Abstrak

Ethnopharmacological relevansi: Phyllanthus niruriLinn. (Euphorbiaceae) digunakan sebagai obat rakyat

di Selatan Amerika untuk mengobati asam urat berlebih. Studi awal kami menunjukkan bahwa ekstrak
metanol dari Phyllanthus niruri dan lignan yang mampu membalikkan asam urat plasma hewan
hyperuricemic.
Tujuan penelitian: Penelitian ini dilakukan untuk menyelidiki mekanisme efek antihyperuricemic dari
Phyllanthus niruriand konstituen lignan nya.
Bahan dan cara: Mekanisme diselidiki menggunakan uji xantin oksidase dan urikosurik Studi kalium
oxonate- dan tikus asam urat yang disebabkan hyperuricemic.
Hasil: Phyllanthus ekstrak nirurimethanol exhibitedin penghambatan vitroxanthine oksidase dengan
IC50of 39,39? G / mL dan moderatein vivo xantin oksidase aktivitas penghambatan. Namun, lignan
menampilkan miskin xantin oksidase inhibitionin vitro dan relatif weakin vivo aktivitas penghambatan
pada 10 mg / kg. Di sisi lain, pengobatan intraperitoneal dengan Phyllanthus niruri ekstrak metanol
menunjukkan 1,69 lipatan peningkatan ekskresi asam urat urin bila dibandingkan dengan hewan kontrol
hyperuricemic. Demikian juga, lignan, phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin dipamerkan hingga
2.51 dan 11,0 kali lebih tinggi di urin ekskresi urat asam dan cukai, masing-masing. Co-administrasi
pirazinamid dengan phyllanthin dipamerkan penekanan yang signifikan dari aktivitas uricosuric
phyllanthin yang menyerupai pirazinamid dengan benzbromarone.
Kesimpulan: Penelitian ini menunjukkan bahwa efek antihyperuricemic ofPhyllanthus nirurimethanol
ekstrak mungkin terutama karena tindakan uricosuric dan sebagian melalui penghambatan oksidase
xanthine, sedangkan efek antihyperuricemic dari lignan disebabkan aksi uricosuric mereka.

1. Perkenalan
Hiperurisemia adalah salah satu kelainan biokimia biasa ditemui dalam praktek klinis dan telah
dilaporkan mempengaruhi
sekitar 10% dari orang dewasa secara global (Dincer et al., 2002). Modifikasi gaya hidup seperti
penurunan berat badan, penurunan konsumsi alkohol dan
asupan purin diet dapat membantu untuk menurunkan asam urat darah tetapi banyak
pasien masih akan memerlukan obat-obatan untuk mengontrol hyperuricemia mereka
(Wright dan Pinto, 2003;. Kong et al, 2004).
Meskipun sejarah panjang hiperurisemia dan gout, hanya ada
sejumlah obat yang saat ini digunakan dalam praktek klinis dan mereka
milik dua kelas, inhibitor oksidase xanthine, misalnya allopurinol dan agen uricosuric, misalnya
probenesid dan benzbromarone.
Allopurinol secara luas diresepkan untuk pengobatan hiperurisemia
dan asam urat. Namun, telah sering dikaitkan dengan merugikan
efek diwujudkan sebagai ruam, hipersensitivitas, hepatotoksisitas, gangguan pencernaan, hepatitis dan
demam. Sekitar 2-10% dari
*
Penulis yang sesuai. Tel .: +60 4 6533888x2696; fax: +60 4 6576836.
E-mail address: klchan@usm.my (. K.-L Chan).

pasien, terutama orang tua mengembangkan eritematosa pruritus

ruam dan 0,4% dari pasien telah mengembangkan sindrom hipersensitivitas, yang selanjutnya mencegah
administrasi allopurinol
(Khoo dan Leow, 2000; Adel, 2001; Dincer et al, 2002;. Kong et
al., 2002). Di sisi lain, probenesid umumnya tidak efektif
pada pasien dengan gangguan ginjal bersamaan sedangkan benzbromarone efektif pada pasien dengan
insufisiensi ginjal tetapi memiliki risiko hepatotoksisitas berat (Perez-Ruiz et al, 1998;. Adel,
2001; Dincer et al., 2002). Dengan demikian, efektif dan ditoleransi dengan baik urat
asam penurun agen banyak dicari terapi seperti baru
Pilihan.
Produk alami, terutama yang berasal dari tumbuhan telah lama digunakan dalam
obat tradisional untuk pengobatan hiperurisemia dan gout.
Sampai sekarang, tanaman obat telah menjadi sumber untuk sejumlah
obat klinis penting seperti morfin, atropin dan digoxin,
dan merupakan sumber yang sangat baik dari senyawa timbal dalam pencarian baru
obat. Dalam pencarian yang sedang berlangsung untuk agen antihyperuricemic baru dari
tanaman obat lokal, ekstrak metanol dan konstituen lignan
ofPhyllanthus niruriLinn. (Euphorbiaceae) ditemukan untuk menurunkan
asam urat plasma tikus hyperuricemic (Murugaiyah dan Chan,
2006) .Phyllanthus niruri, dikenal di Malaysia sebagai "anak dukong" adalah
ramuan kecil, ditemukan di daerah tropis dan subtropis yang paling. Ini memiliki
secara tradisional digunakan sebagai obat terhadap demam, diare, kolik
dan masalah ginjal, dan sebagai diuretik dan ekspektoran (Perry dan
Metzger, 1980). Ini juga telah digunakan sebagai obat rakyat untuk mengobati kelebihan
asam urat di Amerika Selatan (Unader et al., 1991).
Mekanisme whichPhyllanthus niruriand lignan yang mengerahkan
urat efek menurunkan saat ini tidak diketahui. Penelitian ini adalah
dilakukan untuk menyelidiki mekanisme antihyperuricemic
Efek ofPhyllanthus niruriand konstituen lignan yang, phyllanthin,
hypophyllanthin, phyltetralin dan niranthin menggunakan uji xantin oksidase dan studi uricosuric kalium
oxonate- dan urat
asam-diinduksi tikus hyperuricemic.
2. Bahan dan metode
2.1. Bahan kimia dan reagen
Asam urat dan kalium oxonate dibeli dari Merck
(Darmstadt, Jerman) dan Aldrich Chemical Company (Milwaukee,
WI, USA), masing-masing. Probenesid, benzbromarone, pirazinamid,
xantin oksidase (dari buttermilk), xanthine, albumin serum sapi dan Bradford reagen yang dibeli dari
Sigma Kimia
(St. Louis, MO, USA). Allopurinol baik yang disediakan oleh Hovid
Berhad (Ipoh, Malaysia). Semua reagen yang lain yang digunakan adalah dari kelas analitis.
2.2. Ekstraksi, fraksinasi dan isolasi lignan
Bahan baku ofPhyllanthus niruriLinn. (Euphorbiaceae)
yang dibeli dari Nova Laboratories (Malaysia) Sdn. Bhd. Sebuah

