ANALISA

K U A N T I TAT I F
SPEKTROFOTOMETRI
Metode Kalibrasi
Kalibrasi
Adalah suatu proses menghubungkan sinyal analitik yang diukur (respon alat)
dengan konsentrasi analit.

Metode Kalibrasi:
A. Kurva Kalibrasi (Kurva Baku)
B. Metode Adisi Standard
C. Metode Standard Internal
Metode Kalibrasi
A. KURVA KALIBRASI
Sejumlah larutan baku dengan dengan variasi konsentrasi
disiapkan, kemudian diukur menggunakan instrumen, dan respon
instrumen dicatat.
Larutan Baku – Larutan analit yg telah diketahui konsentrasinya.
Larutan baku dibuat agar dalam pengukuran
menggunakan instrumen tidak melampaui batas
linearitas (LOL = Limit of Linearity) dari instrumen.
Kurva Kalibrasi – Plot konsentrasi baku (X) versus respon instrumen
(Y).
Hubungan antara konsentrasi baku dan respon
instrumen adalah linier.
Metode Kalibrasi
A. KURVA KALIBRASI
1. Penyiapan Kurva Kalibrasi
Konsentrasi Respon Instrumen (RI) RI terkoreksi (Si – Sbl)
0,00 0.013 0.000
6.01 0.101 0.088
31.80 0.811 0.798
63.50 1.498 1.485
88.90 2.094 2.081
Sampel 0.924 0.875
2.5 Kurva Kalibrasi
2.0
RI terkoreksi

1.5

1.0

0.5

0.0
0 20 40 60 80 100
Konsentrasi
Metode Kalibrasi
A. KURVA KALIBRASI
1. Penyiapan Kurva Kalibrasi
Gunakan metode regresi linier untuk menghitung persamaan fitting y = mx + b
xi yi x i2 y i2 xiyi
Concentration IR Corr. IR
0.000 0.013 0.000 0.000000 0.000000 0.000000
6.010 0.101 0.088
S xx    xi 0.636804
36.120100
x    x25.376400
0.007744 
0.528880 xi 
2

i 
2 2
31.800 0.811 0.798 1011.240000 S yy
N
 x
2  i 2.205225 94.297500 S yy    y
2

xx    xi  x 
S 63.500 1.498 2 1.485   xi24032.250000 
88.900 2.094 2 2.0812 7903.210000
xi  N
4.330561 185.000900  yi 2 i
S    x  x    x  S    y  y  2
  y 2


Mean
190.210
38.042
xx i 4.452
0.890
i 12982.820100
N 7.180334 yy
S
305.203680
xy 
i
  xi  x  y
i
i  y    Nx y
i
S xy    xi  x  yi  y    xi yi  
xi 
S xy    xi  x  yi  y    xi yi   i  i
x y
m  S xy S xx (Slope)
N b y-
m  S xy S xx (Slope) b  y -x m (Y - in
m  S xy S xx (Slope) b  y -x m (Y - intercept)
S xy
S xy r
S xy r  S xx  S yy
r S xx  S yy
S xx  S yy
Metode Kalibrasi Alat
A. KURVA KALIBRASI
1. Penyiapan Kurva Kalibrasi
Metode Kalibrasi Alat
A. KURVA KALIBRASI
2. Interpretasi Kurva Kalibrasi
Gunakan persamaan fitting y = mx + b untuk menghitung konsentrasi sampel

m = 0.0236 & b = -0.00881

y = 0.0236x – 0.00881

Sehingga:
x = (y – b)/m
x = (y + 0.00881)/0.0236

dan:
x (konsentrasi sampel) = (0.875+0.00881)/0.0236
= 37.4
Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
• Digunakan untuk analit dalam matriks yang kompleks, yg mengakibatkan
terjadinya interferensi dalam respon instrumen (RI).
Contoh: darah, sedimen, serum, dll.
• Sering disebut juga metode SPIKING.
• Metode:
1. Siapkan beberapa aliquot identik, Vx, dari sampel.
2. Tambahkan sejumlah volume tertentu secara bervariasi, Vs,
larutan baku yang telah diketahui konsentrasinya, cs, pada tiap
aliquot.
3. Encerkan (add-kan) masing2 larutan hingga volume tertentu, Vt
4. Ukurlah dengan instrumen untuk mendapatkan respon
instrumen, S
5. Hitung konsentrasi sampel, cx, dengan persamaan berikut:
Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
kVs cs kVx cx
• Persamaan Adisi Standard S 
Vt Vt

