Anda di halaman 1dari 29

12A Sekilas Talak Analytical

Pada Bab 7 kita memeriksa beberapa metode untuk memisahkan analit dari
potensial
interferents. Misalnya, dalam ekstraksi cair-cair analit dan interferent
pada awalnya hadir dalam fase cair tunggal. Sebuah fase, cairan bercampur
kedua diperkenalkan,
dan dua fase yang dicampur dengan gemetar. Selama proses ini
analit dan partisi interferents sendiri antara dua fase yang berbeda
luasan, mempengaruhi perpisahan mereka. Meskipun kekuatan teknik-teknik
pemisahan,
ada beberapa keterbatasan yang signifikan.
12A.1 Masalah dengan Talak Sederhana
Misalkan kita memiliki sampel yang mengandung analit dalam matriks yang
tidak sesuai
dengan metode analisis kami. Untuk menentukan konsentrasi analit yang
pertama kita memisahkan
itu dari matriks menggunakan, misalnya, ekstraksi cair-cair. Jika ada
analit tambahan, kita mungkin perlu menggunakan ekstraksi tambahan untuk
mengisolasi mereka dari
analit ini matriks. Untuk campuran kompleks analit ini dengan cepat menjadi
membosankan
proses.
Selain itu, sejauh mana kita dapat mempengaruhi pemisahan tergantung pada
distribusi rasio masing-masing spesies dalam sampel. Untuk memisahkan analit
dari matriks,
rasio distribusi harus secara signifikan lebih besar dari itu untuk semua
komponen lainnya
dalam matriks. Ketika rasio distribusi analit adalah sama dengan yang lain
spesies, maka pemisahan menjadi tidak mungkin. Sebagai contoh, mari kita
asumsikan bahwa
analit, A, dan matriks interferent, I, memiliki rasio distribusi 5 dan 0,5, masingmasing.
Dalam upaya untuk memisahkan analit dari matriks, sederhana cairekstraksi cair dilakukan dengan menggunakan volume yang sama dari sampel
dan ekstraksi yang cocok
pelarut. Setelah pengobatan yang diuraikan dalam Bab 7, mudah untuk
menunjukkan bahwa
ekstraksi tunggal menghilangkan sekitar 83% dari analit dan 33% dari interferent
tersebut.
Meskipun mungkin untuk menghapus 99% dari A dengan tiga ekstraksi, 70% dari
saya
juga dihapus. Bahkan, tidak ada kombinasi praktis jumlah ekstraksi
atau volume rasio sampel dan fase penggalian yang menghasilkan pemisahan
diterima
dari analit dan interferent oleh ekstraksi cair-cair sederhana.
12A.2 A Way Lebih baik Campuran terpisah
Masalah dengan ekstraksi sederhana adalah bahwa pemisahan hanya terjadi

dalam satu arah.


Dalam ekstraksi cair-cair, misalnya, kita mengekstrak zat terlarut dari awal
fase ke fase penggalian. Pertimbangkan, sekali lagi, pemisahan analit
dan interferent matriks dengan rasio pembagian 5, dan 0,5 masing-masing.
Sebuah tunggal
cair-cair ekstraksi transfer 83% dari analit dan 33% dari interferent untuk
tahap penggalian (Gambar 12.1). Jika konsentrasi A dan I dalam sampel
yang identik, maka konsentrasi rasio mereka dalam tahap penggalian setelah
satu ekstraksi
adalah
Dengan demikian, ekstraksi tunggal meningkatkan pemisahan zat terlarut
dengan faktor 2,5. Sebagai
ditunjukkan pada Gambar 12.1, ekstraksi kedua sebenarnya mengarah ke
pemisahan miskin.
Setelah menggabungkan dua bagian dari tahap penggalian, rasio konsentrasi
menurun sampai
Kita dapat meningkatkan pemisahan dengan terlebih dahulu mengeluarkan zat
terlarut ke dalam penggalian
fase, dan kemudian mengeluarkan mereka kembali ke segar dari fase awal
(Gambar
12,2). Karena zat terlarut A memiliki rasio distribusi yang lebih besar, itu
diekstrak ke
besar sejauh selama ekstraksi pertama dan pada tingkat lebih rendah selama
ekstraksi kedua.
Dalam hal ini rasio konsentrasi akhir
dalam tahap penggalian secara signifikan lebih besar. Proses ekstraksi zat
terlarut
bolak-balik antara bagian segar dari dua tahap, yang disebut countercurrent
suatu
ekstraksi, dikembangkan oleh Craig di * 1940s.1 Fenomena yang sama
membentuk dasar kromatografi modern.
Pemisahan kromatografi yang dilakukan dengan terus melewati satu
sampel bebas fase, disebut fase gerak, selama fase sampel bebas kedua yang
tetap
tetap, atau stasioner. Sampel disuntikkan, atau ditempatkan, ke dalam fase
gerak.
Ketika bergerak dengan fase gerak, komponen sampel partisi sendiri
antara fase gerak dan fasa diam. Komponen-komponen yang distribusinya
Rasio nikmat fase diam memerlukan waktu lebih lama untuk melewati sistem.
Mengingat cukup waktu, dan fase stasioner dan mobile yang cukup, zat terlarut
dengan penilaian setara
rasio distribusi dapat dipisahkan.
Sejarah kromatografi modern dapat ditelusuri ke abad
ketika botani Rusia Mikhail Tswett (1872-1919) menggunakan kolom dikemas
dengan fase diam dari kalsium karbonat untuk pigmen berwarna terpisah dari

ekstrak tanaman. Sampel ditempatkan di bagian atas kolom dan dilakukan


melalui
fase stasioner menggunakan fase gerak petroleum eter. Sebagai sampel pindah
melalui kolom, pigmen dalam ekstrak tanaman dipisahkan menjadi berwarna
individu
band. Setelah pigmen yang memadai dipisahkan, kalsium karbonat
telah dihapus dari kolom, belah, dan pigmen ditemukan oleh ekstraksi.
Tswett bernama kromatograf teknik, menggabungkan kata Yunani
untuk "warna" dan "menulis." Ada sedikit minat dalam teknik Tswett-an sampai
1931
ketika kromatografi diperkenalkan kembali sebagai suatu teknik analitis untuk
biokimia
perpisahan. Pekerjaan perintis oleh Martin dan Synge di 19.412 didirikan
pentingnya
cair-cair kromatografi partisi dan menyebabkan pengembangan
Teori untuk pemisahan kromatografi, mereka dianugerahi Hadiah Nobel 1952 di
kimia untuk pekerjaan ini. Sejak itu, kromatografi dalam berbagai bentuk telah
menjadi
teknik yang paling penting dan banyak digunakan pemisahan. Lain pemisahan
metode,
seperti elektroforesis, efek pemisahan tanpa penggunaan stasioner
fase.
12A.3 Klasifkasi Pemisahan Analitik
Pemisahan analitis dapat diklasifikasikan dalam tiga cara: oleh keadaan fisik dari
fase gerak dan fase diam, dengan metode kontak antara ponsel
fase dan fase diam, atau dengan bahan kimia atau mekanisme fisik yang
bertanggung jawab
untuk memisahkan konstituen sampel. Fase gerak biasanya cairan atau
gas, dan fase diam, ketika hadir, adalah padat atau cair dilapisi film pada
permukaan padat. Teknik kromatografi yang sering disebut dengan daftar jenis
fase gerak, diikuti oleh jenis fase diam. Dengan demikian, dalam kromatografi
gas-cair
fase gerak adalah gas dan fase diam adalah cairan. Seandainya
satu fase diindikasikan, seperti dalam kromatografi gas, diasumsikan sebagai
ponsel
fase.
Dua pendekatan umum yang digunakan untuk membawa fase mobile dan
stasioner
fase ke dalam kontak. Dalam kromatograf kolom, fase diam ditempatkan
dalam kolom sempit melalui dimana fase gerak bergerak di bawah pengaruh
gravitasi atau tekanan. Fase diam adalah baik padat atau film, tipis cair
lapisan pada bahan kemasan partikel padat atau dinding kolom ini. Dalam planar
kromatografi mantel fase diam segelas datar, logam, atau piring plastik
dan ditempatkan dalam ruang berkembang. Sebuah reservoir yang mengandung
fase gerak
ditempatkan dalam kontak dengan fase diam, dan fase gerak bergerak dengan

aksi kapiler.
Mekanisme yang memisahkan zat terlarut menyediakan sarana ketiga untuk
karakteristik
pemisahan (Gambar 12.3). Pada adsorpsi kromatografi, zat terlarut memisahkan
berdasarkan pada kemampuan mereka untuk menyerap ke fase diam padat.
Dalam kromatografi partisi,
lapisan film tipis cairan dukungan solid berfungsi sebagai stasioner
fase. Pemisahan ini didasarkan pada perbedaan dalam partisi keseimbangan
zat terlarut antara fase diam cair dan fase gerak. Seimbang
fase yang terdiri dari pendukung padat dengan anionik kovalen terpasang
(misalnya,-SO3
-)
atau kationik (misalnya,-N (CH3) 3
+) Kelompok fungsional digunakan dalam pertukaran ion kromatografi.
Larutan ionik tertarik dengan fase diam oleh elektrostatik
kekuatan. Gel berpori digunakan sebagai fasa diam dalam ukuran-pengecualian
kromatografi,
di mana pemisahan karena perbedaan dalam ukuran zat terlarut. Besar
zat terlarut tidak dapat menembus ke dalam fase diam keropos dan begitu cepat
melewati kolom. Zat terlarut yang lebih kecil masuk ke dalam fase diam berpori,
meningkatkan waktu yang dihabiskan pada kolom. Tidak semua metode
pemisahan memerlukan
stasioner fase. Dalam pemisahan elektroforesis, misalnya, dikenakan zat terlarut
bermigrasi di bawah pengaruh medan potensial diterapkan. Perbedaan mobilitas
dari ion account untuk perpisahan mereka.
12B Umum Teori Kromatograf Kolom
Dari dua metode untuk membawa stasioner dan fase gerak ke dalam kontak,
yang lebih penting adalah kromatografi kolom. Dalam bagian ini kita
mengembangkan
sebuah teori umum bahwa kita mungkin berlaku untuk setiap bentuk
kromatografi kolom.
Dengan modifikasi yang tepat, teori ini juga dapat diterapkan untuk planar
kromatografi.
Sebuah percobaan kolom khas kromatografi diuraikan dalam Gambar 12.4.
Meskipun
Angka tersebut menggambarkan percobaan kromatografi cair-padat yang mirip
dengan
yang pertama kali digunakan oleh Tswett, desain kolom dan keadaan fisik
fase stasioner dan mobile dapat bervariasi. Sampel dimasukkan di bagian atas
kolom sebagai band sempit. Idealnya, profil konsentrasi awal zat terlarut adalah
persegi panjang
(Gambar 12.5a). Sebagai sampel bergerak menuruni kolom zat terlarut dimulai
untuk memisahkan, dan band terlarut individu mulai memperluas dan
mengembangkan
Gaussian profil (Angka 12.5b, c). Jika kekuatan dari setiap interaksi zat terlarut