spesimen voucher (No. 10843) telah disimpan di herbarium dari School of Biological Sciences, Universiti
Sains Malaysia. The
kering bubuk daun ofPhyllanthus niruriwere soxhlet-diekstraksi
berulang kali dengan metanol segar selama 5 hari. Ekstrak dikumpulkan
setelah penguapan pelarut di bawah vakum parsial menghasilkan kehijauan
residu yang kemudian dimuat ke kolom resin (Diaion
HP 20, Mitshubishi, Jepang), dan selanjutnya dielusi oleh peningkatan persentase bertahap metanol dalam
air. Eluat dari air, 30%,
50% dan 80-100% metanol dalam air dikumpulkan secara terpisah
sebagai pecahan 1, 2, 3 dan 4, masing-masing. Fraksi 4 menjadi bioaktif adalah
lanjut dipartisi dengan n-heksana, kloroform dan n-butanol untuk
menghasilkan sub-fraksinya. Empat lignan seperti yang ditunjukkan inFig. 1;
phyllanthin, hypophyllanthin, phyltetralin dan niranthin diisolasi dari n-heksana sub-fraksi fraksi 4
berikut
protokol dijelaskan sebelumnya dan struktur mereka dikonfirmasi
oleh resonansi magnetik nuklir, spektrometer massa, ultraviolet dan infra-merah spektrum (Murugaiyah
dan Chan, 2006). Karena rendah
yield, niranthin hanya digunakan untuk evaluasi ofin vitro xanthine
oksidase studi inhibisi.
2.3. Hewan
MaleSprague-Dawleyrats tua 12-16 minggu, berat awalnya sekitar 180-280 g disimpan di rumah hewan
Sekolah
Ilmu Farmasi, Universiti Sains Malaysia. Binatang
dipertahankan pada / siklus gelap 12-h cahaya, pada suhu kamar
dari 25

C dan diizinkan akses gratis ke pelet makanan standar

(Gold Coin, Malaysia) dan air keran. Hewan-hewan itu acclimatised untuk setidaknya 1 minggu sebelum
awal percobaan. Hewan dibagi ke dalam kelompok enam masing-masing dan ditempatkan secara
individual
selama periode percobaan. Penanganan dan penggunaan hewan
adalah sesuai dengan pedoman kelembagaan. Persetujuan
diperoleh dari Komite Etika Hewan, Universiti Sains
Malaysia, Penang, Malaysia (nomor Referensi: USM / PPSF / 50 (93)
Jld.1).
2.4. Kegiatan uricosuric
Hewan model yang digunakan dalam penelitian antihyperuricemic kami sebelumnya
(Murugaiyah dan Chan, 2006) diadopsi. Secara singkat, hewan
yang secara kimia diinduksi oleh hiperurisemia intraperitoneal tunggal
pemberian kalium oxonate (200 mg / kg) dan asam urat lisan (1 g / kg). Makanan dan air yang ditahan
semalam sebelum belajar.
Ekstrak metanol dan fraksi / sub-fraksi ofPhyllanthus niruri
(masing-masing pada 50 mg / kg) disiapkan di 20% Tween 20 larutan
atau kandungan kimia yang terisolasi phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin (masing-masing di 10

mg / kg) dan obat-obatan klinis digunakan

(10 mg / kg untuk benzbromarone, 50 mg / kg untuk probenesid) disiapkan
dalam campuran 10% etanol dalam 20% Tween 20 larutan
yang intraperitoneal diberikan kepada tikus 30 menit setelah induksi hyperuricemia. Untuk kontrol
normal dan hiperurisemia, yang
hewan diberi kendaraan saja. Hewan-hewan itu kemudian ditempatkan
di kandang metabolisme dan diberi 100 ml air keran. Urine, dikumpulkan dalam tabung lulus dan asupan
air yang diukur selama 5 jam
setelah perawatan diberikan. Sampel darah diambil pada akhir
studi oleh tusukan jantung. Hewan-hewan itu dibius dengan
dietil eter di dalam ruang dan ditempatkan ke punggungnya selama ini
prosedur. Plasma diperoleh setelah sentrifugasi pada 3000 g
selama 15 menit (Gallenkamp, Inggris Raya). Plasma dan urin
Sampel disimpan pada-20

