Pada Bab 7 kita memeriksa beberapa metode untuk memisahkan analit dari
potensial
interferents. Misalnya, dalam ekstraksi cair-cair analit dan interferent
pada awalnya hadir dalam fase cair tunggal. Sebuah fase, cairan bercampur
kedua diperkenalkan,
dan dua fase yang dicampur dengan gemetar. Selama proses ini
analit dan partisi interferents sendiri antara dua fase yang berbeda
luasan, mempengaruhi perpisahan mereka. Meskipun kekuatan teknik-teknik
pemisahan,
ada beberapa keterbatasan yang signifikan.
12A.1 Masalah dengan Talak Sederhana
Misalkan kita memiliki sampel yang mengandung analit dalam matriks yang
tidak sesuai
dengan metode analisis kami. Untuk menentukan konsentrasi analit yang
pertama kita memisahkan
itu dari matriks menggunakan, misalnya, ekstraksi cair-cair. Jika ada
analit tambahan, kita mungkin perlu menggunakan ekstraksi tambahan untuk
mengisolasi mereka dari
analit ini matriks. Untuk campuran kompleks analit ini dengan cepat menjadi
membosankan
proses.
Selain itu, sejauh mana kita dapat mempengaruhi pemisahan tergantung pada
distribusi rasio masing-masing spesies dalam sampel. Untuk memisahkan analit
dari matriks,
rasio distribusi harus secara signifikan lebih besar dari itu untuk semua
komponen lainnya
dalam matriks. Ketika rasio distribusi analit adalah sama dengan yang lain
spesies, maka pemisahan menjadi tidak mungkin. Sebagai contoh, mari kita
asumsikan bahwa
analit, A, dan matriks interferent, I, memiliki rasio distribusi 5 dan 0,5, masingmasing.
Dalam upaya untuk memisahkan analit dari matriks, sederhana cairekstraksi cair dilakukan dengan menggunakan volume yang sama dari sampel
dan ekstraksi yang cocok
pelarut. Setelah pengobatan yang diuraikan dalam Bab 7, mudah untuk
menunjukkan bahwa
ekstraksi tunggal menghilangkan sekitar 83% dari analit dan 33% dari interferent
tersebut.
Meskipun mungkin untuk menghapus 99% dari A dengan tiga ekstraksi, 70% dari
saya
juga dihapus. Bahkan, tidak ada kombinasi praktis jumlah ekstraksi
atau volume rasio sampel dan fase penggalian yang menghasilkan pemisahan
diterima
dari analit dan interferent oleh ekstraksi cair-cair sederhana.
12A.2 A Way Lebih baik Campuran terpisah
Masalah dengan ekstraksi sederhana adalah bahwa pemisahan hanya terjadi
aksi kapiler.
Mekanisme yang memisahkan zat terlarut menyediakan sarana ketiga untuk
karakteristik
pemisahan (Gambar 12.3). Pada adsorpsi kromatografi, zat terlarut memisahkan
berdasarkan pada kemampuan mereka untuk menyerap ke fase diam padat.
Dalam kromatografi partisi,
lapisan film tipis cairan dukungan solid berfungsi sebagai stasioner
fase. Pemisahan ini didasarkan pada perbedaan dalam partisi keseimbangan
zat terlarut antara fase diam cair dan fase gerak. Seimbang
fase yang terdiri dari pendukung padat dengan anionik kovalen terpasang
(misalnya,-SO3
-)
atau kationik (misalnya,-N (CH3) 3
+) Kelompok fungsional digunakan dalam pertukaran ion kromatografi.
Larutan ionik tertarik dengan fase diam oleh elektrostatik
kekuatan. Gel berpori digunakan sebagai fasa diam dalam ukuran-pengecualian
kromatografi,
di mana pemisahan karena perbedaan dalam ukuran zat terlarut. Besar
zat terlarut tidak dapat menembus ke dalam fase diam keropos dan begitu cepat
melewati kolom. Zat terlarut yang lebih kecil masuk ke dalam fase diam berpori,
meningkatkan waktu yang dihabiskan pada kolom. Tidak semua metode
pemisahan memerlukan
stasioner fase. Dalam pemisahan elektroforesis, misalnya, dikenakan zat terlarut
bermigrasi di bawah pengaruh medan potensial diterapkan. Perbedaan mobilitas
dari ion account untuk perpisahan mereka.
12B Umum Teori Kromatograf Kolom
Dari dua metode untuk membawa stasioner dan fase gerak ke dalam kontak,
yang lebih penting adalah kromatografi kolom. Dalam bagian ini kita
mengembangkan
sebuah teori umum bahwa kita mungkin berlaku untuk setiap bentuk
kromatografi kolom.
Dengan modifikasi yang tepat, teori ini juga dapat diterapkan untuk planar
kromatografi.
Sebuah percobaan kolom khas kromatografi diuraikan dalam Gambar 12.4.
