BioSMART ISSN: 1411-321X

Volume 5, Nomor 2 Oktober 2003

Halaman: 102-105

Perbanyakan Cepat Kunci Pepet (Kaempferia angustifolia Rosc.) melalui

Kultur in vitro

Rapid multiplication of kunci pepet (Kaemferia angustifolia Rosc.) through in vitro culture

ENDANG GATI LESTARI, SRI HUTAMI

Balai Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian (BALITBIOGEN) Bogor

ABSTRACT

Kaempferia angustifolia frequently mentioned as K. rotunda L., in Indonesia is called “kunci pepet”. It contains chemical substances
such as flavonoid, saponin, curcumin and antioxidant belongs to the chloroform fraction; the rhizome can be used as remedy for
diarrhea, tumor, and cancer. Due to the economic crisis in Indonesia, which makes the medical treatment expensive, the necessity for the
alternative medical herbs is escalating. Therefore, there will be an increasing demand for the medical plants herbs. To fulfill the demand
for the seed in a large amount and in a short time, in vitro propagation should be conducted. This research was conducted at the
reproduction and growth Laboratory of Reproduction and Plant Growth, Research Institute of Biotechnology and Genetic Resources for
Agriculture, Bogor. To increase the shoot proliferation speed, three steps of the research were successively carried out, namely (i) MS
+BA (0, 1, 3, and 5 mg/l) + IAA (0 and 1 mg/l); (ii) media MS + BA 5 mg/l+ IAA (0,1; 0,3 and 0,5 mg/l), (iii) media MS + BA (1, 3 and
5 mg/l) + thidiazuron 0,2 mg/l. As explants, lateral shoot was induced through in vitro. The result of the first experiment showed that the
highest amount of shoot is 5,8 coming from MS + BA 3mg/l media. For the second experiment, the highest shoot proliferation (4,8)
comes from MS + BA 5 mg/l + IAA 0 mg/l media. From the first and second experiments, the shoots were relatively low. But on the
third experiment, there was an increasing number to 6,28 derived from MS +BA 1mg/l + thidiazuron 0,2 mg/l media. The root was
formed at the shooting media and the acclimatized plantlet grows well. There was an effect of in vitro treatment media in the green
house growth.
Key words: Kaempferia angustifolia. Rosc, in vitro culture

PENDAHULUAN
Beberapa tahun terakhir harga obat-obatan meningkat
tajam, sehingga pengobatan alternatif menggunakan obat
tradisional semakin meningkat. Sekitar 60% penduduk du-
nia hampir sepenuhnya menggantungkan diri pada tumbuh-
an untuk menjaga kesehatan (Farnsworth, 1994).
Sedangkan menurut perkiraan WHO, lebih dari 80%
penduduk negara-negara yang sedang berkembang
tergantung pada ramuan tradisional untuk mengatasi
masalah kesehatan (Khan et al., 2002). Salah satu tanaman
yang banyak digunakan dalam pengobatan tradisional
adalah kunci pepet (Indonesia) atau kunci menir (Jakarta)
(Kaempferia angustifolia Rosc. atau K. rotunda) yang
berkhasiat mengobati beberapa penyakit seperti tumor dan
kanker. Kunci pepet tumbuh liar di hutan-hutan terutama di
Jawa Tengah dan Jawa Barat. Perbanyakan tanaman
umumnya dilakukan secara vegetatif menggunakan
rimpang atau anakan. Perbanyakan secara konvensional
tersebut mempunyai keterbatasan untuk menghasilkan bibit
yang seragam dan bebas dari penyakit.
K. angustifolia berupa terna kecil, berdaun kecil dan
berumbi batang (Darwis, 1987). Daun bulat lonjong,
bergelombang, bergaris putih dan ungu pada permukaan
atas dan berwarna ungu terang atau hijau pada permukaan
bawah. Akar tunggang, berbau harum, rimpang bulat,
berwarna putih kekuningan, dengan akar air berbentuk
bulat telur berwarna putih. Rimpang berkhasiat sebagai
obat desentri dan obat sakit perut (Heyne, 1987; Kosahara,
1995). Senyawa kimia yang terkandung dalam rimpang
antara lain: saponin, sineol dan metil chavicol (Gunawan
dkk., 1989). Kunci pepet juga mengandung RIP (Ribosome
Inacting Protein) yang berfungsi untuk menonaktifkan
perkembangan sel kanker, merontokkan sel kanker tanpa
merusak jaringan, anti oksidan dan anti imflamantasi.
Untuk mendapatkan bibit yang seragam dalam waktu
yang relatif singkat dapat dilakukan kultur in vitro. Salah
satu faktor penentu keberhasilan perbanyakan cepat melalui
teknologi tersebut adalah kemampuan biakan menghasilkan
tunas yang banyak pada periode tertentu. Keberhasilan
proliferasi tunas ditentukan oleh banyak faktor antara lain:
sumber eksplan, jenis media dasar, jenis dan konsentrasi
zat pengatur tumbuh serta kondisi lingkungan kultur.
Media dasar MS paling banyak digunakan untuk
perbanyakan berbagai jenis tanaman, karena mempunyai
kandungan hara makro paling tinggi terutama kandungan
N. Penggunaan zat pengatur tumbuh sitokinin seperti BA,
kinetin atau 2-iP dapat menentukan kecepatan dan arah
pembentukan tunas (Heloir, 1997). Kombinasi sitokinin
dan auksin dapat mempercepat pertunasan karena pengaruh
sinergis antar zat pengatur tumbuh tersebut (Thorpe, 1987;
Davies, 1995). Meningkatnya jumlah tunas karena
perlakuan kombinasi auksin dan sitokinin didapatkan pada
perbanyakan tanaman obat langka pulasari (Alyxia stellata)
dan tanaman tangguh (Pettivera alliacea) (Gati dan
Mariska, 1994).