dengan
fase diam cukup berbeda, maka zat terlarut terpisah menjadi individu
band (Gambar 12.5d). Kemajuan pemisahan kromatografi dimonitor
dengan detektor yang sesuai terletak di ujung kolom. Sebuah plot detektor
sinyal sebagai fungsi waktu atau volume fase gerak dielusi dikenal sebagai
kromatogram (Gambar 12.6) dan terdiri dari puncak untuk masing-masing
dipisahkan
terlarut band.
Sebuah puncak kromatografi dapat dicirikan dengan berbagai cara, dua di
antaranya adalah
ditunjukkan pada Gambar 12.7. Waktu retensi, tr, adalah waktu berlalu dari
pendahuluan
dari zat terlarut ke puncak maksimum. Waktu retensi juga dapat diukur
secara tidak langsung sebagai volume fase gerak eluting antara pengantar zat
terlarut ini
dan munculnya puncak maksimum zat terlarut itu. Hal ini dikenal sebagai
retensi
volume, Vr. Membagi volume retensi oleh laju aliran fase mobile, u, memberikan
waktu retensi.
Parameter penting kedua adalah lebar puncak kromatografi yang di
dasar, w. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 12.7, baseline width ditentukan
oleh persimpangan
dengan dasar garis singgung ditarik melalui infleksi poin pada
kedua sisi puncak kromatografi. Lebar dasar diukur dalam satuan
waktu atau volume, tergantung pada apakah waktu retensi atau volume retensi
kepentingan.
Selain puncak terlarut, Gambar 12.7 juga menunjukkan puncak kecil dielusi
segera setelah
sampel disuntikkan ke dalam fase gerak. Ini puncak hasil dari zat terlarut yang
bergerak melalui kolom pada tingkat yang sama sebagai fase gerak. Karena zat
terlarut
tidak berinteraksi dengan fase diam, mereka dianggap nonretained. Itu
waktu atau volume fasa gerak yang dibutuhkan untuk mengelusi komponen
nonretained disebut
kolom ini batal waktu, tm, atau volume tertentu.
12B.1 kromatograf Resolusi
Tujuan dari kromatografi adalah memisahkan sampel menjadi serangkaian
kromatografi
puncak, masing-masing mewakili satu komponen dari sampel. Resolusi adalah
kuantitatif ukuran tingkat pemisahan antara dua kromatografi
puncak, A dan B, dan didefinisikan sebagai
Seperti ditunjukkan dalam Gambar 12.8, tingkat pemisahan antara dua

kromatografi
puncak membaik dengan peningkatan R. Untuk dua puncak dengan ukuran yang
sama, resolusi
1,5 berkorespondensi dengan tumpang tindih di daerah hanya 0,13%. Karena
resolusi adalah kuantitatif
ukuran keberhasilan pemisahan itu, ia menyediakan cara yang berguna untuk
menentukan apakah suatu
perubahan kondisi eksperimental mengarah ke pemisahan yang lebih baik.
CONTOH 12.1
Dari persamaan 12.1 jelas bahwa resolusi dapat ditingkatkan baik dengan
meningkatkan
tr atau dengan menurunkan wa atau WB (Gambar 12.9). Kita dapat
meningkatkan tr dengan meningkatkan
interaksi zat terlarut dengan kolom atau dengan meningkatkan kolom
selektivitas untuk salah satu zat terlarut. Lebar puncak adalah efek kinetik
terkait dengan
zat terlarut, gerakan dalam dan di antara fase gerak dan fase diam.
Efeknya diatur oleh beberapa faktor yang secara kolektif disebut efisiensi kolom.
Masing-masing faktor ini dianggap lebih rinci dalam bagian berikut.
12B.2 Kapasitas Faktor
Distribusi zat terlarut, S, antara fase gerak dan fase diam dapat
diwakili oleh reaksi kesetimbangan
dan yang terkait partisi koefisien, KD, dan rasio distribusi, D,
dimana subskrip m dan s mengacu pada fase gerak dan fase diam, masingmasing.
Selama zat terlarut tidak terlibat dalam kesetimbangan tambahan baik
ponsel fase atau fase diam, koefisien partisi keseimbangan dan distribusi
rasio akan sama.
Kekekalan massa mensyaratkan bahwa mol total zat terlarut tetap konstan
seluruh pemisahan, sehingga
(Mol S) tot = (mol S) m + (mol S) s 12.3
Memecahkan persamaan 12.3 untuk mol zat terlarut dalam fase diam dan
menggantikannya
ke dalam persamaan 12.2 memberikan
di mana Vm dan Vs adalah volume dari fase mobile dan stasioner. Mengatur
ulang
dan memecahkan untuk fraksi zat terlarut dalam fase gerak, fm, memberikan
Perhatikan bahwa persamaan ini identik dengan yang menggambarkan ekstraksi
zat terlarut dalam
cair-cair ekstraksi (Persamaan 7,25 dalam Bab 7). Karena volume yang stasioner
dan fase gerak mungkin tidak diketahui, persamaan 12.4 disederhanakan
dengan membagi
baik pembilang dan penyebut dengan Vm, dengan demikian

12.5
dimana
12.6
adalah faktor kapasitas zat terlarut itu.
Faktor kapasitas Sebuah zat terlarut dapat ditentukan dari kromatogram dengan
mengukur
kolom ini batal waktu, tm, dan waktu retensi zat terlarut itu, tr (lihat Gambar
12.7).
Kecepatan rata-rata linier fase mobile, u, sama dengan panjang kolom, L,
dibagi dengan waktu yang dibutuhkan untuk mengelusi zat terlarut nonretained.
12.7
Dengan alasan yang sama, kecepatan rata-rata linier zat terlarut itu, v, adalah
12.8
Zat terlarut hanya dapat bergerak melalui kolom bila dalam fase gerak. -Nya
kecepatan linear rata, oleh karena itu, hanyalah produk dari rata-rata fase mobile
linear kecepatan dan fraksi zat terlarut dalam fase gerak.
v = 12,9 UFM
Menggantikan persamaan 12,5, 12,7, dan 12,8 ke dalam persamaan 12,9
memberikan
Akhirnya, memecahkan persamaan ini untuk k memberikan
12.10
mana tr dikenal sebagai waktu retensi yang disesuaikan.
12B.3 Kolom Selektivitas
Selektivitas relatif kolom kromatografi untuk sepasang zat terlarut diberikan oleh
faktor selektivitas, , yang didefinisikan sebagai
12.11
Identitas zat terlarut didefinisikan seperti zat terlarut bahwa A selalu memiliki
kecil
waktu retensi. Dengan demikian, faktor selektivitas adalah sama dengan 1 ketika
zat terlarut
terelusi dengan waktu retensi yang sama, dan lebih besar dari 1 saat tr, B lebih
besar
dibandingkan tr, A.
CONTOH 12.3
12B.4 Kolom Efisiensi
Pada awal pemisahan kromatografi zat terlarut menempati sempit
band lebar terbatas. Sebagai zat terlarut melewati kolom, lebar pita yang terus
meningkat dalam proses yang disebut pelebaran pita. Efisiensi kolom
menyediakan ukuran kuantitatif dari tingkat pelebaran pita.
Dalam model asli teoritis mereka kromatografi, Martin dan Synge2
diperlakukan kolom kromatografi seolah-olah itu terdiri dari bagian-bagian diskrit
pada
yang partisi dari zat terlarut antara diam dan fase gerak terjadi.
Mereka menyebut setiap bagian piring teoritis dan didefinisikan efisiensi kolom

dalam
hal jumlah pelat teoritis, N, atau ketinggian piring teoritis,
H; mana
12.12
Efisiensi Sebuah kolom membaik dengan peningkatan jumlah pelat teoritis
atau penurunan ketinggian piring teoritis.
Dengan asumsi profil Gaussian, tingkat pelebaran pita diukur oleh
varians atau deviasi standar dari puncak kromatografi. Ketinggian dari teoritis
plat didefinisikan sebagai varians per satuan panjang dari kolom
12.13
di mana varians, 2, memiliki satuan jarak kuadrat. Karena waktu retensi dan
lebar puncak biasanya diukur dalam hitungan detik atau menit, akan lebih
mudah untuk mengekspresikan
standar deviasi dalam satuan waktu, , dengan membagi oleh fase mobile
Rata-rata kecepatan linear.
12.14
Ketika puncak kromatografi memiliki bentuk Gaussian, lebarnya di baseline, w,
adalah
empat kali deviasi standar, .
w = 4 12.15
Menggabungkan persamaan 12.13 sampai 12.15 memberikan ketinggian piring
teoritis dalam
hal tr parameter mudah diukur kromatografi dan w.
12.16
Jumlah pelat teoretis dalam kolom kromatografi diperoleh dengan
menggabungkan
persamaan 12.12 dan 12.16.
12.17
Atau, jumlah pelat teoritis dapat diperkirakan sebagai
mana w1 / 2 adalah lebar puncak kromatografi pada setengah puncaknya.
Penting untuk diingat bahwa piring teoritis merupakan konstruk buatan dan
bahwa tidak ada piring tersebut ada di kolom kromatografi. Bahkan, jumlah
teoritis
piring tergantung pada kedua sifat-sifat kolom dan zat terlarut. Sebagai hasilnya,
jumlah pelat teoritis untuk kolom tidak tetap dan dapat bervariasi dari
terlarut ke larutan.
12B.5 Puncak Kapasitas
Pertimbangan penting lainnya adalah jumlah zat terlarut yang dapat diselesaikan
awal
pada kolom tertentu. Perkiraan kapasitas puncak kolom ini, nc, adalah
12.18
mana Vmin dan Vmax adalah volume terkecil dan terbesar dari fase mobile di
mana
terlarut dapat dielusi dan detected.3 kolom A dengan 10.000 pelat teoritis, untuk

