Terapi Genpada Manusia 09 Nopember 2009

TERAPI GEN PADA MANUSIA
All images in this document is removed due to copyright restriction

Ahmad Aulia Jusuf
Bagian Histologi
Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia
2009
Agenda
Pendahuluan
Definisi Terapi Gen
Jenis Terapi Gen
Metoda Terapi Gen
Prasyarat Terapi Gen
Contoh Terapi Gen
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

Manusia/AAJ/Histologi
Human Gene Therapy?
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

PENDAHULUAN
5000 penyakit bawaan
Kebanyakan bersifat genetik
Defisiensi produk gen
<< Dapat digantikan dengan produk dari luar

Insulin
Defek pada produk ensim tak bisa digantikan
Tak stabil dan mudah rusak
Tak bisa dimasukkan dalam bentuk aktif
Sifat impermeabel membran sel terhadap molekul
besar
Terapi gen
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1
Snustad D. Peter and Simmons M.J. : Human gene therapy in Principles of genetics, 4th Ed, 2006: 499-503
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

Definisi
Terapi untuk mengobati penyakit

tententu1,2,3,4
menginsersikan gen yang telah diperbaiki atau

gen tertentu kedalam genom sel-sel atau
jaringan individu
menggantikan gen yang abnormal penyebab

penyakit tersebut
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"
3
Scott T., Gene Therapy Breakthrough, diunduh dari www.unitedspinal.org. February 26th, 2008
4
What is gene therapy diunduh dari www.ornl.gov/sci/techresources/Human.../genetherapy.shtml
1
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

Prinsip Terapi Gen2,3,4
Insersi gen yang normal pada lokasi yang tidak

spesifik di dalam genom
Gen abnormal dihilangkan dari genom individu

dan digantikan oleh gen yang normal
untuk menggantikan gen yang tidak berfungsi.

Prinsip umum yang paling sering digunakan
Homologous recombination
Gen abnormal diperbaiki melalui cara selective

reverse mutation
Mengubah regulasi (pengaturan) gen tertentu.
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

4
2
3
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

Jenis Terapi Gen1,2,4
Terapi gen sel somatik (somatic cell gene therapy)

Terapi gen sel germinal (Germ line cell gene therapy)
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

Jenis Terapi Gen
Terapi gen sel somatik (somatic cell gene therapy) 1,2,4
gene therapy non hereditable

gen yang normal atau telah dimodifikasi ditransfer ke dalam sel-sel
somatik pasien
mengobati/mengatasi gejala penyakit pasien
tidak dapat diturunkan kepada generasi selanjutnya
gen yang telah diperbaiki ini hanya ada pada sel-sel somatik saja
dan tidak ada pada sel-sel germinal.
mirip dengan transplantasi sel, jaringan atau organ
Lebih rumit dan lebih berbahaya
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

Jenis Terapi Gen

Terapi gen sel germinal (Germ line cell gene therapy) 1,2,4
Gen yang mengalami defek pada sel-sel germinal
diperbaiki dengan cara menginsersikan dan mengintegrasikan gen yang

normal atau gen yang telah dimodifikasi kedalam genom sel-sel germinal
Gen yang telah diinsersikan ini kemudian akan diturunkan ke generasi
berikutnya
Sangat bermanfaat untuk mengatasi penyakit-penyakit genetik dan

penyakit-penyakit yang bersifat herediter
masih sulit dilakukan karena alasan tehnis dan etik
telah mengubah genetik seseorang
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

METODA TERAPI GEN1,2,3,4

Transfer gen yang telah dimodifikasi atau gen
normal kedalam sel-sel sasaran pada pasien
Menggunakan vektor biologi yaitu virus

Menggunakan cara non virus
naked DNA
oligonucleotides
lipoplexes dan polyplexes
hibrid methods
dendrimers
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

10
Transfer Gen menggunakan vektor biologi1,2,3,4

Vektor biologi yang digunakan adalah virus
susunan genetiknya telah diubah sehingga dapat membawa gen

manusia yang normal
gen yang telah diperbaiki dimasukkan kedalam sel-sel sasaran pada
tubuh manusia dengan cara tertentu dan kemudian berintegrasi pada
genom tertentu
gen-gen pada virus yang dapat menyebabkan penyakit harus
dihilangkan dan diganti dengan gen-gen yang telah diperbaiki
contoh virus A diketahui dapat berreplikasi atau memperbanyak diri
dengan cara menginsersikan gen-gen nya kedalam genom sel-sel host.
virus ini mempunyai 2 jenis gene yaitu gen A dan gene B
gen C adalah gen yang telah diperbaiki
Gen A mengkode protein untuk menginsersikan gen-gen nya kedalam genom sel
host (inang)
Gen B menyebabkan timbulnya penyakit pada host
menggantikan gen B
gen A tetap dipertahankan untuk menjalankan fungsinya.
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

