METODE IMMUNOASSAY

IKA UDMALASARI
A201701071
C2
 Metode-metode immunoassay berdasarkan Ebook
dalam Elearning :
Immunoassay Enzyme
Ada dua pendekatan umum untuk mendiagnosis
kondisi ,pelonggaran atau kondisi oleh
immunoassay, pengujian untuk anti-spesifik gens
atau untuk antibodi spesifik antigen.Enzim yang
terkait immunosorbent assay (ELISA), juga dikenal
sebagai enzim immunoassay (EIA), dirancang untuk
mendeteksi antigen atau tubuh dengan
memproduksi perubahan warna yang dipicu oleh
enzim.
Metode EIA menggunakan label nonisotop yang
menawarkan keuntungan dari keamanan. Metode EIA
menggunakan sifat katalitik enzim untuk mendeteksi dan
mengukur reaksi imunologis. Sebuah enzim- digunakan
antibodi berlabel atau konjugasi antigen berlabel enzim
dalam tes imunologis .
Enzim yang digunakan dalam enzim immunoassay yaitu
Label enzim yang umum adalah peroksidase lobak,alkaline
phosphatase, dehydrogenase glukosa-6-fosfat,dan beta-
galactosidase. Untuk digunakan dalam AMDAL, enzim harus
memenuhi kriteria berikut:
• Tingkat stabilitas yang tinggi
• Spesifisitas ekstrem
• Tidak ada dari antigen atau antibodi tidak ada perubahan
oleh inhibitor dalam sistem.
Deteksi Antigen
AMDAL untuk deteksi antigen (Antigen permukaan
hepatitis B) [HBsAg]) memiliki empat langkah.
Antibodi khusus antigen melekat ke permukaan fase
padat (manik-manik plastik). Serum pasien yang
mungkin mengandung antigen ditambahkan.
Selanjutnya, sebuah enzim berlabel antibodi khusus
untuk antigen (konjugat) ditambahkan. Akhirnya,
asubstrat kromogenik ditambahkan, yang berubah
warna dalam kehadiran enzim. Jumlah warna yang
berkembang adalah sebanding dengan jumlah
antigen pada spesimen pasien.
Deteksi Antibodi
Ada tiga jenis AMDAL untuk deteksi antibodi — tidak
kompetitif, kompetitif, dan menangkap.
Immunoassay Enzim Nonkompetitif
Enzim immunoassay nonkompetitif terjadi ketika
antigen spesifik melekat pada permukaan fase padat,
seperti amanik-manik plastik atau mikrotiter dengan
baik. Serum pasien yang bisa mengandung antibodi
(mis., sitomegalovirus [CMV] immunoglobulin G [IgG],
antibodi HIV) ditambahkan ke fase padat wajah, diikuti
oleh antibodi berlabel enzim khusus untuk tes antibodi.
substrat kromogenik ditambahkan berubah warna jika
enzim ada. Jumlah warna yang berkembang adalah
sebanding dengan jumlah antibodi dalam serum pasien.
Capture enzyme immunoassay dirancang untuk
mendeteksi spesies Jenis antibodi spesifik, seperti
IgM atau IgG, CMV IgM, rubella IgM, atau
Toxoplasma IgM. Antibodi spesifik untuk IgM atau
IgG melekat pada permukaan fase padat (manik
plastik, mikrotiter baik). Spesimen pasien berpotensi
mengandung IgM atau IgG ditambahkan. Antigen
spesifik kemudian ditambahkan. Akhirnya,
chrosubstrat mogenik ditambahkan, yang berubah
warna pada Ence enzim. Jumlah warna yang
berkembang adalah sebanding dengan jumlah IgM
atau IgG spesifik antigen dalam serum pasien.
Chemiluminescence mengacu pada emisi cahaya yang
dihasilkan selama suatu reaksi kimia; itu digunakan secara
luas dalam im- otomatis noassays .
Metodologi ini memiliki sitivity dan rentang dinamis. Itu
tidak memerlukan radiasi sampel dan eksitasi nonselektif
dan instabilitas sumber dihilangkan tertambat.
Kebanyakan reagen dan konjugat chemiluminescent
adalah stabil dan relatif tidak beracun. Dalam
immunoassays, label chemiluminescent dapat dilampirkan
ke antigen atau antibodi. Ester acridinium sangat spesifik
label aktivitas yang dapat digunakan untuk memberi label
antibodi dan haptens. Label chemiluminescent digunakan
untuk mendeteksi protein, virus,oligonukleotida, dan
sekuens asam nukleat genom dalam suatu immunoassay.
IMMUNOFLUORESCENCE
Pelabelan neon adalah metode lain yang digunakan untuk
menunjukkan pengompleksan antigen dan antibodi. Fluoresen
Molekul digunakan sebagai pengganti label radioisotop atau
enzim. Teknik antibodi fluoresen terdiri dari pelabelan antibodi
dengan fluorescein isothiocyanate (FITC), senyawa fluoresen
dengan afinitas untuk protein, untuk membentuk kompleks
(konjugat) .Ini konjugat dapat bereaksi dengan antigen spesifik
antibodi.
 Teknik-teknik fluoresen sangat spesifik dan sensitif. Antibodi
dapat dikonjugasikan ke marker lain sebagai tambahan pewarna
fluoresen; penggunaan penanda ini disebut kolorimetri deteksi
probe imunologis. Penggunaan enzim-substrat sistem penanda
telah diperluas. HRP, ALP, dan avidin-label enzim konjugasi
biotin semuanya telah digunakan sebagai visual tag untuk
keberadaan antibodi. Pereaksi ini memiliki Keuntungan hanya
membutuhkan mikroskop cahaya standar.
 Konjugasi neon digunakan dalam dasar berikut metode, yang banyak digunakan:
• Uji imunofluoresen langsung
• Uji inhibisi imunofluoresen
• Uji imunofluoresen tidak langsung