Sebagai contoh, dapat menyelesaikan tidak lebih dari


jika minimum dan maksimum volume fase gerak di mana zat terlarut
dapat mengelusi adalah 1 mL dan 30 mL. Perkiraan ini menyediakan sebuah
keuntungan pada
jumlah zat terlarut yang mungkin dipisahkan dan dapat membantu untuk
mengecualikan dari pertimbangan
kolom yang tidak memiliki cukup pelat teoritis untuk memisahkan
kompleks campuran. Hanya karena kapasitas puncak teoritis kolom adalah lebih
besar
dari jumlah zat terlarut yang akan dipisahkan, bagaimanapun, tidak berarti
bahwa
Pemisahan akan layak. Dalam kebanyakan situasi kapasitas puncak yang
diperoleh kurang
dari nilai perkiraan karena karakteristik retensi dari beberapa zat terlarut
terlalu mirip dengan efek perpisahan mereka. Namun demikian, kolom dengan
lebih teoritis
piring, atau rentang yang lebih besar dari volume elusi mungkin, lebih cenderung
memisahkan campuran kompleks.
12B.6 nonideal Perilaku
Perlakuan kromatografi digariskan dalam Pasal 12B mengasumsikan bahwa zat
terlarut
mengelusi sebagai band simetris, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 12.7.
Ini perilaku ideal
terjadi ketika partisi koefisien zat terlarut itu, KD, adalah konstan untuk semua
konsentrasi
zat terlarut. Dalam beberapa situasi, puncak kromatografi menunjukkan perilaku
nonideal, memimpin
ke puncak asimetris, mirip dengan yang ditunjukkan pada Gambar 12.10.
Kromatografi The
puncaknya pada Gambar 12.10a adalah contoh dari "sepertinya" dan yang
paling sering hasilnya
overloading kolom dengan sampel. Gambar 12.10b, yang merupakan contoh dari
"Tailing," terjadi ketika beberapa situs pada fase diam mempertahankan zat
terlarut lebih
kuat dibandingkan situs lainnya.
Mengoptimalkan Pemisahan kromatografi
Sekarang kita telah mendefinisikan faktor kapasitas, selektivitas, dan efisiensi
kolom kita mempertimbangkan
mereka hubungan dengan resolusi kromatografi. Karena kita hanya tertarik
dalam resolusi antara zat terlarut mengelusi dengan waktu retensi yang sama,
adalah aman untuk mengasumsikan
bahwa lebar puncak untuk kedua zat terlarut yang kurang lebih sama.
Persamaan

12,1, oleh karena itu, ditulis sebagai


12.19
Memecahkan persamaan 12.17 untuk WB dan menggantikannya ke dalam
persamaan 12.19 memberikan
12.20
Waktu retensi untuk zat terlarut A dan B diganti dengan kapasitas masingmasing
faktor dengan menata ulang persamaan 12.10
tr = k tm tm +
dan menggantikannya ke dalam persamaan 12.20.
Akhirnya, faktor kapasitas Sebuah zat terlarut yang dihilangkan menggunakan
persamaan 12.11. Setelah menata ulang,
persamaan untuk resolusi antara puncak-puncak kromatografi untuk zat terlarut
A dan B adalah
12.21
Selain resolusi, faktor penting dalam kromatografi adalah jumlah
waktu yang dibutuhkan untuk mengelusi sepasang zat terlarut. Waktu yang
dibutuhkan untuk mengelusi zat terlarut B adalah
12.22
Persamaan 12.21 dan 12.22 memuat ketentuan-ketentuan yang berhubungan
dengan efisiensi kolom,
Kolom selektivitas, dan faktor kapasitas. Istilah-istilah ini dapat bervariasi, lebih
atau kurang mandiri,
untuk mendapatkan waktu penyelesaian dan analisis yang diinginkan untuk
sepasang zat terlarut.
Istilah pertama, yang merupakan fungsi dari jumlah pelat teoritis atau ketinggian
dari piring teoritis, menyumbang efek efisiensi kolom. Istilah kedua
merupakan fungsi dari dan menyumbang pengaruh selektivitas kolom.
Akhirnya,
Istilah ketiga di kedua persamaan adalah fungsi dari kB , dan rekening untuk
efek zat terlarut
B kapasitas faktor. Memanipulasi parameter untuk meningkatkan resolusi adalah
subjek
dari sisa bagian ini.
12C.1 Menggunakan Faktor Kapasitas untuk Optimalkan Resolusi
Salah satu cara paling sederhana untuk meningkatkan resolusi adalah untuk
menyesuaikan faktor kapasitas untuk zat terlarut B. Jika semua persyaratan
lainnya dalam persamaan 12.21 tetap konstan, peningkatan kB Meningkatkan
resolusi. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 12.11, Namun, efeknya paling besar
ketika faktor kapasitas asli kecil. Selain itu, peningkatan besar dalam kB tidak
menyebabkan proporsional lebih besar peningkatan resolusi. Sebagai contoh,
ketika nilai asli dari kB adalah 1, meningkatkan nilai untuk 10 memberikan
peningkatan 82% dalam resolusi; lebih lanjut m eningkat menjadi 15
memberikan peningkatan bersih dalam resolusi hanya 87,5%. Setiap

peningkatan dalam resolusi diperoleh kB meningkatkan umumnya datang pada


mengorbankan waktu analisis lebih lama. Hal ini juga ditunjukkan pada Gambar
12.11, yang menunjukkan perubahan relatif dalam waktu retensi sebagai fungsi
dari faktor kapasitas baru. Perhatikan bahwa minimal dalam kurva waktu retensi
terjadi ketika kB adalah sama dengan 2, dan waktu retensi meningkat di kedua
arah. Meningkatkan kB dari 2 sampai 10, misalnya, kira-kira dua kali lipat
waktu retensi B terlarut itu. Hubungan antara faktor kapasitas dan waktu analisis
dapat menguntungkan ketika pemisahan menghasilkan resolusi diterima dengan
kB besar. Dalam hal ini mungkin untuk menurunkan kB dengan sedikit
kerugian dalam resolusi sementara secara signifikan memperpendek waktu
analisis. Faktor kapasitas Sebuah zat terlarut adalah berbanding lurus dengan
rasio distribusi (persamaan 12,6), yang, pada gilirannya, sebanding dengan
distribusi kesetimbangan zat terlarut ini konstan. Untuk meningkatkan kB
tanpa secara signifikan mengubah , yang juga merupakan fungsi dari kB , perlu
untuk mengubah kondisi kromatografi dengan cara yang mengarah pada umum
meningkat, nonselektif dalam faktor kapasitas untuk kedua zat terlarut. Dalam
kromatografi gas, ini biasanya dilakukan dengan menurunkan suhu kolom. Pada
suhu yang lebih rendah tekanan uap zat terlarut ini menurun, memastikan
bahwa ia menghabiskan lebih banyak waktu dalam fase diam meningkatkan
faktor kapasitas. Pada kromatografi cair, mengubah kekuatan pelarut fase gerak
adalah cara termudah untuk mengubah faktor kapasitas zat terlarut itu. Ketika
fase gerak memiliki kekuatan pelarut yang rendah, zat terlarut menghabiskan
waktu secara proporsional lebih dalam fase diam, sehingga meningkatkan
kapasitas mereka faktor. Selain itu, Persamaan 12.6 menunjukkan bahwa faktor
kapasitas sebanding dengan volume fase diam. Meningkatkan volume stasioner
fase, karena itu, juga menyebabkan peningkatan kB . Menyesuaikan faktor
kapasitas untuk meningkatkan resolusi antara satu pasang zat terlarut dapat
mengakibatkan waktu retensi dapat diterima lama untuk zat terlarut lainnya.
Misalnya, meningkatkan resolusi untuk zat terlarut dengan waktu retensi singkat
dengan meningkatkan kB secara substansial dapat meningkatkan waktu
retensi untuk kemudian eluting zat terlarut. Di sisi lain, penurunan kB sebagai
sarana memperpendek waktu analisis keseluruhan dapat menyebabkan
hilangnya resolusi untuk larutan eluting dengan waktu retensi lebih pendek. Ini
Kesulitan yang dihadapi begitu sering bahwa itu dikenal sebagai elusi umum
Masalah (Gambar 12.12). Salah satu solusi untuk masalah elusi umum adalah
untuk membuat tambahan penyesuaian terhadap faktor kapasitas dari waktu ke
waktu. Jadi kromatografi, awal kondisi disesuaikan untuk meningkatkan resolusi
untuk zat terlarut dengan singkat waktu retensi. Sebagai pemisahan
berlangsung, kondisi kromatografi yang berubah dengan cara yang
meningkatkan laju elusi (mengurangi waktu retensi) untuk kemudian eluting zat
terlarut. Dalam kromatografi gas ini dilakukan dengan temperatur
pemrograman. Suhu awal kolom ini dipilih sedemikian rupa sehingga solut
pertama yang mengelusi sepenuhnya diselesaikan. Suhu kemudian meningkat,
baik terus menerus atau dalam langkah-langkah, untuk membawa off kemudian
eluting komponen dengan baik yang dapat diterima resolusi dan waktu analisis
yang wajar. Dalam kromatografi cair Efek yang sama dapat diperoleh dengan