Meskipun
Angka tersebut menggambarkan percobaan kromatografi cair-padat yang mirip
dengan
yang pertama kali digunakan oleh Tswett, desain kolom dan keadaan fisik
fase stasioner dan mobile dapat bervariasi. Sampel dimasukkan di bagian atas
kolom sebagai band sempit. Idealnya, profil konsentrasi awal zat terlarut adalah
persegi panjang
(Gambar 12.5a). Sebagai sampel bergerak menuruni kolom zat terlarut dimulai
untuk memisahkan, dan band terlarut individu mulai memperluas dan
mengembangkan
Gaussian profil (Angka 12.5b, c). Jika kekuatan dari setiap interaksi zat terlarut
dengan
fase diam cukup berbeda, maka zat terlarut terpisah menjadi individu
band (Gambar 12.5d). Kemajuan pemisahan kromatografi dimonitor
dengan detektor yang sesuai terletak di ujung kolom. Sebuah plot detektor
sinyal sebagai fungsi waktu atau volume fase gerak dielusi dikenal sebagai
kromatogram (Gambar 12.6) dan terdiri dari puncak untuk masing-masing
dipisahkan
terlarut band.
Sebuah puncak kromatografi dapat dicirikan dengan berbagai cara, dua di
antaranya adalah
ditunjukkan pada Gambar 12.7. Waktu retensi, tr, adalah waktu berlalu dari
pendahuluan
dari zat terlarut ke puncak maksimum. Waktu retensi juga dapat diukur
secara tidak langsung sebagai volume fase gerak eluting antara pengantar zat
terlarut ini
dan munculnya puncak maksimum zat terlarut itu. Hal ini dikenal sebagai
retensi
volume, Vr. Membagi volume retensi oleh laju aliran fase mobile, u, memberikan
waktu retensi.
Parameter penting kedua adalah lebar puncak kromatografi yang di
dasar, w. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 12.7, baseline width ditentukan
oleh persimpangan
dengan dasar garis singgung ditarik melalui infleksi poin pada
kedua sisi puncak kromatografi. Lebar dasar diukur dalam satuan
waktu atau volume, tergantung pada apakah waktu retensi atau volume retensi
kepentingan.
Selain puncak terlarut, Gambar 12.7 juga menunjukkan puncak kecil dielusi
segera setelah
sampel disuntikkan ke dalam fase gerak. Ini puncak hasil dari zat terlarut yang
bergerak melalui kolom pada tingkat yang sama sebagai fase gerak. Karena zat
terlarut
tidak berinteraksi dengan fase diam, mereka dianggap nonretained. Itu
waktu atau volume fasa gerak yang dibutuhkan untuk mengelusi komponen
nonretained disebut
kolom ini batal waktu, tm, atau volume tertentu.
12B.1 kromatograf Resolusi
Tujuan dari kromatografi adalah memisahkan sampel menjadi serangkaian
kromatografi
puncak, masing-masing mewakili satu komponen dari sampel. Resolusi adalah
kuantitatif ukuran tingkat pemisahan antara dua kromatografi
puncak, A dan B, dan didefinisikan sebagai
Seperti ditunjukkan dalam Gambar 12.8, tingkat pemisahan antara dua
kromatografi
puncak membaik dengan peningkatan R. Untuk dua puncak dengan ukuran yang
sama, resolusi
1,5 berkorespondensi dengan tumpang tindih di daerah hanya 0,13%. Karena
resolusi adalah kuantitatif
ukuran keberhasilan pemisahan itu, ia menyediakan cara yang berguna untuk
menentukan apakah suatu
perubahan kondisi eksperimental mengarah ke pemisahan yang lebih baik.
CONTOH 12.1
Dari persamaan 12.1 jelas bahwa resolusi dapat ditingkatkan baik dengan
meningkatkan
tr atau dengan menurunkan wa atau WB (Gambar 12.9). Kita dapat
meningkatkan tr dengan meningkatkan
interaksi zat terlarut dengan kolom atau dengan meningkatkan kolom
selektivitas untuk salah satu zat terlarut. Lebar puncak adalah efek kinetik
terkait dengan
zat terlarut, gerakan dalam dan di antara fase gerak dan fase diam.
Efeknya diatur oleh beberapa faktor yang secara kolektif disebut efisiensi kolom.
Masing-masing faktor ini dianggap lebih rinci dalam bagian berikut.
12B.2 Kapasitas Faktor
Distribusi zat terlarut, S, antara fase gerak dan fase diam dapat
diwakili oleh reaksi kesetimbangan
dan yang terkait partisi koefisien, KD, dan rasio distribusi, D,
dimana subskrip m dan s mengacu pada fase gerak dan fase diam, masingmasing.
Selama zat terlarut tidak terlibat dalam kesetimbangan tambahan baik
ponsel fase atau fase diam, koefisien partisi keseimbangan dan distribusi
rasio akan sama.
Kekekalan massa mensyaratkan bahwa mol total zat terlarut tetap konstan
seluruh pemisahan, sehingga
(Mol S) tot = (mol S) m + (mol S) s 12.3
Memecahkan persamaan 12.3 untuk mol zat terlarut dalam fase diam dan
menggantikannya
ke dalam persamaan 12.2 memberikan
di mana Vm dan Vs adalah volume dari fase mobile dan stasioner. Mengatur
ulang
dan memecahkan untuk fraksi zat terlarut dalam fase gerak, fm, memberikan
Perhatikan bahwa persamaan ini identik dengan yang menggambarkan ekstraksi
zat terlarut dalam
cair-cair ekstraksi (Persamaan 7,25 dalam Bab 7). Karena volume yang stasioner
dan fase gerak mungkin tidak diketahui, persamaan 12.4 disederhanakan
dengan membagi
baik pembilang dan penyebut dengan Vm, dengan demikian
12.5
dimana
12.6
adalah faktor kapasitas zat terlarut itu.