C sebelum cair kinerja tinggi

kromatografi (HPLC) analisis. Konsentrasi asam urat plasma
penentuan yang dijelaskan sebelumnya (Murugaiyah dan Chan,
2006). Konsentrasi asam urat urin ditentukan oleh HPLC yang
sistem yang terdiri dari Waters 510 pompa HPLC (Milford, MA, USA), sebuah
Waters Spherisorb S5 C8 kolom (4,6 id 250 mm, Waters, USA), sebuah
Gilson 115 detektor UV (Middleton, WI, USA) dan Hitachi D-2500
Kromatografi-integrator (Tokyo, Jepang). Kondisi analitis yang
sebagai berikut: fase mobile 5 mM asetat penyangga dengan pH disesuaikan
untuk 4.0 dengan asam asetat, aliran-laju 1,0 mL / menit dan deteksi panjang gelombang 292 nm dari.
Ekskresi asam urat urin dinyatakan sebagai mg
asam urat diekskresikan per kg dari hewan per 5 h (mg / (kg 5 h)) sementara
izin asam urat dinyatakan sebagai volume asam urat (L)
dibersihkan per hewan kg per h (L / (kg h)). Salah satu lignan diuji,
phyllanthin selanjutnya dinilai untuk aktivitas uricosuric nya pada dosis
5 dan 20 mg / kg mengikuti metode yang sama seperti dijelaskan di atas.
2.5. Pirazinamid tes penekanan
Percobaan dilakukan dalam empat kelompok hewan
hyperuricemia diinduksi berikut protokol dijelaskan dalam Bagian
2.4. Makanan dan air yang ditahan semalam sebelum belajar. Sebuah
dosis oral 300 mg / kg pirazinamid di 0,5% larutan karboksimetilselulosa diberikan kepada semua
binatang 30 menit setelah
induksi hyperuricemia. Kelompok yang diperlakukan menerima baik
phyllanthin (10 mg / kg), probenesid (50 mg / kg) atau benzbromarone
(10 mg / kg) intraperitoneal 30 menit setelah pemberian pirazinamid. Kelompok kontrol hyperuricemicpirazinamid menerima
volume yang sama dari kendaraan. Semua perawatan disiapkan dalam campuran etanol 10% di 20%
Tween 20 larutan. Output urin, dikumpulkan dalam tabung lulus dan asupan air yang diukur
selama 5 jam setelah perawatan diberikan. Konsentrasi asam urat urin

ditentukan dengan metode HPLC seperti yang dijelaskan dalam Section2.4.

2.6. In vitro assay xantin oksidase
Efek penghambatan ofPhyllanthus niruriextract dan lignan yang
pada aktivitas xantin oksidase ditentukan setelah metode spektrofotometri dimodifikasi ofNoro dkk.
(1983). Sampel uji dilarutkan dalam dimetil sulfoksida (DMSO) dan kemudian
diencerkan dengan dapar fosfat (pH 7,8) dengan konsentrasi akhir yang mengandung 1-5% DMSO. Pada
konsentrasi ini, DMSO ditemukan
memiliki tidak ada penghambatan xantin oksidase. Uji ini melibatkan penambahan 0,1 mL larutan uji ke
2,9 mL 50 mM bufer fosfat
solusi (pH 7,8). 0,1 mL larutan enzim baru disiapkan mengandung 0,4 unit per mL di 50 mM dapar fosfat
pH 7,8 adalah
selanjutnya ditambahkan dan campuran uji pra-diinkubasi pada 37

Cfor
10 menit. Reaksi enzimatik dimulai dengan penambahan
2.0 solusi mL baru disiapkan 0,15 mM xanthine substrat di
air dan uji akhir campuran diinkubasi selama 30 menit. The
Reaksi dihentikan oleh penambahan 1,0 mL asam klorida 1 M. Absorbansi campuran assay diukur pada
292 nm. The niruriwas ekstrak metanol ofPhyllanthus awalnya
diuji untuk xantin oksidase aktivitas penghambatan pada 100? g / mL, sedangkan
fraksinya / sub-fraksi dan konstituen lignan diuji di
40? G / mL.
Untuk 50% konsentrasi hambat (IC50) penentuan,
ekstrak metanol dari Phyllanthus niruri, fraksinya dan subfraksi diperiksa di enam konsentrasi di kisaran
3,13-500? G / mL. Tidak ada IC50determination dilakukan untuk lignan terisolasi.
2.7. In vivo assay xantin oksidase
Setelah 5 jam administrasi ekstrak metanol, fraksi,
sub-fraksi dan lignan ofPhyllanthus niruri, tikus dibius dengan dietil eter dan hati mereka dipotong dan
diproses
untuk mendapatkan fraksi sitosol mengikuti metode yang dijelaskan
byDan dkk. (1994). Secara singkat, hati itu perfusi dengan 50 mL
es-dingin 0,25 mol / L sukrosa dalam 100 mmol penyangga / L fosfat
pH 7,8. Sekitar 3 g hati itu dipotong dan homogen dalam homogenizer MSE (Inggris) dengan empat jilid
icecold 0,25 mol / L sukrosa dalam 100 mmol dapar fosfat / L pH 7,8.
Homogenat itu disentrifugasi dalam Eppendorf centrifuge 5403
(Engelsdorf, Jerman) pada 1500 GUntuk 10 menit pada 4

C. Supernatan yang dihasilkan disaring dan selanjutnya disentrifugasi pada 14.100 g

selama 20 menit. Supernatan yang dihasilkan lagi disentrifugasi pada
14.100 GUntuk 20 menit pada 4

C. Supernatan setelah ketiga

sentrifugasi (fraksi sitosol) digunakan vivoassay Forin aktivitas xantin oksidase. Fraksi sitosol hati 0,4
mL adalah

pra-diinkubasi di 1,4 ml 50 mmol / L dapar fosfat dan 0,2 mL

xanthine solusi kemudian ditambahkan. Campuran diinkubasi
selama 30 menit pada 37

