LAPAK MIKROFAR ALAT DAN BAHAN I. Alat 1. Inkubator 2. Korek api 3. Labu ukur 4. Lampu spiritus 5.

Ose bulat 6. Pipet volume 7. Rak tabung reaksi 8. Tabung reaksi

II. Bahan 1. Aquadest steril 2. Nutrient broth double strength 3. Nutrient broth single strength 4. Pelarut sedian uji (etanol 96%) 5. Sediaan UJi (kloramfenikol 250 mg) 6. Suspensi bakteri ( Escherichia coli) PROSEDUR Alat-alat yang telah disterilkan dan bahan-bahan yang diperlukan disiapkan. Lampu spiritus dinyalakan dengan korek api. Sediaan uji (kloramfenikol) dimasukkan ke dalam labu ukur dan dilarutkan dengan sedikit pelarutnya yaitu

etanol 96%. Kemudian ditambahkan aquadest steril ke dalam labu ukur hingga 100 mL. Konsentrasi larutan uji ini adalah sebesar 2500 g/mL. Dihitung konsentrasi pengenceran yang diinginkan pada masing-masing tabung besar dan kecil. Pengenceran larutan uji dilakukan pada tabung reaksi besar sebanyak dua kali dengan aquadest steril agar didapatkan konsentrasi 1000 g/mL dan 600 g/mL. Sebanyak 1 mL larutan kloramfenikol dimasukkan ke dalam tabung reaksi besar dan ditambahkan dengan 1,5 mL aquadest steril agar didapatkan konsentrasi pengenceran pertama yaitu sebesar 1000 g/mL. Kemudian dilakukan pengenceran kedua untuk mendapatkan konsentrasi sebesar 600 g/mL. Sebanyak 1,5 mL larutan kloramfenikol dimasukkan ke dalam tabung reaksi besar keduadan ditambahkan aquadst steril sebanyak 1 mL. Setelah itu, tabung reaksi kecil pertama diisi dengan 1 mL NB double strength dan kelima tabung reaksi kecil lainnya diisi dengan 1 mL NB single strength. Sebanyak 1 mL larutan uji konsentrasi 600 g/mL dipipet dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi kecil pertama, tabung ditutup, dan dikocok hingga homogen. Sebanyak 1 mL campuran dari tabung 1 dipipet dan dimasukkan ke tabung 2, lalu kocok hingga homogen. Prosedur tersebut diulangi hingga tabung ke 6 dan sebanyak 1 mL campuran dari tabung terakhir dibuang. Tambahkan sebanyak 1 ose suspensi bakteri ke dalam tabung ke 2 sampai ke 6. Lalu dibuat 1 kontrol positif yang berisi 1mL NB dan 1 ose suspensi bakteri dan 1 kontrol negatif yang berisi 1 mL NB saja. Semua langkah dilakukan dengan cara kerja aseptis, yaitu dengan didekatkan dengan sumber api lampu spiritus. Setelah itu, semua tabung reaksi kecil, kontrol negatif, dan kontrol positif diinkubasi pada suhu 37oC selama 18- 24 jam. Diamati kekeruhan yang terjadi dan dibandingkan dengan kontrol positif dan kontrol negatif. Setelah itu, ditentukan letak atau rentang MICnya.