11
Vektor biologi yang digunakan adalah virus

Adenovirus merupakan virus generasi pertama
yang digunakan dalam terapi gen dan sangat
efektif sebagai vektor pembawa transgen2,4
Virus lain
retrovirus
adeno-associated viruses
virus herpes simplex
virus penyebab HIV
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

12

Retrovirus1,2,3,4
Materi genetik pada virus ini adalah dalam bentuk RNA

Ketika retrovirus menginfeksi sel sasaran (host)
RNA retrovirus, ensim reverse transcriptase dan integrase

masuk kedalam sel sasaran
RNA retrovirus akan diubah menjadi DNA melalui proses
reverse transcription menggunakan ensim reverse
transcriptase
DNA kemudian akan ditransfer kedalam inti sel sasaran
berintegrasi pada tempat tertentu di genom sel sasaran

dengan bantuan ensim integrase
DNA yang telah diperbaiki ini juga akan terintegrasi pada
tempat tertentu di genom sel sasaran
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

13
Transfer Gen menggunakan vektor retrovirus
(diunduh dari encarta.msn.com/media_461561269/gene_therapy.html)
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

14

Retrovirus1,2,3,4
Salah satu masalah yang dapat terjadi pada terapi gen
ensim integrase dapat menginsersikan materi genetik virus pada tempat yang kurang
sesuai
Hal ini sekarang dapat diatasi dengan menggunakan ensim Zinc finger nucleases 5
Keuntungan menggunakan retrovirus
pada bagian tengah gen-gen endogen pada host
gen endogen ini tidak dapat berfungsi dikenal sebagai insertional mutagenesis
pada gen pengatur fungsi gen lainnya
proses pembelahan sel dapat tidak terkendali dan berubah menjadi sel kanker
transgen yang dimasukkan bisa di transmisikan kesemua sel yang terinfeksi dan
turunannya
Kerugian
dapat menyebabkan terjadinya mutasi genetik yang berbahaya selama tahap

pengintegrasian
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

15

Adenovirus1,2,3,4
Ketika virus adenovirus menginfeksi sebuah sel inang
molekul DNA virus tersebut akan dimasukkan kedalam sel inang tersebut
materi genetik adenovirus tidak bersatu dengan materi genetik sel inang
molekul DNA virus terletak bebas dalam inti sel dan proses transkripsinya berlangsung secara sendiri
molekul DNA virus tidak ikut berreplikasi ketika sel mengalami pembelahan sehingga sel-sel inang hasil
pembelahan tidak mengandung DNA virus
membutuhkan pemasukkan kembali gen-gen yang sudah dimodifikasi ke dalam populasi sel yang baru
Sebaliknya keadaan ini akan mencegah terjadinya kanker
Gendicine
adenovirus yang telah mengandung gen p53 yang digunakan pada terapi gen untuk mengobati penyakit
kanker pada kepala dan leher
sudah diizinkan oleh FDA China untuk digunakan pada manusia pada tahun 2003
FDA Amerika Serikat telah menyetujui advexin, suatu vektor yang serupa dengan Gendicine untuk
digunakan di Amerika serikat pada tahun 2008
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

16
Transfer Gen menggunakan vektor adenovirus
(diunduh dari www.acceleratingfuture.com/michael/blog/?p=455)
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

17
Transfer Gen menggunakan cara non virus1,2,3,4

Keuntungan
dapat diproduksi dalam jumlah besar

immunogenisitas pada sel inang yang rendah
Beberapa metoda non virus yang dapat digunakan adalah
Naked DNA
metoda transfeksi non virus yang sangat sederhana
penelitian klinik dengan cara menyuntikan naked DNA secara intramuskular

menunjukkan sebagian hasil yang sukses dan sebagian lagi mengalami
kegagalan
ekspresi gen pada metoda transfeksi ini sangat rendah dibandingkan dengan
cara transfeksi lainnya
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

18

Beberapa metoda non virus yang dapat digunakan
adalah
Oligonukleotida
Metoda menginaktifkan gen-gen yang terlibat dalam proses penyakit.
Menggunakan antisense yang spesifik untuk gen sasasaran
mengganggu proses transkripsi gen sasaran yang rusak.

