PEMERIKSAAN JENIS

BAKTERI
 ALAT-ALAT YANG DIPERLUKAN

Ose Bulat Ose bulat

Ose jarum

Gelas Objek glass datar

sediaan Objek glas cekung/berkeluk

Training jar
Jembatan pewarna
Petridis
• Colony counter
• Lampu spistus/bunsen
• Incubator
• Dexicator/exicator
• Oven (Hot air oven)
• Tabung
• Tabung rekasi
• Tabung durham
• Autoclave
• Timbangan top Loading dan timbangan analitik
• Blender • Mikroskop
• Lamina air flow cabinet • Loup
• Lemari es • Pompa vacum
• Tangas air • Pinset
• Magnetic steril • Pisau/skapel
• Sentrifus • Spatula/sendol
• Wadah perendam pipet • Labu ukur
kotor • Gelas ukur
• Spekfotometer
 PEWARNAAN

• Suatu teknik untuk mempelajari morfologi bakteri dengan cara

pemberian zat kepada sel bakteri
• Bagian-bagian sel dapat diamayi, dapat menyerap zat warna
yang berbeda oleh masing-masing bagian sel
 KAPAN PERLU DI WARNA?

• Bakteri ukurannya sangat kecil 0,5-1 u x 10u

• Di bawah mikroskop tidak jelas bagian-bagiannya
• Untuk melihat dengan jelas perlu diberi zat warna
 MCAM-MACAM ZAT WARNA

Zat Komponen warnanya adalah anion

warna
bersifat Dama bentuk galam natrium
asam

Zat Komponen warna kation

warna
bersifat
basa Dalam bentuk klorida
 MACAM-MACAM ZAT WARNA

No Nama zat pewarnaan Warna

1 Sapranin Merah

2 Gentian violet Ungu

3 Methylen Blue Biru

4 Malachit green Hijau

5 Karbol fuchsin Merah

 MACAM-MACAM PEWARNAAN

• Pewarnaan sederhana
• Menggunakan 1 macam zat warna
• Warna bakteri hanya 1
• Tidak dapat membedakan sifatnya
• Untuk melihat ukuran dan bentuknya
 MACAM-MACAM PEWARNAAN
DIFFERENSIAL
• Pewarnaan gram
• Pewarnaan BTA
• Pewarnaan spora
• Pewarnaan granula
 FIKSASI

• Proses melengketkan sediaan pada kaca obyek

• Bakteri mati, tetpai tidak lisis
• Secara kimia : Metanol
• Seara fisika : pemanasan diatas nyala api
 PEWARNAAN GRAM

• Ditemukan Christian Gram (1884)

• Pewarnaan dasara dan rutin dalam identifikasi bakteri lebih
lanjut
• Kuman dibagi dua
• Gram positif berwarna ungu
• Gram negatif berwarna merah
 TAHAP PEWARNAAN GRAM

Perlakuan Waktu Warna

Gram + Gram -
Pembuatan preparat
Fiksasi
Gentian violet 30 detik Ungu Ungu
Cuci dengan air
Larutan iodium 30 detik -
Cuci dengan air dan
keringkan
Dekolorisasi 20 detik
dengan alkohol
Cuci dengan air dan
keringklan
Sapranin 30 detik Ungu Merah
 PEWARNAAN BTA

• Untuk mengidentifikasi kuman M.TBC dan M. Leprae

• Kuman M.tbc dan M.leprae mempunyai dinding sel yang
banyak mengandung lipid
• Sukar ditenbusi zat warna biasa
• Perlu pemanasan
• Bakteri M.TBC dan leprae berwarna merah
 TAHAP PERWARNAAN BTA

• Buat preparat
• Fiksasi
• Zat warna karbol Fuchsin sambil di panaskan (tidak mendidih)
selama 3 menit
• Cuci dengan air
• Pelunturan dengan asam alkohol hingga bersih
• Methylen blue 1 menit
 ZAT WARNA PEWARNAAN BTA

• Karbol fuchsin = merah

• Methylen blue = biru
• Asam alkohol sebagai peluntur
• Kuman BTA positif: batang berwarna merah
• Kuman BTA negatif: batang berwarna ungu
• Sensutifitas: 5000 BTA/ml sputum
 METODE PEWARNAAN

• Ziehl nellson
• Kinyoun Gabbet
• Tan Tiam Hook
 PEWARNAAN ZIEHL-NEELSEN

• Adalah salah satu jenis pewarnaan bakteri tahan asam (BTA),

yang pertama kali diperkenalkan oleh Paul Ehrlich. Pewarnaan
Ziehl-Neelsen adalah pewarnaan bakteriologis yang
digunakan untuk mengidentifikasi organisme tahan asam,
terutama jenis Mycobacterium
METODE KINYOUN ATAU PEWARNAAN
KINYOUN
• Adalah prosedur yang digunakan untuk mewarnai spesies
tahan asam dari genera bakteri mycobacterium dan Nocardia
dan genus apicomplexan Cryptosporidium. Ini adalah variasi
dari metode yang dikembangkan oleh Robert Koch pada tahun
1882. Spesies bakteri tertentu memiliki lipid lilin yang disebut
asam mikolat, di dinding selnya yang memungkinkannya
diwarnai dengan Tahan Asam lebih baik daripada Pewarnaan
Gram. Kemampuan unik mikobakteri untuk melawan
dekolorisasi oleh asam-alkohol adalah mengapa mereka
disebut tahan asam. Ini melibatkan aplikasi pewarnaan
primer, penghilang warna (asam-alkohol), dan counterstain.
• Berbeda dengan pewarnaan Ziehl-neelsen (pewarnaan ZN),
metode pewarnaan Kinyoun tidak membutuhkan pemanasan.
Dalam pewarnaan Ziehl-Neelsen, panas bertindak sebagai
mordan fisik sedangkan fenol (karbol karbol fuschin)
bertindak sebagai mordan kimiawi. Karena pewarnaan
Kinyoun adalah metode dingin (tanpa panas), konsentrasi
carbol fuschin yang digunakan meningkat.
 TAN TIAM HOOK

• Cara ini merupakan kombinasi dari Kinyoun dan Gabbet.

• Sediaan sesudah difiksasi di atas api, celupkan ke dalam larutan
Kinyoun selama 3 menit.
• Cuci dengan air kran selama ½ menit.
• Celupkan lagi dalam larutan Gabbet selama 1 menit.
• Bilasi dengan air kran, keringkan dalam temperatur kamar dan dilihat
dengan mikroskop.
• Hasil pewarnaan
• Basil tahan asam : merah.
• Tidak tahan asam : biru muda.
TERIMA KASIH