Uji Fitokimia dan aktivitas antimikroba dari akar dan ekstrak tangkai Eurycoma

longifolia Jack (Tongkat Ali).

Sejak zaman dahulu, tanaman obat merupakan sumber kekayaan antimikroba.
Sayangnya, pada tahun ini, daya tahan antimikroba menjadi soal utama kesehatan
masyarakat secara global. Hal ini dilaporan bahwa lebih dari 70% mikroba patogen
ditemukan di rumah sakit US. Mikroba tersebut melawan kurang dari satu antibiotik yang
menyebabkan kematian lebih dari 14.000 pasien tiap tahunnya dari infeksi nosomical. Oleh
karena itu, diperlukan suatu pendekatan yang efektif tentang penemuan dan pengembangan
antimicroba baru yang alami. Salah satu tumbuhan yang dapat dijadikan antimikroba adalah
Eurycoma longifolia Jack. Eurycoma longifolia Jack merupakan tumbuhan tradisional yang
terkenal di Malaysia. Penelitian sebelumnya menyatakan bahwa Eurycoma longifolia Jack
memiliki kandungan quassionid, alkaloid, glikosida, eurycomanol, eurycomaone dan
sebagainya (Bedir et al., 2003) yang dapat berperan sebagai antimalaria, antitumor,
antikanker, antidiabetes, aphrodisiac, axiolytic dan antiparasit (Rashid et al., 2009).
Penelitian ini dilakukan untuk megetahui aktivitas mikroba dari ekstrak batang dan akar
Eurycoma longifolia Jack pada berbagai konsentrasi terhadap beberapa spesies bakteri
patogen.
MATERIAL DAN METODE
Material
Batang dan akar E. longifolia yang diperoleh dari Delima Jelita Herbal Pvt. Ltd dari Alor
Setar, Kedah, Malaysia. Perusahaan ini adalah pemasok bahan baku herbal terbesar di
Malaysia. Bahan baku diperoleh dalam bentuk bubuk, yang disiapkan dengan mesin
penggiling serbuk kayu sebelum pengeringan di tempat teduh/kering angin. Keuntungan
bahan tanaman ini adalah hasil hutan Kabupaten Sik, Kedah, Malaysia seperti yang
ditunjukkan pada kemasan.
Persiapan Ekstraksi
Secara singkat 100 g masing-masing bubuk sampel (batang dan akar) direndam
terpisah dalam 500 ml petroleum eter, kloroform, etil asetat, aseton dan metanol selama 24
jam pada 40 oC pada waterbath. Ekstrak yang diperoleh disaring dengan menggunakan
kertas saring Whatman No 1. Setiap Filtrat dipekatkan pada tekanan tereduksi pada rotary
evaporator sampai massa kental emas diperoleh. Ekstrak siap disimpan pada 4 oC untuk
analisis lebih lanjut.
Uji Fitokimia
Ekstrak dianalisis untuk kehadiran senyawa fenolik, flavonoid terpenoid, saponin, alkaloid,
glikosida jantung dan protein.
o
o

Uji Ferric Chloride

Setiap ekstrak (50 mg) dilarutkan dalam 5 ml air suling dan beberapa tetes 5% besi
klorida ditambahkan. Warna hitam kebiruan menunjukkan adanya senyawa fenolik.
Uji Alkaline Reagent
Beberapa tetes natrium hidroksida ditambahkan ke dalam ekstrak untuk memberikan
warna kuning yang intens. Hilangnya warna setelah penambahan asam encer
hidroklorida menunjukkan adanya flavonoid.
Uji Salkowskis
Ekstrak (0,5 mg) ditambahkan dengan beberapa ml kloroform diikuti oleh asam sulfat
pekat sampai membentuk lapisan. Warna coklat kemerahan pada permukaan
menunjukkan adanya terpenoid.
Uji Froth
Setiap ekstrak (50 mg) diencerkan dengan air suling dan membuat hingga 20 ml.
Suspensi terguncang dalam silinder lulus selama 15 menit. Pengembangan dua
lapisan cm busa menunjukkan adanya saponin.
Uji Wagners