© 2003 Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta

 GATI-LESTARI dan HUTAMI – Kultur in vitro Kaempferia angustifolia 103

Penelitian ini bertujuan untuk medapatkan metode mg/l pada media yang sudah mengandung BA, ternyata
proliferasi tunas yang tinggi, sehingga dapat digunakan tidak meningkatkan jumlah tunas. Pada minggu ke-12 rata-
untuk pengadaan bibit kunci pepet secara cepat. rata jumlah tunas terbanyak didapatkan pada media MS +
BA 3 dan 5 mg/l, yaitu 5,8 dan 5,4 (Tabel 1). Pada media
MS dengan BA untuk setiap konsentrasi yang sama,
BAHAN DAN METODE penambahan IAA umumnya menurunkan jumlah tunas.
Bahkan dibanding dengan kontrol (MS 0), kombinasi BA 1
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Reproduksi mg/l + IAA 1 mg/l jumlah tunasnya nyata lebih sedikit.
dan Pertumbuhan Tanaman, Balai Bioteknologi dan Untuk media MS + BA (3 dan 5 mg/l) + IAA 1 mg/l
Sumberdaya Genetik Pertanian, Bogor. Bahan tanaman jumlah tunasnya tidak berbeda nyata dengan kontrol.
yang digunakan sebagai eksplan adalah mata tunas kunci
pepet (K. angustifolia) berukuran 1 cm diambil dari Tabel 1. Pengaruh perlakuan kombinasi BA dan IAA terhadap
rimpang yang masih segar. Bahan tanaman dicuci bersih jumlah tunas.
dan direndam dalam air sabun selama 10 menit, selanjutnya
disterilisasi berturut-turut menggunakan larutan HgCl2 Rata-rata jumlah tunas
No Perlakuan (mg/l)
0,2% selama 4 menit, kloroks 30% selama 10 menit, Minggu ke-8 Minggu ke-12
kloroks 20% selama 12 menit dan terakhir dibilas dengan 1 BA 0 2,1 c 4,6 ab
akuades steril tiga kali.
2 1 2,5 c 2,7 ab
Media dasar yang digunakan adalah Murashige-Skoog
(MS) dan vitamin B kompleks (nicoticic acid 0,5 mg/l, 3 3 4,6 a 5,8 a
pyridoksin HCl 0,5 mg/l dan thiamin HCl 0,1 mg/l), serta 4 5 4,5 ab 5,4 a
myo inositol 100 mg/l. Sebagai sumber energi ditambahkan 5 BA 1 IAA 1 2c 1,6 b
sukrosa 30 g/l dan bubuk agar 7,5 g/l sebagai pemadat.
6 31 2,6 bc 3,2 ab
Adapun zat pengatur tumbuh BA, IAA dan thidiazuron
digunakan sebagai perlakuan. Kemasaman media dibuat 7 51 3,4 ab 4,5 ab
5,6-5,7 dengan menambahkan HCl 1 N atau KOH 1 N.
Intensitas penyinaran untuk rak kultur sebesar 1000 lux Keterangan: angka-angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada
mengunakan lampu TL 40 watt. kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 1% uji DMRT.
Penelitian terdiri dari 3 tahap percobaan berturut-turut,
yaitu: (i) BA (0, 1, 3 dan 5 mg/l) + IAA (0 dan 1 mg/l), (ii)
Tinggi tunas pada masing-masing perlakuan
BA 5 mg/l + IAA (0,1, 0,3 dan 0,5 mg/l), (iii) BA (1, 3 dan
memberikan hasil yang tidak berbeda nyata, pada Gambar
5 mg/l) + thidiazuron 0,2 mg/l. Percobaan disusun dengan
1. dapat dilihat adanya kecenderungan semakin tinggi
Rancangan Acak Lengkap, masing-masing perlakuan
konsentrasi BA yang diberikan, maka tunas yang
dengan 10 ulangan. Plantlet yang dihasilkan diaklimatisasi
dihasilkan semakin pendek. Jumlah daun yang dihasilkan
di rumah kaca menggunakan media tanah dan pupuk
menunjukkan hasil yang hampir sama dengan jumlah tunas,
kandang dengan perbandingan 1: 1. Parameter yang
yaitu jumlah daun tertinggi dihasilkan pada perlakuan MS
diamati adalah jumlah tunas, tinggi tunas, dan jumlah daun.
+ BA 3 mg/l (Tabel 2).
Analisis data menggunakan ANAVA dilanjutkan DMRT
pada taraf 1%.

