KOLOKIUM

Komposisi Kimia Dan Aktivitas Antimikrobial Minyak Atsiri Spesies Guatteriopsis Dari
Amazon

Nama : Raudhatul Jannah

Nim : 0608103010037
PEMBIMBING: Binawati Ginting, M.Si
TANGGAL SEMINAR 24 Mei 2010

ABSTRAK

Minyak atsiri dari Guatteriopsis blepharophylla, Guatteriopsis friesiana dan Guatteriopsis hispida dihasilkan dengan metode destilasi
dan dianalisis menggunakan GC dan GC/MS. Senyawa utama yang ditemukan pada daun tanaman tersebut adalah minyak Guatteriopsis
blepharophylla yaitu caryophyllene oksida (1) (69,25%). Minyak pada daun Guatteriopsis friesiana mengandung predominan β-
eudesmol (2) (51,60%), γ-eudesmol (3) (23,70%), dan α-eudesmol (4) (14,56%). Senyawa utama yang diidentifikasi dalam daun
Guatteriopsis hispida adalah β-pinen (38,18%), α-pinene (30,77%) dan (E)-karyophyllen (20,59%). Aktivitas antimikroba minyak atsiri
diuji terhadap 11 jenis mikroorganisme. Minyak atsiri Guatteriopsis friesiana menunjukkan aktivitas antimikroba yang signifikan untuk
semua mikroorganisme uji, sedangkan Guatteriopsis hispida dan Guatteriopsis blepharophyla memiliki aktivitas yang besar terhadap
Rhodococcus equi dengan nilai MIC sebesar 50 μg/mL. Unsur utama dari masing-masing minyak atsiri juga diuji secara terpisah, dan
menunjukkan aktivitas yang lebih rendah dibandingkan dengan minyak mentah. Selain itu, campuran dari unsur utama, dalam proporsi
yang sama ditemukan pada minyak Guatteriopsis friesiana dan minyak Guatteriopsis hispida, tidak menunjukkan aktivitas yang sama
dengan minyak aslinya.

