CCR5 down-mengatur osteoklas Fungsi di gigi Orthodontic Gerakan

ABSTRAK
Selama pergerakan gigi ortodontik, ada lokal produksi kemokin dan masuknya
leuko- cytes ke periodonsium. CCL5 memainkan impor- Peran tant dalam
perekrutan osteoklas dan activation.This studi yang bertujuan untuk menyelidiki
apakah CCR5- yang reseptor mempengaruhi peristiwa ini dan, akibatnya,
pergerakan gigi ortodontik. Sebuah appli- ortodontik Ance ditempatkan pada tikus
wild type (WT) dan CCR5- deficientmice (CCR5- / -) .Theexpressionofmediators
terlibat dalam remodeling tulang dievaluasi dalam jaringan periodontal oleh Realtime PCR. Nomor osteoklas TRAP-positif dan ekspresi cathepsin K, RANKL, dan
MMP13 yang signifikan cantly lebih tinggi di CCR5- / -. Sementara itu, ekspresi
dari dua penanda diferensiasi osteoblastik, Runx2 dan osteocalcin, dan bahwa
tulang resorpsi regulasitor, IL-10 dan OPG, lebih rendah pada CCR5- / -. Analisi
sis data juga menunjukkan bahwa CCR5- / - dipamerkan jumlah yang lebih besar
dari pergerakan gigi setelah 7 hari pembebanan mekanik. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa CCR5 mungkin turun-pengatur tulang alveolar resorpsi
selama pergerakan ortodontik.
Kata kunci:
pergerakan gigi ortodontik, tulang renovasi, CCR5, kemokin

Pengantar
pergerakan gigi rthodontic telah didefinisikan sebagai hasil dari sebuah bio
Tanggapan logis untuk stimulus mekanik diterapkan gigi, dan itu adalah dicapai
oleh ligamen periodontal (PDL) dan remodeling tulang alveolar. Tulang diserap
kembali oleh osteoklas pada situs tekanan, dan dibentuk oleh osteoblas pada situs
ketegangan (Krishnan dan Davidovitch, 2006; Wise dan Raja, 2008).
Remodeling tulang juga diatur oleh endogen media- inflamasitor, seperti
prostaglandin, sitokin, dan kemokin (Alhashimi et al.,1999; Andrade et al., 2007; .
Garlet et al, 2007, 2008; Maeda et al., 2007;Boyce dan Xing, 2008; Bijaksana dan
Raja, 2008). Kemokin adalah fam- besarily rendah berat molekul sitokin
kemotaktik (Allen et al., 2007; Sallusto dan Baggiolini, 2008). Molekul-molekul
ini memberikan sinyal kunci untuk perdagangan dan homing osteoklas dan
osteoblas (Fuller et al, 1995;. Yu dkk., 2004; Yano et al., 2005). Selain itu, kemokin
juga dapat mengontrol proliferasi, diferensiasi, aktivasi, dan kelangsungan hidup
sel-sel tulang (Handkk., 2001; Watanabe et al., 2004; Yu dkk., 2004; Yano et
al., 2005; Lee et al., 2007).
Studi terbaru menunjukkan bahwa kemokin CC mungkin memainkan peran
dalam model hewan (Alhashimi et al, 1999;. Andrade et al, 2007.) dan manusia