HASIL DAN PEMBAHASAN

16
Pada tahap awal percobaan, 14
dilakukan penanaman eksplan pada
12
media MS + BA 3 mg/l, tujuannya
untuk memperoleh tunas steril yang 10
akan digunakan dalam percobaan
8
perlakuan media. Dua minggu
pertama setelah tanam belum 6
menunjukkan adanya respon 4
pembentukan tunas, namun setelah
dilakukan subkultur beberapa kali 2
pada media yang sama terlihat adanya 0
respon pembentukan tunas baru
Jumlah tunas Jumlah daun Tinggi tunas
dengan jumlah cukup banyak untuk
digunakan pada percobaan tahap
pertama. BA 0 BA 1 BA 3 BA 5 BA 1 Iaa 1 BA 3 Iaa 1 BA 5Iaa 1
Percobaan tahap pertama menun-
jukkan bahwa penambahan IAA 1
Gambar 1. Pengaruh BA dan IAA terhadap jumlah tunas, jumlah daun dan tinggi tunas.
104 B i o S M A R T Vol. 5, No. 2, Oktober 2003, hal. 102-105

Pada perlakuan tanpa zat pengatur tumbuh, tunas dapat
bermultiplikasi tidak berbeda nyata dengan perlakuan BA
dan kombinasi dengan IAA, seperti halnya Mariska dkk.
(1994) pada perbanyakan tanaman kencur. Diduga organ
mata tunas yang dikulturkan mempunyai zat pengatur
tumbuh alami yang mencukupi, dimana keseimbangan
relatif antara zat pengatur tumbuh tersebut masih terpenuhi
untuk terbentuknya tunas-tunas baru.
gemuk dan lebih tegar (Gambar 2.). Namun tunas tampak
lebih pendek bila dibandingkan dengan perlakuan tanpa
thidiazuron. Hal ini sejalan dengan penelitian
Purnamaningsih dan Gati (1999) pada tunas temu giring
(Curcuma heyneana), dan penelitian Preece dan Imel
dalam Lu (1993) yang menunjukkan adanya pembentukan
tunas yang lebih pendek pada media yang mengandung
thidiazuron.

Tabel 2. Pengaruh BA dan IAA terhadap tinggi tunas dan jumlah

daun.

Rerata tinggi Rerata jumlah

No Perlakuan (mg/l) tunas, minggu daun minggu
ke-8 ke-12
1 BA 0 10,4 a 10,2 ab
2 BA 1 10,2 a 9 ab
3 BA 3 10,1 a 13,6 a
4 BA 5 10 a 12,1 ab
5 BA 1 + IAA 1 10,5 a 5,2 b
6 BA 3 + IAA 1 8,8 a 8,5 ab
7 BA 5 + IAA 1 9,0 a 9,7 ab

Gambar 2. Biakan kunci pepet pada media BA 1 mg/l +

Keterangan: angka-angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada thidiazuron 0,2 mg/l.
kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 1% uji DMRT.