1. Pendahuluan 1976). Tanaman yang belum diuji secara fitokimia (kecuali

Annonaceae adalah tanaman tropis dan substropis yang
memiliki sekitar 120 genera dan lebih dari 2000 spesies
(Leboeuf et al., 1982). Tanaman ini merupakan sumber buah-
buahan yang dapat dimakan, sebagai bahan baku kosmetik dan
industri parfum, serta sebagai tanaman obat (Leboeuf et al.,
1982; Boyom et al., 2003; Braga, 1976; Gemtchújnicov, 1976).
Meskipun tanaman ini digunakan sebagai tanaman obat untuk
masyarakat, namun jumlah spesies yang telah diketahui
kandungan zat kimianya masih sedikit yang diselidiki (ca 150
spesies yang termasuk dari 41 genera) (Castedo et al., 1991).
Unsur utama kimia dari jenis famili tanaman ini adalah
alkaloid, karbohidrat, lipid, asam amino, protein, polifenol,
terpen, senyawa aromatik dan asetogenin (Leboeuf et al., 1982;
Rupprecht et al, 1990). Walaupun Annonaceae memiliki
keragaman kandungan kimia, namun yang lebih diutamakan
untuk dipelajari adalah senyawa alkaloid pada tanaman tersebut,
yang memiliki Kemotaksonomi (Castedo et al., 1991).
Guatteriopsis adalah genus kecil dari famili tanaman ini yang
dikenal sebagai envireira, yang terdiri dari empat spesies
tanaman tingkat rendah, yang tumbuh di Amerika Tengah dan
Amerika Selatan (Hutchinson, 1964). Hanya satu studi fitokimia
pada genus ini yang telah dilaporkan, yaitu isolasi dan
identifikasi minyak atsiri dari daun Guatteriopsis
blepharophylla (Maia et al., 2005). Tetapi penelitian yang
melibatkan aktivitas biologis baik dari senyawa atau ekstrak
genus ini belum dilakukan.
Dalam tulisan ini kami melaporkan komposisi kimia dan
aktivitas antimikroba minyak atsiri dari daun Guatteriopsis
blepharophylla, Guatteriopsis friesiana dan Guatteriopsis
hispida, yang merupakan tiga spesies tanaman dari Amazon,
Brazil.
Jenis tumbuhan yang dipilih didasarkan pada seringnya
penggunaan spesies dari famili tanaman ini dalam pengobatan
tradisional (Boyom et al., 2003; Braga, 1976; Gemtchújnicov,
Guatteriopsis blepharophylla) dan diuji aktivitas biologis akan
diteliti pada penelitian ini.
Ketiga spesies ini merupakan tanaman tingkat rendah yang
dikenal sebagai '’envireira". Morfologi tanaman ini memiliki
kulit yang tebal berwarna kekuningan, dan ditemukan di daerah
Amazon, Brazil (Ribeiro et al., 1999), namun tidak begitu
dikenal pada literatur akademik.
2. Hasil dan Pembahasan
Minyak dari daun tanaman Guatteriopsis blepharophylla
diperoleh sebanyak 0,24%, Guatteriopsi friesiana sebanyak
0,50% dan Guattreiopsis hispida 0,41% yield (relatif terhadap
berat sampel kering). Hasil analisis minyak atsiri ditunjukkan
pada Tabel 1. Komposisi utama minyak atsiri mengandung
monoterpen dan seskuiterpen. Seskuiterpen mewakili lebih dari
90% dari minyak Guattriopsis blepharophylla (90,56%),
Guatteriopsis friesiana (97,13%), dan Guatteriopsis hispida
29,25%. Monoterpen mewakili lebih dari 70% dari minyak
Guattreiopsis hispida. Walaupun minyak yang dihasilkan dari
tanaman Annonaceae bersifat volatil, namun berbeda secara
kualitatif dan kuantitatif (lihat Tabel 1). Komponen utama yang
ditemukan dalam minyak daun Guatteriopsis blepharophylla
adalah Caryophyllene oksida (1) (69,25%). Minyak daun
Guatteriopsis friesiana mengandung dominan β-eudesmol (2)
(51,60%), γ-eudesmol (3) (23,70%) dan α-eudesmol (4)
(14,56%) (Gambar 1). Senyawa utama dalam minyak daun
Guatteriopsis hispida adalah β-pinena (38,18%), α-pinena
(30,77%) dan (E)-caryophyllena (20,59%). Isomer eudesmol
berhasil dipisahkan dengan KLT menggunakan silika gel dengan
AgNO3. Semua isomer dikarakterisasi lebih lanjut menggunakan
analisis spektroskopi NMR (Nuclear Magnetic Resonansi).
Minyak atsiri dari jenis tanaman Guatteriopsis
blepharophylla telah dilakukan uji fitokimia (Maia et al., 2005).
Unsur utama yang terkandung dalam minyak atsiri dari
Guatteriopsis blepharophylla pada literatur, sama dengan Carissone 1926
penelitian sebelumnya yaitu menggunakan analisis spektroskopi Monoterpenes
1
H dan 13C NMR menunjukkan senyawa Caryophyllene oksida identified 70.52 0.08 0.18
(1). Dalam penelitian ini dilaporkan bahwa identifikasi senyawa Sesquiterpenes
telah dilakukan sebelumnya. identified 29.25 90.56 97.13
Minyak atsiri Guatteriopsis friesiana mengandung senyawa
Table 1 tertentu yang tidak diamati dalam minyak lainnya. Namun,