Sekitar 50 mg ekstrak diaduk dengan sedikit ml asam klorida encer dan disaring.
Kemudian, beberapa tetes reagen Wagner ditambahkan di sisi tabung reaksi.
Pembentukan endapan coklat kemerahan menunjukkan adanya alkaloid.
Uji Keller-Kilianis
Sejumlah kecil ekstrak (50 mg) diperlakukan dengan 2 ml asam glacial acetic yang
mengandung satu tetes besi klorida 5%, diikuti dengan penambahan 1 ml asam sulfat
pekat. Sebuah cincin coklat pada permukaan adalah karakteristik gula cardenolide
deoxy. Penampilan cincin ungu di bawah cincin coklat dan cincin kehijauan di lapisan
asam asetat menunjukkan adanya glikosida jantung.
Uji Biuret
Setiap ekstrak (50 mg) diencerkan dengan air suling dan diperlakukan dengan Biuret
reagen. Munculnya warna pink menunjukkan adanya protein.

Studi Antimikroba
o Mikroorganisme
Sifat antimikroba dari E. longifolia Jack diselidiki terhadap satu spesies jamur; A. niger,
tiga gram bakteri negatif; Escherichia coli, Salmonella virchow, P. aeruginosa dan dua
bakteri gram positif; B. cereus, S. aureus. Sebanyak enam mikroorganisme patogen
yang diperoleh dari koleksi kultur Laboratorium Mikrobiologi, Universitas Malaysia
Kelantan, Kampus Jeli, Kelantan, Malaysia.
o

Inokulasi Mikroorganisme
Kultur murni mikroorganisme yang melesat ke piring nutrien agar (Merck) dan
diinkubasi pada suhu 37 oC selama 24 jam. Koloni terisolasi yang aseptik dipindahkan
ke kaldu nutrisi (Merck) dan diinkubasi lagi pada suhu 37 oC selama 24 jam. Densitas
optik bakteri diinkubasi diukur menggunakan spektrofotometer UV (Shimadzu, Jepang)
pada panjang gelombang 600 nm. Densitas optik yang diinginkan (OD) diperoleh
sebagai 0,45 - 0,55, mewakili 0,5 standar McFarland (108 CFU/mL). Kekeruhan setiap
patogen disesuaikan dengan kisaran yang diinginkan oleh dilusi jika nilai-nilai OD lebih
tinggi dari standar atau diinkubasi lagi jika nilai OD kurang dari standar.

Persiapan Sampel
Aktivitas antimikroba ekstrak diuji pada berbagai konsentrasi mulai 12,50 - 200,00 g /
l. Ekstrak batang dan akar E. longifolia dari lima pelarut yang dipilih ditimbang dan
dilarutkan dalam DMSO untuk mempersiapkan larutan stok konsentrasi 200,00 g/l.
Larutan stok yang sama telah digunakan untuk mendapatkan konsentrasi yang
diinginkan dari 100,00 g /l, 50.00 g/l, 25.00 g/l dan 12.50 g/l dengan metode
pengenceran serial menggunakan persamaan, c1v1 = c2v2, dimana c = konsentrasi dan
v = volume.

Uji Difusi Disc

The petroleum eter, kloroform, etil asetat, aseton dan metanol ekstrak batang dan akar
E. longifolia disaring untuk aktivitas antimikroba dengan menggunakan metode difusi
cakram (Zaidan et al., 2005). Dalam uji setiap suspensi inokulum (10 8 CFU/mL)
tersebar merata di seluruh nutrien agar permukaan dengan steril koleksi swab.
Kemudian, cakram diameter 6 mm yang disterilkan pada suhu 121 oC selama 15 menit
dan diisi dengan kontrol positif (ampisilin, 20 g/l) dan larutan ekstrak E. longifolia
pada berbagai konsentrasi. Cakram yang penuh dikeringkan selama 3-5 menit dan
dikeluarkan ke permukaan piring inokulasi dengan forsep yang telah dipanaskan.
Setiap disc ditekan ke bawah dengan kuat untuk memastikan kontak yang lengkap
dengan permukaan nutrien agar. Cakram ditempatkan sesuai tempatnya dan tidak
direlokasi setelah dikontakkan dengan permukaan agar-agar. Pelat kemudian diberi
label dan diinkubasi pada 37 oC selama 24 jam untuk kedua bakteri dan jamur
(Espinel-Ingroff et al, 2007;. Zaidan et al, 2005.). Hasil diukur dan dinyatakan dalam
zona inhibisi (ZI) bakteri dan jamur yang tumbuh di setiap disk dalam milimeter sebagai
aktivitas rendah (1-6 mm), aktivitas moderat (7-10 mm), aktivitas tinggi (11-15 mm),
aktivitas yang sangat tinggi (16-20 mm), tidak ada aktivitas (-) (Parveen et al., 2010).

