KULTUR

JARINGAN
KELOMPOK 2
ADZKA DA'IYAH UMRI (4191220008)
AMELIA ROHANA MALAU (4192520002)
DINDA ARSITA (4192220003)
FEROSALINA NATASIA SARAGIH (4194520007)
YUNNIKE INDRYANDANA (4192520008)
Indentitas Jurnal

1 Judul Natural Deep Eutectic Solvent Are Viable Solvents For Plant Cell
Cultureassisted Stereoselective Biocatalysis
 

2 Nama Jurnal Process Biochemistry

 

3 Volume dan Halaman Volume 93 Halaman 69 – 76

 

4 Tahun 2020
 

5 Penulis Dubravko Pavoković, Karla Košpića, Manuela Panić, Ivana Radojčić

Redovniković, Marina Cvjetko Bubalo
 
Tujuan Dan Subjek Penelitian

Tujuan Penelitian Subjek Penelitian

01 Penggunaan kultur sel
02 Pelarut ekuatik alami (NADES)
tanaman (gula bit, Beta vulgaris
L. subsp. vulgaris) untuk
memediasi reduksi prokiral 1-
(3,4-dimetilfenil) etanon
menjadi alkohol kiral (1R)-1-
(3,4 dimetilfenil) etanol dalam
NADES.
Metode Penelitian
01 Alat dan Bahan
• 1-(3,4-dimethylphenyl) ethanone (DMPA)
• Bahan untuk persiapan NADES : kolin
klorida, glukosa, gliserol dan etilen-glikol
• Jaringan kalus normal gula bit Beta vulgaris L .
subsp. Vulgar (Betaceae)
• Autoklaf
• Konsentrator vakum (Savant SPD131DDA
SpeedVac Concentrator, Thermo Scienti fi c,
USA)
Metodologi Penelitian
02 Metode Penelitian
Metode penelitian yang digunakan
dalam jurnal ini ialah deskriptif
kualitatif.
Sesuai dengan tujuan penelitian,
peneliti akan mendapat gambaran
deskriptif mengenai penggunaan
kultur sel tanaman buah bit gula
(sugar beet) dalam mereduksi
DMPA menjadi 1-(3,4 dimetil)
etanol.
Proses pelaksanaannya meliputi :
 Persiapan alat dan bahan
 Budidaya sel bit gula (sugar beet)
 Persiapan NADES
 Prosedur umum reduksi asimetris
 Analisis GCMS
 Biokompatibilotas sel tumbuhan dengan
NADES
 Kuantifikasi protein
 Uji peroksida lipid
 Aktivitas peroksidase
 
Definisi Operasional Variabel Dependent dan
Independent

Definisi Operasional Definisi Operasional

01 02 Independent
Variabel Dependent
Variabel independent atau variabel bebas
merupakan variabel yang memberikan
Variabel dependen atau variabel terikat adalah
pengaruh baik secara positif ataupun
variabel yang dipengaruhi atau ditentukan oleh negatif terhadap variabel dependen.
Adapun variabel independen dalam
adanya variabel bebas. Adapun variabel
penelitian ini adalah Pelarut NADES
dependen dalam penelitian ini adalah aktivitas (National Deep Eutectic Solvents).
biokatalisis. Dimana definisi operasional dari
aktivitas biokatalisis ini adalah reaksi kimiawi
menggunakan katalis biologis pada kultur sel bit
gula (sugar beet).
 Cara dan Alat Ukur Variabel Dependent

Cara kerja dari variabel dependen ini adalah dengan melakukan

pengurangan asimetris DPMA, mengamati pertumbuhan dan metabolit sel
pada bit gula (sugar beet), dan mengamati aktivitas metabolisme
berkepanjangan dari kultur sel sugar beet (bit gula).

