Penentuan Piperidine Alkaloid dari

Tembakau India (Lobelia inflata)

Tumbuhan dan ProdukTumbuhan
Kelompok 1:
1. Regina Fitri Febrianti
2. Sahna Shafira
3. Suci Pratiwi
4. Veriza Aprilita
Abstrak

Lobelia inflata juga dikenal sebagai tembakau India adalah tanaman obat
tradisional asli Amerika Utara. L. inflata mengandung alkaloid piperidin
yang membentuk keluarga besar metabolit khusus, banyak di antaranya
sangat menarik untuk berbagai kegiatan farmasi mereka. Sampai saat ini,
belum ada penelitian yang melaporkan profil alkaloid berbagai L. inflata
produk. Penelitian ini bertujuan untuk mengkarakterisasi komposisi kimia
L. inflata produkmenggunakan beberapa metode. Metode Kromatografi
Lapis Tipis (KLT) Efisien, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC atau LC)
dan metode Spektrometri Massa LC-tandem (LC-MS / MS) dikembangkan
untuk analisis alkaloid piperidin dari ekstrak L. inflata seluruh tanamandan
daridari Lobeliaproduk-produk alami yang berasaltermasuk tingtur, kapsul,
dan tembakau untuk menentukan profil alkaloid dari sampel-sampel ini.
Beberapa alkaloid piperidin termasuk 8,10-dietil-lobelionol, norlelobanidine
dan lobeline terdeteksi dan diidentifikasi dari ekstrak sampel. Tingtur tidak
mengandung lobeline. Oleh karena itu,yang Lobeliaproduk-derived harus
dipilih dengan hati-hati jika dimaksudkan untuk digunakan farmasi.
Prosedur Eksperimental
Bahan kimia, reagen
metanol,
 kloroform,
asetonitril,
etanol, untuk kromatografi (kadar HPLC) dan
Spektrometri Massa (kadar LC-MS) dibeli dari Fisher
Scientific
Air Milli-Q disiapkan dengan sistem pemurnian air
dari Merck Millipore (MA, USA).
piperine dan lobeline diperoleh dari Sigma-Aldrich
Bahan
Tanaman Lobelia

Selain itu, tiga produk komersial yang berbeda, yang

diklaim dibuat dari Lobelia, digunakan termasuk
larutan cair (Nature's Answer tingtur Homeopathic L.
inflata), kapsul kering (Nature's Way Lobelia
suplemen) dan sekantong tembakau India
Ekstraksi metabolit
Sampel segar L. inflata (daun, akar dan batang)

ditumbuk menjadi bubuk halus menggunakan nitrogen cair

2 gram tingtur cair, kapsul dan tembakau India kering

Masing-masing dibuat rangkap 3

diukur dalam tabung gelas dan piperin 250 ppm

Sampel diekstraksi dengan 20 mL 100% metanol selama 24 jam pada suhu kamar

disentrifugasi pada 12.000 rpm selama 10 menit

sampel dilakukan blok pemanasan di bawah aliran gas nitrogen pada 50 ° C

Didapat ekstraksi asam-basa cair-cair untuk mengekstraksi alkaloid.

 sampel kering

di vorteks dan dilarutkan dengan 450 μL kloroform 2% H 2SO4

Fasa berair yang asam dipisahkan dari fase organik

ditambahkan dengan 150 μL dengan 450 NHμL 3

Fase organik yang mengandung lapisan air alkaloid

dicuci 2X

Dikumpulkan

diuapkan sampai kering pada suhu kamar

dilarutkan dengan 300 μL metanol

Setiap sampel diekstraksi dalam rangkap tiga

alikuot disimpan dalam freezer sampai analisis

Analisis KLT
Sebanyak 10 μL untuk setiap sampel atau standar lobeline

Diletakkan pada silika gel 60 pelat TLC 60 F254

Produk seperti tincture kering

dimuatditempatkan ruang migrasi pra-ekuilibrasi dengan ramuan dalam kapsul.

kandungan alkaloid piperidin dalam kloroform fase gerak terdapat metanol: amonia (90: 9: 1)

Setelah migrasi selesai

dikeringkan

divisualisasikan dengan iluminasi UV pada panjang gelombang 254

Visualisasi alkaloid dengan reagent Dragendorff

Alkaloid dibandingkan dengan masing-masing karakterisasi

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Kondisi HPLC-DAD
Tiga ekstraksi independen Lobelia sampel

dianalisis HPLC-PDA

Pemisahan menggunakan kolom C18 fase terbalik analitik yang dipanaskan pada suhu 40 °
C

Pelarut yang digunakan adalah (A) 2,5% asam asetat dalam air dan (B) 100% asetonitril

