KROMATOGRAFI

 KATA “CHROMATOGRAPHY” DIKENALKAN OLEH TSWETT (1906)

 “CHROMA” ATAU“COLOR” ARTINYA WARNA DAN “
GRAPHEIN” ATAU “WRITE” ARTINYA MENULIS.

 KROMATOGRAFI : METODE PEMISAHAN DIMANA KOMPONEN

KOMPONEN TSB TERDISTRIBUSI DIANTARA FASE DIAM
( STASIONER) DAN FASE GERAK ( MOBILE)

 FASE DIAM : PADATAN BERPORI YG DIGUNAKAN SENDIRIAN

ATAU DILAPISI DGN FASE DIAM ZAT CAIR ( DISEBUT DGN
PADATAN PENDUKUNG)

 FASE GERAK : DISEBUT ELUENT ATAU PEMBAWA

 ELUSI : PROSES DIMANA ELUENT BERGERAK DGN MEMBAWA

KOMPONEN DISEPANJANG KOLOM DISEBUT

 PEMISAHAN DAPAT TERJADI KARENA KOMPONEN DARI SAMPEL

MEMPUNYAI PERBEDAAN AFINITAS DIANTARA FASE DIAM DAN
2
FASE GERAK.
 KROMATOGRAFI BERDASARKAN ASAS
TERJADINYA PROSES PEMISAHAN :

1. ADSORPSI (FASE DIAM : PADAT & FASE GERAK :

CAIR / GAS), pemisahan tergantung
perbedaan polaritas molekul.

Contoh :
 Kromt kolom konvensional
 Kromt lapis tipis
 Kromt Penukar Ion
 Kromt gas padat
 Kromt cair kinerja tinggi
3
2. PARTISI (FASE DIAM: CAIR & FASE GERAK :
CAIR), pemisahan tergantung perbedaan
koefisien distribusi.

Contoh:
 Kromt kolom
 Kromt kertas
 Kromt gas cair
 Kromt cair kinerja tinggi

4
KROMATOGRAFI KOLOM
PRINSIP DASAR
 METODE PEMISAHAN BEBERAPA TAHAP (MULTI
STAGE)

 TERJADI BEBERAPA KALI PROSES

KESETIMBANGAN ANTARA DUA FASE.

 ALAT YG DIGUNAKAN : TABUNG (DISEBUT

KOLOM) YANG MENGANDUNG BAHAN PADAT
GRANULAR YG SERING DIIKATKAN / DILAPISI
FASE CAIR DGN GAYA FISIK ATAU KIMIA  FASE
DIAM.

 FASE GERAK : ELUEN YANG MENGALIR TERUS

MENERUS MELEWATI KOLOM.
 SAMPEL DILETAKKAN DIATAS KOLOM, LALU
ELUEN DIALIRKAN MELEWATI KOLOM  TERJADI
BEBERAPA KALI KESETIMBANGAN ANTARA DUA
FASE, KONSTITUEN/ZAT TERLARUT AKAN
BERGERAK KEBAWAH.

 ADA SEDIKIT PERBEDAAN RATIO DISTRIBUSI YG

DIPERLUKAN UNTUK ZAT TERLARUT BERGERAK
DENGAN KECEPATAN YANG BERBEDA MELALUI
KOLOM DAN TERJADILAH PROSES PEMISAHAN
SATU DARI YG LAINNYA.

 GAYA PEMISAHAN PADA METODE MULTI STAGE

INI LEBIH BESAR DARI PADA SINGLE-STAGE.

7
 CARA PENGGUNAAN KROMATOGRAFI KOLOM
1. Sampel yang dilarutkan dalam sedikit pelarut, dituangkan
melalui atas kolom dan dibiarkan mengalir ke dalam adsorben
(bahan penyerap).

2. Komponen dalam sampel diadsorbsi dari larutan secara

kuantitatif oleh bahan penyerap berupa pita sempit pada
permukaan atas kolom.

