PEMBUATAN MEDIA

KULTUR JARINGAN

Prof. Dr. Ir. Yusnita, M.Sc.

Gedung Bioteknologi Pertanian Lt I or
Gedung Pascasarjana Pertanian Lt 1-PS Magister Agronomi
Kampus UNILA Gedung Meneng
 MEDIA KULTUR
Komponen Media Kultur
1. Air, gunakan aquadest.
2. Hara-hara makro: N, P, K, Ca, Mg, S.
3. Hara-hara mikro: Cu, Co, Mo,Fe, Mn, Zn, B.
4. Gula: sukrosa, glukosa.
5. Gula alkohol (heksitol): myo-inositol.
6. Vitamin dan zat organik: tiamin-HCl, piridoksin-
HCl, niasin (asam nikotinat), glisin.
7. Kompleks adenda: air kelapa, ekstrak taoge, jus
tomat, jus apel, dsb.
8. Pemadat media: bubuk agar atau gelrite.
 Formulasi Media
Berdasarkan komposisi garam-garam mineralnya,
terdapat banyak formulasi media kultur,
diantaranya:

•Murashige dan Skoog (MS) (1962)

•WPM (Woody Plant Medium) (Lloyd dan McCown,

1981).
•Vacin dan Went (1949).

•Knudson C (1946).
Perhitungan kimia
Konsentrasi:
Banyaknya zat per satu satuan volume.
Misal:
KNO3 1900 mg/liter, artinya dalam satu liter larutan
terdapat 1900 mg KNO3.

Benziladenin 1 mg/liter, artinya dalam satu liter

larutan terdapat 1 mg benziladenin.

Satuan konsentrasi lain: %, ppm, mM, uM.

Konsentrasi dalam satuan % (persen).

Misalnya, dalam suatu formulasi media,

konsentrasi air kelapa adalah 15%, artinya
dalam 1 liter media terdapat 150 ml air kelapa.

150ml/1000ml = 0.15 = 15%

Konsentrasi sukrosa 0.3%, artinya dalam 1 liter

media terdapat 0.3/100= 3 g/ 1000g sukrosa.
30g sukrosa / per l media = 3%.
Ingat: 1 liter aquades = 1000 g (atau 1 kg)
Konsentrasi dalam ppm = part per million
Artinya satu per satu juta.

Jika dalam satu liter media terdapat 1 mg/l

benziladenin, maka konsentrasi BA tsb adalah
1 mg/liter. Padahal 1 liter air (aquades = 1kg =
1000 g = 1 000 000 mg.

Jadi 1mg/l = 1 mg / 1 000 000 mg air = 1 ppm.

5 ppm NAA = 5 mg/l NAA.

Konsentrasi dalam satuan Molar (mol per
liter).

Diperlukan pengetahuan tentang bobot

molekul bahan kimia yang digunakan.

Contoh: Bobot molekul BA = 225.03

1 M BA = 225.03 g/l BA
1 M = 1000 mM = 1 000 000 µ M
1 M BA = 225 g BA/ 1 liter air

1 mM BA = 225 mg/ 1 liter air.

1 uM BA = 0.225 mg/ 1 liter air.

Berapa uM kah 1 mg/l BA?

1 mg/l BA = 1 : 0.225 uM = 4.44 uM BA.

PEMBUATAN MEDIA KULTUR
Larutan Stok:
Larutan yang kepekatannya (konsentrasinya) beberapa
kali lebih tinggi daripada yang digunakan dalam media

BA dalam media = 1 mg/l

BA dalam larutan stok (misalnya 100 x lebih pekat)
= 100 x 1 mg/l = 100 mg/l.

Menimbang 100 mg lebih mudah daripada 1 mg/l

sehingga lebih teliti dan tepat.
Bagaimana cara membuat media kultur,
misalnya diketahui formulasinya?