C. Reaksi dihentikan dengan penambahan

2.0 mL asam 0,4 M perklorat. Sampel disentrifugasi pada
1000 GUntuk 10 menit. Konsentrasi asam urat dalam supernatan ditentukan pada 292 nm menggunakan
Perkin Elmer Lambda 45
spektrofotometer (Perkin Elmer Instrumen, Norwalk, CT, USA).
Aktivitas enzim dinyatakan sebagai nmoles asam urat diproduksi
per menit dengan 1 mg protein (nmol / (mg protein min)). Konsentrasi protein ditentukan mengikuti
metode Bradford menggunakan
albumin serum sapi sebagai standar (Bradford, 1976).
2.8. Analisis statistik
Hasilnya disajikan sebagai mean standard error dari
berarti (S.E.M.) dari enam hewan. Signifikansi statistik perbedaan dievaluasi dengan analisis varians
(ANOVA) dilanjutkan
oleh hoctest Tukeypost.
3. Hasil
3.1. Efek urikosurik dari ekstrak metanol, fraksi,
sub-fraksi dan lignan terisolasi dari Phyllanthus niruri
Efek ofPhyllanthus ekstrak nirurimethanol, fraksinya
dan sub-fraksi serta lignan diisolasi pada asupan air,
Output urine, ekskresi urin dan pembersihan asam urat dari
tikus hyperuricemic ditunjukkan pada Tabel 1. Secara umum, pengobatan dengan
Phyllanthus ekstrak nirurimethanol, fraksinya, sub-fraksi
fraksi 4 (n-heksana, kloroform andn-butanol) atau lignan disebabkan
perubahan signifikan dalam asupan air dan output urin tikus hyperuricemic. Hanya tikus hyperuricemic
diobati dengan phyllanthin
pada 10 mg / kg menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam output urine saat
dibandingkan dengan orang-orang dari tikus kontrol hyperuricemic meskipun
asupan air mereka tidak terpengaruh. Namun, perubahan dalam urin
tabel 1
Pengaruh ekstrak metanol, fraksi, sub-fraksi dan lignan ofPhyllanthus asupan air nirurion, urin, ekskresi
asam urat dan pembersihan tikus hyperuricemic keluaran diamati dengan phyllanthin hewan diperlakukan
tidak dosedependent.
Induksi hiperurisemia oleh administrasi tunggal kalium oxonate intraperitoneal (200 mg / kg) dan asam
urat secara lisan
(1 gm / kg) menyebabkan peningkatan signifikan dalam ekskresi asam urat
dibandingkan tikus kontrol normal. Sebaliknya, hyperuricemic
tikus diperlakukan dengan ekstrak thePhyllanthus nirurimethanol memiliki 5.13
dan 1,69 kali, masing-masing lebih tinggi di ekskresi asam urat urin
dibandingkan hewan kontrol normal dan hiperurisemia. Antara
fraksinya, fraksi 4 dipamerkan 5.98 dan 1.97 kali lebih tinggi

ekskresi asam urat dibandingkan kontrol normal dan hiperurisemia, masing-masing. Partisi berikutnya
fraksi 4 menghasilkan
tiga sub-fraksi dengan komponen kemudian-heksana yang paling
ampuh dan dipamerkan ekskresi signifikan 8,06 dan 2,65 kali lebih tinggi kemih asam urat daripada
normal dan hiperurisemia
kontrol, masing-masing. Pengobatan dengan benzbromarone (10 mg / kg),
probenesid (50 mg / kg) dan lignan, phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin pada 10 mg / kg
masing-masing juga diproduksi 6.22, 5.95,
5.57, 5.05 dan 4.53 kali, ekskresi urin masing-masing lebih tinggi dari
asam urat dibandingkan tikus normal dan 2.80, 2.68, 2.51, 2.27 dan 2.04
kali, masing-masing lebih tinggi bila dibandingkan dengan hyperuricemic
hewan kontrol (Tabel 1). Penelitian lebih lanjut pada phyllanthin menunjukkan
peningkatan yang signifikan tergantung dosis dari 2,32 dan 3,77 kali di ekskresi asam urat pada 5 mg / kg
dan 20 mg / kg, masing-masing
bila dibandingkan dengan yang kontrol hyperuricemic.
Pengobatan withPhyllanthus ekstrak nirurimethanol diproduksi
peningkatan signifikan dalam izin asam urat bila dibandingkan dengan
yang normal dan hiperurisemia kontrol, masing-masing. Namun,
pengobatan dengan fraksi yang 4 menghasilkan peningkatan yang signifikan dalam
pembersihan asam urat dari 5.0 dan 10.0 kali dari kontrol normal dan hiperurisemia, masing-masing
sementara kemudian-heksana sub-fraksi
berasal fromfraction 4 tikus diperlakukan memiliki 7,17 dan 14,33 kali lebih tinggi
pembersihan asam urat dibandingkan hewan kontrol, masing-masing. Mirip dengan hasil yang diperoleh
untuk ekskresi asam urat, administrasi benzbromarone, probenesid dan lignan menyebabkan lebih tinggi
izin asam urat, tetapi peningkatan yang signifikan dari 15,67 dan 11,0 kali
dibandingkan dengan kontrol hyperuricemic hanya diamati pada
hewan yang diberi benzbromarone (10 mg / kg) dan phyllanthin
(10 mg / kg), masing-masing. Administrasi phyllanthin lanjut juga
menghasilkan peningkatan tergantung dosis clearance asam urat dari 9,0
dan 20,67 kali pada 5 mg / kg dan 20 mg / kg, masing-masing jika dibandingkan dengan yang kontrol
hyperuricemic.
3.2. Pirazinamid tes penekanan
Tabel 2shows efek benzbromarone, probenesid dan
phyllanthin pada ekskresi asam urat urin tikus hyperuricemic
dengan co-administrasi pirazinamid. Tikus hyperuricemic diberikan
dosis oral 300 mg / kg pirazinamid menunjukkan signifikan
penurunan ekskresi asam urat dibandingkan dengan hewan hyperuricemic tanpa pirazinamid (Tabel 1).
Pirazinamid
diberikan tikus hyperuricemic diobati dengan probenesid menunjukkan
peningkatan yang signifikan dari 6,96 kali di urin ekskresi asam urat sedangkan mereka yang diobati
dengan benzbromarone dan phyllanthin
Tabel 2
Pengaruh klinis digunakan obat urikosurik dan phyllanthin pada ekskresi asam urat tikus hyperuricemic
dengan co-administrasi pirazinamid.