S= sinyal atau respon instrumen

k = konstanta proporsionalitas
Vs = volume standard yg ditambahkan
cs = konsentrasi standard
Vx = volume aliquot sampel
cx = konsentrasi sample
Vt = volume total pengenceran
Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
• Plot respon instrumen (S) vs volume standard (Vs)

m = D y/ D x
Respons Instrumen ( S )

b = y-intercept

(V s ) 0

Vs

S  mVs  b
Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
• Hitung konsentrasi sampel.
• Kombinasikan:
kVs cs kVx cx
S  mVs  b dan S 
Vt Vt

bcs
cx 
mVx
Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Metode Adisi Standard
Arsenik in suatu sampel biologi ditetapkan dengan metode adisi standard.
10 mL aliquot sample dipipet ke dalam 5 buah labu takar 100 mL. Variasi
volume dari standard 22.1 ppm ditambahkan ke dalam 4 labu takar, masing2
diencerkan hingga batas. Absorbansi masing2 larutan ditentukan.

Sample (mL) Standard (mL) Absorbance

10.0 0.00 0.156
10.0 5.00 0.195
10.0 10.00 0.239
10.0 15.00 0.276
10.0 20.00 0.320

Hitung konsentrasi sampel!

Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Metode Adisi Standard

b.cs
Adisi Standard Arsenik
cx 
0.45 m.Vx
0.40
m = 0.00818
b = 0.1554 (0.1554)(22.1)
cx 
0.35
sm = 0.000119
0.30 sb = 0.001463 (0.00818)(10)
Absorbance

0.25

0.20
cx  41.98 ppm
0.15

0.10

0.05

0.00
0 5 10 15 20

Volume Standard (Vs )

Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Metode Adisi Standard
• Penggunaan Adisi Standard untuk menghitung konsentrasi sampel

1) Buat 2 larutan yg mengandung aliquot sampel yg sama, tambahkan

standar pada salah satu larutan. Encerkan hingga batas (100 mL)
2) Ukurlah respon instrumennya (absorbansi) pada kedua larutan.
3) Hitung konsentrasi sampel dengan persamaan berikut:

S1csVs
cx 
S2  S1 Vx
dimana: S1 = respon instrumen sampel
S2 = respon instrumen sampel + spike
Metode Kalibrasi
B. METODE ADISI STANDARD
Contoh: Standard Addition 2 titik
Sebanyak 25.0 mL aliquot larutan quinine diencerkan hingga
50.0 mL dan diukur absorbansinya, mempunyai absorbansi
0.416 pada 348 nm diukur dalam kuvet setebal 1.00 cm.
Sebanyak 25 mL aliquot kedua dicampur dengan 10.0 mL
larutan yg mengandung 23.4 ppm quinine. Setelah diencerkan
hingga50.0 mL, larutan ini memiliki absorbansi 0.610 (kuvet
1.00 cm pada panjang gelombang yg sama). Hitung
konsentrasi (ppm) quinine dalam sampel.
S1 = 0.416
S1csVs
S2 = 0.610 cx 
Vs = 10 mL S2  S1 Vx
cs = 23.4 ppm (0.416)( 23.4)(10.0)
cx   20.07 ppm
Vx = 25.0 mL (0.610  0.416)( 25.0)
Metode Kalibrasi
C. METODE STANDARD INTERNAL
• Umumnya digunakan dalam GC dan HPLC
• Suatu senyawa reference/pembanding (standard internal) dengan volume/massa yg
konstan ditambahkan ke dalam larutan standar dan sampel.
• Rasio analit terhadap standard internal digunakan sebagai sumbu Y dalam plot kurva
kalibrasi dan untuk menetapkan sampel.
Metode Kalibrasi
C. METODE STANDARD INTERNAL
Hexane Calibration Curve

2.50E+06

2.00E+06 y = 31641x + 142659

R2 = 0.8171
1.50E+06
Peak Area

1.00E+06

5.00E+05

0.00E+00
0 10 20 30 40 50 60

Conc. (ppt hexane)

Metode Kalibrasi
C. METODE STANDARD INTERNAL
Hexane/Octane Calibration Curve

2.5

y = 0.0359x + 0.0772
2 R2 = 0.9998
Heaxne/Octane Peak Area

1.5

0.5

0
0 10 20 30 40 50 60

Conc. (ppt hexane)