Mari kita lihat contoh formulasi media

Murashige & Skoog (1962) berikut ini yang
terdiri dari :
• Sumber hara makro,
• Sumber Hara mikro,
• Sumber Besi,
• Sumber Vitamin dan Bahan Organik,
• Sumber Energi
• Zat Pengatur Tumbuh
Toshio Murashige & Yusnita (1989) di
University of California Riverside.
 Formulasi Media Murashige & Skoog (1962)
(MS)
Sumber Hara Makro Konsentrasi di media Konsentrasi dalam
MS (mg/l) Larutan Stok 10xMS
(mg/l)
NH4NO3 1 650 16 500
KNO3 1 900 19 000
MgSO4.7 H2O 370 3 700
KH2PO4 170 1 700

100 X (mg/l)
CaCl2.2H2O 440 4 4 000
Sumber Hara Mikro Konsentrasi di media MS 100 X MS
(mg/l) (mg/l)
H3BO3 6.2 620
MnSO4.H2O 16.9 1 690
ZnSO4.7H2O 8.6 860
11000 X (mg/l)
KI 0.83 830
Na2MoO4.2H2O 0.25 250
CuSO4.5H2O 0.025 25
CoCl2.H2O 0.025 25

Sumber Fe 100 x MS
FeSO4.7H20 27.8 2 780
Na2EDTA 37.3 3 730
Sumber Vitamin Konsentrasi (mg/l) Konsentrasi dalam larutan
dan bahan organik stok 100x( mg/l)
Thiamine-HCl 0.1 10
Nicotinic acid 0.5 50
Piridoksin-HCl 0.5 50
Glisin 2.0 200
Mio-inositol 100 10 000

Sumber Energi Konsentrasi (mg/l) Tidak dibuat larutan Stok

Sukrosa 20 000 – 40 000

Zat Pengatur Tumbuh Konsentrasi (mg/l) Konsentrasi dalam

(sesuai perlakuannya) larutan stok 100x(
mg/l)
Benziladenin (BA) 1-10 mg/l 100-1000 mg/l
Kinetin 1-10 mg/l 100-1000 mg/l
Indoleacetic acid (IAA) 1-10 mg/l 100-1000 mg/l
Naphthaleneacetic acid 1-10 mg/l 100-1000 mg/l
(NAA)
Membuat Larutan Stok Makro

Stok hara-hara makro biasanyaK, S dan Mg,

sedangkan untuk larutan stok dibuat untuk
sumber N, P Ca dibuat secara terpisah untuk
menghindari terjadinya pengendapan.

Contoh larutan stok makro 10 x MS adalah :

dalam 1 liter aquadest dilarutkan NH4NO3, KNO3,
MgSO4. 7 H2O dan KH2PO4, masing2
konsentrasinya 10 kali dari yang ada di media MS.
Membuat Stok Ca pada konsentrasi 100 x MS.
Caranya:
CaCl2. 2H2O dalam MS = 444 mg/l.

Jadi jika larutan stok dibuat 100 x lebih pekat,

yang harus dibuat adalah 100 x 444 mg =
44 400mg = 44 g CaCl2 dalam 1 liter air.

Jika membuatnya hanya 500 ml, CaCl2.2 H2O

yang ditimbang sebanyak ½ x 44 g = 22 g.
Membuat Stok Hara Mikro

Lihat resepnya.... Karena kandungan hara mikro

berdasarkan jumlahnya ada yang agak besar dan
ada yang sangat kecil, maka pembuatan larutan stok
dapat dilakukan dengan membagi menjadi dua
larutan, misalnya Stok Mikro A (H3BO3, MnSO4.2
H2O, ZnSO4.7H2O).
Larutan Stok Mikro A bisa dibuat 100 x MS.

(Lihat resepnya)

Siapkan satu gelas piala berisi sekitar 600 ml

aquadest, timbang masing-masing bahan kimia,
larutkan satu demi satu hingga larutan homogen
(jangan bersama-sama), lalu tera menjadi
volume akhir.
Pembuatan Larutan Stok mikro B bisa dilakukan
1000 x MS karena kandungan hara mikro I, Cu,
Mo, Co dan dalam MS sangat kecil.

Pembuatan larutan stok Fe 100 x MS harus dibuat

tersendiri untuk menghindarkan pengendapan.

Caranya, masing-masing bahan kimia ditimbang,

dilarutkan tersendiri, kalau sudah larut baru kedua
larutan dicampur dan ditera menjadi volume akhir.
MENGHITUNG KEBUTUHAN
LARUTAN STOK

Larutan stok BA = 100 mg/l.

