SELEKSI DAN PENGUJIAN BAKTERI ASAM LAKTAT

KANDIDAT PROBIOTIK ASAL NIRA AREN

(Arenga pinnata Mer.) PAPUA

NAMA : PIPIT NOVITA SARI

NIM : 13010062

PEMBIMBING :
Dr. Sulistiani M.Kes.
Dr. Anna P. Roswiem MS.
LATAR BELAKANG

Mikroorganisme hidup yang

memberikan manfaat bagi
kesehatan (FAO, 2002)

menstimulasi sistem kekebalan tubuh

(Isolauri dan Salminen, 2008)
 Bakteri asam laktat (BAL) adalah
 Bakteri Gram positif
 Bentuk batang atau bulat
 Tidak membentuk spora
 Fermentasi fakultatif anaerob
 Tidak mempunyai sitokrom
 Oksidasi negatif
 Katalase negatif
 Motilitas negatif (Carr et al,. 2002)

BAL dapat ditemukan di saluran

cerna, …NIRA
Mikroflora dalam nira aren antara
lain: khamir, bal, bas
Identifikasi Masalah

• Dilakukan seleksi isolat BAL dari Nira Aren Papua

untuk mencari kandidat Probiotik.

Batasan Masalah

• Penelitian ini difokuskan pada seleksi BAL asal nira

aren dari Papua dengan dilakukan beberapa uji
untuk menentukan apakah isolat BAL dari Nira
Papua dapat dijadikan sebagai kandidat probiotik.
 KERANGKA PEMIKIRAN

52 isolat BAL asal

Nira Papua
Isolat tahan antimikroba &
Uji Antimikroba garam empedu diuji
Diuji secara in
Uji garam empedu dengan ketahanan pH
vitro, meliputi :
rendah

Isolat terpilih di perbanyak

pada media dedak, kacang Isolat terpilih diuji
kedelai, kacang dadap, pankreatin & pepsin
kacang hijau dan jagung.
Hipotesis

• Isolat BAL asal Nira Aren Papua dapat dijadikan

sebagai kandidat probiotik.

Tujuan Penelitian

• Menyeleksi isolat BAL asal nira Papua yang

mempunyai potensi sebagai kandidat probitik.

Manfaat Penelitian

• Memberikan informasi manfaat BAL asal nira Aren

Papua menjadi kandidat probiotik.
SYARAT BAKTERI  Mudah menyeseuaikan diri dengan
lingkungan
PROBIOTIK  Tidak patogen
 Toleran terhadap asam lambung &
garam empedu
 Menempel & mengkoloni usus
 Aktivitas antagonis terhadap bakteri
patogen
 Memiliki pengaruh yang
menguntungkan bagi kesehatan
(Shortt ,1999)
ALAT DAN BAHAN
 • Pepsin (MERCK),

• Brain-Heart Infussion (BHI) (OXOID CM1135), • KCl (MERCK)

• de Man Rogosa Sharpe Broth (MRSB) (MERCK • NaHCO3 (MERCK),

1.10661.0500),
• Agar Powder-Bacteriological (HIMEDIA GRM026),
• Potato Dextrose Agar (PDA) (DIFCOTM 213400),
• Yeast Extract (BACTOTM 212750),
• Mueller-Hinton Broth (MHB) (OXOID CM0405),
• Tween 80 (OMNIPUR),
• D-Glukosa (MERCK 1.08337.1000),
• Pepton (BACTOTM 211677),
• Kalsium Karbonat (CaCO3) (MERCK 1.02066.0250),
• Ox-Bile Dehydrated Purified (FLUKA 70168),
• HCl 5M,
• NaOH 0,1M,
• KH2PO4 (MERCK),
• Na2HPO4.2H2O (MERCK),
• NaCl (MERCK),
• Glucose Yeast Pepton (GYP),
• Phosphate Buffered Saline (PBS),
• Simulated Intestinal Juice (SIJ),
• Simulated Gastric Juice (SGJ),
• Spiritus,
• Bakteri Escherichia coli,
• Bakteri Bacillus cereus,
• Isolat BAL nira Aren asal Papua koleksi LIPI
dan

• NaCl 0,85%, • Akuadest.

 METODE PENELITIAN

Peremajaan Isolat BAL asal Papua

52 isolat 37°C 24 jam

Media GYPA

Penanaman Isolat BAL asal Papua

37°C 24 jam

MRS broth
 PENGUJIAN AKTIVITAS ANTIMIKROBA
TERHADAN Bacillus cereus & Escherichia coli
7µL bakteri dimasukan 100 mL MHB
uji agar 0.8%
Dituang ke Cawan petri
Diambil dalam cawan diberi nomer
5mL petri berisi sesuai nomer
MHB agar 1,8% isolat

Dipipet 50µL isolat

BAL nira papua Dimasukan isolat
ke dalam lubang Media dilubangi
dalam media MRS dengan sedotan
broth pada media

Diinkubasi 37°C selama 48

(Buntin et al., 2007) Jam.
 UJI KETAHANAN
GARAM EMPEDU

5µL isolat
BAL Nira 1000ppm 2000ppm 3000ppm 4000ppm

37°C 48 jam

(Buntin et al,. 2007)

PENGUJIAN KETAHANAN TERHADAP PH RENDAH
5400rpm
Isolat BAL dipipet
tahan garam
empedu 20µL

0,5 ml MRS broth

37°C 24 jam
PBS pH 2
1mL 5400rpm
Supernatan
dibuang
PBS pH 2,5
1 mL

5 menit
Sel dicuci
dengan PBS pH
7.4
 1mL 1mL
NaCl NaCl
900µL 900µL

PBS pH2 Pengenceran 105 PBS pH2,5 Pengenceran 105

Diambil 100µL Diambil 100µL

GYPA GYPA

Disebar menggunakan
spreader. Diinkubasi pada
suhu 37°C 48 Jam

Diulang kembali perlakuannya setelah

jam keempat.
 UJI KETAHANAN SIMULATED GASTRIC
JUICE & SIMULATED INTESTINAL JUICE
10mL lar. SGC
Lar. Saline 5% ditambahkan HCl sampai pH 2
steril

Diinokulasi

1mL Isolat BAL nira 37°C selama 90

menit
Isolat yang
diinkubasi
dengan SGC

10mL SIJ steril 37°C selama 60

menit