meningkatkan kekuatan pelarut yang eluting. Ini adalah dikenal sebagai elusi
gradien.
12C.2 Menggunakan Selektivitas Kolom untuk Optimalkan Resolusi
Pendekatan kedua untuk meningkatkan resolusi untuk menyesuaikan alpha, .
Bahkan, ketika adalah hampir 1, biasanya tidak mungkin untuk meningkatkan
resolusi dengan menyesuaikan kB atau N. Perubahan sering memiliki efek
yang lebih dramatis pada resolusi dari kB . Misalnya,
mengubah 1,1-1,5 meningkatkan resolusi oleh 267%. Perubahan mungkin
jika kondisi kromatografi yang diubah dengan cara yang lebih selektif untuk
salah satu zat terlarut. Jika zat terlarut berpartisipasi dalam sekunder
kesetimbangan reaksi baik dalam fase diam atau bergerak, maka mungkin
mungkin untuk mengubah fase itu dengan cara yang selektif mengubah faktor
kapasitas zat terlarut itu. Sebagai contoh, Gambar 12.13a menunjukkan
bagaimana pH suatu fase gerak air dapat digunakan untuk mengontrol waktu
retensi, dan dengan demikian faktor kapasitas, untuk dua diganti asam benzoat.
Perubahan yang dihasilkan dalam ditunjukkan pada Gambar 12.13b. Dalam
gas kromatografi, penyesuaian biasanya dilakukan dengan mengubah
stasioner
fase, sedangkan merubah komposisi fase gerak yang digunakan dalam cairan
kromatografi.
12C.3 Menggunakan Efsiensi Kolom untuk Optimalkan Resolusi
Jika faktor kapasitas dan diketahui, maka persamaan 12.21 dapat digunakan
untuk menghitung jumlah pelat teoritis yang diperlukan untuk mencapai resolusi
yang diinginkan (Tabel 12.1). Misalnya, diberikan = 1,05 dan kB = 2.0,
resolusi 1,25 membutuhkan sekitar 24.800 teoritis piring. Jika kolom hanya
menyediakan 12.400 piring, setengah dari apa yang dibutuhkan, maka
pemisahan tidak mungkin. Bagaimana jumlah teoritis pelat dua kali lipat? Cara
termudah adalah dengan menggandakan panjang kolom, namun, ini juga
membutuhkan dua kali lipat dari waktu analisis. Sebuah pendekatan yang lebih
diinginkan adalah untuk memotong ketinggian piring teoritis dalam setengah,
memberikan resolusi yang diinginkan tanpa mengubah waktu analisis. Bahkan
lebih baik, jika H dapat menurun lebih dari 50%, hal itu juga mungkin untuk
mencapai resolusi yang diinginkan dengan bahkan lebih pendek analisis time
dengan mengurangi kB atau Untuk menentukan bagaimana ketinggian piring
teoritis dapat menurun, maka perlu untuk memahami faktor-faktor
eksperimental berkontribusi terhadap perluasan dari terlarut ini kromatografi
band. Beberapa teori pengobatan dari pelebaran pita telah diusulkan. Kami akan
mempertimbangkan satu pendekatan di mana ketinggian teoritis plate
ditentukan oleh empat kontribusi: beberapa jalan, difusi longitudinal,
perpindahan massa dalam fase diam, dan transfer massa dalam fase gerak.
Beberapa molekul zat terlarut Jalan melewati kolom kromatografi perjalanan jalur
terpisah yang mungkin berbeda panjangnya. Karena perbedaan-perbedaan
dalam jalur panjang, molekul zat terlarut disuntikkan secara bersamaan elusi

pada waktu yang berbeda. Kepala sekolah faktor ini variasi dalam panjang
lintasan adalah kemasan nonhomogen dari fase diam dalam kolom. Perbedaan
ukuran partikel dan kemasan konsistensi menyebabkan molekul zat terlarut
untuk perjalanan jalan panjang yang berbeda. Beberapa zat terlarut molekul
mengikuti jalan yang relatif lurus melalui kolom, tetapi yang lain mengikuti lagi
jalan, lebih berliku-liku (Gambar 12.14a). Kontribusi jalur ganda untuk ketinggian
piring teoritis, Hp, adalah Hp = 2 dp 12.23
di mana dp adalah diameter rata-rata bahan kemasan partikulat, dan adalah
konstan akuntansi untuk konsistensi kemasan. Berbagai kecil ukuran partikel dan
kemasan lebih konsisten menghasilkan nilai yang lebih kecil untuk . Perhatikan
bahwa untuk terbuka kolom tubular, yang tidak mengandung bahan kemasan,
Hp adalah 0. Difusi longitudinal Kontribusi kedua pelebaran pita hasilnya difusi
longitudinal zat terlarut dalam fase gerak. Bahkan jika fase gerak kecepatan
adalah 0, molekul zat terlarut terus bergerak, menyebar melalui ponsel fase.
Karena konsentrasi zat terlarut sangat besar di pusat kromatografi yang band,
lebih zat terlarut berdifusi ke tepi band maju dan belakang daripada berdifusi ke
tengah band. Hasil akhirnya adalah peningkatan lebar band (Gambar 12.14b).
Kontribusi difusi longitudinal untuk ketinggian teoritis piring, Hd, adalah di mana
Dm adalah koefisien difusi zat terlarut dalam fase gerak, u adalah ponsel
kecepatan fase, dan adalah konstanta yang berhubungan dengan kemasan
kolom. Pengaruh Hd pada ketinggian piring teoritis diminimalkan dengan
kecepatan mobile-fase yang tinggi. Karena koefisien difusi zat terlarut yang lebih
besar dalam fase gerak gas daripada di fase gerak cair, difusi longitudinal adalah
masalah yang lebih serius dalam gas kromatografi. Misal Pindahkan Dua
kontribusi akhir untuk hasil pelebaran pita dari terbatas waktu yang dibutuhkan
untuk sebuah molekul zat terlarut menyebar melalui fase diam dan fase gerak.
Sebuah pemisahan kromatografi terjadi karena zat terlarut berpindah fase
stasioner dan mobile. Untuk zat terlarut untuk berpindah dari satu tahap ke
tahap yang lain, pertama kali harus berdifusi ke antarmuka antara dua fase
(Gambar 12.14c)-a proses yang disebut perpindahan massa. Sebuah kontribusi
untuk band memperluas terjadi setiap kali Gerakan zat terlarut untuk antarmuka
tidak cukup cepat untuk menjaga keseimbangan yang benar distribusi zat
terlarut antara dua fase. Dengan demikian, zat terlarut molekul dalam fase gerak
bergerak lebih jauh ke bawah kolom dari yang diharapkan sebelum melewati ke
stasioner fase. Molekul zat terlarut dalam fase diam, di sisi lain, mengambil lebih
lama dari yang diharapkan untuk menyeberang ke fase gerak. Kontribusi massa
mentransfer dalam fase diam, Hs, dan transfer massa dalam fase gerak, Hm,
yang
diberikan oleh 12.25 12.26
mana df adalah ketebalan fase diam, dc adalah diameter kolom, Ds adalah
koefisien difusi zat terlarut dalam fase diam, q adalah terkait konstan ke kolom
kemasan materi, dan istilah yang tersisa sebagaimana ditentukan sebelumnya.
Sebagaimana ditunjukkan dalam persamaan 12.26, bentuk yang tepat dari Hm
tidak diketahui, meskipun fungsi ukuran partikel dan diameter kolom. Kontribusi
perpindahan massa ke ketinggian piring teoritis adalah terkecil untuk lambat
mobile-fase kecepatan, diameter lebih kecil bahan kemasan, dan film tipis dari
fase diam. Puting Ini Semua Bersama Ketinggian bersih piring teoritis merupakan

penjumlahan dari kontribusi dari masing-masing istilah dalam persamaan 12,2312,26, dengan demikian, H = Hp + HD + + Hs Hm 12,27
Sebuah bentuk alternatif dari persamaan ini adalah persamaan van Deemter
12.28
yang menekankan pentingnya laju aliran fase mobile. Dalam van Deemter
persamaan, A menyumbang beberapa jalur (Hp), B / u untuk difusi longitudinal
(Hd), dan Cu untuk perpindahan massa zat terlarut dalam fase stasioner dan
mobile (Hs dan Hm). Ada beberapa ketidaksepakatan pada persamaan yang
tepat untuk menggambarkan hubungan antara tinggi piring dan mobile-fase
velocity.4 Selain van Deemter persamaan (persamaan 12.28), persamaan lain
yang diusulkan oleh Hawkes mana Cs dan Cm adalah istilah perpindahan massa
untuk fase stasioner dan mobile masing. Sebuah persamaan ketiga ditemukan
oleh Knox. Semua tiga persamaan, dan lain-lain, telah digunakan untuk
mengkarakterisasi kromatografi sistem, dengan tidak ada persamaan tunggal
memberikan penjelasan terbaik di setiap case.5 Untuk meningkatkan jumlah
pelat teoritis tanpa meningkatkan panjang kolom, maka perlu untuk mengurangi
satu atau lebih dari istilah dalam persamaan 12,27 atau persamaan 12.28. Cara
termudah untuk melakukannya adalah dengan menyesuaikan kecepatan fase
gerak. Pada kecepatan mobile-fase rendah, efisiensi kolom dibatasi oleh difusi
longitudinal, sedangkan pada efisiensi kecepatan tinggi dibatasi oleh dua
perpindahan massa istilah. Seperti ditunjukkan dalam Gambar 12.15 (yang
ditafsirkan dalam hal Persamaan 12,28), kecepatan mobile-fase optimal sesuai
dengan minimum sebidang H sebagai fungsi dari u.
Parameter yang tersisa mempengaruhi ketinggian piring teoritis ditentukan oleh
konstruksi kolom dan menyarankan bagaimana desain kolom dapat digunakan
untuk meningkatkan efisiensi. Sebagai contoh, baik Hp dan Hm adalah fungsi
dari ukuran partikel yang digunakan untuk bahan kemasan. Penurunan ukuran
partikel, Oleh karena itu, merupakan salah satu pendekatan untuk meningkatkan
efisiensi. Penurunan ukuran partikel terbatas, namun, oleh kebutuhan untuk
tekanan yang lebih besar untuk mendorong fase gerak melalui kolom. Salah satu
kemajuan yang paling penting dalam konstruksi kolom telah pembangunan
kolom tubular, atau kapiler terbuka yang tidak mengandung bahan kemasan (Dp
= 0). Sebaliknya, dinding interior sebuah kolom kapiler dilapisi dengan lapisan
tipis fase diam. Tidak adanya bahan kemasan berarti bahwa fase gerak dapat
bergerak melalui kolom dengan tekanan substansial kurang. Akibatnya, kapiler
kolom dapat diproduksi dengan panjang yang jauh lebih besar daripada yang
mungkin dengan dikemas kolom. Selain itu, tinggi plat berkurang karena Hp
istilah dalam persamaan 12,27 menghilang dan istilah Hm menjadi lebih kecil.
Kombinasi dari ketinggian yang lebih kecil untuk piring teoritis dan kolom lagi
mengarah ke perkiraan 100-kali lipat peningkatan jumlah pelat teoritis. Kolom
kapiler tidak tanpa kekurangan. Karena kolom kapiler jauh lebih sempit daripada
dikemas kolom, mereka memerlukan jumlah signifikan lebih kecil dari sampel.
Kesulitan dengan reproducibly menyuntikkan sampel kecil mempersulit
penggunaan kromatografi kapiler untuk pekerjaan kuantitatif. Pendekatan lain
untuk meningkatkan resolusi adalah dengan menggunakan film tipis stasioner
fase. Kapiler kolom yang digunakan dalam kromatografi gas dan fase terikat