BA yang dibutuhkan dalam media = 1 mg/l.

Volume larutan stok BA (100 mg/l) yang

dibutuhkan untuk membuat 1 liter larutan yang
mengandung 1 mg BA adalah =
(1 mg/100 mg) x 1000 ml = 10 ml.
Bagaimana membuat larutan stok IAA pada
konsentrasi 1 mM sebanyak 500 ml?

Bobot molekul IAA = 175

1 M IAA = 175 g / liter air.

1 mM IAA = 175 mg/l air.
Atau jika membuat larutan stok nya 500 ml,
maka IAA yang dibutuhkan 175mg : 2 = 87.5
mg (dilarutkan dalam 500 ml air).
Misalkan di laboratorium sudah tersedia
larutan stok IAA 1 mM. Berapa larutan stok
yang diperlukan untuk membuat 2 liter media
yang mengandung 5 uM IAA?

Jawab: 1 mM = 1000 uM.

5 uM ke 1000 uM adalah 200 x

Kebutuhan larutan stok IAA untuk 2 liter

media yang mengandung IAA 5 uM =
5/1000 x 2000 ml = 10 ml atau 1/200 x
2000 ml = 10 ml/
CARA MELARUTKAN ZAT PENGATUR TUMBUH

ZPT yang bersifat asam (IAA, IBA, NAA, 2,4-D)

dilarutkan dalam larutan basa, sedangkan
yang bersifat basa dilarutkan dalam larutan
asam.
Asam yang digunakan = HCl 1 N
Basa yang digunakan = KOH/NaOH 1 N
CARA MELARUTKAN ZAT PENGATUR TUMBUH
ZPT yang bersifat asam:
IAA Larutkan dengan bantuan
NAA basa, misalnya KOH atau
IBA
NaOH 1N.
2,4-D

ZPT yang bersifat basa:

BAP Larutkan dengan
Kinetin
bantuan asam,
2iP
Zeatin
misalnya HCl 1N.
CARA MELARUTKAN ZAT PENGATUR TUMBUH
PRINSIP:
Jumlah mol KOH/NaOH/HCl maksimum yang
digunakan adalah sama dengan jumlah mol ZPT yang
dilarutkan.

Pedoman Umum:
Setiap 10 mg ZPT yang dilarutkan
dibutuhkan maksimum 0,3 ml
KOH/NaOH/HCl 1 N.
CARA MELARUTKAN ZAT PENGATUR TUMBUH

•Timbang sebanyak yang dibutuhkan

•Tambahkan beberapa tetes KOH/NaOH 1 N atau HCl

1 N. aduk hingga rata/terbasahi semua.

•Tambahkan akuades sampai jumlah yang dibutuhkan

Pelarutan dapat dibantu dengan pemanasan

Cara Membuat Media dengan formulasi MS

1. Siapkan wadah, alat pengukur , aquadest dan

semua bahan kimia yang diperlukan.
2. Buat semua larutan stok yang diperlukan,
perhatikan berapa kali lebih pekat dari yang
seharusnya ada di formulasi media media.
3. Hitung masing-masing kebutuhan larutan stok jika
ingin membuat sejumlah media.
4. Timbang agar-agar, gula atau arang aktif jika
diperlukan.
5. Tuliskan di buku Log pembuatan media langkah-
langkah yang harus dilakukan secara berurutan

6. Ambil sesuai dengan yang dibutuhkan, masing-

masing larutan stok, termasuk ZPT. Masukkan
satu demi satu ke dalam gelas piala yang
sebelumnya diberi aquades seperlunya.

7. Masukkan gula dan tambahkan akuades hingga

mencapai volume akhir. Aduk hingga larutan
homogen.

6. Atur pH menjadi 5.8 menggunakan pH meter dan

KOH atau HCl.
Pembuatan media kultur sebaiknya menggunakan borang
sbb:
Komponen Volume Stok Keterangan
Makro 100 ml 
Ca 10 ml 
Mikro A 10 ml 
Mikro B 1 ml 
Fe 10 ml 
Vitamin 1 ml
Mio-inositol 100 ml
Gula 30 gram
BA atau ZPT lain Sesuai kebutuhan
pH 5.8
Agar-agar 7 gram
Arang aktif Sesuai kebutuhan