pergerakan gigi ortodontik (Maeda et al, 2007;.. Garlet et al, 2008). Namun, sedikit
yang diketahui tentang yang kemokin atau reseptor yang sesuai terlibat dalam
resorpsi dan pembentukan tulang selama gigi ortodontik gerakan. Beberapa
laporan menunjukkan bahwa kedua CCL3 (Fuller et al, 1995;. Han
dkk., 2001; Watanabe et al., 2004; Yu dkk., 2004; Oba et al, 2005.; Lee . et
al, 2007) dan CCL5 (Yu et al, 2004;. Yano et al, 2005) mempromosikan rekrutmen.
ment dan diferensiasi osteoklas. Kedua kemokin mengikat CCR1 dan
Reseptor CCR5 (Oba et al, 2005;. Yano et al, 2005;. Allen et al., 2007; Sallusto
dan Baggiolini, 2008), yang dinyatakan dalam osteoklas (Han et al.,
2001; Yu dkk., 2004; Yano et al., 2005; Lee et al., 2007) dan osteoblas
(Yano et al., 2005). Beberapa hasil terlibat CCR5 di osteolisis in vitro dan in
vivo (Oba et al, 2005;... menu et al, 2006, Rossi et al, 2008), meskipun yang fungsi
dalam resorpsi tulang belum ditentukan. Ini juga telah ditemukan bahwa
interferensi dengan CCR5, dengan pemberian sistemik dari antagonis,
mengakibatkan pencabutan-multiple myeloma-diinduksi osteolisis (Menu
et al., 2006) dan perbaikan dari kehilangan tulang arthritis terkait (Vierboom et al.,
2005; Okamoto dan Kamatani, 2006).
Pemahaman yang lebih baik dari respon seluler dan molekuler untuk
mekanik pemuatan sangat penting untuk perbaikan di masa depan perawatan
ortodontik. Didalam Penelitian ini, kami menerapkan model pergerakan gigi ke
tikus CCR5-kekurangan untuk menyelidiki peran CCR5 dalam pergerakan gigi
ortodontik
BAHAN & Metode
Hewan eksperimental
Tiga puluh tikus liar sepuluh minggu-tua (WT) (C57BL6 / J) dan 30 tikus CCR5kekurangan sepuluh minggu-tua (CCR5- / -) Yang digunakan dalam
percobaan ini. Semua hewan diperlakukan di bawah regulasi etikations untuk
hewan percobaan, yang didefinisikan oleh Etika Kelembagaan Komite. Berat
masing-masing hewan tercatat di seluruh periode percobaan, dan tidak ada
kerugian yang signifikan dari berat badan.
Protokol eksperimental
Protokol eksperimental didasarkan pada pekerjaan sebelumnya (Andrade
et al., 2007). Tikus-tikus dibius ip. Dengan 0,2 mL larutan yang mengandung
xylazine (0,02 mg mL -1 ) Dan ketamin (50 mg mL-1). Sebuah alat ortodontik
terdiri dari Ni-Ti 0,25 x 0,76 mm (Lancer Ortodonti, San Marcos, CA, USA) coil
musim semi, terikat oleh resin cahaya-sembuh (Transbond, Unitek / 3M,
Monrovia, CA, USA) antara molar pertama kanan dan gigi seri (Lampiran Gambar.
1). Sisi kiri digunakan sebagai control. Kekuatan besar itu dikalibrasi oleh
pengukur ketegangan (Shimpo Corp, Tokyo, Jepang) untuk mengerahkan kekuatan
0,1 N diterapkan ke arah mesial. Jumlah gaya yang dihasilkan oleh aktivasi
kumparan (1 mm = 0,1 N) didasarkan pada kami sebelumnya eksperimen, yang