umum digunakan dalam HPLC memberikan penurunan yang signifikan di


ketinggian pelat akibat pengurangan dari istilah Hs dalam persamaan 12,27.
12D Gas Kromatografi
Dalam gas (GC) sampel kromatografi, yang mungkin gas atau cairan, disuntikkan
ke dalam aliran suatu fase gerak gas lembam (sering disebut gas pembawa). Itu
sampel dilakukan melalui kolom dikemas atau kapiler di mana komponen sampel
memisahkan berdasarkan kemampuan mereka untuk mendistribusikan sendiri
antara ponsel
dan fase stasioner. Sebuah diagram skematik dari kromatografi gas khas adalah
ditunjukkan pada Gambar 12,16.
12D.1 Handphone Tahap
Tahapan ponsel paling umum untuk GC adalah Dia, Ar, dan N2, yang memiliki
keuntungan
menjadi kimia inert terhadap kedua sampel dan fase stasioner.
Pilihan yang gas pembawa menggunakan sering ditentukan oleh detektor
instrumen.
Dengan kolom dikemas kecepatan ponsel-fase ini biasanya dalam kisaran
dari 25-150 mL / menit, laju aliran sedangkan untuk kolom kapiler 1-25 mL /
menit. Sebenarnya
laju aliran ditentukan dengan flow meter ditempatkan di outlet kolom.
12D.2 kromatografi Kolom
Sebuah kolom kromatografi menyediakan lokasi untuk fisik mempertahankan
stasioner
fase. Konstruksi kolom juga mempengaruhi jumlah sampel yang dapat
ditangani, efisiensi pemisahan, jumlah analit yang dapat dengan mudah
dipisahkan, dan jumlah waktu yang diperlukan untuk pemisahan. Keduanya
dikemas dan
kolom kapiler digunakan dalam kromatografi gas.
Kolom dikemas Sebuah kolom dikemas dibangun dari kaca, stainless steel,
tembaga atau aluminium dan biasanya 2-6 m panjang, dengan diameter internal
2-4 mm. Kolom diisi dengan partikel dukungan yang solid, dengan diameter
partikel
mulai 37-44 m sampai 250-354 m.
Dukungan partikulat yang paling banyak digunakan adalah tanah diatom, yang
terdiri
dari kerangka silika diatom. Partikel-partikel ini cukup berpori, dengan
permukaan
bidang 0,5-7,5 m2 / g, yang menyediakan kontak yang cukup antara fase gerak
dan stasioner fase. Ketika dihidrolisa, permukaan bumi diatomaceous
mengandung
kelompok silanol (-SiOH), menyediakan situs aktif yang menyerap molekul zat
terlarut dalam
gas-padat kromatografi.
Dalam kromatografi gas-cair (GLC), pemisahan didasarkan pada partisi

zat terlarut antara fase gerak gas dan dilapisi fase cair stasioner pada
bahan kemasan padat. Untuk menghindari adsorpsi molekul zat terlarut pada
terpapar
bahan kemasan, yang menurunkan kualitas pemisahan, silanol permukaan
adalah
dinonaktifkan oleh silanizing dengan dimethyldichlorosilane dan mencuci dengan
alkohol
(Biasanya metanol) sebelum dilapisi dengan fase diam.
Baru-baru ini, dukungan yang solid yang terbuat dari manik-manik kaca atau
polimer fluorocarbon memiliki
telah diperkenalkan. Ini mendukung memiliki keuntungan menjadi lebih lembam
daripada diatomaceous
bumi.
Untuk meminimalkan jalur ganda dan kontribusi massa transfer ke ketinggian
pelat
(Persamaan 12.23 dan 12.26), bahan kemasan harus menjadi sekecil diameter
seperti praktis dan dimuat dengan film tipis dari fase diam (persamaan 12.25).
Dibandingkan dengan kolom kapiler, yang dibahas pada bagian berikutnya,
dikemas
kolom dapat menangani sejumlah besar sampel. Sampel dari 0.1-10 L secara
rutin
dianalisis dengan kolom dikemas. Efisiensi kolom biasanya beberapa ratus
hingga 2000 piring / m, menyediakan kolom dengan 3000-10,000 pelat teoritis.
Dengan asumsi
Vmax / Vmin adalah sekitar 50,3 kolom dikemas dengan 10.000 pelat teoritis
memiliki
kapasitas puncak (persamaan 12.18) dari
Kolom tubular Kolom kapiler kapiler, atau terbuka yang dibangun dari
leburan silika dilapisi dengan polimer pelindung. Kolom mungkin sampai 100 m
di
panjang dengan diameter sekitar 150-300 m (Gambar 12.17).
Kolom bore lebih besar dari 530 m, yang disebut kolom megabore, juga
tersedia.
Kolom kapiler terdiri dari dua jenis utama. Wall-dilapisi terbuka tubular
kolom (WCOT) mengandung lapisan tipis fase diam, biasanya 0,25 m tebal,
dilapisi di dinding bagian dalam kapiler itu. Untuk mendukung berlapis kolom
tubular terbuka
(Scot), lapisan tipis dari dukungan yang solid, seperti diatomaceous bumi,
dilapisi dengan
fase diam cair melekat pada dinding bagian dalam kapiler itu.
Kolom kapiler memberikan peningkatan yang signifikan dalam efisiensi
pemisahan.
Tekanan yang diperlukan untuk memindahkan fase gerak melalui kolom dikemas
membatasi nya
panjang. Tidak adanya bahan kemasan memungkinkan kolom kapiler menjadi
lebih lama dari

kolom dikemas. Meskipun kolom kapiler sebagian besar mengandung lebih


banyak piring teoritis
per meter dari kolom dikemas, kontribusi lebih penting untuk mereka yang lebih
luas
Efisiensi adalah kemampuan untuk fashion kolom lagi. Misalnya, 50-m kapiler
kolom dengan 3000 pelat / m memiliki 150.000 pelat teoritis dan, dengan asumsi
Vmax / Vmin
adalah sekitar 50,3 kapasitas puncak hampir 380. Di sisi lain, dikemas
kolom dapat menangani sampel yang lebih besar. Karena diameternya lebih
kecil, kolom kapiler
memerlukan sampel yang lebih kecil, biasanya kurang dari 10-2 L.
12D.3 Stationary Phases
Selektivitas dalam kromatografi gas dipengaruhi oleh pilihan fase diam.
Elusi urutan GLC ditentukan terutama oleh titik didih zat terlarut dan, untuk
tingkat yang lebih rendah, oleh interaksi zat terlarut dengan fase diam. Zat
terlarut dengan
titik didih secara signifikan berbeda dengan mudah dipisahkan. Di sisi lain, dua
zat terlarut dengan titik didih yang sama dapat dipisahkan hanya jika fase diam
selektif
berinteraksi dengan salah satu dari zat terlarut. Secara umum, zat terlarut
nonpolar lebih
mudah dipisahkan dengan fase diam nonpolar, dan zat terlarut kutub lebih
mudah untuk
memisahkan menggunakan fase diam polar.
Kriteria utama untuk memilih fase diam adalah bahwa hal itu harus kimia
inert, termal stabil, volatilitas yang rendah, dan dari polaritas yang tepat untuk
zat terlarut yang dipisahkan. Meskipun ratusan fasa diam telah dikembangkan,
banyak yang tersedia secara komersial, sebagian besar pemisahan GLC
yang dicapai dengan mungkin 5-10 fase stasioner yang umum. Beberapa
ini tercantum dalam Tabel 12.2, dalam rangka meningkatkan polaritas, bersama
dengan fisik mereka
sifat dan aplikasi yang khas.
Fasa diam Banyak memiliki struktur umum ditunjukkan pada Gambar 12.18a. A
stasioner fase polidimetil siloksan, di mana semua R-kelompok adalah metil
kelompok (-CH3), adalah nonpolar dan sering membuat pilihan pertama yang
baik untuk pemisahan baru.
Urutan elusi saat menggunakan polidimetil siloksan biasanya mengikuti
Titik didih zat terlarut, dengan larutan mendidih rendah eluting pertama.
Mengganti beberapa
dari kelompok metil dengan substituen lain meningkatkan polaritas fase diam
itu,
memberikan selektivitas lebih besar. Dengan demikian, dalam 50% metil-50%
fenil polisiloksan,
50% dari kelompok-R adalah kelompok fenil (C6H5-), menghasilkan stasioner
sedikit polar
fase. Polaritas Meningkatkan disediakan dengan menggantikan trifluoropropyl