 Uji Imunofluoresen Langsung Dalam teknik direct fluorescent antibody (DFA), konjugasi gated
antibody digunakan untuk mendeteksi reaksi antigen-antibodi ditingkat mikroskopis (Gbr. 12-5). DFA
dapat diterapkan pada jaringan bagian atau apusan untuk mikroorganisme (lihat Plat Warna 2).
Antibodi terkonjugasi Fluorescein terikat pada fluorochrome FITC digunakan untuk
memvisualisasikan banyak bakteri dalam spesimen langsung (lihat kemudian, "Tes Antibodi
Fluoresen Langsung untuk Neisseria gonorrhoeae ”). HRP terkonjugasi pada antibodi, yaitu
immunoperoxidase noda, dapat digunakan untuk mendeteksi CMV, virus lain, atau asam
nukleatdalam sel. Dalam biotin-avidin, metode terkonjugasi enzim, tunggal probe asam nukleat yang
terdampar, antibodi antimikroba, atau antibodi antibodi timah dapat terikat pada molekul biotin
kecil.
 Inhibisi Immunofluorescent Assay
Uji inhibisi immunofluorescent adalah tes pemblokiran . Antigen pertama kali terkena antibodi tidak
berlabel dan kemudian untuk diberi label antibodi, dan akhirnya dicuci dan diperiksa. Jika antibodi
tak berlabel dan berlabel keduanya homolog dengan antigen, seharusnya tidak ada fluoresensi. Hasil
ini menegaskan kekhususan teknik FA. Antibodi dalam suatu yang tidak diketahui serum juga dapat
dideteksi dan diidentifikasi dengan uji penghambatan.
 Uji Immunofluorescent Tidak Langsung Dasar untuk uji fluorescent tidak langsung (IFA) adalah
bahwa tubuh (imunoglobulin) tidak hanya bereaksi dengan homolog antigen, tetapi juga dapat
bertindak sebagai antigen dan bereaksi dengan munoglobulin . IFA adalah metode serologis yang
paling banyak banyak digunakan untuk mendeteksi beragam antibodi. Kekebalan tubuh fluoresensi
digunakan secara luas dalam deteksi autoanti- tubuh dan antibodi terhadap antigen jaringan dan
seluler. Untuk contohnya, antibodi antinuklear (ANA) – heterogen kelompok imunoglobulin yang
bersirkulasi yang bereaksi dengan seluruh nukleus atau komponen nuklir (mis., protein nuklir, DNA,
histones) dalam jaringan inang — sering diuji fluoresensi tidak langsung.
 SOAL DAN JAWABAN TERKAIT PPT

1. Immunoassay enzym non kompetitif terjadi ketika antigen melekat pada

permukaan …
A. Fase Cair
B. Fase Padat
C. Fase Padat Cair
D. Fase yang melekat pada antigen tertentu.
Jawabn : B
2. Capture Enzyme Immunoassay dirancang untuk mendeteksi spesies jens
antibodi spesifik, seperti?
A. IgM
B. IgE
C. A dan D benar
D. IgG
Jawaban : C
3. Digunakan untuk mendeteksi protein, virus,oligonukleotida dan sekuens asam nukleat
genom dalam suatu immunoassay disebut metode…
A. Metode capture enzyme
B. Immunofluorescence
C. Inhibisi immunofluorescent
D. Chemiluminescence
Jawaban : D
4. Konjugasi Neon digunakan dalam dasar metode…?
A. Uji imunoflueresent langsung
B. Uji imunoflueresent tidak langsung
C. Uji inhibisi imunofluoresen assay
D. Semua Benar.
Jawaban : D
5. Metode serologis yang paling banyak digunakan untuk mendeteksi beragam antibodi
adalah metode..?
A.Uji inhibisi imunofluoresen assay
B. Uji imunoflueresent langsung
C. Uji imunoflueresent tidak langsung
D. Uji Chemiluminescence.
Jawaban : C
 LEBIH DAN KURANGNYA MOHON
DIMAAFKAN.
WASSALAMUALAIKUM WARAHMATULLAHI
WABARAKATU.