Menggunakan oligonukleotida rantai ganda (double strand
oligonucleotide)
mengikat faktor-faktor transkripsi yang diperlukan untuk regulasi

promoter gen sasaran
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

19

Beberapa metoda non virus yang dapat digunakan adalah
Lipoplexes and polyplexes
Meningkatkan efisiensi transfer dengan cara melindungi DNA dari kerusakan

dan memfasilitasi pemasukkannya kedalam sel
Menggunakan molekul lipid
lipoplexes dan polyplexes
dirancang untuk melindungi DNA dari proses degradasi selama proses

transfeksi
membungkus plasmid yang mengandung DNA dalam bentuk seperti micelle

atau liposome
lipoplexes atau polyplexes yang telah mengandung DNA dikenal sebagai

lipoplex.
lipoplex akan berinteraksi dengan membran sel dan masuk kedalam secara
endositosis
endosome yang mengandung lipoplex ini kemudian akan lisis dan transgen
yang ada di dalamnya akan dikeluarkan ke dalam sitoplasma sel untu
kemudian akan masuk ke dalam inti sel
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

20
Beberapa metoda non virus yang dapat digunakan

adalah
Metoda Hibrid (Hybrid method)
Untuk meningkatkan efisiensi trnasfer transgen dikembangkan metoda

hibrid (campuran) yaitu kombinasi liposome dengan virus influenza
atau HIV yang diinaktifkan
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
3
4
1
2
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

21
HAMBATAN DALAM TERAPI GEN2,4

Beberapa faktor yang menghambat efektivitas penggunaan terapi gen
Masa hidup alami terapi gen yang pendek (Short-lived nature of gene therapy)
Respons Imunologik
gen yang dimasukkan kedalam sel-sel target harus dapat berfungsi

sel-sel yang mengandung gen terapi ini harus dapat hidup lama dan stabil.
adanya stimulus tertentu yang merangsang timbulnya respons imunologik dapat
menurunkan efektivitas terapi gen
adanya respon imunologik ini juga akan menyulitkan pengulangan terapi gen pada
pasien
Masalah dengan virus yang berfungsi sebagai vektor
toksisitas, reaksi imunologik dan inflamasi, kontrol gen dan jaringan sasaran.
kemungkinan pulihnya kembali kemampuan virus untuk menyebabkan penyakit pada
manusia
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

2
4
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

22
HAMBATAN DALAM TERAPI GEN2,4
Beberapa faktor yang menghambat efektivitas penggunaan terapi gen
Kelainan gen multipel
terapi gen sulit digunakan untuk mengobati penyakit-penyakit yang disebabkan oleh
adanya kombinasi gen-gen yang mengalami kerusakan
penyakit jantung, tekanan darah tinggi, Alzheimer, artritis dan diabetes.
Potensi untuk timbulnya tumor
Bila DNA diintegrasikan pada tempat yang salah di dalam genom, misalnya pada
daerah tumor suppressor gene, hal ini dapat menyebabkan timbulnya tumor.
pasien dengan X-linked severe combined immunodeficiency (X-SCID) yang diterapi dengan
sel punca darah (Hematopoietic stem cells yang diinfeksi oleh retrovirus yang mengandung
transgen
Tiga dari 20 pasien yang diterapi menderita leukemia6
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

6
Woods NB, Bottero V, Schmidt M, von Kalle C, Verma IM (Apr 2006). "Gene therapy: therapeutic gene causing lymphoma". Nature 440
(7088): 1123
2
4
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

23
Prasyarat1
National Institute of Health (NIH)
Gen harus di klon dan diketahui karakteristiknya
Metoda efektif
Resiko terapi gen
harus tersedia dalam bentuk murni
harus dievaluasi secara berhati-hati

seminimal mungkin
Penyakit tidak dapat diobati dengan cara lainnya

Harus ada data penelitian pendahuluan
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