Tabel 3
Dalam vitroxanthine oksidase aktivitas penghambatan dan IC50values ekstrak metanol, fraksi, sub-fraksi
dan lignan ofPhyllanthus niruri
menunjukkan peningkatan signifikan dari 3,51 dan 4,26 kali, masing-masing di ekskresi asam urat urin.
Dengan demikian, di pirazinamid diberikan hewan hyperuricemic, efek urikosurik dari benzbromarone
atau phyllanthin ditekan saat efek urikosurik
probenesid tidak terpengaruh.
3.3. In vitro xantin oksidase aktivitas penghambatan
Allopurinol, inhibitor dikenal xanthine oxidase, diadopsi
sebagai kontrol positif dalam penelitian dan memiliki IC50of 0.022? g / mL
(0,162? M). Aktivitas penghambatan ekstrak metanol, fraksi, sub-fraksi dan lignan ofPhyllanthus
niruriagainst xantin oksidase dan IC50values masing-masing ditunjukkan pada Tabel 3.
Aktivitas penghambatan ekstrak metanol awalnya dinilai
pada 100? g / mL dan IC50 yang adalah 39,39? g / mL. Oleh karena itu, xantin oksidase aktivitas
penghambatan ofPhyllanthus nirurifractions, subfraksi dan lignan awalnya ditentukan pada 40? G / mL.
The
Hasil menunjukkan bahwa setelah fraksinasi xantin oksidase aktivitas penghambatan ekstrak metanol
ofPhyllanthus niruri
terkonsentrasi di fraksinya 3 dan 4 dengan 59,14% dan 65,01%
penghambatan, masing-masing. Partisi lanjut dari fraksi 4 menghasilkan
konsentrasi aktivitas penghambatan xantin oksidase dalam nbutanol sub-fraksi dengan penghambatan
69,93%. Namun, mereka
kurang kuat bila dibandingkan dengan allopurinol. Sebaliknya, lignan terisolasi tidak menunjukkan cukup
xantin oksidase inhibitor
activityin vitro. Lignan tidak dapat diuji pada konsentrasi yang lebih tinggi lebih dari 40? G / mL karena
kelarutan miskin dan
kecenderungan untuk mengendapkan dalam campuran assay buffer. Selain itu,
yang IC50value dari ekstrak metanol adalah 39,39? g / mL, yang mengindikasikan bahwa penelitian lebih
lanjut dari lignan luar 40? g / mL tidak
menguntungkan.
3.4. In vivo xantin oksidase aktivitas penghambatan
Pengaruh metanol ekstrak ofPhyllanthus niruriand nya
fraksi, sub-fraksi dan lignan pada tikus xanthine oxidase hati adalah
ditunjukkan pada Tabel 4. Hyperuricemia induksi tidak menyebabkan perubahan berarti dalam aktivitas
oksidase xanthine hati. Metanol
Tabel 4
Pengaruh ekstrak metanol, fraksi, sub-fraksi dan lignan terisolasi dan allopurinol pada tikus xanthine
oxidase hati tikus hyperuricemic
ekstrak pada 50 mg / kg dosis dipamerkan penghambatan yang signifikan 76,84%
aktivitas oksidase xanthine sedangkan antara fraksinya di sejenis
dosis, yang xantin oksidase aktivitas penghambatan ditemukan terkonsentrasi di fraksi 3 dan 4 dengan
penghambatan yang signifikan dari 84,10%
dan 87,49%, masing-masing. Partisi lanjut dari fraksi 4 menghasilkan
n-heksana, kloroform andn-butanol sub-fraksi yang menyebabkan

penghambatan 58,30%, 49,23% dan 81,98% dalam kegiatan oksidase xanthine hati, masing-masing pada
50 mg / kg. Tak satu pun dari lignan diisolasi
sejak saat itu-heksana sub-fraksi menunjukkan perubahan yang signifikan
dalam hati aktivitas oksidase xanthine pada 10 mg / kg dosis. Sebaliknya,
dosis tunggal allopurinol pada 10 mg / kg menyebabkan signifikan 82,06%
pengurangan aktivitas oksidase xanthine hati.
4. Diskusi
Hiperurisemia yang biasa ditemui dalam praktek klinis tapi
Saat ini agen terapi untuk menurunkan asam urat darah
sangat sedikit dalam jumlah (Dincer et al., 2002). Sebuah sumber potensial novel
agen antihyperuricemic dapat berasal dari produk alami. Dalam penelitian kami sebelumnya, ekstrak
metanol dari daun
ofPhyllanthus niruri (Euphorbiaceae) menunjukkan asam urat menurunkan
Kegiatan pada tikus hyperuricemic. Selanjutnya antihyperuricemic-dipandu
fraksinasi dan pemurnian lignan ekstrak metanol diberikan; phyllanthin, hypophyllanthin, phyltetralin dan
niranthin sebagai
konstituen bioaktif yang secara signifikan terbalik plasma
kadar asam urat hewan hyperuricemic ke tingkat normal dibandingkan dengan obat klinis digunakan
(Murugaiyah dan Chan, 2006).
Studi ini meneliti mekanisme mereka asam menurunkan efek urat.
Ekskresi asam urat telah dipelajari dengan baik di tikus
karena tikus menunjukkan reabsorpsi bersih asam urat dalam ginjal dan
merespon dengan baik untuk agen dikenal memiliki efek pada ekskresi asam urat pada manusia (Sugino
dan Shimada, 1995;. Yamada et al, 1999a).
Dalam penelitian ini, induksi hiperurisemia menyebabkan peningkatan
dalam ekskresi asam urat dan hasilnya adalah dalam perjanjian dengan laporan sebelumnya (Johnson et
al, 1969;. Yonetani
dan Iwaki, 1983). Pemberian fraksi 4 dari ekstrak metanol
dan kemudian-heksana sub-fraksi fraksi 4 meningkatkan ekskresi dan clearance asam urat tikus
hyperuricemic. Demikian juga,
lignan bioaktif, phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin
meningkatkan ekskresi asam urat urin. Phyllanthin meningkatkan
urin ekskresi asam urat dan pembersihan dengan cara tergantung dosis dan pada 10 mg / kg dosis
dipamerkan potensi yang sama dengan yang
benzbromarone (10 mg / kg) dan probenesid (50 mg / kg). Sebaliknya,
dosis jauh lebih tinggi dari lebih dari 100 mg / kg scopoletin, agen uricosuric fromErycibe
obtusifoliaincrease asam urat urin
tingkat tikus hyperuricemic ke tingkat yang sama seperti probenesid
(100 mg / kg) (Ding et al., 2005).
Pirazinamid tes penekanan digunakan untuk menjelaskan mekanisme kerja agen uricosuric. Metabolit
aktif pirazinamid, pyrazinoate telah dilaporkan menghambat sekresi
asam urat di segmen kedua dari proksimal convulated tubulues
(Sugino dan Shimada, 1995;. Yamada et al, 1999b). Sementara itu,
obat uricosuric seperti probenesid dan benzbromarone menghambat

