aerobik
Bakteri Mikroaerofilik
Bakteri Fakultatif
Bakteri Anaerobik
Blue Green
Algae/fotosintetik
Simbiotik:
Bakteri
Blue Green Algae

Jenis Mikroorganisme

Azotobacter, Beijerinckia
Azospirillum, Thiobacillus, Spirillum
Bacillus, Escherichia, Pseudomonas
Clostridium, Desulfovibrio
Nostoc, Anabaena, Rhodospirillum

Rhizobium-Legum
Anabaenaazollae-Azolla

Cara pengukuran aktivitas

Nitrogenase

10/22/2013

Penghambat balik Fiksasi N

(feedback inhibition)

Fiksasi nitrogen tidak terjadi jika terdapat NH4+,

NO 3 - dan Bahan organik tersedia.
Karena menurut hipotesis:
Adanya N tersedia mengalir langsung hilang dari
nitrogenase (tidak ada elektron) sehingga tidak
mereduksi.

Nodul

Pada sistem simbiotik bahwa reduksi nitrat pada

nodul yang menyebabkan NO 2 - berikatan dengan
senyawa yang melindungi nitrogenase dari O 2 .

1. Pemilihan karbohidrat
2. Penghambatan nitrogenase
Akar

3. Penghambatan leghaemoglobin
4. Amonium feed back

Bisakah saya
menjelaskan
gambar di
samping ini??