Pada minggu ke-8 dari formulasi media yang dicobakan

Percobaan tahap pertama di atas menunjukkan bahwa media terbaik yang menghasilkan tunas terbanyak adalah
produksi tunas relatif masih rendah yaitu 5,8 dari perlakuan BA 1 mg/l + thi 0,2 mg/l yaitu 6,28 (Tabel 4).
dengan formulasi media terbaik. Untuk itu percobaan
dilanjutkan dengan menggunakan konsentrasi auksin yang Tabel 4. Pengaruh BA dan thidiazuron terhadap jumlah tunas,
lebih rendah. Konsentrasi IAA yang dicobakan yaitu (0,1, minggu ke-8.
0,3 dan 0,5 mg/l) ditambahkan pada media MS + BA 5
mg/l. Pada perlakuan kombinasi tersebut, rata-rata jumlah No
Media perlakuan Rerata
tunas pada minggu ke-8 dan ke-20 menunjukkan hasil yang (mg/l) jumlah tunas
tidak berbeda nyata pada semua perlakuan yang diuji 1 BA 1 + thi 0,2 6,28 a
(Tabel 3.). Pada perlakuan tersebut IAA yang diberikan 2 BA 3 + thi 0,2 2,28 b
tidak mampu meningkatkan laju proliferasi tunas. Untuk itu
3 BA 5 + thi 0,2 3,85 ab
pada percobaan tahap ketiga dicoba kombinasi BA dengan
thidiazuron.
Keterangan: angka-angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada
Tabel 3. Pengaruh perlakuan kombinasi BA dengan IAA terhadap kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%, uji DMRT.
jumlah tunas