3. Dengan penambahan pelarut secara terus menerus, masing-

masing komponen akan bergerak turun melalui kolom dan akan
terbentuk pita yang setiap zona berisi satu macam komponen.

4. Setiap zona yang keluar kolom dapat ditampung dengan

sempurna sebelum zona yang lain keluar kolom.
GAMBAR KROMATOGAFI KOLOM
KROMATOGRAFI KERTAS
PRINSIP DASAR
 Pelarut bergerak lambat pada kertas, komponen-komponen
bergerak pada laju yang berbeda dan campuran dipisahkan
berdasarkan pada perbedaan kelarutan zat-zat dalam
pelarut serta perbedaan penyerapan (adsorbsi) kertas
terhadap zat-zat yang akan dipisahkan

 Kromatografi kertas adalah kromatografi yang

menggunakan kertas selulosa murni yang mempunyai
afinitas besar terhadap air atau pelarut polar lainnya.

 Kromatografi kertas digunakan untuk memisahkan

campuran dari substansinya menjadi komponen-
komponennya.
CARA PENGGUNAAN KROMATOGARFI KERTAS

1. Kertas yang digunakan adalah Kertas Whatman No.1.

2. Sampel diteteskan pada garis dasar kromatografi

kertas.

3. Kertas digantungkan pada wadah yang berisi pelarut

dan terjenuhkan oleh uap pelarut.

4. Penjenuhan udara dengan uap, menghentikan

penguapan pelarut sama halnya dengan pergerakan
pelarut pada kertas.
GAMBAR KROMATOGRAFI
KERTAS
KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
PRINSIP DASAR
 Pada proses pemisahan dengan kromatografi lapis tipis,
terjadi hubungan kesetimbangan antara fase diam dan
fasa gerak, dimana ada interaksi antara permukaan fase
diam dengan gugus fungsi senyawa organik yang akan
diidentifikasi yang telah berinteraksi dengan fasa geraknya

 Kesetimbangan ini dipengaruhi oleh 3 faktor, yaitu :

kepolaran fase diam, kepolaran fase gerak, serta
kepolaran dan ukuran molekul.

 Perbedaan dgn kromatografi kertas terlihat pada media

pemisahannya, yakni digunakan lapisan tipis adsorben
halus yang tersangga pada papan kaca, aluminium atau
plastik sebagai pengganti kertas.
APA KELEBIHAN DAN KEKURANGANNYA
DIBANDING KROMATOGRAFI KERTAS?

KLT KKT
Lebih serbaguna dibanding
kromatografi kertas, pemisahan Hanya untuk senyawa
komponen senyawa lebih senyawa terbatas
sempurna

Pembuatan lempengnya
memerlukan waktu Pembuatan fase diam
kecuali bila telah tersedia lebih sederhana
secara komersial
FAKTOR FAKTOR YANG MEMENGARUHI
GERAKAN MEDIA DALAM KLT
 Struktur kimia dan senyawa yang dipisahkan

 Sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya

 Suhu dan kesetimbangan

 Pelarut dan derajat kemurnian fase bergerak

 Derajat kejenuhan
NILAI RF ( RETARDATION FACTOR)

Rf merupakan perbandingan jarak antara

migrasi komponen dengan jarak migrasi
eluen.
Nilai Rf menunjukkan identitas sesuatu
senyawa karena nilai ini karakteristik untuk
suatu senyawa pada pelarut tertentu.

Rf =
FAKTOR YANG MEMPENGARUHI
HARGA RF
 Pelarut
perubahan yang sangat kecil dari komposisi
pelarut akan menyebabkan harga Rf berubah.
 Suhu perubahan
suhu menyebabkan perubahan koefisien partisi
dan kecepatan alir.
 Ukuran bejana,

volume bejana mempengaruhi homogenitas

atmosfer sehingga mempengaruhi kecepatan
penguapan pelarut dari kertas.