TATA TERTIB

1. Mendaftarkan diri untuk mendapatkan kartu

praktikum
2. Kartu selalu dibawa tiap praktikum dan responsi
3. Menulis rencana kerja praktikum pada buku BRK,
dikumpul sebelum praktikum dimulai
 BRK disampul seragam tiap kelompok
4. Datang tepat waktu
5. Tertib didalam laboratorium, bicara seperlunya
6. Meja praktikum ditinggalkan dalam keadaan bersih
dan rapi
7. Laporan praktikum dikumpulkan paling lambat 3
(tiga) hari setelah praktikum
PERLENGKAPAN
 TIAP MAHASISWA :  TIAP KELOMPOK :
 Jas paraktikum  Pena marker
 Sandal jepit baru  Selotip bening
bernama  Korek api
 Buku Rencana Kerja  Pinset
 Pensil Warna  Label/stiker nama
 Masker  Tissue gulung
 Sarung tangan
 Dimasukkan dalam
box alat
PEWARNAAN
KUMAN

LAB. MIKROBIOLOGI
F. KEDOKTERAN UNS
PEWARNAAN
 Mikroorganisme dapat dilihat dengan alat
bantu : MIKROSKOP
 Teknik pewarnaan mikroorganisme dilakukan
untuk membantu mempelajari MORFOLOGI
mikroorganisme  berbeda dengan latar
belakang/artefak/benda-benda sekelilingnya
FIKSASI
 Adalah upaya melekatkan spesimen pada
gelas obyek agar tidak lepas saat proses
pewarnaan

 Metode :
 Fisis  Pemanasan
 Kimiawi  Methyl alkohol (metanol)
SPESIMEN/SAMPEL
 Cair/Larutan  Langsung dibuat preparat
 Padat  dilarutkan dulu baru dibuat
preparat
 Apusan yang baik :
 Tipis
 Rata
PEWARNAAN SEDERHANA
 Menggunakan satu zat warna
 Warna bakteri & sekitarnya sama
 Warna bakteri lebih dens/jelas
 Dapat digunakan untuk melihat
MORFOLOGI kuman
 Macam : Safranin, Fuchsin basis,
Kristal Violet, Methylen Blue
PRAKTIKUM

 Tujuan : Melihat morfologi kuman dengan satu macam

pewarna
 Dasar : Dengan pewarnaan kuman terlihat lebih jelas

dibanding sekitarnya
 Cara kerja :
HASIL PEWARNAAN

Safranin

Fuchsin

Methylen Blue

Kristal violet
PEWARNAAN GRAM
 Menggunakan dua macam pewarna
 Menggunakan peluntur diantara dua zat pewarna tsb
 Dapat digunakan untuk membedakan struktur dinding
sel bakteri menurut reaksi pewarnaan
 Bakteri yang tahan terhadap peluntur akan menyerap
pewarna pertama  Reaksi +
 Bakteri yang tidak tahan terhadap peluntur akan
menyerap pewarna kedua  Reaksi -
GRAM

 Pewarna Pertama : Kristal violet (A)

 Intensifier : Kalium Yodida (B)
 Peluntur : Alkohol (C)
 Pewarna Kedua : Safranin (D)
 DINDING BAKTERI
 GRAM POSITIF  GRAM NEGATIF
 Lapisan peptidoglikan  Lapisan peptidoglikan
tebal tipis
 Tanpa selaput Luar  Mempunyai selaput
luar

Membr sitoplasma Membr sitoplasma

Sitoplasma Sitoplasma
 PRAKTIKUM
 Tujuan : Membedakan bakteri Gram + dan Gram -
 Dasar : Gram + mempertahankan pewarna I,
Gram – Tidak dapat mempertahankan
pewarna I, luntur oleh alkohol, shg
menyerap pewarna II
 Cara kerja :
HASIL PEWARNAAN
Clostridium tetani Escherechia coli

Gafkyia Nisseria gonococcus

PEWARNAAN TAHAN ASAM
 PRINSIP PEWARNAAN = PEWARNAAN MAJEMUK
• Dinding sel bakteri tahan asam mengandung lipid
tinggi  sukar diwarnai
• Mewarnai bakteri tahan asam  menghilangkan
lapisan lipid pada dinding sel : pemanasan (ZN),
deterjen (KG)
• Macam : Ziehl Nielsen, Kinjoun, Kinjoun Gabbet,
Tan Thiam Hok dll
ZIEHL NIELSEN

 Pewarna pertama : Fuchsin basis

 Peluntur : Alkohol dan
HCl
 Pewarna kedua : Methylen Blue

 Menghilangkan lipid : pemanasan

 PRAKTIKUM
 Tujuan : Membedakan bakteri tahan asam & tidak
tahan asam
 Dasar : Bakteri tahan asam sukar diwarnai, namun
bila telah menyerap pewarna akan sukar
dilunturkan sekalipun dengan asam kuat
 Cara kerja :
HASIL PEWARNAAN

BTA + BTA -
 PEWARNAAN KHUSUS
 Digunakan untuk melihat organella accessories
(tambahan)  Spora, Flagel, Kapsul, Granula

 Organella tambahan  Sukar diwarnai

 Spora : struktur kompleks berlapis-lapis sukar
ditembus zat warna
 Kapsula : polisakarida yang tidak menyerap zat warna
 Granula : polimer fosfat, tidak nampak dg pewarnaan
biasa
 Flagel :sangat rapuh, mudah tanggal pada proses
pewarnaan
METODE PEWARNAAN

 KAPSULA : Burri, Hiss, Gins, Flu, Muis,

Raebiger
 SPORA : Klein Vedder, Sceffer
Fulton,Darner
 FLAGELLA : Gray
 GRANULA : Neisser
PEWARNAAN KAPSULA
 Metode yang digunakan : Burri
 Menggunakan kombinasi pewarnaan negatif
dan pewarnaan sederhana
 Latar belakang dibuat gelap (pewarnaan
negatif), kuman dicat methylen blue
(pewarnaan sederhana)  Kapsul terlihat
sebagai ‘hallo’ disekitar masa biru (kuman)
 PRAKTIKUM
 Tujuan : melihat kapsul bakteri dengan kombinasi
negatif sataining & simple staining
 Dasar : Kapsula bakteri tidak menyerap zat warna,
kapsula dapat dilihat dengan menggelapkan
medan penglihatan, kapsul nampak sebagai
hallo yang mengelilingi kuman.
 Cara kerja :
HASIL PEWARNAAN
Diplococcus pneumoniae

Pewarnaan Gram Pewarnaan Burri

PEWARNAAN SPORA
 Metode yang digunakan : Klein Vedder
 Menggunakan prinsip pemanasan dan pewarnaan
majemuk tahan asam
 Pemanasan  membengkakkan dan memecah
spora shg pewarna dapat masuk dalam spora
 Setelah spora terwarnai, tidak mudah dilunturkan
walau dengan asam kuat sekalipun
 Spora  mengikat warna I
Tubuh bakteri  mengikat warna II
PRAKTIKUM
 Tujuan :Melihat bentuk dan letak spora bakteri.
 Dasar : Spora dapat menyerap zat warna setelah
dipanaskan, spora mempertahankan warna
dengan kuat terhadap peluntur asam, badan
kuman tidak tahan terhadap peluntur asam
 Cara kerja :
HASIL PEWARNAAN

Clostridium sp

SPORA

TUBUH
KUMAN

Pewarnaan Gram Pewarnaan Klein Vedder