Faktor kapasitas Sebuah zat terlarut dapat ditentukan dari kromatogram dengan
mengukur
kolom ini batal waktu, tm, dan waktu retensi zat terlarut itu, tr (lihat Gambar
12.7).
Kecepatan rata-rata linier fase mobile, u, sama dengan panjang kolom, L,
dibagi dengan waktu yang dibutuhkan untuk mengelusi zat terlarut nonretained.
12.7
Dengan alasan yang sama, kecepatan rata-rata linier zat terlarut itu, v, adalah
12.8
Zat terlarut hanya dapat bergerak melalui kolom bila dalam fase gerak. -Nya
kecepatan linear rata, oleh karena itu, hanyalah produk dari rata-rata fase mobile
linear kecepatan dan fraksi zat terlarut dalam fase gerak.
v = 12,9 UFM
Menggantikan persamaan 12,5, 12,7, dan 12,8 ke dalam persamaan 12,9
memberikan
Akhirnya, memecahkan persamaan ini untuk k memberikan
12.10
mana tr dikenal sebagai waktu retensi yang disesuaikan.
12B.3 Kolom Selektivitas
Selektivitas relatif kolom kromatografi untuk sepasang zat terlarut diberikan oleh
faktor selektivitas, , yang didefinisikan sebagai
12.11
Identitas zat terlarut didefinisikan seperti zat terlarut bahwa A selalu memiliki
kecil
waktu retensi. Dengan demikian, faktor selektivitas adalah sama dengan 1 ketika
zat terlarut
terelusi dengan waktu retensi yang sama, dan lebih besar dari 1 saat tr, B lebih
besar
dibandingkan tr, A.
CONTOH 12.3
12B.4 Kolom Efisiensi
Pada awal pemisahan kromatografi zat terlarut menempati sempit
band lebar terbatas. Sebagai zat terlarut melewati kolom, lebar pita yang terus
meningkat dalam proses yang disebut pelebaran pita. Efisiensi kolom
menyediakan ukuran kuantitatif dari tingkat pelebaran pita.
Dalam model asli teoritis mereka kromatografi, Martin dan Synge2
diperlakukan kolom kromatografi seolah-olah itu terdiri dari bagian-bagian diskrit
pada
yang partisi dari zat terlarut antara diam dan fase gerak terjadi.
Mereka menyebut setiap bagian piring teoritis dan didefinisikan efisiensi kolom
dalam
hal jumlah pelat teoritis, N, atau ketinggian piring teoritis,
H; mana
12.12
Efisiensi Sebuah kolom membaik dengan peningkatan jumlah pelat teoritis
atau penurunan ketinggian piring teoritis.
Dengan asumsi profil Gaussian, tingkat pelebaran pita diukur oleh
varians atau deviasi standar dari puncak kromatografi. Ketinggian dari teoritis
plat didefinisikan sebagai varians per satuan panjang dari kolom
12.13
di mana varians, 2, memiliki satuan jarak kuadrat. Karena waktu retensi dan
lebar puncak biasanya diukur dalam hitungan detik atau menit, akan lebih
mudah untuk mengekspresikan
standar deviasi dalam satuan waktu, , dengan membagi oleh fase mobile
Rata-rata kecepatan linear.
12.14
Ketika puncak kromatografi memiliki bentuk Gaussian, lebarnya di baseline, w,
adalah
empat kali deviasi standar, .
w = 4 12.15
Menggabungkan persamaan 12.13 sampai 12.15 memberikan ketinggian piring
teoritis dalam
hal tr parameter mudah diukur kromatografi dan w.
12.16
Jumlah pelat teoretis dalam kolom kromatografi diperoleh dengan
menggabungkan
persamaan 12.12 dan 12.16.
12.17
Atau, jumlah pelat teoritis dapat diperkirakan sebagai
mana w1 / 2 adalah lebar puncak kromatografi pada setengah puncaknya.
Penting untuk diingat bahwa piring teoritis merupakan konstruk buatan dan
bahwa tidak ada piring tersebut ada di kolom kromatografi. Bahkan, jumlah
teoritis
piring tergantung pada kedua sifat-sifat kolom dan zat terlarut. Sebagai hasilnya,
jumlah pelat teoritis untuk kolom tidak tetap dan dapat bervariasi dari
terlarut ke larutan.
12B.5 Puncak Kapasitas
Pertimbangan penting lainnya adalah jumlah zat terlarut yang dapat diselesaikan
awal
pada kolom tertentu. Perkiraan kapasitas puncak kolom ini, nc, adalah
12.18
mana Vmin dan Vmax adalah volume terkecil dan terbesar dari fase mobile di
mana
terlarut dapat dielusi dan detected.3 kolom A dengan 10.000 pelat teoritis, untuk
meningkatkan kekuatan pelarut yang eluting. Ini adalah dikenal sebagai elusi
gradien.