24
Contoh Terapi Gen1
Terapi gen pada manusia pertama kali dilakukan tahun 1990
penyakit Adenosine deaminase-deficient severe combined immunodeficiency

disease (ADA-SCID)
SCID
penyakit autosomal yang jarang terjadi

penderita tidak mempunyai sistem imun
beberapa penderita mengalami defisiensi ensim adenosine deaminase (ADA)
kadar deoxyadenosine yang terfosforilasi meningkat mencapai tingkat toksik dan

terakumulasi dalam limfosit T
membunuh sel limfosit.
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

25
Terapi Gen padaAdenosine deaminase-deficient severe

combined immunodeficiency disease (ADA-SCID)
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

26
Contoh Terapi Gen1
Contoh penggunaan adenovirus dalam terapi gen
terapi gen yang dipakai untuk mengobati cystic fibrosis (CF)
virus adenovirus yang membawa gen CF diinhalasi oleh pasien
sel-sel paru akan terinfeksi dan mensintesa produk gen CF untuk mengatasi
simptom dan gejala penyakit
kuatnya reaksi imunologik tubuh menyebabkan terapi gen menjadi tidak
efektif
Sel-sel yang terinfeksi virus dan mengandung transgen akan mati dan
tidak bisa memperbanyak diri
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
1
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

27
Monday, November
09, 2009
Terapi Gen pada

28

Terapi Genpada Manusia 09 Nopember 2009

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Terapi Genpada Manusia 09 Nopember 2009

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

TERAPI GEN PADA MANUSIA

All images in this document is removed due to copyright restriction

Terapi Gen pada

Human Gene Therapy?

Terapi Gen pada

5000 penyakit bawaan

Kebanyakan bersifat genetik

Defisiensi produk gen

<< Dapat digantikan dengan produk dari luar

Terapi Gen pada

Terapi untuk mengobati penyakit

menginsersikan gen yang telah diperbaiki atau

menggantikan gen yang abnormal penyebab

Terapi Gen pada

Prinsip Terapi Gen2,3,4

Insersi gen yang normal pada lokasi yang tidak

Gen abnormal dihilangkan dari genom individu

untuk menggantikan gen yang tidak berfungsi.

Gen abnormal diperbaiki melalui cara selective

Mengubah regulasi (pengaturan) gen tertentu.

Gene Therapy diunduh dari "http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy"

Terapi Gen pada

Jenis Terapi Gen1,2,4

Terapi gen sel somatik (somatic cell gene therapy)

Terapi Gen pada

Jenis Terapi Gen

Terapi gen sel somatik (somatic cell gene therapy) 1,2,4

gene therapy non hereditable

Lebih rumit dan lebih berbahaya

Terapi Gen pada

Jenis Terapi Gen

Gen yang mengalami defek pada sel-sel germinal

diperbaiki dengan cara menginsersikan dan mengintegrasikan gen yang

Sangat bermanfaat untuk mengatasi penyakit-penyakit genetik dan

telah mengubah genetik seseorang

Terapi Gen pada

METODA TERAPI GEN1,2,3,4

Menggunakan vektor biologi yaitu virus

Terapi Gen pada

Transfer Gen menggunakan vektor biologi1,2,3,4

susunan genetiknya telah diubah sehingga dapat membawa gen

virus ini mempunyai 2 jenis gene yaitu gen A dan gene B

gen C adalah gen yang telah diperbaiki

gen A tetap dipertahankan untuk menjalankan fungsinya.

Terapi Gen pada

Transfer Gen menggunakan vektor biologi1,2,3,4

Vektor biologi yang digunakan adalah virus

Terapi Gen pada

Transfer Gen menggunakan vektor biologi1,2,3,4

Materi genetik pada virus ini adalah dalam bentuk RNA

RNA retrovirus, ensim reverse transcriptase dan integrase

berintegrasi pada tempat tertentu di genom sel sasaran

Terapi Gen pada

Transfer Gen menggunakan vektor retrovirus

(diunduh dari encarta.msn.com/media_461561269/gene_therapy.html)

Terapi Gen pada

Transfer Gen menggunakan vektor biologi1,2,3,4

Salah satu masalah yang dapat terjadi pada terapi gen

Keuntungan menggunakan retrovirus

pada bagian tengah gen-gen endogen pada host

dapat menyebabkan terjadinya mutasi genetik yang berbahaya selama tahap

Terapi Gen pada

Transfer Gen menggunakan vektor biologi1,2,3,4