ELISA

By Immunologi
 ELISA
(ENZYME-LINKED-
IMMUNOSORBENT ASSAY)
Salah satu metode imunoassay yang
digunakan untuk deteksi:
•Antibodi
•Protein
•Peptida
•Biomolekul
 IMUNOASSAY
• Immunoassay berasal dari kata “immuno” (=secara
imunologi) dan “assay” (=kemurnian suatu
substansi/jumlah konstituen dalam suatu campuran).
 KENAPA DISEBUT ENZYME
LINKED IMMUNOSORBENT
ASSAY?
1. Antigen/antibodi yang diinginkan diabsorbsi ke
permukaan plastik (‘sorbent’)
2. Antigen dikenali oleh antibodi spesifik (‘immuno’)
3. Antibodi ini dikenali oleh antibodi kedua (‘immuno’)
yang ditempeli oleh enzim (‘enzyme-linked’)
4. Substrat bereaksi dengan enzim untuk memproduksi
produk, berupa warna
 PENGERTIAN ELLISA
Dalam pengertian sederhana:
• Antibodi ini terikat dengan suatu enzim, dan pada
tahap terakhir, ditambahkan substansi yang dapat
diubah oleh enzim menjadi sinyal yang dapat
dideteksi.
 KOMPONEN PENTING
DALAM IMUNOASSAY
• Antibodi (antiserum)
• Antigen
• Labeling material
 ANTIBODI (ANTISERUM)
• Antibodi: protein yg diproduksi oleh sistem imun untuk
melawan antigen
 ANTIGEN
• Antigen: molekul yang menginduksi produksi antibodi
ketika dikenali oleh tubuh
• Apapun yang asing bagi sistem imun, misal: bakteri,
virus, dll
 LABELING MATERIAL
• Diperlukan adanya marker untuk mengetahui ikatan
antigen-antibodi
• Marker tidak boleh mengganggu ikatan
 METHODE ELLISA
1. Direct ELISA ( To detect Ag, Ab)
2. Indirect ELISA (To detect Ab)
3. Sandwich ELISA ( To detect Tumor marker, Hormones)
4. Competitive ELISA ( to detect free testosterone)
 PRINSIP DASAR ELISA
1. Antigen/sampel ditambahkan
ke plate
2. Blocking buffer ditambahkan
untuk menghalangi tempat
pengikatan protein
3. Tambahkan antibodi primer
yang sesuai
4. Tambahkan konjugat antibodi
sekunder-enzim yang sesuai
yang mengenali dan
berikatan dengan antibodi
primer
5. Tambahkan substrat TMB yang
akan dikonversi oleh enzim
menjadi bentuk yang
terdeteksi
 KOMPONEN KIT
• Pre-coated, stabilized 96-well microtiter
• Plate
• Sample diluent
• Standard and controls
• Conjugated detection antibody
• 10x wash solution
• Substrate
• Stop solution
 KEUNTUNGAN ELISA
• Reagen, waktu simpan lama
• Spesifitas dan sensitivitas ELISA tinggi
• Mudah dilihat hasilnya dan prosedur cepat
• ELISA dapat digunakan untuk berbagai infeksi
 KEKURANGAN ELISA
• Pengukuran aktivitas enzim jauh lebih
kompleks dibandingkan pengukuran aktivitas
dengan menggunakan radioisotop
• Aktivitas enzim dapat terpengaruh oleh
konstituen plasma
• Kit tersedia secara komersial, tapi tidak
murah
• Sangat spesifik untuk antigen tertentu. Tidak
akan mengenali antigen lain
• Bisa terjadi positif/negatif palsu, terutama
dengan antigen yang termutasi.
HASIL
TERIMA KASIH