12C.2 Menggunakan Selektivitas Kolom untuk Optimalkan Resolusi
Pendekatan kedua untuk meningkatkan resolusi untuk menyesuaikan alpha, .
Bahkan, ketika adalah hampir 1, biasanya tidak mungkin untuk meningkatkan
resolusi dengan menyesuaikan kB atau N. Perubahan sering memiliki efek
yang lebih dramatis pada resolusi dari kB . Misalnya,
mengubah 1,1-1,5 meningkatkan resolusi oleh 267%. Perubahan mungkin
jika kondisi kromatografi yang diubah dengan cara yang lebih selektif untuk
salah satu zat terlarut. Jika zat terlarut berpartisipasi dalam sekunder
kesetimbangan reaksi baik dalam fase diam atau bergerak, maka mungkin
mungkin untuk mengubah fase itu dengan cara yang selektif mengubah faktor
kapasitas zat terlarut itu. Sebagai contoh, Gambar 12.13a menunjukkan
bagaimana pH suatu fase gerak air dapat digunakan untuk mengontrol waktu
retensi, dan dengan demikian faktor kapasitas, untuk dua diganti asam benzoat.
Perubahan yang dihasilkan dalam ditunjukkan pada Gambar 12.13b. Dalam
gas kromatografi, penyesuaian biasanya dilakukan dengan mengubah
stasioner
fase, sedangkan merubah komposisi fase gerak yang digunakan dalam cairan
kromatografi.
12C.3 Menggunakan Efsiensi Kolom untuk Optimalkan Resolusi
Jika faktor kapasitas dan diketahui, maka persamaan 12.21 dapat digunakan
untuk menghitung jumlah pelat teoritis yang diperlukan untuk mencapai resolusi
yang diinginkan (Tabel 12.1). Misalnya, diberikan = 1,05 dan kB = 2.0,
resolusi 1,25 membutuhkan sekitar 24.800 teoritis piring. Jika kolom hanya
menyediakan 12.400 piring, setengah dari apa yang dibutuhkan, maka
pemisahan tidak mungkin. Bagaimana jumlah teoritis pelat dua kali lipat? Cara
termudah adalah dengan menggandakan panjang kolom, namun, ini juga
membutuhkan dua kali lipat dari waktu analisis. Sebuah pendekatan yang lebih
diinginkan adalah untuk memotong ketinggian piring teoritis dalam setengah,
memberikan resolusi yang diinginkan tanpa mengubah waktu analisis. Bahkan
lebih baik, jika H dapat menurun lebih dari 50%, hal itu juga mungkin untuk
mencapai resolusi yang diinginkan dengan bahkan lebih pendek analisis time
dengan mengurangi kB atau Untuk menentukan bagaimana ketinggian piring
teoritis dapat menurun, maka perlu untuk memahami faktor-faktor
eksperimental berkontribusi terhadap perluasan dari terlarut ini kromatografi
band. Beberapa teori pengobatan dari pelebaran pita telah diusulkan. Kami akan
mempertimbangkan satu pendekatan di mana ketinggian teoritis plate
ditentukan oleh empat kontribusi: beberapa jalan, difusi longitudinal,
perpindahan massa dalam fase diam, dan transfer massa dalam fase gerak.
Beberapa molekul zat terlarut Jalan melewati kolom kromatografi perjalanan jalur
terpisah yang mungkin berbeda panjangnya. Karena perbedaan-perbedaan
dalam jalur panjang, molekul zat terlarut disuntikkan secara bersamaan elusi
pada waktu yang berbeda. Kepala sekolah faktor ini variasi dalam panjang
lintasan adalah kemasan nonhomogen dari fase diam dalam kolom. Perbedaan
ukuran partikel dan kemasan konsistensi menyebabkan molekul zat terlarut
untuk perjalanan jalan panjang yang berbeda. Beberapa zat terlarut molekul
mengikuti jalan yang relatif lurus melalui kolom, tetapi yang lain mengikuti lagi
jalan, lebih berliku-liku (Gambar 12.14a). Kontribusi jalur ganda untuk ketinggian
piring teoritis, Hp, adalah Hp = 2 dp 12.23
di mana dp adalah diameter rata-rata bahan kemasan partikulat, dan adalah
konstan akuntansi untuk konsistensi kemasan. Berbagai kecil ukuran partikel dan
kemasan lebih konsisten menghasilkan nilai yang lebih kecil untuk . Perhatikan
bahwa untuk terbuka kolom tubular, yang tidak mengandung bahan kemasan,
Hp adalah 0. Difusi longitudinal Kontribusi kedua pelebaran pita hasilnya difusi
longitudinal zat terlarut dalam fase gerak. Bahkan jika fase gerak kecepatan
adalah 0, molekul zat terlarut terus bergerak, menyebar melalui ponsel fase.
Karena konsentrasi zat terlarut sangat besar di pusat kromatografi yang band,
lebih zat terlarut berdifusi ke tepi band maju dan belakang daripada berdifusi ke
tengah band. Hasil akhirnya adalah peningkatan lebar band (Gambar 12.14b).