serapan asam urat dalam lumen. Setelah empat kompartemen

Model, benzbromarone menghambat reabsorpsi pasca-sekretorik, sedangkan
probenesid terutama menghambat pasca-sekretorik dan sebagian menghambat reabsorpsi presecretory
(Dan et al, 1990;. Yamada et al, 1999b.).
Dalam penelitian ini administrasi pirazinamid ke
tikus hyperuricemic menyebabkan penurunan tajam dalam urat urin
asam ekskresi mirip dengan laporan sebelumnya (Dan et al., 1990). The
co-administrasi pirazinamid dengan benzbromarone atau phyllanthin secara signifikan menekan aktivitas
uricosuric yang terakhir
agen sedangkan bila diberikan dengan probenesid aktivitas uricosuric probenesid berkurang pada tingkat
lebih rendah. Kapan
probenesid adalah co-dikelola dengan pirazinamid, uricosuric nya
efek tidak banyak terpengaruh, karena sebagian merupakan inhibitor pra-sekretorik
dan akan menghambat reabsorpsi asam urat pada segmen pertama dari
tubulus proksimal. Sebaliknya, benzbromarone terutama menghambat postreabsorption asam urat dan
efeknya berhubungan dengan tubular dengan
konsentrasi asam urat yang tersisa setelah sekresi pada segmen kedua. Sejak pirazinamid menghambat
sekresi, uricoscuric yang
Pengaruh benzbromarone ditekan dengan adanya pirazinamid. Phyllanthin menunjukkan aktivitas
uricosuric mirip dengan
dari benzbromarone, mungkin dengan menghambat reabsorpsi pada
pasca-sekresi situs reabsorpsi tubulus proksimal convulated.
Nirurilignans yang uricosuric alam ofPhyllanthus mungkin
minat yang besar dalam pengelolaan hiperurisemia dan gout, mengingat bahwa dalam praktek klinis
sekitar 90% dari pasien gout
adalah underexcretors asam urat (Wright dan Pinto, 2003). Tidak seperti
benzbromarone, Phyllanthus niruriand lignan yang, phyllanthin dan
hypophyllanthin juga dilaporkan memiliki sifat hepatoprotektor (Syamasundar et al, 1985;. Harish dan
Shivanandappa, 2006).
Keuntungan tambahan dengan ofPhyllanthus penggunaan niruriover yang
agen uricosuric lainnya adalah sifat antiurolithic nya (Freitas et al.,
2002; Barros et al., 2006) yang dapat meminimalkan risiko asam urat
deposisi dalam tubulus pengumpul biasa terlihat dengan
penggunaan obat urikosurik lainnya.
Mekanisme lain yang mungkin dimana agen dapat mengurangi
asam urat darah adalah melalui penghambatan enzim xantin oksidase yang
akhirnya akan mengurangi produksi asam urat. Metanol
ekstrak ofPhyllanthus nirurishowed moderatein vitroandin vivo
xantin oksidase aktivitas penghambatan tetapi lignan terisolasi menunjukkan
sebuah niruriwas inhibition.Phyllanthus relatif miskin juga dilaporkan
mengandung serangkaian flavanoids, polifenol dan tanin (Calixto et
al., 1998). Penelitian telah menunjukkan bahwa senyawa ini menunjukkan
aktivitas penghambatan baik terhadap xantin oksidase (Ying dkk., 1998;
Hatano et al., 1990). Oleh karena itu, tampaknya sangat mungkin bahwa senyawa ini, mungkin ditemukan

pada konsentrasi rendah dapat bertanggung jawab atas xanthine oksidase diamati aktivitas penghambatan
dari
Ekstrak Phyllanthus nirurimethanol.
5. Kesimpulan
Berdasarkan temuan dari penelitian ini, tampak jelas bahwa
peningkatan progresif dalam ekskresi asam urat urin ditampilkan byPhyllanthus fraksi niruri, sub-fraksi
dan lignan sejajar mereka
Efek antihyperuricemic, berbeda dengan orang-orang temuan dari
xantin oksidase studi penghambatan. Oleh karena itu, tampaknya sangat mungkin
bahwa efek antihyperuricemic Phyllanthus nirurimethanol
Ekstrak mungkin disebabkan terutama untuk aksi uricosuric dan sebagian
melalui penghambatan oksidase xanthine, sedangkan antihyperuricemic
efek dari lignan ini disebabkan tindakan uricosuric mereka.
Ucapan Terima Kasih
Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Departemen Sains, Teknologi
dan Inovasi, Malaysia dan Universiti Sains Malaysia untuk memberikan dukungan keuangan dan PASCA
beasiswa. Terima kasih juga kami sampaikan
untuk Profesor K. Takeya dari Sekolah Farmasi, Tokyo University of Pharmacy & Life Sciences,
Hachioji, Tokyo, Jepang dan H.
Morita dari Fakultas Ilmu Farmasi, Hoshi University,
Shinagawa-ku, Tokyo, Jepang dan Associate Professor Osamu Shirota
dari Fakultas Ilmu Farmasi, Universitas Tokushima Bunri, Sanuki-City, Kagawa, Jepang untuk
menjalankan spektrum massa terisolasi
senyawa dan NMR dari niranthin. Terima kasih khusus kepada Mr Peter
Sprenger dari Bruker BIOSPIN, Bangkok, Thailand untuk menjalankan NMR
dari phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin.