Indeks antimikroba (AI) dihitung dengan menggunakan persamaan (Bhat dan Abdul
Khalil, 2010).
Antimikroba indeks = (1 Da/Db) x 100
di mana Da adalah diameter zona pertumbuhan pelat uji dan Db adalah diameter zona
pertumbuhan pelat kontrol.
o

Analisis Statistik
Teknik statistik Duncans multiple range test (DMRT) digunakan dengan bantuan SPSS
Versi 16 untuk penilaian rata-rata perbandingan. Hasilnya dinyatakan dalam rata-rata
standar deviasi. Semua data yang disajikan adalah nilai rata-rata dari pengukuran
rangkap tiga (n = 3), yang diperoleh dari tiga kali terpisah; kecuali dinyatakan lain.

HASIL DAN DISKUSI

Skrining fitokimia
Hasil skrining fitokimia dari ekstrak mengungkapkan adanya senyawa fenolik, flavonoid,
terpenoid, alkaloid, protein, dan glikosida jantung pada batang dan akar ekstrak E.
longifolia (Tabel 1).

Khususnya, metanol, etilasetat dan kloroform ekstrak E. longifolia adalah sumber yang
baik dari kelas yang berbeda dari senyawa. Hal ini menunjukkan bahwa pelarut ini efektif
untuk mengisolasi senyawa biologis aktif karena polaritas tinggi. Flavonoid terdeteksi
dalam kloroform, etil asetat, aseton dan ekstrak metanol dari kedua batang dan akar
bagian tanaman kecuali ekstrak petroleum eter. Flavonoid termasuk dalam kelompok
senyawa polifenol dan biasanya dikenal untuk mempromosikan properti kesehatan seperti
antioksidan, anti-alergi, anti-inflamasi, antimikroba dan antikanker (Aiyelaagbe dan
Osamudiamen, 2009). Sejalan dengan itu, ekstrak ini juga dinyatakan positif senyawa
fenolik. Senyawa fenolik adalah metabolit sekunder aromatik yang memberi warna, rasa
dan terkait dengan manfaat kesehatan seperti mengurangi risiko jantung dan penyakit
kardiovaskular (Alothman et al, 2009;. Bhat et al, 2011). Semua ekstrak E. longifolia
kecuali ekstrak aseton telah terdeteksi keberadaan terpenoid, meskipun saponin sama
sekali tidak ada dalam semua ekstrak batang dan akar. Alkaloid diamati hanya dalam
petroleum eter, kloroform dan etil asetat ekstrak batang, tetapi alkaloid tidak terdeteksi.
Tidak adanya alkaloid dalam penelitian ini mungkin akibat dari lokasi geografis yang
berbeda di mana mineral tanah dan faktor lingkungan memiliki pengaruh besar pada isi
fitokimia tanaman (Borokini dan Ayodele, 2012). Selain itu, glikosida jantung yang biasa
digunakan untuk mengobati gagal jantung kongestif dan aritmia jantung, ditemukan di
semua ekstrak batang kecuali ekstrak petroleum eter, sedangkan, tidak ada ekstrak akar
menunjukkan kehadiran mereka (Hollman, 1985). Semua ekstrak batang disiapkan
menunjukkan adanya protein kecuali petroleum eter dan ekstrak kloroform, sedangkan
akar E. longifolia ditemukan benar-benar kurang kandungan protein. Biasanya, Protein
adalah kelompok besar makromolekul dan bertindak sebagai agen antibiotik dan
antimikroba. Di antara semua ekstrak yang diuji batang dan akar, minyak ekstrak eter
memiliki jumlah terendah dalam uji fitokimia. Ekstrak etil asetat batang dalam uji fitokimia
sangat besar dibandingkan dengan ekstrak lain, sedangkan, dalam kasus akar, ekstrak
metanol yang paling besar.

 Aktivitas antimikroba
o Akar
Aktivitas antimikroba dari ekstrak akar E. longifolia ditunjukkan pada Tabel 2 dan 3.