Adapun alat ukur dalam mengamati variabel dependen ini adalah

menggunakan analisis GCMS yang dilakukan pada instrumen Shimadzu
QP2010PLUS yang dilengkapi dengan Beta DEX 225 kolom kilar kapiler an
detektor spektometri massa (MS).
 Langkah Penelitian
a) Budidaya Sel bit gula
1. Sel bit gula dilarutkan dalam media basal PG0
dan dipadatkan dengan agar-agar 0,9% dan
mengandung hormon tanaman untuk pertumbuhan
0.45 M 2,4-dichlorophenoxyacetic asam dan 0,44
M 6-benziladenin (PG0+H)
2. Sel ditumbuhkan didalam ruang pada 23 °C di
bawah fotoperiode 16 jam (80 mol foton m 2 s -1 )
3. Setiap dua minggu, sel-sel dipindahkan ke media
segar
b) Persiapan NADES
1. Kolin klorida (ChCl) dikeringkan dalam konsentrator
vakum pada 60 °C selama 24 jam sebelum digunakan
2. HBD dan akseptor ikatan hidrogen, dalam rasio tertentu
dan dengan kadar air yang berbeda, selanjutnya ditempatkan
pada gelas labu, diaduk dan kemudian dipanaskan sampai
suhu 50 °C
3. Air ditambahkan untuk mengubah viskositas NADES,
selanjutnya semua komponen diaduk dan dipanaskan sampai
50 °C selama 2 jam untuk mendapatkan cairan pada suhu
kamar.
4. NADES yang telah disiapkan disterilkan dalam autoklaf
(121 ° C, 15 menit) sebelum digunakan.

