Bahan Ajar : MIkrobiologi Laut

ISOLASI DAN PEWARNAAN MIKROORGANISME

OLEH

ARNIATI MASSINAI
Isolasi

Suatu kegiatan untuk memperoleh mikrooganisme

dari lingkungan, dengan memisahkan mikroba satu
dengan mikroba lain yang berasal dari campuran
berbagai mikroba berdasarkan morfologi, sifat dan
biokomiawinya.

Sampel

Kultur murni

Uji biokimia
 1. Apa yang harus dipersiapan untuk
pengambilan sampel mikrobiologi?
Peralatan
Pencucian
menggunakan sabun cair
Pembilasan dengan air steril 2-3 kali
Sterilisasi
Autoclave
pemanasan kering
Filtrasi
kimia (alkohol 50-70% (bakteri dan jamur),
sodium hypochlorite 0.1% (virus),
hypochlorite 12 % (protozoa)
Ionisasi (Sinar ultraviolet) 254 nm
Clean-up (menghilangkan zat kimia)
sodium tiosulfat (residu klorin atau
halogen lain)
 Medium tumbuh untuk pertumbuhan
Autoclave : Medium umum
Nutrient Agar (NA)
Potato dextrose Agar (PDA)
Zobell Marine Agar 2216
Trypticase Soy Agar (TSA) : patogen
Nonautoclave : medium selektive
Salmonella Shigella
Slanetz and Bartley medium
Brilliance E. coli/coliform Selective Agar
LYI Entamoeba Medium (ATCC PRA-2154)
Kultur sel (virus)
Eagles Minimal Esential Medium (MEM) :
kultur sel
2. Bagaimana cara pengambilan sampel
mikroba

Penetapan titik sampling

(danau, waduk, muara dan laut)
Pengambilan Sampel Air
Pengambilan Sampel sedimen
Pengambilan sampel pada
 Pengambilan sampel Sampling

A ) S im p le r a n d o m B ) T ra n s e c t

C ) T w o - s ta g e D ) S y s te m a tic g rid
Pengambilan Sampel
1. Sampel tanah
Rhizozfer (sekitar perakaran dekat permukaan
tanah
2. Sampel dari udara
 Pengambilan sampel
3. Sampel air
Pengambilan sampel air
bergantung kepada keadaan
air itu sendiri. Jika beerasal
dari air sungai yang mengalir
maka botol dicelupkan miring
dengan bibir botol melawan
arus air. Bila pengambilan
sampel dilakukan pada air
yang tenang, botol dapat
dicelupkan dengan tali, jika
ingin mengambil sampel dari
air keran maka sebelumya
keran dialirkan dulu beberapa
saat dan mulut kran dibakar.

6-12 inci dari permukaan

Always leave 2.5 - 5 cm of headspace in the
sample bottle
4. Sampel pada organimme
a. Pengambilan sampel dilakukan
dengan mengambil cuplikan
karang yang terinfeksi penyakit
sepanjang 2 cm dengan
menggunakan pahat atau palu
untuk karang masif dan kliper
untuk karang bercabang.
b. Pengambilan mukus pada polip
dengan menggunakan pipektor
kemudian dimasukkan dalam
kantong sampel yang berisi air laut
steril
3. Penangan sampel saat pengangkutan
penyimpanan dalam cool box berisi es batu
Holding Times
 Preparasi Suspensi
Swab (ulas) : mengusapkan cotton
bud memutar sehingga seluruh
permukaan kapas dari cotton bud
kontak dengan permukaan sampel.
Swab akan lebih baik jika cotton bud
dicelupkan terlebih dahulu ke dalam
larutan atraktan semisal pepton
water.

Rinse (bilas) merupakan prosedur

kerja dengan mencelupkan sampel ke
dalam akuades dengan perbandingan
1 : 9 (w/v).

Maseration (pengancuran), sampel

yang berbentuk padat dapat
ditumbuk dengan mortar dan pestle
 Autoclave

Glassware and other dry

materials15 min.
Contaminated and
discarded materials 30
min.
Liquids, total volumes
Up to 250 mL15
min.
500 to 1,000 mL30
min.
> 2,000 mL45 min.
Oven
Ultraviolet