Kontribusi difusi longitudinal untuk ketinggian teoritis piring, Hd, adalah di mana
Dm adalah koefisien difusi zat terlarut dalam fase gerak, u adalah ponsel
kecepatan fase, dan adalah konstanta yang berhubungan dengan kemasan
kolom. Pengaruh Hd pada ketinggian piring teoritis diminimalkan dengan
kecepatan mobile-fase yang tinggi. Karena koefisien difusi zat terlarut yang lebih
besar dalam fase gerak gas daripada di fase gerak cair, difusi longitudinal adalah
masalah yang lebih serius dalam gas kromatografi. Misal Pindahkan Dua
kontribusi akhir untuk hasil pelebaran pita dari terbatas waktu yang dibutuhkan
untuk sebuah molekul zat terlarut menyebar melalui fase diam dan fase gerak.
Sebuah pemisahan kromatografi terjadi karena zat terlarut berpindah fase
stasioner dan mobile. Untuk zat terlarut untuk berpindah dari satu tahap ke
tahap yang lain, pertama kali harus berdifusi ke antarmuka antara dua fase
(Gambar 12.14c)-a proses yang disebut perpindahan massa. Sebuah kontribusi
untuk band memperluas terjadi setiap kali Gerakan zat terlarut untuk antarmuka
tidak cukup cepat untuk menjaga keseimbangan yang benar distribusi zat
terlarut antara dua fase. Dengan demikian, zat terlarut molekul dalam fase gerak
bergerak lebih jauh ke bawah kolom dari yang diharapkan sebelum melewati ke
stasioner fase. Molekul zat terlarut dalam fase diam, di sisi lain, mengambil lebih
lama dari yang diharapkan untuk menyeberang ke fase gerak. Kontribusi massa
mentransfer dalam fase diam, Hs, dan transfer massa dalam fase gerak, Hm,
yang
diberikan oleh 12.25 12.26
mana df adalah ketebalan fase diam, dc adalah diameter kolom, Ds adalah
koefisien difusi zat terlarut dalam fase diam, q adalah terkait konstan ke kolom
kemasan materi, dan istilah yang tersisa sebagaimana ditentukan sebelumnya.
Sebagaimana ditunjukkan dalam persamaan 12.26, bentuk yang tepat dari Hm
tidak diketahui, meskipun fungsi ukuran partikel dan diameter kolom. Kontribusi
perpindahan massa ke ketinggian piring teoritis adalah terkecil untuk lambat
mobile-fase kecepatan, diameter lebih kecil bahan kemasan, dan film tipis dari
fase diam. Puting Ini Semua Bersama Ketinggian bersih piring teoritis merupakan
penjumlahan dari kontribusi dari masing-masing istilah dalam persamaan 12,2312,26, dengan demikian, H = Hp + HD + + Hs Hm 12,27
Sebuah bentuk alternatif dari persamaan ini adalah persamaan van Deemter
12.28
yang menekankan pentingnya laju aliran fase mobile. Dalam van Deemter
persamaan, A menyumbang beberapa jalur (Hp), B / u untuk difusi longitudinal
(Hd), dan Cu untuk perpindahan massa zat terlarut dalam fase stasioner dan
mobile (Hs dan Hm). Ada beberapa ketidaksepakatan pada persamaan yang
tepat untuk menggambarkan hubungan antara tinggi piring dan mobile-fase
velocity.4 Selain van Deemter persamaan (persamaan 12.28), persamaan lain
yang diusulkan oleh Hawkes mana Cs dan Cm adalah istilah perpindahan massa
untuk fase stasioner dan mobile masing. Sebuah persamaan ketiga ditemukan
oleh Knox. Semua tiga persamaan, dan lain-lain, telah digunakan untuk
mengkarakterisasi kromatografi sistem, dengan tidak ada persamaan tunggal
memberikan penjelasan terbaik di setiap case.5 Untuk meningkatkan jumlah
pelat teoritis tanpa meningkatkan panjang kolom, maka perlu untuk mengurangi
satu atau lebih dari istilah dalam persamaan 12,27 atau persamaan 12.28. Cara
termudah untuk melakukannya adalah dengan menyesuaikan kecepatan fase
gerak. Pada kecepatan mobile-fase rendah, efisiensi kolom dibatasi oleh difusi
longitudinal, sedangkan pada efisiensi kecepatan tinggi dibatasi oleh dua
perpindahan massa istilah. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 12.15 (yang
ditafsirkan dalam hal Persamaan 12,28), kecepatan mobile-fase optimal sesuai
dengan minimum sebidang H sebagai fungsi dari u.