Abstrak
Phyllanthus niruriLinn. (Euphorbiaceae) atau Meniran digunakan sebagai obat rakyat di Selatan Amerika

untuk mengobati asam urat berlebih. Studi awal menunjukkan bahwa ekstrak metanol dari Phyllanthus
niruri dan lignan yang mampu membalikkan asam urat plasma hewan hiperurisemia. Mekanismenya
dengan menggunakan uji xantin oksidase dan urikosurik kalium oxonate- dan tikus asam urat yang
disebabkan hyperurisemia. Hasilnya yaitu Phyllanthus ekstrak niruri dengan menggunakan methanol
exhibitedin menghambat aktivitas vitroxanthin oksidase dengan IC50of 39,39? G / mL dan moderatein
vivo xantin oksidase. Namun, lignan menampilkan kurangnya xantin oksidase inhibitionin vitro dan
relatif lemahnya vivo dalam menunjukkan aktivitas penghambatan per 10 mg / kg. Di sisi lain,
pengobatan intraperitoneal dengan Phyllanthus niruri dengan menggunakan ekstrak methanol
menunjukkan 1,69 lipatan peningkatan ekskresi asam urat urin bila dibandingkan dengan hewan kontrol
hiperurisemia. Demikian juga, lignan, phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin ditunjukkan hingga
2.51 dan 11,0 kali lebih tinggi ekskresi asam urat dan cukai di urin, masing-masing. Co-administrasi
pirazinamid dengan phyllanthin ditunjukkan memberi penekanan yang signifikan dari aktivitas urikosurik
phyllanthin yang menyerupai pirazinamid dengan benzbromarone. Kesimpulannya, penelitian ini
menunjukkan bahwa efek antihiperurisemik dari Phyllanthus niruri ekstrak methanol mungkin terjadi
terutama karena tindakan urikosurik dan sebagian melalui penghambatan oksidase xanthin, sedangkan
efek antihiperurisemik dari lignan disebabkan aksi urikosurik mereka.

Latar Belakang
Hiperurisemia adalah salah satu kelainan biokimia yang biasa ditemui dalam praktek klinis dan
telah dilaporkan mempengaruhi sekitar 10% dari orang dewasa secara global (Dincer et al., 2002).
Modifikasi gaya hidup seperti penurunan berat badan, penurunan konsumsi alkohol dan diet asupan purin
dapat membantu untuk menurunkan asam urat darah tetapi banyak pasien masih akan memerlukan obatobatan untuk mengontrol hiperurisemia mereka (Wright dan Pinto, 2003;. Kong et al, 2004). Sejumlah
obat yang saat ini digunakan dalam praktek klinis dan mereka milik dua kelas yaitu inhibitor oksidase
xanthin misalnya allopurinol, dan agen urikosurik misalnya probenesid dan benzbromarone. Allopurinol
secara luas diresepkan untuk pengobatan hiperurisemia dan asam urat. Namun, telah sering dikaitkan
dengan merugikan efek yang diwujudkan sebagai ruam, hipersensitivitas, hepatotoksisitas, gangguan
pencernaan, hepatitis dan demam. Kemudian probenesid umumnya tidak efektif pada pasien dengan
gangguan ginjal, sedangkan benzbromarone efektif pada pasien dengan insufisiensi ginjal tetapi memiliki
risiko hepatotoksisitas berat. Dengan demikian, banyak dicari terapi baru yang efektif untuk penurun agen
asam urat.
Produk alami yang berasal dari tumbuhan telah lama digunakan dalam obat tradisional untuk
pengobatan hiperurisemia dan gout. Dalam penelitian yang sedang berlangsung untuk agen anti
hiperurisemik baru dari tanaman obat lokal, ekstrak metanol dan konstituen lignan dari Phyllanthus
niruriLinn. (Euphorbiaceae) ditemukan untuk menurunkan asam urat plasma tikus hyperuricemic
(Murugaiyah dan Chan, 2006) . Meniran dapat ditemukan di daerah tropis dan subtropis dan memiliki
khasiat sebagai obat demam, diare, kolik dan masalah ginjal, sebagai diuretik dan ekspektoran, juga telah
digunakan sebagai obat rakyat untuk mengobati kelebihan asam urat.Penelitian ini dilakukan untuk
menyelidiki mekanisme efek anti hiperurisemik dari meniran dan konstituen lignannya dengan
menggunakan uji xantin oksidase dan studi urikosurik kalium oxonate- dan asam urat yang diinduksikan
ke tikus hiperurisemik.