(-C3H6CF3) dan cyanopropyl (-C3H6CN) kelompok fungsional atau menggunakan


stasioner
fase berdasarkan glikol polietilen (Gambar 12.18b).
Masalah penting dengan semua fase diam cair adalah kecenderungan mereka
untuk
"Berdarah" dari kolom. Suhu batas yang tercantum dalam Tabel 12.2 adalah
mereka yang
meminimalkan hilangnya fase diam. Ketika dioperasikan di atas batas-batas ini,
kolom ini
berguna seumur hidup secara signifikan dipersingkat. Kolom kapiler dengan
berikat atau cross-linked fasa diam memberikan stabilitas superior. Fasa diam
Berikat yang melekat pada permukaan silika kapiler itu. Silang, yang dilakukan
setelah fase diam ditempatkan di kolom kapiler, link bersama-sama rantai
polimer yang terpisah, sehingga memberikan stabilitas yang lebih besar.
Karakteristik penting lain dari kromatografi gas
kolom adalah ketebalan fase diam. Seperti ditunjukkan dalam persamaan
12.25, efisiensi pemisahan meningkat dengan film tipis. Itu
ketebalan film yang paling umum adalah 0,25 m . Film tebal digunakan untuk
sangat volatile zat terlarut, seperti gas, karena mereka memiliki lebih besar
kapasitas untuk mempertahankan zat terlarut tersebut. Film tipis yang
digunakan ketika
memisahkan zat terlarut dari volatilitas yang rendah, seperti steroid.
Sebuah GLC Beberapa fasa diam bergantung pada selektivitas kimia. Yang paling
menonjol adalah
stasioner fase yang mengandung gugus fungsional kiral, yang dapat digunakan
untuk memisahkan
enantiomers.6
12D.4 Contoh Pendahuluan
Tiga pertimbangan menentukan bagaimana sampel diperkenalkan ke
kromatografi gas.
Pertama, semua konstituen disuntikkan ke dalam GC harus stabil. Kedua, analit
harus hadir pada konsentrasi yang sesuai. Akhirnya, menyuntikkan sampel
tidak harus menurunkan pemisahan.
Mempersiapkan kromatografi Contoh Gas Volatile dapat digunakan untuk analit
yang terpisah
dalam matriks yang kompleks. Tidak setiap sampel yang berpotensi dapat
dianalisis dengan GC,
Namun, bisa disuntikkan langsung ke dalam instrumen. Untuk bergerak melalui
kolom,
konstituen sampel harus stabil. Zat terlarut dari volatilitas yang rendah dapat
dipertahankan
oleh kolom dan terus mengelusi selama analisis sampel berikutnya.
Zat terlarut nonvolatile mengembun pada kolom, merendahkan kolom ini
kinerja.
Analit Volatile dapat dipisahkan dari matriks nonvolatile menggunakan salah satu
teknik ekstraksi dijelaskan dalam Bab 7. Cair-cair ekstraksi, di mana

analit yang diekstraksi dari matriks berair dalam metilen klorida atau organik
pelarut, umumnya digunakan. Solid-fase ekstraksi juga digunakan untuk
menghapus
matriks yang tidak diinginkan konstituen.
Suatu pendekatan yang menarik untuk mengisolasi analit adalah microextraction
padat-fase
(SPME). Dalam satu pendekatan, yang diilustrasikan dalam Gambar 12.19, serat
leburan silika adalah
ditempatkan di dalam jarum suntik. Serat, yang dilapisi dengan film tipis organik,
seperti polidimetil siloksan, diturunkan ke dalam sampel dengan menekan
plunger
dan terkena sampel untuk waktu yang telah ditentukan. Serat tersebut kemudian
ditarik
ke jarum dan ditransfer ke kromatografi gas untuk analisis.
Analit Volatile juga dapat dipisahkan dari matriks cair menggunakan
pembersihan dan
perangkap atau sampling headspace. Dalam pembersihan dan perangkap (lihat
Gambar 7.19 di Bab 7),
gas inert, seperti Dia atau N2, ditiupkan melalui sampel, pembersihan volatile
senyawa. Senyawa ini menyapu melalui perangkap dikemas dengan penyerap
materi, seperti Tenax, di mana mereka dikumpulkan. Pemanasan perangkap dan
backflushing
dengan gas pembawa transfer senyawa atsiri dengan kromatografi gas. Di
headspace sampel sampel ditempatkan dalam botol tertutup dengan udara
diatasnya
ruang. Setelah memberikan waktu bagi analit stabil untuk menyeimbangkan
antara sampel
dan udara di atasnya, sebagian dari fase uap sampel oleh jarum suntik dan
disuntikkan
ke dalam kromatografi gas.
Desorpsi termal digunakan untuk melepaskan analit volatil dari padatan.
Sebagian dari
padat ditempatkan dalam tabung kaca berlapis, stainless steel, dan diadakan di
tempat dengan colokan dari
glass wool. Setelah membersihkan dengan gas pembawa untuk menghilangkan
O2 (yang dapat menyebabkan oksidasi
reaksi saat memanaskan sampel), sampel dipanaskan. Analit Volatile yang
menyapu dari tabung dengan gas pembawa dan dibawa ke GC. Untuk menjaga
efisiensi
zat terlarut sering terkonsentrasi di bagian atas kolom dengan pendingin kolom
inlet bawah suhu kamar, proses yang dikenal sebagai fokus kriogenik.
Analit nonvolatile harus kimia dikonversi menjadi turunan volatil
sebelum analisis. Misalnya, asam amino tidak cukup stabil untuk menganalisis
langsung oleh kromatografi gas. Bereaksi asam amino dengan 1-butanol dan
asetil klorida menghasilkan asam amino esterfied. Setelah pengobatan dengan

asam trifluoroasetat memberikan volatil asam amino N-trifluoroacetyl-n-butyl


ester
derivatif.
Mengatur analit Konsentrasi Analytes hadir pada konsentrasi terlalu
kecil untuk memberikan kebutuhan sinyal yang memadai untuk terkonsentrasi
sebelum menganalisa. Sisi A
manfaat dari banyak metode ekstraksi yang diuraikan sebelumnya adalah bahwa
mereka sering berkonsentrasi
analit. Volatile bahan organik diisolasi dari sampel air oleh
purge dan perangkap, misalnya, dapat terkonsentrasi sebanyak 1000-kali lipat.
Ketika suatu analit terlalu terkonsentrasi, mudah untuk membebani kolom,
sehingga
serius merendahkan pemisahan. Selain itu, analit dapat hadir pada konsentrasi
tingkat yang melebihi respon linier detektor. Melarutkan sampel dalam
pelarut yang mudah menguap, seperti metilen klorida, membuat analisis yang
layak.
Penyuntikan Sampel Untuk menghindari kerugian precolumn dalam resolusi
karena band
memperluas, sampel ukuran yang cukup harus diperkenalkan dalam volume kecil
dari ponsel
fase. Contoh dari port injeksi sederhana untuk kolom dikemas ditunjukkan pada
Gambar 12.20. Suntikan tersebut dilakukan melalui septum karet menggunakan
jarum suntik mikroliter.
Blok injector dipanaskan sampai suhu yang setidaknya 50 C di atas
sampel komponen dengan titik didih tertinggi. Dengan cara ini penguapan yang
cepat dari
seluruh sampel dipastikan.
Kolom kapiler memerlukan penggunaan injector khusus untuk menghindari
overloading
kolom dengan sampel. Injector kapiler tersedia beberapa, yang paling umum
yang merupakan split / splitless injector.7 Ketika digunakan untuk injeksi
perpecahan hanya sekitar
0,1-1% dari sampel memasuki kolom, dengan sisanya dibawa sebagai limbah. Di
injeksi splitless, yang berguna untuk analisis jejak, suhu kolom
diselenggarakan pada 20-25 C di bawah titik didih pelarut itu. Sebagai pelarut
memasuki kolom,
mengembun, membentuk penghalang yang memerangkap zat terlarut. Setelah
waktu yang memungkinkan untuk
larutan berkonsentrasi, suhu kolom meningkat, dan pemisahan
dimulai. Sebuah injeksi splitless memungkinkan persentase yang lebih tinggi dari
zat terlarut untuk masuk
kromatografi kolom.
Untuk sampel yang terurai dengan mudah, suntikan on-kolom mungkin
diperlukan.
Dalam metode ini sampel disuntikkan pada kolom tanpa pemanasan. Kolom
Suhu ini kemudian meningkat, volatilizing sampel dengan suhu serendah sebagai

praktis.
12D.5 Suhu Control
Seperti disebutkan sebelumnya, kontrol suhu kolom adalah penting untuk
mencapai yang baik
pemisahan dalam kromatografi gas. Untuk alasan ini kolom ini terletak di dalam
thermostated oven. Dalam pemisahan isotermal kolom dipertahankan pada
konstan
temperatur, pilihan yang ditentukan oleh zat terlarut. Biasanya, temperatur
diatur sedikit di bawah bahwa untuk zat terlarut mendidih terendah sehingga
dapat meningkatkan
terlarut ini interaksi dengan fase diam.
Salah satu kesulitan dengan pemisahan isotermal adalah bahwa suhu
menguntungkan
pemisahan rendah didih zat terlarut dapat menyebabkan waktu retensi lama
untuk dapat diterima
didih yang lebih tinggi zat terlarut. Ovens mampu pemrograman temperatur
memberikan solusi
untuk masalah ini. Suhu awal ditetapkan di bawah bahwa untuk mendidih
terendah
zat terlarut. Sebagai pemisahan berlangsung, temperatur secara perlahan
meningkat pada baik
seragam tingkat atau dalam serangkaian langkah-langkah.
12D.6 Detektor untuk Kromatografi Gas
Bagian akhir dari kromatografi gas detektor. Detektor yang ideal memiliki
beberapa
diinginkan fitur, termasuk batas deteksi rendah, respon linear lebih luas
rentang konsentrasi zat terlarut (yang membuat pekerjaan lebih mudah
kuantitatif), daya tanggap
untuk semua zat terlarut atau selektivitas untuk kelas tertentu zat terlarut, dan
ketidakpekaan terhadap
perubahan laju aliran atau suhu.
Konduktivitas termal Detector Salah satu detektor gas awal kromatografi,
yang masih banyak digunakan, didasarkan pada konduktivitas termal fase
mobile (Gambar
12.21). Sebagai pintu keluar fase gerak kolom, lolos melalui renium tungstenkawat filamen. Hambatan listrik filamen tergantung pada suhu,
yang, pada gilirannya, tergantung pada konduktivitas termal dari fase gerak.
Karena
konduktivitas termal yang tinggi, helium adalah fase mobile pilihan saat
menggunakan
konduktivitas termal detektor (TCD).
Ketika zat terlarut mengelusi dari kolom, konduktivitas termal dari ponsel
fase menurun dan suhu filamen kawat, dan dengan demikian resistensi,
meningkat.
Sebuah sel referensi, yang hanya melalui fase gerak melewati, mengoreksi
setiap saat tergantung variasi laju alir, tekanan, atau listrik, semua
yang dapat menyebabkan perubahan dalam perlawanan filamen itu.