Komposisi kimia dari minyak atsiri pada spesies Guatteriopsis
beberapa senyawa seperti α-selinena dan spathulenol, ada dalam
Unsur RIa G. G. G.
Hispid blepharophylla Friesiana minyak ini yang juga dimiliki pada spesies famili Annonaceae
(%) (%) (%) lain (Maia et al., 2005). Senyawa (2), (3), dan (4) ditemukan
pada minyak atsiri Hexalobus crispiflorus (Annonaceae)
α-Pinene 934 30.77
Camphene 944 0.43 (Boyom et al.,2003). Isolasi kedua senyawa tersebut yang
β-Pinene 977 38.18 berasal dari minyak atsiri famili Annonaceae telah dilaporkan.
Myrcene 991 0.47 Pada penelitian ini juga diamati bahwa senyawa (1), (E)-
p-Cymene 1022 0.10 caryophyllene, γ-gurjunene, δ-cadinene, β-selinene, α-trans-
Limonene 1026 0.36 bergamotene dan humulene epoksida II ditemukan dalam
Citronellal 1152 0.08 minyak atsiri dari Guatteriopsis hispida dan Guatteriopsis
α-Terpinen-4-ol 1174 0.08 blepharophylla dan ternyata hasil analisis ini sama dengan
α–Terpineol 1188 0.13
laporan penelitian lain pada famili Annonaceae (Leboeuf et al.,
δ-Elemene 1336 0.11
Cyclosativene 1368 0.12
1982).
α–Ylangene 1373 0.27 0.89 Penelitian terbaru (Maia et al., 2005; Founier et al., 1997)
β-Bourbonene 1388 0.21 menunjukkan bahwa senyawa (1) dan spathulenol merupakan
β–Elemene 1390 1.18 senyawa volatil penting yang terdapat dalam minyak dari daun
(E)-caryophyllene 1420 20.59 0.99 Guatteria ouregou, Guatteria sagotiana dan Guatteria
β–Ylangene 1425 0.12 wachenheimi, berasal dari Guyana Prancis. Pada literatur,
α-Trans- dinyatakan bahwa genus Guatteriopsis bukan dari genus
0.33
bergamotene 1434 0.13 Guatteria, dikarenakan keunikan pada kelopak bunga yang khas
Aromadendrene 1441 0.10 yaitu berbentuk belah ketupat pada permukaan. Berdasarkan
α–Humulene 1451 0.70
analisis, komposisi dari minyak yang dihasilkan tanaman genus
(E)-b-Farnesene 1458 0.40
ini, memiliki kesamaan secara struktur dengan Annonaceae pada
Trans-cadina-1-
(6),4-diene 1475 0.16 literatur (Maia et al., 2005; Founier et al, 1997).
γ-Gurjunene 1479 0.63 0.24 Telah dilaporkan sebelumnya bahwa senyawa (1), (E)-
γ–muurolene 1478 0.15 caryophyllene dan spathulenol dimiliki pada tanaman spesies
γ–curcumene 1482 0.68 Xylopia, Guatteria, Hexalobus, Pachypodanthium dan Duguetia
γ-Himachalene 1485 1.44 (Maia et al., 2005; Founier et al.,1997; Boyom et al., 2003;
Germacrene D 1489 0.14 Fechine et al., 2002; Lima et al, 2003). Tanaman spesies ini
epi-Cubebol 1492 0.14 dikenal sebagai kemotaksonomi pada genera Annonaceae
β–Selinene 1493 0.78 0.39 (Founier et al., 1997; Fechine et al., 2002; Lima et al.,2003).
Cuparene 1496 Hasil pengujian aktivitas antimikroba minyak atsiri
β–Bisabolene 1507 0.31
ditunjukkan pada Tabel 2. Minyak atsiri yang paling efektif
γ–Cadinene 1511 0.18
δ–Cadinene 1523 1.20 1.07 adalah minyak Guatteriopsis friesiana dikarenakan aktivitas
Trans-cadina- antimikroba yang diperoleh signifikan untuk semua
1(2),4-diene 1531 0.38 mikroorganisme uji, yaitu sangat menghambat
α-Calacorene 1541 0.69 aktivitas mikroba seperti Bacillus sustilis, Staphylococcus
Elemol 1551 2.16 epidermides, Enterococcus hirae, Candida albicans,
Trans-cadinene- Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus dan Rhodococcus
ether 1551 2.03 equi dengan nilai MIC masing-masing adalah 60, 100, 100, 125,
Germacrene B 1554 0.31 125, 125 dan 50 μg/mL. Guatteriopsis blepharophylla
Spathulenol 1578 2.64
menunjukkan nilai MIC untuk aktivitas antimikroba pada
Caryophyllene
Candida albicans, Micrococcus luteus dan Staphylococcus
oxide (1) 1581 2.77 69.25
β -Copaen-4-α-ol 1592 0.70 aureus masing-masing adalah 700, 1000 dan 1000 μg/mL dan
Humulene epoxide
menunjukkan aktivitas antimikroba yang kuat terhadap
II 1609 0.12 1.98 Rhodococcus equi dengan nilai MIC sebesar 50 μg/mL.
10-epi-γ-eudesmol 1617 1.40 Guatteriopsis hispida menunjukkan aktifitas yang selektif
1-epi-Cubenol 1627 0.33 terhadap Rhodococcus equi dengan nilai MIC sebesar 50 μg/mL.
Cis-cadin-4-en-7-ol 1631 1.84
Caryophylla-
4(14),8(15)-dien-5-
olb 1636 0.55
γ-Eudesmol (3) 1638 23.70
Hinesol 1641 0.89
Cubenol 1641 0.42
β-Eudesmol (2) 1660 51.60
α-Eudesmol (4) 1662 14.56
14-hydroxy-9-epi-
(E)-caryophyllene 1670 2.50
Ishwarone 1679 2.01
14-oxy-α–
muurolene 1770 0.22
 Gambar 1. Struktur dari senyawa isolasi dari minyak atsiri pada
Guatteriopsis friesiana dan Guatteriopsis blepharophylla