Bahan dan Metode

a. Bahan dan reagen
- Asam urat dan kalium oxonate
- Probenesid, benzbromarone, pirazinamid, xantin oksidase (dari buttermilk), xanthine, albumin serum
sapi dan reagen Bradford
- Phyllanthus niruriLinn. (Euphorbiaceae)
b. Metode
- Ekstraksi, fraksinasi dan isolasi lignan
Pertama, bubuk kering dari daun Phyllanthus niruri disoxhlet lalu diekstraksi berulang kali dengan
metanol segar selama 5 hari. Ekstrak yang dikumpulkan setelah penguapan pelarut metanol,
menghasilkan residu kehijauan yang kemudian dimuat ke kolom resin, dan selanjutnya dielusi oleh
peningkatan persentase bertahap metanol dalam air. Eluat dari air, 30%, 50% dan 80-100% metanol dalam
air dikumpulkan secara terpisah sebagai pecahan 1, 2, 3 dan 4. Fraksi 4 menjadi bioaktif yang dipartisi
dengan n-heksana, kloroform dan n-butanol untuk menghasilkan sub-fraksinya. Empat lignan seperti
phyllanthin, hypophyllanthin, phyltetralin dan niranthin diisolasi dari n-heksana sub-fraksi, fraksi 4 dan
kemudian strukturnya dikonfirmasi oleh resonansi magnetik nuklir, spektrometer massa, ultraviolet dan
spektrum inframerah (Murugaiyah dan Chan, 2006).
- Hewan
Tikus jantan Sprague-Dawley umur 12-16 minggu, dengan bb awal sekitar 180-280g, dipertahankan pada
siklus gelap cahaya selama 12 jam, pada suhu kamar dari 25C dengan pemberian makanan pelet standar
dan air keran yang ditempatkan didalam kandang. Hewan-hewan itu diisolasi untuk setidaknya 1 minggu
sebelum awal percobaan. Hewan dibagi ke dalam masing-masing 6 kelompok dan ditempatkan secara
individual selama periode percobaan. Penanganan dan penggunaan hewan adalah sesuai dengan pedoman
kelembagaan. Urine tikus, dikumpulkan dalam tabung dengan asupan air yang diukur selama 5 jam
setelah perawatan diberikan. Sampel darah diambil pada akhir studi oleh tusukan jantung. Hewan-hewan
tersebut dibius dengan dietil eter di dalam ruang dan ditempatkan ke punggungnya. Plasma diperoleh
setelah sentrifugasi pada 3000 g selama 15 menit. Plasma dan urin sampel disimpan pada-20 C
sebelum analisis kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Konsentrasi asam urat urin ditentukan oleh
sistem HPLC

- Pengujian oksidasi xantin secara In vitro

Efek penghambatan dari ekstrak Phyllanthus niruri dan lignan yang pada aktivitas xantin oksidase

ditentukan setelah metode spektrofotometri. Sampel uji dilarutkan dalam dimetil sulfoksida (DMSO) dan
kemudian diencerkan dengan dapar fosfat (pH 7,8) dengan konsentrasi akhir yang mengandung 1-5%
DMSO. Pada konsentrasi ini, DMSO ditemukan memiliki tidak ada penghambatan xantin oksidase.
- Pengujian oksidasi xantin In vivo
Setelah 5 jam administrasi ekstrak metanol, fraksi, sub-fraksi dan lignan dari Phyllanthus niruri, tikus
dibius dengan dietil eter dan hati mereka dipotong dan diproses untuk mendapatkan fraksi perfusi sitosol
dengan 50 mL es dingin + 0,25 mol / L sukrosa dalam 100 mmol / L larutan fosfat pH 7,8. Kemudian
sekitar 3 g hati tersebut dipotong dan dihomogenkan dalam homogenizer. Homogenat itu disentrifugasi
dalam Eppendorf centrifuge 5403 Untuk 10 menit pada 4 C. Supernatan yang dihasilkan disaring dan
selanjutnya disentrifugasi pada 14.100 g selama 20 menit. Supernatan yang dihasilkan disentrifugasi
lagi selama 20 menit pada 4C. Lalu konsentrasi asam urat dalam supernatan ditentukan pada 292 nm
spektrofotometer Lambda 45.
- Analisis statistik
Hasilnya disajikan sebagai mean standard error (S.E.M.) dari 6 hewan. Signifikansi perbedaan statistik
dievaluasi dengan analisis varians (ANOVA) dilanjutkan oleh post hoctest Tukey.

Hasil penelitian
Pengobatan dengan ekstrak Phyllanthus niruri dengan methanol, fraksinya, sub-fraksi fraksi 4 (n-heksana,
kloroform dan n-butanol) atau lignan disebabkan perubahan signifikan dalam asupan air dan pengeluaran
urin tikus hiperurisemik. Hanya tikus hiperurisemik, diobati dengan Phyllanthin pada 10 mg / kg
menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam pengeluaran urin. Induksi hiperurisemia oleh pemberian
tunggal kalium oxonate intraperitoneal (200 mg / kg) dan asam urat per oral (1 gm / kg) menyebabkan
peningkatan signifikan dalam ekskresi asam urat dibandingkan dengan tikus kontrol normal. Sebaliknya,
tikus hiperurisemik diperlakukan dengan ekstrak Phyllanthus niruri methanol memiliki perbedaan
masing-masing lebih tinggi di ekskresi asam urat urin dibandingkan hewan kontrol normal dan
hiperurisemia. Antara fraksinya, fraksi 4 memiliki perbedaan lebih tinggi ekskresi asam urat
dibandingkan kontrol normal dan hiperurisemia. Pengobatan dengan benzbromarone (10 mg / kg),
probenesid (50 mg / kg) dan lignan, phyllanthin, hypophyllanthin dan phyltetralin pada 10 mg / kg juga
diproduksi dan ekskresi urin masing-masing lebih tinggi dari asam urat dibandingkan tikus normal bila
dibandingkan dengan hewan kontrol hiperurisemik. Mirip dengan hasil yang diperoleh untuk ekskresi
asam urat, administrasi benzbromarone, probenesid dan lignan menyebabkan lebih tinggi asam urat,
dibandingkan dengan kontrol hiperurisemik yang masing-masing hanya diamati pada hewan yang diberi
benzbromarone (10 mg / kg) dan phyllanthin (10 mg / kg). Administrasi dari phyllanthin juga
menghasilkan peningkatan tergantung dosis clearance asam urat dari masing-masing uji jika
dibandingkan dengan yang kontrol hiperurisemik.

Kesimpulan
Berdasarkan temuan dari penelitian ini, tampak jelas bahwa peningkatan progresif dalam ekskresi urin
asam urat yang ditampilkan dari fraksi Phyllanthus niruri, sub-fraksi dan lignan adalah sejajar. Efek anti
hiperurisemik berbeda dengan studi penghambatan dari xantin oksidase. Oleh karena itu, tampaknya
sangat mungkin bahwa efek anti hiperurisemik Ekstrak methanol niruri mungkin terutama disebabkan
untuk aksi urikosurik dan sebagian melalui penghambatan oksidase xanthine. Sedangkan efek anti
hiperurisemik dari lignan ini disebabkan oleh tindakan urikosuriknya.