c) Reduksi asimetris
1. Sel bit gula (0,6 g) diinkubasi dalam 2,5 mL dalam
masing-masing NADES
2. Substrat DMPA kemudian ditambahkan pada
konsentrasi 0,17 mmol L-1.
3. Reaksi dilakukan dalam shakers pengocok pada 25 ° C
dan 85 rpm, dipantau selama 72 jam.
4. Pada interval waktu tertentu, reaksi dihentikan dan
seluruh reaksi campuran disaring dan divakum
5. Absorbansi supernatan diukur pada 260 nm dan 280
nm untuk DNA dan kandungan protein, kemudian
supernatan diekstraksi dengan n-heptana (3 × 5 mL) pada
vortex shaker (5 menit, 23 °C).
6. Fasa organik dikumpulkan dan diuapkan dalam kondisi
tereduksi dalam tekanan untuk mengubah produk mentah.
Kemudian produk mentah tersebut kembali disuspensikan
dalam 50 L n-heptana dan dianalisis dengan kromatografi
gas.
7. Daur ulang biomassa diuji dalam eksperimen terpisah
yang disiapkan dengan 2,5 g biomassa dalam 10 mL pelarut
(ChGlc30, ChGlc50, ChGlc80 dan air) yang mengandung
0,17 mmol L 1 DMPA
8. Setelah satu siklus reaksi (72 jam), campuran reaksi
disaring untuk memisahkan sel bit gula dari media reaksi,
biomassa yang tertahan digunakan dalam siklus kedua dan
ketiga pengurangan asimetris DMPA dengan pelarut segar
(NADES atau air)
9. Efisiensi reaksi pada akhir setiap siklus ditentukan dengan
menyatakan hasilnya sebagai persen konversi dibandingkan
dengan persen yang diperoleh dengan biomassa pada siklus
pertama.
d) Analisis GCMS
1. Konsentrasi (1R)-1-(3,4-dimetilfenil)etanol
dalam n-fase heptana ditentukan dengan
analisis GCMS kiral yang dilakukan pada
instrumen Shimadzu QP2010PLUS yang
dilengkapi dengan Beta DEX 225 kolom kiral
kapiler dan detektor spektrometri massa (MS)
dengan program suhu.
2. Konfigurasi absolut ditentukan
menggunakan senyawa referensi. Kemudian
Data dikuantifikasi dengan kalibrasiterhadap
sampel standar.
3. Waktu retensi untuk 1-(3,4-dimetil-fenil)
etanol adalah 17,82 menit, untuk (1R)-1-(3,4-
dimetilfenil) etanol adalah 19,06 menit dan
untuk (1S)-1-(3,4-dimetilfenil) etanol 19,53
menit
e) Biokompatibilitas sel tumbuhan dengan NADES
1. Sel bit gula (2,5 g) diinkubasi dalam 10 mL ChGlc dengan
kandungan air (30, 50 atau 80%, v/v) atau dalam dH 2 O atau
PG0+H (sebagai kontrol) pada suhu 23 °C.
2. Pada hari pertumbuhan tertentu, sel-sel dipisahkan dari media,
dikeringkan dengan vakum filtraksi dan massa ditentukan. Media
percobaan disimpan ke dalam tabung Falcon steril dan dibekukan
pada suhu -20 °C.
4. Sel-sel diteteskan ke dalam nitrogen cair dan disimpan pada
suhu -80 °C. Viabilitas sel diuji menggunakan larutan trypan blue
0,4%.
5. Untuk setiap pengujian, 0,15 g sel disuspensikan kembali dalam
1 mL dH2O dan dikocok sebentar. Larutan trypan blue dicampur
1:1 dengan dH2O dan sel diinkubasi selama 1 menit
7. Viabilitas sel ditentukan oleh pengamatan visual dengan
mikroskop pada perbesaran 100x atau 400x. Viabilitas dihitung
dengan menghitung 100 sel dan membagi jumlah sel tidak
berwarna sebanyak 100
f) Kuantifikasi protein
1. Ekstrak kasar disiapkan dengan
menggiling 0,5 g sel dengan aditiftion
polivinilpirolidon dalam 1,5 mL 50
mmol L 1 potasium phosbuffer fat, pH
7,0. Selanjutnya Homogenat
disentrifugasi pada 20.000 × g pada
suhu 4°C selama 10 menit. Supernatan
kemudian dikumpulkan dan
disentrifugasi pada 20.000 × g pada 4
°C selama 30 menit.
2. Kandungan protein dalam
supernatan ditentukan oleh Metode
Bradford. Ekstrak kasar yang sama
kemudian digunakan untuk lipid uji
peroksidasi dan penentuan aktivitas
enzim peroksidase.
g) Uji peroksidasi lipid
1. Ekstrak sel kasar dicampur
dengan 10% (b/v) triasam
kloroasetat yang mengandung 0,3%
(b/v) larutan asam tiobarbiturat.
2. Setelah 30 menit pemanasan
pada 95 °C, campuran didinginkan
sebentar dalam es dan
disentrifugasi pada 20.000 × g
selama 30 menit pada 4 ° C
3. Absorbansi supernatan diukur
pada 532 nm dan dikoreksi untuk
nonkekeruhan spesifik dengan
mengurangkan absorbansi pada 600
nm
h) Aktivitas peroksidase
1. Aktivitas guaiacol peroksidase
diukur menggunakan campuran reaksi
yang mengandung 50 mmol L 1 buffer
fosfat (pH 7), 9 mmol L 1 guaiacol, 19
mmol L 1 H2O2 dan ekstrak kasar atau
media inkubasi.
2. Absorbansi pada 470 nm diukur pada
15 s interval selama 2 menit kerangka
waktu. Aktivitas peroksidase dihitung
menggunakan koefisien kepunahan (25
mM -1 cm -1 pada 470 nm) dan
dinyatakan sebagai U mg mL -1 protein
3. Satu unit aktivitas enzim
didefinisikan sebagai jumlah enzim
yang mengkatalisis pembentukan 1,0
M guaiacol produk dehidrogenasi per
menit.
 Hasil Penelitian
• Pengurangan asimetris DMPA oleh kultur sel bit gula, penelitian DMPA berbantuan jaringan
tanaman ini mengungkapkan bahwa sel tumbuhan yang mampu menyimpan gula dalam
jumlah besar sebagai cadangan setara duksi yang diperlukan untuk daur ulang NAD(P)
(misalnya wortel, gula bit, dll.) adalah biokatalis yang sangat baik untuk reaksi bioreduksi.

• NADES berpengaruh pada pertumbuhan dan metabolisme sel bit gula, NADES
mempengaruhi pertumbuhan sel bit gula kemungkinan besar oleh gen memicu stres
oksidatif. Stres ini menyebabkan gangguan pada berbagai proses fisiologis dan metabolisme.
Tingkat stres oksidatif, dan terutama stres yang diketahui merusak membran sel, dapat
diperkirakan dikawinkan dengan mengukur kandungan malondialdehid (MDA) sebagai
indikator peroksidasi lipid membran sel.