Semua ekstrak akar ditemukan aktif terhadap uji bakteri gram positif; B. cereus dan
S. aureus; sementara, benar-benar tidak aktif terhadap bakteri gram negatif; E. coli,
P. aeruginosa, S. virchow dan jamur; A. niger (Tabel 2).
Tidak seperti bakteri gram negatif, bakteri gram positif memungkinkan kontak
langsung dari konstituen ekstrak dengan bilayer fosfolipid dari membran sel,
menyebabkan permeabilitas ion ditingkatkan, kebocoran konstituen intraseluler, atau
gangguan sistem enzim bakteri (Zhao et al., 2001). Di antara semua strain bakteri
gram negatif, P. aeruginosa menunjukkan resistensi tertinggi, karena setelah
pengobatan dengan ampisilin (20 g/l), itu tidak menunjukkan respon positif. Hal ini
terutama karena perlawanan yang dikembangkan oleh strain bakteri dengan waktu
karena paparan obat atau mutasi (David, 2002). Di antara bakteri gram positif,
ekstrak kloroform akar E. longifolia menunjukkan aktivitas tertinggi (ZI dari 11,67
1,53 mm) terhadap S. aureus diikuti oleh ekstrak aseton (ZI dari 11,00 1,00 mm)
pada 200 g/l, ditandai dengan lebih rendahnya AI (17 dan 21) relatif terhadap
ekstrak lainnya, masing-masing (Tabel 3 dan 5). AI rendah dari ekstrak sesuai
dengan kerentanan antimikroba yang tinggi relatif terhadap kontrol. Temuan ini
diperkuat dengan nilai-nilai ZI dekat ekstrak (kloroform dan aseton pada 200 g/l)
dengan kontrol (ZI dari 14.00 1.00). Sebaliknya, dalam temuan sebelumnya pada
ekstrak akar tidak ada ekstrak akar disiapkan (metanol, etanol, aseton dan air) yang
ditemukan aktif terhadap S. sureus (Farouk dan Benafri, 2007). Aktivitas moderat
diperagakan oleh petroleum eter, etil asetat dan ekstrak metanol akar terhadap S.
aureus pada berbagai konsentrasi (Tabel 3).
Berdasarkan Duncan uji jarak berganda, aseton dan etil asetat ekstrak akar
tidak signifikan berbeda satu sama lain terhadap S. aureus, tapi mereka berdua jauh
berbeda dari metanol, kloroform dan ekstrak petroleum eter dengan nilai signifikan P
<0,05. Hal ini sesuai dengan efikasi yang sebanding aseton dan etil asetat ekstrak
terhadap S. aureus, mungkin disebabkan fitokimia yang sama komposisinya. Selain
itu, ekstrak metanol, kloroform dan petroleum eter yang lumayan berbeda satu sama
lain, menunjukkan mereka memiliki sifat antimikroba yang berbeda. Mengingat
korelasi konsentrasi, kontrol positif adalah lumayan berbeda dari ekstrak akar di

semua konsentrasi terhadap S. aureus. Selain itu, ekstrak akar E. longifolia juga
melaporkan kegiatan antimikroba moderat untuk pertama kalinya melawan B. cereus
pada konsentrasi 100 g/l dan ke atas. Tingginyaaktivitas ditunjukkan oleh ekstrak
etil asetat (10,670,58 mm) ditemukan B. Cereus 200 g/l, didukung dengan
rendahnya nilai Al (16) pada (Tabel 3 dan 5).
Batang
Kegiatan antimikroba ekstrak batang E. longifolia ditampilkan pada Tabel 2 dan 4.