No Perlakuan (mg/l)
Rerata jumlah Rerata jumlah tuna Semakin tinggi konsentrasi BA yang diberikan maka
tunas minggu ke-8 minggu ke-20 jumlah tunas yang dihasilkan semakin sedikit, diduga
1 BA 5 + IAA 0 4,8 a 6,7 a thidiazuron pada konsentrasi yang diberikan sudah mampu
2 BA 5 + IAA 0,1 4,3 a 5,9 a memacu proliferasi, sehingga BA yang tinggi menghambat
pembentukan tunas baru. Lu (1993) menyatakan bahwa
3 BA 5 + IAA 0,3 4,5 a 5,4 a
thidiazuron dapat menstimulasi pembelahan sel dan
4 BA 5 + IAA 0,5 2,9 a 5,3 a prolifrasi tunas aksiler, sedang pada tanaman Pyrus
communis kombinasi BA dengan thidiazuron dapat
Keterangan: angka-angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada meningkatkan jumlah tunas. Pada multiplikasi tunas temu
kolom yang sama tidak berbeda nyata pada taraf 5%, uji DMRT. giring, penambahan thidiazuron 0,4 mg/l menghasilkan
tunas terbanyak (Purnamaningsih dan Gati, 1999).
Thidiazuron juga memacu frekwensi regenerasi pada
Percobaan ke-3 menggunakan BA (1, 3 dan 5 mg/l) kacang tanah (Arachis hypogaea) secara in vitro.
dikombinasikan dengan thidiazuron 0,2 mg/l memberikan Thidiazuron berpotensi untuk memacu pembentukan tunas
hasil yang lebih baik dibandingkan dengan percobaan adventif pada beberapa jenis tumbuhan (Huetterman and
sebelumnya. Pada perlakuan ini tunas yang dihasilkan lebih Preece, 1993), karena dapat menginduksi proses
 GATI-LESTARI dan HUTAMI – Kultur in vitro Kaempferia angustifolia
pembelahan sel secara cepat pada kumpulan sel meristem,
sehingga terbentuk primordial tunas (George dan
Sherington, 1994).
Semua perlakuan yang diberikan pada percobaan tahap
pertama menunjukkan bahwa pada media yang sama,
biakan dapat membentuk tunas dan akar. Plantlet yang
diperoleh kemudian diaklimatisasi di rumah kaca, dengan
menggunakan media campuran tanah dan pupuk = 1:1.
Semua tunas dapat tumbuh baik dan menunjukkan
pertumbuhan yang normal. Tunas yang berasal dari
perlakuan media yang berbeda menunjukkan pertumbuhan
yang berbeda pula. Jumlah tunas terbanyak dihasilkan pada
tunas yang berasal dari perlakuan BA 5 mg/l yaitu (2,5
buah) dengan rata-rata tinggi tunas 10 cm. Demikian pula
untuk parameter tinggi tunas terdapat pengaruh nyata atas
perlakuan yang diberikan pada tahap periode kultur in
vitro. Tanaman tertinggi dihasilkan dari perlakuan BA (1
dan 3 mg/l) dengan IAA (0,1 dan 0,3), yaitu 20 cm (Tabel
5).
Tabel 5. Pengaruh asal media kultur terhadap pertumbuhan bibit
di rumah kaca umur 10 minggu.
Asal media kultur Rerata Rerata tinggi
No
(mg/l) jumlah tunas tunas (cm)
1 BA 1 1 8
2 BA 3 1 8,2
3 BA 5 2,5 10
4 BA 1 + IAA 1 1 15,2
5 BA 3 + IAA 1 1 20
6 BA 5 + IAA 1 1,5 20
KESIMPULAN
Proliferasi tunas kunci pepet (Kaempferia angustifolia
Rosc.) untuk tujuan perbanyakan bibit secara cepat dapat
dilakukan melalui kultur in vitro, media terbaik untuk
penggandaan tunas adalah media dasar MS + BA 1 mg/l +
thidiazuron 0,2 mg/l, rata-rata tunas yang dihasilkan
sebanyak 6,28. Akar dapat terbentuk pada media yang
sama dengan media yang digunakan untuk pertunasan.
Planlet dapat diaklimatisasi dan tumbuh dengan baik pada
105
media tanah dicampur pupuk kandang dengan
perbandingan 1:1. Di samping itu terdapat pengaruh
perlakuan media in vitro terhadap pertumbuhan bibit di
rumah kaca.
DAFTAR PUSTAKA
Darwis, S. N, A.B.D. Madjo-Indo dan S. Hariyadi. 1991. Tumbuhan Obat
Familia Zingiberaceae. Bogor: Badan Penelitian dan Pengembangan
Pertanian, Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri
(Puslitbangtri).
Davies. P.J. 1995. The plant hormone their nature, occurrence, and
function. In Davies (ed.). Plant Hormone and Their Role in Plant
Growth Development. Dordrecht: Martinus Nijhoff Publisher.
Farnsworth, N.R. 1994. Ethnobotany and the Search for New Drugs. New
York: John Wiley and Sons.
Gati, E. dan I. Mariska. 1994. Mikropropagasi tanaman obat langka
Alyxia stellata. Dalam: Prosiding Seminar Hasil Penelitian dan
Pengembangan Bioteknologi I. Puslitbang Bioteknologi LIPI, Bogor,
11-12 Mei 1994.
George, J. H and P.D. Sherington. 1984. Plant Propagation by Tissue
Culture. London: Exegetik Ltd.
Gunawan,D., C.J. Soegihardjo., S. Maryani, dan K. Soemardiyah. 1989.
Empon-Empon dan tanaman lain Dalam: Zingiberaceae, cetakan
pertama. Yogyakarta: Perhimpunan Peneliti Bahan Obat Alami
(PERHIBA).
Heloir, Mc., J.C. Fournior, L. Oziol, and R. Bessis. 1997. An improved
procedure for the propagation in vitro axillary-bud microcuting. Plant
Cell, Tissue, and Organ Culture 49: 223-225.
Heyne, 1987. Tumbuhan Berguna Tumbuhan I. Jakarta: Badan Penelitian
dan Pengembangan Kehutanan.
Huetterman, C.A. and J.E. Preece. 1993. Thidiazuron: A potent cytokinin
for woody plant tissue culture. Plant Cell, Tissue and Organ Culture
33: 105-119.
Khan, M.T.H., L. Lampronti, D. Martello, N. Bianchi, S. Jabbar, M.S.K.
Choudhuri, B.K. Datta, and R. Gambari. 2002. Identification of
pyrogallol as an anti-prolifertive compound present in extracts from
the medicinal plant Emblica medicinalis: effect on in-vitro cell
growth of human tumor cell lines. International Journal of Oncology
20: 187–192.
Kosahara J. 1995. Medical Herb Index in Indonesia (Indeks Tumbuh-
tumbuhan Obat di Indonesia). Jakarta: PT. Eisai Indonesia.
Lu, C.Y. 1993. The Use of thidiazuron in tissue culture in vitro. Cell
Development Biology 29: 92-96.
Mariska, I., D. Seswita dan E. Gati. 1994. Aplikasi kultur jaringan untuk
perbanyakan klonal tanaman kencur. Prosiding Seminar Nasional VI.
Tumbuhan Obat Indonesia. UNPAD Bandung. 2-3 Pebruari 1994.
Purnamaningsih, R dan E.Gati. 1999. Multiplikasi Tunas Temu giring
kultur in vitro. Buletin Plasma Nutfah 5 (1): 24-27.
Thorpe, T.A. 1987. Micropropagation of softwood and hardwoods. In
Proceding of The Seminar on Tissue Culture of Forest Species. Kuala
Lumpur, 15 –18 Juni 1987.