• Aktivitas metabolisme yang berkepanjangan dari kultur sel bit gula, Penghambatan
pertumbuhan sel bit gula, serta permeabilitas sel membran, sangat jelas; Namun, degradasi
lengkap dari sel tidak terlihat selama setidaknya 10 hari. menunjukkan kemungkinan
menggunakan NADES untuk menstabilkan biomolekul (misalnya RNA, DNA dan protein)
dalam sampel biologis seperti sel, jaringan, biopsi dan darah .
 Kelemahan Penelitian
Pada poin metode tidak diberikan penjelasan

1
Pada penelitian ini penulis tidak 3 secara spesifik mengenai jenis alat – alat
yang digunakan sehingga membingungkan
menjelaskan secara langsung apa pembaca dalam memahami penelitian :
tujuan dari penelitian ini. • Bahan kimia
• Budidaya sel bit gula (sugar beet) normal
• Persiapan NADES
• Prosedur umum untuk reduksi asimetris
• analisis GCMS
Selain itu penulis juga tidak • Biokompatibilitas sel tumbuhan dengan
2 memaparakan dokumentasi pada
NADES
• Kuantifikasi protein
jurnal sehingga mengurangi • Uji peroksidasi lipid
• Aktivitas peroksidase
pemahaman pembaca.
 Kekuatan Penelitian
1 Jurnal ini dilengkapi dengan adanya
tinjauan pustaka sebagai dasar latar 3 Pada setiap hasil yang telah didapatkan,
diperkuat dengan sumber-sumber referensi
belakang dari dilaksanakannya yang relevan. Sehingga hasil yang telah
penelitian. Hal ini menjadi acuan bagi didapatkan ini dapat dipertanggungjawabkan
para peneliti ataupun reviewer mengenai kebenaranny.
kelanjutan dari penelitian yang akan
dilakukan.

4 Tampilan jurnal ini juga sangat baik karena

telah mengikuti kaidah penulisan jurnal yang
benar dimana ia menyertakan kelengkapan
2 Metodologi pelaksanaan penelitian
dalam jurnal ini di paparkan secara rinci,
identitas jurnal tersebut.

mulai dari alat bahan hingga analisis

yang digunakan.
5 Format penulisan jurnal ini juga dinilai cukup
efisien yang terlihat dari konsistensi
penggunaan menjorok kedalam pada setiap
paragraf dan penggunaan format penulisan
dua kolom.
Kesimpulan
1. Melalui penelitian yang telah dilakukan, para penulis dalam jurnal ini menyimpulkan bahwa DMPA ini
dapat direduksi secara asimetris menjadi 1-(3,4 dimetil) etanol menggunakan kultur sel tanaman. Dimana
ia tidak berdiferensiasi sebagai biokatalis dalam kondisi ringan di semua NADES (Natural deep eutectic
solvents) berbasis kolinium klorida yang diuji.
2. Secara khusus aktivitas metabolisme yang berkepanjangan dari kultur sel pada buah bit gula (sugar beet)
ini dapat menarik minat masyarakat untuk tujuan industri. Selain itu, pengamatan bahwa NADES yang
memungkinkan sekresi metabolit sederhana ke dalam media inkubasi menunjukkan adanya kemungkinan
bahwa penggunaan NADES juga akan mengurangi waktu dan biaya bioproses dan membantu ekstraksi
produk yang lebih mudah, serta membuat keseluruhan proses lebih efisien dari perspektif industri.
3. Namun, pengujian lebih lanjut diperlukan untuk mengkonfirmasi efek NADES pada membran sel,
mekanisme difusi ke dalam sel, stabilitas intraseluler NADES, potensi interaksi NADES dengan metabolit
sel dan efek NADES pada metabolisme sel hidup.
DAFTAR PUSTAKA

Pavoković, D; Košpića, K; Panić, M; Redovniković, I. R; Bubalo, M. C. 2020. Natural Deep

Eutectic Solvent Are Viable Solvents For Plant Cell Cultureassisted Stereoselective
Biocatalysis. Process Biochemistry. Vol 93: 69 – 76
LAMPIRAN

Gambar 1. Cover jurnal