Parameter yang tersisa mempengaruhi ketinggian piring teoritis ditentukan oleh
konstruksi kolom dan menyarankan bagaimana desain kolom dapat digunakan
untuk meningkatkan efisiensi. Sebagai contoh, baik Hp dan Hm adalah fungsi
dari ukuran partikel yang digunakan untuk bahan kemasan. Penurunan ukuran
partikel, Oleh karena itu, merupakan salah satu pendekatan untuk meningkatkan
efisiensi. Penurunan ukuran partikel terbatas, namun, oleh kebutuhan untuk
tekanan yang lebih besar untuk mendorong fase gerak melalui kolom. Salah satu
kemajuan yang paling penting dalam konstruksi kolom telah pembangunan
kolom tubular, atau kapiler terbuka yang tidak mengandung bahan kemasan (Dp
= 0). Sebaliknya, dinding interior sebuah kolom kapiler dilapisi dengan lapisan
tipis fase diam. Tidak adanya bahan kemasan berarti bahwa fase gerak dapat
bergerak melalui kolom dengan tekanan substansial kurang. Akibatnya, kapiler
kolom dapat diproduksi dengan panjang yang jauh lebih besar daripada yang
mungkin dengan dikemas kolom. Selain itu, tinggi plat berkurang karena Hp
istilah dalam persamaan 12,27 menghilang dan istilah Hm menjadi lebih kecil.
Kombinasi dari ketinggian yang lebih kecil untuk piring teoritis dan kolom lagi
mengarah ke perkiraan 100-kali lipat peningkatan jumlah pelat teoritis. Kolom
kapiler tidak tanpa kekurangan. Karena kolom kapiler jauh lebih sempit daripada
dikemas kolom, mereka memerlukan jumlah signifikan lebih kecil dari sampel.
Kesulitan dengan reproducibly menyuntikkan sampel kecil mempersulit
penggunaan kromatografi kapiler untuk pekerjaan kuantitatif. Pendekatan lain
untuk meningkatkan resolusi adalah dengan menggunakan film tipis stasioner
fase. Kapiler kolom yang digunakan dalam kromatografi gas dan fase terikat
zat terlarut antara fase gerak gas dan dilapisi fase cair stasioner pada
bahan kemasan padat. Untuk menghindari adsorpsi molekul zat terlarut pada
terpapar
bahan kemasan, yang menurunkan kualitas pemisahan, silanol permukaan
adalah
dinonaktifkan oleh silanizing dengan dimethyldichlorosilane dan mencuci dengan
alkohol
(Biasanya metanol) sebelum dilapisi dengan fase diam.
Baru-baru ini, dukungan yang solid yang terbuat dari manik-manik kaca atau
polimer fluorocarbon memiliki
telah diperkenalkan. Ini mendukung memiliki keuntungan menjadi lebih lembam
daripada diatomaceous
bumi.
Untuk meminimalkan jalur ganda dan kontribusi massa transfer ke ketinggian
pelat
(Persamaan 12.23 dan 12.26), bahan kemasan harus menjadi sekecil diameter
seperti praktis dan dimuat dengan film tipis dari fase diam (persamaan 12.25).
Dibandingkan dengan kolom kapiler, yang dibahas pada bagian berikutnya,
dikemas
kolom dapat menangani sejumlah besar sampel. Sampel dari 0.1-10 L secara
rutin
dianalisis dengan kolom dikemas. Efisiensi kolom biasanya beberapa ratus
hingga 2000 piring / m, menyediakan kolom dengan 3000-10,000 pelat teoritis.
Dengan asumsi
Vmax / Vmin adalah sekitar 50,3 kolom dikemas dengan 10.000 pelat teoritis
memiliki
kapasitas puncak (persamaan 12.18) dari
Kolom tubular Kolom kapiler kapiler, atau terbuka yang dibangun dari
leburan silika dilapisi dengan polimer pelindung. Kolom mungkin sampai 100 m
di
panjang dengan diameter sekitar 150-300 m (Gambar 12.17).
Kolom bore lebih besar dari 530 m, yang disebut kolom megabore, juga
tersedia.
Kolom kapiler terdiri dari dua jenis utama. Wall-dilapisi terbuka tubular
kolom (WCOT) mengandung lapisan tipis fase diam, biasanya 0,25 m tebal,
dilapisi di dinding bagian dalam kapiler itu. Untuk mendukung berlapis kolom
tubular terbuka
(Scot), lapisan tipis dari dukungan yang solid, seperti diatomaceous bumi,
dilapisi dengan
fase diam cair melekat pada dinding bagian dalam kapiler itu.
Kolom kapiler memberikan peningkatan yang signifikan dalam efisiensi
pemisahan.
Tekanan yang diperlukan untuk memindahkan fase gerak melalui kolom dikemas
membatasi nya
panjang. Tidak adanya bahan kemasan memungkinkan kolom kapiler menjadi
lebih lama dari
analit yang diekstraksi dari matriks berair dalam metilen klorida atau organik
pelarut, umumnya digunakan. Solid-fase ekstraksi juga digunakan untuk
menghapus
matriks yang tidak diinginkan konstituen.
Suatu pendekatan yang menarik untuk mengisolasi analit adalah microextraction
padat-fase
(SPME). Dalam satu pendekatan, yang diilustrasikan dalam Gambar 12.19, serat
leburan silika adalah
ditempatkan di dalam jarum suntik. Serat, yang dilapisi dengan film tipis organik,
seperti polidimetil siloksan, diturunkan ke dalam sampel dengan menekan
plunger
dan terkena sampel untuk waktu yang telah ditentukan. Serat tersebut kemudian
ditarik
ke jarum dan ditransfer ke kromatografi gas untuk analisis.