diadaptasi dari metode yang diusulkan oleh Pavlin dkk. (2000). Tidak ada
reaktivasi selama periode eksperimental. Hewan dibagi menjadi 2 kelompok:
kelompok kontrol (hewan non-dioperasikan) dan kelompok eksperimen (dengan
diaktifkan coil spring). Tikus tewas dengan overdosis anestesi pada waktu berikut:
7 dan 12 hari untuk histo- pengukuran logis, dan 3 dan 7 hari untuk analisi
biokimiasis. Untuk setiap set percobaan (histologis dan biokimia pengukuran), 5
hewan yang digunakan untuk setiap titik waktu.
Histologi
Hak dan bagian kiri maxillae tersebut, termasuk yang pertama, kedua, dan geraham
ketiga, yang dibedah dan tetap di 10% buffered untuk-malin (pH 7,4) dan dibasuh
dengan air suling. Setelah fiksasi, masing-masing hemi-rahang itu didekalsifikasi
dalam 14% EDTA (pH 7,4) selama 14 hari dan ditanam dalam parafin. Sampel
dipotong menjadi vertikal dengan bagian cal ketebalan 4 mm. Pemilihan
didasarkan pada Kriteria morfologi seperti posisi disto-bukal root, di mana ia
tampaknya selama mungkin. Bagianbernoda untuk tartrat-asam fosfatase tahan
(TRAP; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), counterstained dengan
hematoxylin, dan digunakan untuk pemeriksaan histologis. Distal- yang akar
bukal, pada koronal dua-pertiga dari periodontal mesial situs, digunakan untuk
jumlah osteoklas pada 5 bagian per hewan.Osteoklas diidentifikasi sebagai TRAPpositif, berinti sel pada permukaan tulang. Jumlah osteoklas adalah
ditentukan dalam 5 bidang mikroskopis berturut-turut (x 40)
Pengukuran Gerakan Gigi
Gambar J software (National Institutes of Health) yang digunakan untuk
evaluasi morfometrik dari jumlah perpindahan gigi. Kita mengukur jarak antara
persimpangan sementum-enamel (CEJs) dari molar pertama dan molar kedua (1stDan 2nd - jarak molar) di 5 bagian vertikal per hewan menggunakan Axioskop 40
(Carl Zeiss, Gttingen, Jerman) dilengkapi dengan kamera digital (PowerShot
A620, Canon, Tokyo, Jepang), sesuai-ing untuk studi sebelumnya (Mavragani et
al., 2005). Tiga pengukuran KASIH dilakukan untuk setiap evaluasi, dan
variabilitas di bawah 5% dalam semua kasus. Untuk memvalidasi konsistensi
pengukuran, dua pemeriksa diukur 20 slide berturut sampai r 2 minimal 0,85
berulang kali diperoleh. RNA Ekstraksi dan Real-time PCR Menggunakan
mikroskop stereo, kita diekstraksi ligamen periodontal dan sekitarnya sampel
tulang alveolar dari daerah sekitarnya ke atas molar pertama. Gingiva, mukosa
mulut, dan gigi yang dibedah dan dibuang. Jaringan menjadi sasaran Ekstraksi
RNA dengan Trizol reagen (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). DNA komplementer
(cDNA) disintesis dengan 2 mg RNA melalui reaksi reverse-transkripsi
(Superscript II, Invitrogen). Real-time analisis PCR dilakukan dalam ABI Prisma
7000 dengan fluoresensi kuantifikasi SYBR-hijau sistem (Terapan Biosystems,
Foster City, CA, USA). Standar Kondisi PCR yang 95C (10 menit), dan kemudian

40 siklus 94C (1 menit), 58C (1 menit), dan 72C (2 menit), diikuti oleh-standar
yang kurva denaturasi dard. Urutan primer adalah sebagai berikut untuk mouse aktin: OPG, RANKL, TRAF6, MMP13, cathepsin K, Runx2, OCN, CCL2, CCL3,
CCL5, CCR1, dan IL-10 (Lampiran Tabel 1).
Kami menggunakan nilai rata-rata dari Ct duplikat pengukuran menghitung
ekspresi gen sasaran, dengan normalisasi ke pengendalian internal (-aktin)
menggunakan rumus 2-DCt. Analisis statistik Evaluasi masing-masing kelompok
dinyatakan sebagai rataSEM. Perbandingan antara kelompok dianalisis secara
statistik oleh satu arah analisis varians (ANOVA), diikuti oleh Newman-Keuls tes
beberapa perbandingan. P <0,05 adalah pertimbangan-ered signifikan secara
statistik.
HASIL
Gigi Gerakan, TRAP Kegiatan, dan Jumlah
Sel-TRAP positif Peningkatan di CCR5
-/Tikus
Hasil menunjukkan jumlah yang lebih besar dari pergerakan gigi di
CCR5
-/tikus setelah 7 dan 12 hari dari beban mekanis ketika
dibandingkan dengan yang di WT tikus pada saat-poin yang sama (Gambar. 1A).
Pada kelompok kontrol, aktivitas TRAP ditemukan pada distal
sisi permukaan tulang alveolar, dan tidak ada aktivitas diamati pada
wilayah mesial periodonsium (Gambar. 1B). Pada hari 7, TRAP
Kegiatan muncul untuk meningkatkan pada periodonsium mesial
disto-bukal akar, dan untuk mengurangi di sisi distal akar ini di
Tikus WT. Dalam CCR5
-/tikus, tampaknya ada penurunan yang sama
di sisi distal, tetapi peningkatan yang lebih besar dari aktivitas TRAP pada
sisi mesial. Pada hari 12, kegiatan TRAP tampaknya meningkat lebih
secara luas di CCR5
-/tikus (Gambar. 1C), yang disajikan lebih besar