Ekstrak batang ditemukan sangat aktif terhadap bakteri gram positif, B. cereus dan S.
aureus. Tidak seperti akar, ekstrak etil asetat dan metanol batang menunjukkan
aktivitas moderat dan rendah terhadap bakteri gram negatif tahan ampisilin, P.
aeruginosa (ZI dari 9.33 0.58) dan E. coli (ZI dari 3,33 5,77), masing-masing
(Tabel 2 dan 4). Di antara semua ekstrak yang diuji, ekstrak etil asetat hanya batang
menunjukkan aktivitas tinggi (ZI dari 11,00 1,73) terhadap A. niger pada 200 g/l.
Temuan ini pada ekstrak batang terhadap A. niger, P. aeruginosa dan E. coli yang
baru untuk yang terbaik dari pengetahuan kita. Selain itu, sifat antimikroba ekstrak
batang diamati lebih unggul sehubungan dengan ekstrak akar. Semua ekstrak batang
dipamerkan tinggi untuk aktivitas moderat terhadap S. aureus pada konsentrasi diuji
terendah 12,5 g/l sedangkan ekstrak metanol menunjukkan aktivitas yang sangat
tinggi pada konsentrasi 200 g /l dengan ZI, 17.00 6.56 mm dan AI, -22. Nilai yang
sangat rendah dari AI dengan tanda negatif menunjukkan kerentanan antimikroba
yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol (Tabel 4 dan 5).

Dari uji Duncan jarak berganda, kloroform, petroleum eter dan aseton ekstrak tidak
signifikan berbeda satu sama lain terhadap S. aureus sementara, ekstrak etil asetat
dan metanol yang jauh berbeda dengan nilai yang signifikan P <0,05. Korelasi antara
konsentrasi menunjukkan bahwa kontrol positif dan ekstrak yang jauh berbeda satu
sama lain. Selain itu, batang ekstrak pada konsentrasi yang berbeda, 100, 50 dan 25
lg / ll tidak signifikan berbeda satu sama lain, yang menunjukkan kemanjuran yang
serupa pada konsentrasi yang berbeda.
Semakin rendah nilai AI dibandingkan dengan ekstrak lainnya dibuktikan lebih
tinggi atau potensi antimikroba hampir sama sehubungan dengan kontrol positif
terhadap B. cereus. Berdasarkan uji Duncan jarak berganda, ekstrak kloroform,
petroleum eter dan aseton tidak signifikan berbeda satu sama lain, sedangkan,
metanol dan etil asetat ekstrak batang yang jauh berbeda dari ekstrak lainnya
terhadap B. cereus, sesuai dengan aktivitas tinggi yang ditunjukkan oleh kedua
metanol dan ekstrak etil asetat dari ekstrak lainnya. Ekstrak batang pada semua
konsentrasi yang sangat berbeda satu sama lain terhadap B. cereus menunjukkan
variasi potensi ekstrak dengan dosis.
Dalam kasus P. aeruginosa dan A. niger, penafsiran Duncan multiple berbagai
test menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat batang secara signifikan berbeda dari
empat ekstrak lain, karena, di antara semua ekstrak batang disiapkan, hanya ekstrak
etil asetat menunjukkan aktivitas terhadap mikroorganisme tersebut. Ekstrak etil
asetat pada konsentrasi lg / ll 200 dan 100 yang jauh berbeda satu sama lain serta
dari perawatan lain ekstrak etil asetat, terbukti dari kekuatan mereka pada
konsentrasi yang diuji (Tabel 4). Semua ekstrak batang menunjukkan tidak ada
tanggapan terhadap S. virchow.
Kesimpulan
Hasil skrining fitokimia awal menunjukkan bahwa kedua batang dan akar ekstrak E.
longifolia merupakan sumber yang baik dari phytochemical yang bermanfaat. Kegiatan
antijamur dari ekstrak siap menunjukkan bahwa ekstrak batang adalah agen antimikroba
yang lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak akar. Di antara berbagai ekstrak disiapkan
batang, metanol dan etil asetat ekstrak yang paling efektif terhadap spesies bakteri dan
jamur yang diuji. Analisis statistik yang dilakukan sehubungan dengan kegiatan antimikroba
ekstrak yang berbeda pada berbagai konsentrasi yang dikuatkan dengan hasil penelitian ini.
Dengan demikian, penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menentukan kemanjuran ekstrak
terhadap berbagai spesies bakteri dan jamur patogen lainnya. Selain itu, E. longifolia yang
diperoleh dari berbagai lokasi geografis juga dapat dieksplorasi; untuk mengevaluasi potensi
yang lebih baik dari tanaman sebagai sumber antimikroba. Juga, ada panggilan untuk isolasi
dan identifikasi prinsip aktif dari tanaman ekstrak bertanggung jawab atas aktivitas
antimikroba dalam rangka untuk mengembangkan obat-obatan di masa depan.