Analit Volatile juga dapat dipisahkan dari matriks cair menggunakan
pembersihan dan
perangkap atau sampling headspace. Dalam pembersihan dan perangkap (lihat
Gambar 7.19 di Bab 7),
gas inert, seperti Dia atau N2, ditiupkan melalui sampel, pembersihan volatile
senyawa. Senyawa ini menyapu melalui perangkap dikemas dengan penyerap
materi, seperti Tenax, di mana mereka dikumpulkan. Pemanasan perangkap dan
backflushing
dengan gas pembawa transfer senyawa atsiri dengan kromatografi gas. Di
headspace sampel sampel ditempatkan dalam botol tertutup dengan udara
diatasnya
ruang. Setelah memberikan waktu bagi analit stabil untuk menyeimbangkan
antara sampel
dan udara di atasnya, sebagian dari fase uap sampel oleh jarum suntik dan
disuntikkan
ke dalam kromatografi gas.
Desorpsi termal digunakan untuk melepaskan analit volatil dari padatan.
Sebagian dari
padat ditempatkan dalam tabung kaca berlapis, stainless steel, dan diadakan di
tempat dengan colokan dari
glass wool. Setelah membersihkan dengan gas pembawa untuk menghilangkan
O2 (yang dapat menyebabkan oksidasi
reaksi saat memanaskan sampel), sampel dipanaskan. Analit Volatile yang
menyapu dari tabung dengan gas pembawa dan dibawa ke GC. Untuk menjaga
efisiensi
zat terlarut sering terkonsentrasi di bagian atas kolom dengan pendingin kolom
inlet bawah suhu kamar, proses yang dikenal sebagai fokus kriogenik.
Analit nonvolatile harus kimia dikonversi menjadi turunan volatil
sebelum analisis. Misalnya, asam amino tidak cukup stabil untuk menganalisis
langsung oleh kromatografi gas. Bereaksi asam amino dengan 1-butanol dan
asetil klorida menghasilkan asam amino esterfied. Setelah pengobatan dengan
praktis.
12D.5 Suhu Control
Seperti disebutkan sebelumnya, kontrol suhu kolom adalah penting untuk
mencapai yang baik
pemisahan dalam kromatografi gas. Untuk alasan ini kolom ini terletak di dalam
thermostated oven. Dalam pemisahan isotermal kolom dipertahankan pada
konstan
temperatur, pilihan yang ditentukan oleh zat terlarut. Biasanya, temperatur
diatur sedikit di bawah bahwa untuk zat terlarut mendidih terendah sehingga
dapat meningkatkan
terlarut ini interaksi dengan fase diam.
Salah satu kesulitan dengan pemisahan isotermal adalah bahwa suhu
menguntungkan
pemisahan rendah didih zat terlarut dapat menyebabkan waktu retensi lama
untuk dapat diterima
didih yang lebih tinggi zat terlarut. Ovens mampu pemrograman temperatur
memberikan solusi
untuk masalah ini. Suhu awal ditetapkan di bawah bahwa untuk mendidih
terendah
zat terlarut. Sebagai pemisahan berlangsung, temperatur secara perlahan
meningkat pada baik
seragam tingkat atau dalam serangkaian langkah-langkah.
12D.6 Detektor untuk Kromatografi Gas
Bagian akhir dari kromatografi gas detektor. Detektor yang ideal memiliki
beberapa
diinginkan fitur, termasuk batas deteksi rendah, respon linear lebih luas
rentang konsentrasi zat terlarut (yang membuat pekerjaan lebih mudah
kuantitatif), daya tanggap
untuk semua zat terlarut atau selektivitas untuk kelas tertentu zat terlarut, dan
ketidakpekaan terhadap
perubahan laju aliran atau suhu.
Konduktivitas termal Detector Salah satu detektor gas awal kromatografi,
yang masih banyak digunakan, didasarkan pada konduktivitas termal fase
mobile (Gambar
12.21). Sebagai pintu keluar fase gerak kolom, lolos melalui renium tungstenkawat filamen. Hambatan listrik filamen tergantung pada suhu,
yang, pada gilirannya, tergantung pada konduktivitas termal dari fase gerak.
Karena
konduktivitas termal yang tinggi, helium adalah fase mobile pilihan saat
menggunakan
konduktivitas termal detektor (TCD).
Ketika zat terlarut mengelusi dari kolom, konduktivitas termal dari ponsel
fase menurun dan suhu filamen kawat, dan dengan demikian resistensi,
meningkat.
Sebuah sel referensi, yang hanya melalui fase gerak melewati, mengoreksi
setiap saat tergantung variasi laju alir, tekanan, atau listrik, semua
yang dapat menyebabkan perubahan dalam perlawanan filamen itu.
dengan
pentana dan ditentukan dengan kromatografi gas menggunakan detektor
menangkap elektron.
Karena volatilitas dan kehadiran di mana-mana di sebagian besar laboratorium,
kloroform dari lainnya
sumber adalah interferent signifikan.
