PRAKTIKUM VIROLOGI

DETEKSI VIRUS NEWCASTLE

DISEASE (NDV)

PROGRAM STUDI D IV TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

STIKES MANDALA WALUYA KENDARI
2020
Pengambilan sampel Usap Lingkungan

• Sampel Ayam (swab Kloaka) Usap Kloaka

Sampel
Usap Trakhea
P2
Deteksi Agen
- ve
Note:
Pasase 2 inokulasi ke telur HA
Isolasi Individu + ve HI

- ve
Ekstraksi
rRT-PCR
Viral RNA
Isolat
+ ve
terpilih
ND-M ND-F

Uji Patogenisitas

Isolat terpilih Ayam Organ rRT-PCR

Analisa Data  Deskriptif

Sekian
 Paramyxoviridae ( APMV-1 s.d
APMV-10)
 subfamili Paramyxovirinae
 genus Avulavirus
 NDV APMV-1
 Kelas I  unggas air dan burung
pantai (Czegledi et al. 2006, Kim
et al. 2007)
 kelas II  unggas, burung
peliharaan dan unggas liar
 genom untai tunggal RNA
negative sense (15-16 kb)
 kapsid simetris heliks
 tidak bersegmen
 berdiameter 13-18 nm
 Panen cairan
+ 10.000 iu
Alantois
Penisilin
streptomycin 0,2 ml

Sampel Cairan
Swab Alantois

Inkubasi pada suhu 37C selama 4 hari

Phosphate Buffer Saline (PBS)

Sel Darah Merah 1% Phosphate Buffer Saline (PBS)

Phosphate Buffer Saline (PBS)

Sel Darah Merah 1% Antigen 4 HAU

Nama gen nama primer dan probe Sekuens
M+4100 forward 5' –AGTGATGTGCTCGGACCTTC-3’
APMV-1
M+4169 matrix Probe 5',- [FAM]TTCTCTAGCAGTGGGACAGCCTGC[BHQ]-3’
(Matrix)
M-4220 Reverse 5’ - CCTGAGGAGAGGCATTTGCTA- 3’
F+4829 forward 5’ - GGTGAGTCTATCCGGARGATACAAG- 3’
vNDV F+4894 Probe 1(VFP-1)
5`-[FAM]AAGCGTTTCTGTCTCCTTCCTCCA[BHQ]-3’
(fusion) (virulent fusion)
F-4939 reverse 5’-AGCTGTTGCAACCCAAG-3’

Komposisi Mixture Volume (l)

ddH2O 0.37
2x RT-Buffer 12.5
Primer Forward (20pmol/l) 0.67
Primer Reverse (20pmol/l) 0.34
Probe (6 pmol/l) 0.45
Enhancer 1.67
Enzyme 1
Template RNA 8
 104 0,05 ml/mata

Pengamatan
selama 14 hari

Sampel
(Cairan Alantois)

• Pengambilan sampel organ

ayam dilakukan pada hari ke
2, 5, 10, dan 14 PI
• Organ yang diambil:
Ekstraksi RNA a. Otak
b. Paru-paru
c. Proventrikulus
d. Limpa
e. Usus