20 μl ekstrak diinjeksikan

dipisahkan dengan metode gradien: 100% A selama 5 menit

98% A dan 2% B selama 2 menit

80% A dan 20% B selama 2 menit
60% A dan 40% B untuk 15 mnt
40% A dan 60% B selama 10 mnt
20% A dan 80% B selama 10 mnt
2% A dan 98% B selama 6 mnt
98% A dan 2% B selama 4 mnt pada aliran tingkat 0,5 ml / menit.
Kurva kalibrasi standar
Piperine dgn konsentrasi (0,1, 0,5, 1, 5, 10, 15, 25, 35, 50,
75, 100 ppm)

disiapkan dalam rangkap tiga

dianalisis menggunakan HPLC

Kondisi LC-MS / MS

HPLC digabungkan dengan Waters micromass Quattro

LC Triple Quad Liquid Chromatography / Mass
Spectrometer (LC-MS / MS) sistem untuk
menentukan yang tepat m / z dari metabolit yang
diekstraksi dalam setiap sampel.

kolom C18 fase terbalik

Proses pemisahan
Hasil
Hasil ekstraksi lebih tinggi dengan L. inflata jaringan
tanamandibandingkan dengan Lobelia suplemen. L. inflata
menghasilkan jumlah yang lebih tinggi dengan 41,67 ± 8,22
mg / g sedangkan ekstrak tingtur secara signifikan lebih rendah
dibandingkan dengan semua ekstrak lainnya dengan 9,83 ± 1,11
mg / g. Hasil ekstrak kapsul secara signifikan lebih rendah
dibandingkan dengan L. inflata, tetapi tidak dibandingkan
dengan sampel tembakau.

Puncak Piperine dihitung menggunakan area puncak dengan

kurva kalibrasi piperine. Secara keseluruhan, efisiensi ekstraksi
serupa (pemulihan 40-50%) untuk semua sampel
menunjukkan bahwa metode kami dapat direproduksi.
Hasil Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Pelat Kromatografi Lapis Tipis (KLT) F254 yang

mengandung fluorofor yang menampilkan bayangan
di bawah UV jika ada senyawa yang digunakan.
Dengan demikian, TLC terungkap di bawah UV 254
nm, 365 nm dan secara kimia menggunakan reagen
Dragendorff
Analisis ekstrak HPLC
Puncak untuk standar pada Waktu Retensi (Rt)
spesifik dan spektrum serapan mendeteksi secara
khusus lobeline (Rt 15.3 min; λmaks 246 dan 211 nm) dan piperin
sebagai IS (Rt 25.9 min; λmax t 340 dan 254 nm)
Konsentrasi tertinggi lobeline ditemukan dalam
tembakau (17,64 μg / g) diikuti
oleh seluruh tanaman L. inflata (0,95 μg / g) dan
ekstrak kapsul (0,77 μg / g).
Analisis LC-MS / MS dari ekstrak.
Analisis + ESI-MS / MS dari standar lobeline
mengungkapkan dengan mayoritas Rt dari 24,69 menit
untuk ionmolekul m/ z 338 [M + H] + fragmen ion m /
z 320, 218, 216, 200, 188 dan 105. Fragmen ion m / z 320
diperoleh melalui m / z 218. Kehilangan terbentuk dari
Hby 2O dari penghilangan molekul fenil-2-ketoetil ion
m / z 338. Sisi ion pada rantai (120 Da) sedangkan m / z
216 dihasilkan oleh hilangnya gugus fenil-2-hidroksietil
(122 Da). Ion produk yang lebih banyak pada m / z 200
berhubungan dengan dehidrasi m / z 218
KESIMPULAN
Investigasi fitokimia L. inflata tanamandan Lobelia produk turunan
dengan teknik spektrometri massa canggih menyebabkan
karakterisasi beberapa alkaloid piperidin. Beberapa struktur molekul
alkaloid yang diidentifikasi dikonfirmasi melalui perbandingan
literatur dan pola spektrometri massa tandem. Senyawa-senyawa ini
dilaporkan untuk pertama kalinya dalam Lobeliaproduk yang
diproduksi, yaitu tingtur dan kapsul. Karena aktivitas farmasi alkaloid
piperine, perhatian besar harus diambil ketika menggunakan produk
ini. Selain itu, penelitian kami mengarah pada identifikasi alkaloid
pada L. inflata tanaman, terutama yang terkait dengan prekursor dan
perantara metabolisme potensial. Dengan demikian, penelitian kami
memberikan studi pendahuluan pekerjaan pada jalur biosintesis
alkaloid piperidine pada tanaman. Pemahaman yang lebih baik
tentang metabolisme alkaloid dan aktivitas biologisnya dapat
mengarahkan pada pengembangan obat-obatan alami baru.