Prosedur. Sampel dikumpulkan dalam 40-mL botol dengan sekrup-topi dilapisi
dengan
Teflon septum. Isi botol untuk meluap, memastikan bahwa tidak ada gelembung
udara.
Tambahkan bahan pereduksi asam askorbat (25 mg/40 mL) untuk memadamkan
lanjut
produksi trihalomethanes, dan tutup botol. Toko sampel pada suhu 4 C, dan
menganalisis
dalam waktu 14 hari.
Siapkan larutan stok standar untuk setiap trihalomethane dengan menempatkan
9,8 mL
metanol dalam labu volumetrik 10-mL. Biarkan labu ukur berdiri selama 10
menit, atau
sampai semua permukaan dibasahi dengan metanol kering. Timbang labu ukur
untuk
terdekat 0,1 mg. Menggunakan 100 - jarum suntik L , tambahkan 2 atau 3
tetes trihalomethane untuk
labu volumetrik, memungkinkan untuk turun langsung ke metanol. Reweigh yang
termos sebelum menipiskan volume dan pencampuran. Transfer ke vial 15 mLsekrup-topi dengan
Teflon liner, dan melaporkan konsentrasi dalam mikrogram per mililiter. Standar
larutan stok yang stabil selama 4 minggu bila disimpan pada suhu 4 C.
Siapkan standar multikomponen tunggal bekerja dari standar saham dengan
membuat pengenceran sesuai dengan metanol. Konsentrasi dalam bekerja yang
standar harus berada pada tingkat bahwa 20 - sampel L ditambahkan ke 100
mL air
memberikan standar kalibrasi yang respon untuk trihalomethane setiap dalam
25%
itu untuk sampel yang akan dianalisis.
Sampel dan standar kalibrasi dipersiapkan untuk analisis menggunakan 10-mL
jarum suntik. Tambahkan 10,00 mL setiap sampel dan standar untuk
memisahkan 14-mL sekrup-topi
vial yang mengandung 2,00 mL pentana. Kocok keras selama 1 menit untuk
mempengaruhi
pemisahan. Tunggu 60 s untuk tahap untuk memisahkan. Suntikkan 3,0-L
aliquot dari pentana yang
lapisan ke GC yang dilengkapi dengan diameter 2 mm-internal, 2-m kolom gelas
panjang
dikemas dengan fase stasioner skualan 10% pada bahan kemasan dari 80/100
jala Chromosorb WAW. Mengoperasikan kolom pada 67 C dan laju alir 25 mL /
menit.
Pertanyaan
1. Sebuah ekstraksi cair-cair sederhana jarang ekstrak 100% dari analit.
Bagaimana
ini perhitungan metode untuk ekstraksi lengkap?
Kedua sampel dan standar diperlakukan identik sehingga relatif mereka
konsentrasi tidak terpengaruh oleh ekstraksi lengkap.
2. Metode ini menggunakan kolom, dikemas pendek yang umumnya
menghasilkan miskin
resolusi puncak kromatografi. Ekstraksi cair-cair digunakan untuk
ekstrak trihalomethanes adalah nonselektif. Selain trihalomethanes, yang
cakupan luas dari konstituen organik nonpolar dan polar, seperti benzena dan
fenol, juga yang diekstraksi. Mengapa kehadiran senyawa lain
tidak mengganggu analisis ini?
Sebuah detektor menangkap elektron relatif tidak sensitif terhadap
nonhalogenated
senyawa, memberikan selektivitas tambahan.
3. Meskipun kloroform merupakan suatu analit, itu juga bisa interferent. Karena
nya
volatilitas, kloroform hadir di udara laboratorium dapat menyebar melalui
sampel botol ini Teflon septum, mengkontaminasi sampel. Bagaimana kita bisa
menentukan apakah sampel telah terkontaminasi dengan cara ini?
Sebuah kosong sampel trihalomethane bebas air dapat disimpan dengan sampel
pada
sepanjang waktu. Jika kosong sampel tidak menunjukkan bukti untuk kloroform,
maka kita dapat
aman berasumsi bahwa sampel juga bebas dari kontaminasi.
4. Mengapa perlu untuk mengumpulkan sampel sedemikian rupa sehingga tidak
ada ruang atas (lapisan
udara atasnya cairan) dalam botol sampel?
Karena volatilitas trihalomethanes, kehadiran headspace yang memungkinkan
untuk
kemungkinan hilangnya analit.
12D.10 Evaluasi
Skala analit Operasi hadir pada tingkatan dari komponen utama untuk ultratrace
telah berhasil ditentukan dengan kromatografi gas. Tergantung pada
pilihan detektor, sampel dengan analit besar dan kecil mungkin perlu diencerkan
sebelum analisis. Konduktivitas termal dan detektor ionisasi nyala dapat
menangani jumlah yang lebih besar dari analit, detektor lainnya, seperti detektor
penangkapan elektron
atau spektrometer massa, memerlukan sejumlah substansial lebih kecil dari
analit.
Meskipun volume sampel disuntikkan cukup kecil (sering kurang dari mikroL a),
jumlah materi yang tersedia dari mana volume injeksi diambil
harus cukup untuk menjadi sampel yang representatif. Untuk analit jejak, yang
sebenarnya