Sebuah detektor TCD memiliki keuntungan dari universalitas, karena


memberikan sinyal untuk
setiap zat terlarut yang termal konduktivitas berbeda dari helium. Keuntungan
lain
adalah bahwa hal itu memberikan respon yang linear untuk konsentrasi zat
terlarut pada rentang
104-105 lipat. Detektor juga tak rusak, sehingga memungkinkan
untuk mengisolasi zat terlarut dengan perangkap dingin postdetector.
Sayangnya, batas deteksi detektor konduktivitas termal adalah miskin
dibandingkan dengan detektor populer lainnya.
Ionisasi api Detector Pembakaran senyawa organik di
sebuah hasil api H2/air dalam api kaya elektron dan ion. Jika potensi
sekitar 300 V diterapkan di seluruh api, arus kecil
dari sekitar 10-9-10-12 A berkembang. Ketika diperkuat, saat ini
memberikan sinyal analitis yang berguna. Ini adalah dasar yang populer
detector pengionan nyala (FID), sebuah skema yang ditunjukkan pada
Gambar 12,22.
Kebanyakan atom karbon, kecuali yang berada di karbonil dan karboksilat
kelompok, menghasilkan sinyal, membuat FID detektor hampir universal
untuk senyawa organik. Sebagian besar senyawa anorganik dan gas banyak,
seperti H2O dan CO2, tidak dapat dideteksi, membuat detektor FID
ideal untuk analisis sampel lingkungan atmosfer dan berair.
Keuntungan dari FID termasuk batas deteksi yang kira-kira
02:58 lipat lebih kecil dari itu untuk konduktivitas termal
detektor dan respon linear lebih 106-107 lipat dalam jumlah
analit disuntikkan. Sampel, tentu saja, hancur ketika menggunakan ionisasi nyala
detektor.
Detector Tangkap Elektron Detektor menangkap elektron adalah contoh dari
selektif
detektor. Detektor terdiri dari emitor beta (partikel beta adalah elektron)
seperti 63Ni. Elektron yang dipancarkan mengionisasi fase gerak, yang biasanya
N2, sehingga
dalam produksi elektron tambahan yang menimbulkan arus listrik
antara sepasang elektroda (Gambar 12.23). Ketika zat terlarut dengan
penampang tinggi
untuk menangkap elektron mengelusi dari kolom, penurunan arus listrik.
Penurunan arus listrik berfungsi sebagai sinyal. ECD ini sangat selektif terhadap
zat terlarut dengan kelompok elektronegatif fungsional, seperti halogen, dan
nitro
kelompok dan relatif tidak sensitif terhadap amina, alkohol, dan hidrokarbon.
Meskipun
batas deteksi yang sangat baik, rentang linier yang membentang di atas hanya
sekitar dua perintah
besarnya.
Detektor lainnya Dua detektor tambahan serupa dalam desain dengan ionisasi
nyala

detektor. Dalam emisi detektor fotometri nyala optik dari fosfor


dan belerang menyediakan detektor selektif untuk senyawa yang mengandung
unsur-unsur.
Detektor termionik merespon nitrogen senyawa yang mengandung atau
fosfor.
Dua detektor yang umum, yang juga adalah instrumen mandiri, adalah Fourier
mengubah spektrofotometer inframerah (FT-IR) dan spektrometer massa (MS). Di
GC-FT-IR, limbah dari kolom mengalir melalui sel optik dibangun
dari tabung Pyrex 10-40 cm-dengan diameter 1-3 mm. Sel interior
permukaan dilapisi dengan lapisan mencerminkan emas. Beberapa refleksi dari
sumber radiasi seperti yang ditularkan melalui sel meningkatkan panjang jalur
optik
melalui sampel.
Dalam GC-MS buangan dari kolom diperkenalkan langsung ke spektrometer
massa ini
ionisasi ruang dengan cara yang menghilangkan sebagian besar carrier
gas. Dalam ruang ionisasi semua molekul (carrier gas yang tersisa, pelarut, dan
zat terlarut) yang terionisasi, dan ion yang dipisahkan oleh massa-untuk-biaya
mereka. Karena
zat terlarut masing mengalami fragmentasi karakteristik menjadi ion-ion yang
lebih kecil, yang
massa spektrum intensitas ion sebagai fungsi massa-untuk-biaya rasio
menyediakan kualitatif
informasi yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi zat terlarut.
Sebagai detektor GC, arus ion total untuk semua ion mencapai detektor biasanya
digunakan untuk mendapatkan kromatogram (Gambar 12.24a). Selektivitas
dapat dicapai
dengan memantau hanya khusus massa-untuk-biaya rasio (Gambar 12.24b),
proses yang disebut
selektif ion pemantauan. Sebuah spektrometer massa memberikan batas deteksi
yang sangat baik,
biasanya 25 sampai 100 fg pg, dengan kisaran linier mencakup lima lipat.
12D.7 Kuantitatif Aplikasi
Kromatografi gas secara luas digunakan untuk analisis beragam sampel di
lingkungan, klinik, farmasi, biokimia, forensik, ilmu makanan, dan
petrokimia laboratorium. Contoh aplikasi ini dibahas dalam berikut
bagian.
Analisis Lingkungan Salah satu aplikasi yang paling penting dari lingkungan
kromatografi gas adalah untuk analisis polutan organik banyak di udara, air,
dan air limbah. Analisis organik volatil dalam air minum, misalnya, adalah
dilakukan dengan pembersihan dan perangkap, diikuti dengan perpisahan
mereka pada kolom kapiler
dengan fase diam nonpolar. Sebuah ionisasi nyala, penangkapan elektron, atau
spektrometer massa dapat digunakan sebagai detektor. Gambar 12.25a
menunjukkan kromatogram yang

untuk analisis pestisida klor dalam air.


Analisis Klinis klinis, farmasi, dan laboratorium forensik sering menggunakan
kromatografi gas untuk analisis obat. Karena matriks sampel sering
tidak sesuai dengan kolom GC, analit umumnya harus diisolasi dengan ekstraksi.
Gambar 12.25b menunjukkan bagaimana kromatografi gas dapat digunakan
dalam pemantauan
alkohol dalam darah tingkat.
Consumer Goods Banyak rasa, rempah-rempah, dan wewangian dapat segera
dianalisis dengan GC,
menggunakan analisis headspace atau desorpsi termal. Makanan dan minuman
yang dianalisa
baik secara langsung maupun setelah ekstraksi yang sesuai. Volatile bahan,
seperti yang
ditemukan dalam rempah-rempah dan wewangian, sering dapat diperoleh oleh
sampling headspace. Gambar
12.25c menunjukkan analisis khas sampel wiski Scotch.
Minyak Industri Gas kromatografi cocok untuk analisis minyak bumi
produk, termasuk bensin, solar, dan minyak. Sebuah kromatogram khas untuk
analisis bensin tanpa timbal ditunjukkan pada Gambar 12.25d.
Kuantitatif Perhitungan Dalam analisis kuantitatif, ketinggian atau wilayah
dimana analit ini
puncak kromatografi digunakan untuk menentukan konsentrasi. Meskipun
puncak
ketinggian mudah untuk mengukur, pemanfaatannya sangat terbatas oleh
hubungan terbalik antara
tinggi dan lebar dari puncak kromatografi. Kecuali kondisi kromatografi
secara hati-hati dikendalikan untuk mempertahankan efisiensi kolom konstan,
variasi
tinggi puncak dapat mengurangi akurasi dan ketepatan analisis kuantitatif. A
pilihan yang lebih baik adalah dengan mengukur daerah di bawah puncak
kromatografi dengan mengintegrasikan suatu
perekam. Karena luas puncak berbanding lurus dengan jumlah analit
yang disuntikkan, perubahan efisiensi kolom tidak akan mempengaruhi akurasi
atau ketepatan
analisis.
Kurva kalibrasi biasanya dibangun dengan menganalisis serangkaian eksternal
standar dan merencanakan sinyal detektor sebagai fungsi dari konsentrasi
mereka dikenal.
Selama volume injeksi identik untuk setiap standar dan sampel,
kalibrasi kurva disiapkan dengan cara ini memberikan baik hasil yang akurat dan
tepat.
Sayangnya, bahkan di bawah kondisi terbaik, suntikan ulangan dapat memiliki
volume
yang berbeda sebanyak 5% dan sering dapat secara substansial lebih buruk.
Untuk ini
Alasannya, kerja kuantitatif memerlukan akurasi dan presisi tinggi dicapai

menggunakan standar internal.


