PERBENIHAN/PERTUMBUHAN KUMAN

Oleh:
dr. Kartuti Debora MS., Sp.MK(K)
• Tujuan dari perbenihan kuman antara lain:
Untuk isolasi mikroorganisme dari bahan
pemeriksaan
Untuk membuat kultur murni, sehingga dapat
dilakukan uji lebih lanjut
Untuk penyimpanan (stok) kuman
Untuk transport bahan pemeriksaan, sehingga
mikroorganisme dapat tumbuh pada waktu
pengiriman.
• Menanam kuman dari medium cair ke medium padat (lempeng agar)
secara goresan (streaking)
Tujuan  mendapatkan koloni kuman yang terpisah (isolated colonies)
Caranya:
1. Dasar bagian luar dari lempeng agar nutrient yang akan ditanami
dibagi menjadi 3 bagian: A,B dan C dan ditandai dengan spidol
2. Satu sengkelit steril dari biakan campuran kuman dalam media cair
dipindahkan pada lempeng agar di bagian A
3. Dengan sengkelit tersebut dilakukan penggoresan yang rapat pada
bagian A (kurang lebih sepertiga dari seluruh lempeng)
4. Selesai dengan bagian A, sengkelit yang telah dipakai disterilkan dan
dibiarkan dingin.
5. Penggoresan kedua melewati goresan terakhir bagian A, untuk
selanjutnya dilakukan penggoresan yang tidak rapat pada bagian B
6. Lakukan lagi tindakan no 4 (mensterilkan sengkelit).
7. Penggoresan ketiga melewati goresan terakhir bagian B, untuk
selanjutnya dilakukan goresan yang tidak rapat pada bagian C
• Menanam kuman dari medium padat (lempeng agar) ke
medium setengah padat
Tujuan mengetahui adanya pergerakan dari kuman yang
ditanam pada medium setengah padat. Pada medium ini kuman
yang motil akan mampu menyebar dan tumbuh di sekitar tempat
penanaman.
• Caranya:
1. Dengan menggunakan jarum penanam yang lebih dulu
telah disterilkan di atas nyala api spiritus dan telah
didinginkan, satu koloni diambil dari biakan kuman yang
disediakan pada medium padat (koloni yang diambil
tersebut disebut sebagai inokulum).
2. Jarum penanam dengan inokulum ini selanjutnya
ditusukkan, tegak lurus ke dalam medium setengah padat
yang tersedia sampai kurang lebih 1 cm di bawah
permukaan medium. Kemudian jarum penanam ditarik
keluar melalui arah penusukan semula sedemikian rupa
tanpa merusak medium.
• Menanam kuman dari medium padat
(lempeng agar) ke medium agar miring
Tujuan memperoleh biakkan murni dan
menyimpan kuman dalam waktu lama (stock
culture)
• Caranya:
1. Dengan sengkelit yang steril diambil satu koloni
terpisah dari biakan kuman yang tumbuh pada
lempeng agar nutrient.
2. Inokulum tersebut digoreskan pada permukaan
medium agar miring nutrient yang disediakan
secara zigzag dari bagian paling bawah ke arah
mulut tabung.
• Menanam kuman dari medium padat (lempeng
agar) ke medium cair
Tujuan Memperbanyak kuman dari satu koloni
terpisah untuk kemudian dapat dilakukan uji
biokimia, dll
1. Dengan sengkelit yang sudah disterilkan dan
didinginkan, ambil satu koloni biakan kuman yang
disediakan.
2. Buatlah suspensi kuman yang halus, sedikit demi
sedikit pada dinding tabung tepat di permukaan
medium cair nutrient dengan gelas mencampurkan
inokulum dengan media cair tersebut.
3. Kocoklah medium cair yang sudah ditanami secara
hati-hati, agar suspensi kuman yang terjadi dapat
bercampur dengan seluruh medium cair tersebut
Pelaksanaan praktikum perbenihan hari ini:

• Mahasiswa melakukan penanaman bakteri

dari media agar plate ke media agar plate
secara streaking
• Prosedur penanaman secara streaking:
1. Dasar bagian luar dari lempeng agar nutrient yang akan ditanami
dibagi menjadi 3 bagian: A,B dan C dan ditandai dengan spidol
2. Satu sengkelit steril dari biakan campuran kuman dalam media
cair dipindahkan pada lempeng agar di bagian A
3. Dengan sengkelit tersebut dilakukan penggoresan yang rapat
pada bagian A (kurang lebih sepertiga dari seluruh lempeng)
4. Selesai dengan bagian A, sengkelit yang telah dipakai disterilkan
dan dibiarkan dingin.
5. Penggoresan kedua melewati goresan terakhir bagian A, untuk
selanjutnya dilakukan penggoresan yang tidak rapat pada bagian
B
6. Lakukan lagi tindakan no 4 (mensterilkan sengkelit).
7. Penggoresan ketiga melewati goresan terakhir bagian B, untuk
selanjutnya dilakukan goresan yang tidak rapat pada bagian C
Selamat Bekerja
Terima Kasih