ELEKTROFORESIS Elektroforesis adalah suatu cara analisis kimiawi yang didasarkan pada pergerakan molekul-molekul protein bermuatan di dalam

medan listrik. Pergerakan molekul dalam medan listrik dipengaruhi oleh bentuk, ukuran, besar muatan dan sifat kimia dari molekul. Pemisahan dilakukan berdasarkan perbedaan ukuran berat molekul dan muatan listrik yang dikandung oleh makro-molekul tersebut. Bila arus listrik dialirkan pada suatu medium atau matriks penyangga yang telah berisi protein plasma maka komponen-komponen protein tersebut akan mulai bermigrasi. Elektroforesis untuk makromolekul memerlukan matriks penyangga untuk mencegah terjadinya difusi karena timbulnya panas dari arus listrik yang digunakan. Banyak molekul biologi bermuatan listrik yang besarnya tergantung pada pH dan komposisi medium dimana molekul biologi tersebut terlarut. Bila berada dalam suatu medan listrik, molekul biologi yang bermuatan positif akan bermigrasi ke elektroda negatif dan sebaliknya. Prinsip inilah yang dipakai dalam elektroforesis untuk memisahkan molekul-molekul berdasarkan muatannya. Dalam hal ini protein diberi muatan negatif. agar. !arena ampel protein dimasukkan ke dalam slot atau sumuran pada ujung sampel ini memiliki eperti berat, mereka akan turun ke dasar D"#, Protein halnya dengan elektroforesis

sumuran.Elektroforesis

elektroforesis protein memungkinkan kita untuk memisahkan protein berdasarkan ukurannya dan memperlihatkan hasilnya. Elektroforesis gel memiliki beberapa komponen yang terdiri dari$ %. Comb$ digunakan untuk membentuk well atau sumuran pada gel. &. Tray$ digunakan untuk sebagai cetakan gel. '. Chamber$ digunakan sebagai wadah gel. (. umber listrik$ digunakan untuk memberi arus saat proses elektroforesis.

)ambar. #lat elektroforesis *angkah- langkah yang harus dilakukan ketika kita akan melakukan elektroforesis pada suatu bahan, misalnya protein, adalah$ %. +empersiapkan matriks penyangga berpori yang berupa gel. )el poliakrilamid ,P#)E- dan agarosa ,#)E- merupakan matriks penyangga yang banyak dipakai untuk separasi protein dan asam nukleat. .erdapat dua macam gel yang digunakan dalam elektroforesis, yaitu$ a. Stacking gel$ di dalam gel ini, molekul-molekul protein akan menata diri berdasarkan berat molekulnya ketika dialari oleh medan listrik. b. Separating gel$ di dalam gel ini molekul-molekul telah berada dalam posisi yang berurutan berdasarkan berat molekulnya. +olekul dengan berat yang lebih kecil akan cenderung aktif bergerak sehingga memposisikan diri di bagian bawah dari gel. !omposisi dari masing-masing gel adalah sebagai berikut$ Bahan #krilamid d-bis .ris dH&4 D %15 #P %15 .hemed Stacking gel ,/*'01 pH 2,0 (31 &%11 '1 '1 3 Separating gel ,/*%02& pH 0,0 %311 %'2% '1 '1 3

&. +emasukkan gel yang telah dibuat ke dalam tray atau cetakan gel, dengan posisi stacking gel di sebelah atas dan separating gel di sebelah bawah. etelah gel berada di dalam cetakan, pada bagian atas gel dibuat sumuran dengan menggunakan comb atau sisir pembuat sumuran.

)ambar. +encetak gel dan membuat sumuran '. +emasukkan gel yang telah siap ke dalam chamber atau ruang elektroforesis. !e dalam ruang elektroforesis kemudian juga dimasukkan running buffer.

)ambar. )el yang telah siap di dalam chamber (. +emasukkan protein yang akan dipisahkan molekulnya ke dalam sumuran sebanyak 3 /* - %1 /*.

)ambar. +emasukkan sampel ke dalam sumuran 3. Proses elektroforesis dijalankan dengan memberi daya listrik pada gel. Pemberian daya listrik disesuaikan dengan sampel yang akan digunakan. etelah terlihat bahwa pita-pita molekul protein mencapai titik yang berjarak 6 1,3cm dari ujung bawah gel, maka proses elektroforesis dihentikan.

)ambar. Hasil elektroforesis 2. #gar molekul protein tampak maka harus dilakukan pewarnaan, yaitu dengan mengambil lembaran gel yang telah dielektroforesis dan memasukkannya ke dalam larutan staining ,pewarna-, yaitu dapat berupa$ 7P8, methanol, dan asam asetat. #gar terlihat lebih jelas maka dilakukan destaining dengan larutan yang sama namun tanpa 7P8. Pewarnaan diulangi sebanyak &-' kali. 9. Bagian gel yang tidak terpakai dipotong. +olekul protein yang diinginkan kemudian diisolasi.