CONTOH 12,5
12D.8 kualitatif Aplikasi
Kromatografi gas juga dapat digunakan untuk tujuan kualitatif. Bila
menggunakan
FT-IR atau spektrometer massa sebagai detektor, informasi spektral yang
tersedia
sering dapat digunakan untuk mengidentifikasi zat terlarut individu.
Dengan detektor nonspectroscopic konvensional, metode lain harus digunakan
untuk
mengidentifikasi zat terlarut. Satu pendekatan adalah untuk sampel spike
dengan menambahkan alikuot dari
dicurigai analit dan mencari peningkatan ketinggian puncak. Waktu retensi juga
dapat dibandingkan dengan nilai yang terukur untuk standar, dengan ketentuan
bahwa operasi
kondisi identik. Karena sulitnya tepat sesuai kondisi seperti itu,
tabel waktu retensi adalah utilitas yang terbatas.
Indeks retensi Kovat menyediakan salah satu solusi untuk pencocokan retensi
kali. Dalam kondisi isotermal, retensi disesuaikan saat alkana yang normal
meningkatkan logaritmis. Kovat mendefinisikan indeks retensi, I, untuk alkana
normal seperti
100 kali jumlah atom karbon, dengan demikian, indeks retensi adalah 400 untuk
butana
dan 500 untuk pentana. Untuk menentukan indeks retensi untuk senyawa lain,
yang
waktu retensi yang disesuaikan diukur relatif terhadap yang untuk alkana biasa
eluting
sebelum dan sesudah. Misalnya, senyawa eluting antara butana dan pentana
memiliki indeks retensi antara 400 dan 500. Nilai yang tepat untuk senyawa
retensi indeks, ICPD, diberikan sebagai
12.29
di mana x adalah eluting alkana normal sebelum senyawa, dan x + 1 adalah
normal
alkana eluting setelah kompleks.
CONTOH 12,6
12D.9 Perwakilan Metode
Meskipun setiap metode kromatografi gas memiliki pertimbangan sendiri yang
unik, yang
mengikuti deskripsi penentuan trihalomethanes dalam air minum
memberikan contoh instruktif dari prosedur yang khas.
Metode 12,1 Penentuan trihalomethanes di Minum Water9
Deskripsi Metode. Trihalomethanes, seperti kloroform (CHCl3) dan
bromoform (CHBr3), ditemukan di perairan yang paling diklorinasi. Karena
kloroform adalah
dicurigai karsinogen, penentuan trihalomethanes di minum publik
persediaan air cukup penting. Dalam metode ini trihalomethanes
CHCl3, CHBrCl2, CHBr2Cl, dan CHBr3 yang terisolasi oleh ekstraksi cair-cair

dengan
pentana dan ditentukan dengan kromatografi gas menggunakan detektor
menangkap elektron.
Karena volatilitas dan kehadiran di mana-mana di sebagian besar laboratorium,
kloroform dari lainnya
sumber adalah interferent signifikan.
Prosedur. Sampel dikumpulkan dalam 40-mL botol dengan sekrup-topi dilapisi
dengan
Teflon septum. Isi botol untuk meluap, memastikan bahwa tidak ada gelembung
udara.
Tambahkan bahan pereduksi asam askorbat (25 mg/40 mL) untuk memadamkan
lanjut
produksi trihalomethanes, dan tutup botol. Toko sampel pada suhu 4 C, dan
menganalisis
dalam waktu 14 hari.
Siapkan larutan stok standar untuk setiap trihalomethane dengan menempatkan
9,8 mL
metanol dalam labu volumetrik 10-mL. Biarkan labu ukur berdiri selama 10
menit, atau
sampai semua permukaan dibasahi dengan metanol kering. Timbang labu ukur
untuk
terdekat 0,1 mg. Menggunakan 100 - jarum suntik L , tambahkan 2 atau 3
tetes trihalomethane untuk
labu volumetrik, memungkinkan untuk turun langsung ke metanol. Reweigh yang
termos sebelum menipiskan volume dan pencampuran. Transfer ke vial 15 mLsekrup-topi dengan
Teflon liner, dan melaporkan konsentrasi dalam mikrogram per mililiter. Standar
larutan stok yang stabil selama 4 minggu bila disimpan pada suhu 4 C.
Siapkan standar multikomponen tunggal bekerja dari standar saham dengan
membuat pengenceran sesuai dengan metanol. Konsentrasi dalam bekerja yang
standar harus berada pada tingkat bahwa 20 - sampel L ditambahkan ke 100
mL air
memberikan standar kalibrasi yang respon untuk trihalomethane setiap dalam
25%
itu untuk sampel yang akan dianalisis.
Sampel dan standar kalibrasi dipersiapkan untuk analisis menggunakan 10-mL
jarum suntik. Tambahkan 10,00 mL setiap sampel dan standar untuk
memisahkan 14-mL sekrup-topi
vial yang mengandung 2,00 mL pentana. Kocok keras selama 1 menit untuk
mempengaruhi
pemisahan. Tunggu 60 s untuk tahap untuk memisahkan. Suntikkan 3,0-L
aliquot dari pentana yang
lapisan ke GC yang dilengkapi dengan diameter 2 mm-internal, 2-m kolom gelas
panjang
dikemas dengan fase stasioner skualan 10% pada bahan kemasan dari 80/100
jala Chromosorb WAW. Mengoperasikan kolom pada 67 C dan laju alir 25 mL /

menit.
Pertanyaan
1. Sebuah ekstraksi cair-cair sederhana jarang ekstrak 100% dari analit.
Bagaimana
ini perhitungan metode untuk ekstraksi lengkap?
Kedua sampel dan standar diperlakukan identik sehingga relatif mereka
konsentrasi tidak terpengaruh oleh ekstraksi lengkap.
2. Metode ini menggunakan kolom, dikemas pendek yang umumnya
menghasilkan miskin
resolusi puncak kromatografi. Ekstraksi cair-cair digunakan untuk
ekstrak trihalomethanes adalah nonselektif. Selain trihalomethanes, yang
cakupan luas dari konstituen organik nonpolar dan polar, seperti benzena dan
fenol, juga yang diekstraksi. Mengapa kehadiran senyawa lain
tidak mengganggu analisis ini?
Sebuah detektor menangkap elektron relatif tidak sensitif terhadap
nonhalogenated
senyawa, memberikan selektivitas tambahan.
3. Meskipun kloroform merupakan suatu analit, itu juga bisa interferent. Karena
nya
volatilitas, kloroform hadir di udara laboratorium dapat menyebar melalui
sampel botol ini Teflon septum, mengkontaminasi sampel. Bagaimana kita bisa
menentukan apakah sampel telah terkontaminasi dengan cara ini?
Sebuah kosong sampel trihalomethane bebas air dapat disimpan dengan sampel
pada
sepanjang waktu. Jika kosong sampel tidak menunjukkan bukti untuk kloroform,
maka kita dapat
aman berasumsi bahwa sampel juga bebas dari kontaminasi.
4. Mengapa perlu untuk mengumpulkan sampel sedemikian rupa sehingga tidak
ada ruang atas (lapisan
udara atasnya cairan) dalam botol sampel?
Karena volatilitas trihalomethanes, kehadiran headspace yang memungkinkan
untuk
kemungkinan hilangnya analit.
12D.10 Evaluasi
Skala analit Operasi hadir pada tingkatan dari komponen utama untuk ultratrace
telah berhasil ditentukan dengan kromatografi gas. Tergantung pada
pilihan detektor, sampel dengan analit besar dan kecil mungkin perlu diencerkan
sebelum analisis. Konduktivitas termal dan detektor ionisasi nyala dapat
menangani jumlah yang lebih besar dari analit, detektor lainnya, seperti detektor
penangkapan elektron
atau spektrometer massa, memerlukan sejumlah substansial lebih kecil dari
analit.
Meskipun volume sampel disuntikkan cukup kecil (sering kurang dari mikroL a),
jumlah materi yang tersedia dari mana volume injeksi diambil
harus cukup untuk menjadi sampel yang representatif. Untuk analit jejak, yang
sebenarnya

jumlah analit disuntikkan sering dalam kisaran picogram. Menggunakan


trihalomethane tersebut
analisis dijelaskan dalam Metode 12.1 sebagai contoh, sebuah 3.0- injeksi L
dari sampel air yang mengandung 1 g / L dari CHCl3 dapat disamakan dengan
15 pg dari CHCl3 (dengan asumsi
ekstraksi lengkap CHCl3).
Akurasi Keakuratan metode kromatografi gas bervariasi secara substansial
dari sampel ke sampel. Untuk sampel rutin, akurasi dari 1-5% yang umum.
Untuk analit hadir pada tingkat konsentrasi yang sangat rendah, untuk sampel
dengan kompleks
matriks, atau untuk sampel yang membutuhkan pengolahan yang signifikan
sebelum analisis, akurasi
mungkin secara substansial lebih miskin. Dalam analisis untuk trihalomethanes
dijelaskan dalam
Metode 12,1, misalnya, kesalahan determinate sebesar 25% adalah possible.9
Presisi Ketepatan analisis kromatografi gas termasuk kontribusi
dari sampling, persiapan sampel, dan instrumen. Standar relatif
penyimpangan karena bagian kromatografi gas analisis biasanya
1-5%, meskipun dapat secara signifikan lebih tinggi. Kepala keterbatasan presisi
adalah detektor kebisingan dan reproduksibilitas volume injeksi. Dalam
kuantitatif
bekerja, penggunaan standar internal mengkompensasi setiap variabilitas dalam
injeksi
volume.
Sensitivitas Dalam kromatografi gas analisis sensitivitas, (kemiringan kalibrasi
kurva) ditentukan oleh karakteristik detektor. Dari kepentingan yang lebih besar
untuk
pekerjaan kuantitatif kisaran linier detektor, yaitu kisaran konsentrasi
di mana kurva kalibrasi linier. Detektor dengan kisaran linier yang luas, seperti
konduktivitas detektor panas dan detektor ionisasi nyala, dapat digunakan untuk
menganalisis
sampel dari berbagai konsentrasi tanpa menyesuaikan kondisi operasi. Detektor
lainnya,
seperti detektor penangkapan elektron, memiliki rentang linier jauh lebih sempit.
Selektivitas Karena menggabungkan pemisahan dengan analisis, kromatografi
gas
menyediakan selektivitas yang sangat baik. Dengan menyesuaikan kondisi itu
biasanya mungkin untuk merancang
pemisahan sehingga analit terelusi sendiri. Selektivitas tambahan dapat
disediakan dengan menggunakan detektor, seperti detektor penangkapan
elektron, yang tidak merespon
untuk semua senyawa.
Waktu, Biaya, dan Peralatan waktu Analisis dapat bervariasi dari beberapa menit
untuk sampel
mengandung hanya beberapa konstituen untuk lebih dari satu jam untuk lebih
kompleks

sampel. Persiapan sampel awal secara substansial dapat meningkatkan analisis


waktu. Instrumentasi untuk rentang kromatografi gas di harga dari murah (a
beberapa ribu dolar) untuk mahal (lebih dari $ 50.000). Semakin mahal model
dilengkapi untuk kolom kapiler dan mencakup berbagai pilihan injeksi dan
lebih canggih detektor, seperti spektrometer massa. Kolom dikemas biasanya
biaya $ 50 - $ 200, dan biaya kolom kapiler biasanya $ 200 - $ 1000.
12E High-Performance Liquid Chromatography