Tabel 2
Aktivitas antimicrobial dari minyak atsiri, senyawa murni dan campuaran A dan B dari spesies Guatteriopsis.
Minyak atsiri/senyawa Konsentrasi inhibitor minimum (μg/mL)
murni
B. S. E. E. E. M. P. R. S. S. C.
subtilis epidermides faecium hirae coli luteus aeruginosa equi choleraesuis aureus albicans
G. hispida f f f F f f f 50 f F F
G. blepharophylla f f f F f 1000 f 50 f 1000 700
G. friesiana 60 100 250 100 900 125 900 50 600 125 125
Caryophyllene oxide (1) e e e E e f e 500 f E 600
β-eudesmol (2) 300 600 e 300 f f f 125 f F 125
γ-eudesmol (3) 800 700 f F f 800 300 800 e 600 500
α-eudesmol (4) 800 700 f 600 e 300 200 100 e 250 125
mixture A a 100 300 e E e 400 e 400 e 250 800
α –pinene e e e E e e e 500 e E 100
β –pinene e e e E e e e 800 e E 500
(E)-caryophyllene e e e E e e e 800 e E 250
mixture B b e e e E e e e 700 e E 700
Chloramphenicolc 20 40 70 120 40 50 850 40 60 20
Nystatind 50

a adalah campuran dari β -eudesmol, γ , α –eudesmol (1,0;0,5;0,3)

b adalah campuran dari α-pinene, β -pinene, (E)-caryophyllene (1,0;0,8;0,5)
c adalah obat sebagai control pada bakteri
d adalah obat sebagai control jamur
e adalah tidak diuji
f> adalah 1000μg/ml

Aktivitas antimikroba yang kuat dari minyak Guatteriopsis
friesiana dan Guatteriopsis blepharophylla mungkin
disebabkan karena kandungan seskuiterpen yang tinggi yaitu
97,13% dan 90,56%. Aktivitas antimikroba Guatteriopsis
friesiana juga dikarenakan adanya seskuiterpenoid sebesar
89,86% dari total minyak yang dianalisis yang mengandung
senyawa (2) (51,60%), senyawa (3) (23,70%) dan senyawa (4)
(14,56%), tetapi pada uji hayati yang dilakukan menggunakan
seskuiterpenoid yang diisolasi tidak menunjukkan aktivitas
yang sama seperti hasil penelitian pada minyak mentahnya
(Tabel 2). Hal ini mungkin terjadi karena efek sinergis dari
campuran senyawa ini, begitu juga pada minyak ini (campuran
A), telah diuji dan menunjukkan aktivitas yang lebih rendah
dari minyak mentah (Tabel 2).
Perbandingan aktivitas antara campuran A dengan senyawa
hasil isolasi, telah diamati memiliki efek sinergis pada Bacillus
subtilis dan Staphylococcus epidermides (Tabel 2), tetapi pada
masing-masing senyawa murni ternyata memberikan aktivitas
yang lebih aktif menghambat Candida albicans daripada
campuran A (800 μg/mL). Pada penelitian ini aktivitas dari
minyak mentah sama seperti yang diamati pada senyawa (2)
dan senyawa (4) yaitu memiliki niilai MIC sebesar 125 μg/mL.
Hal ini menunjukkan bahwa aktivitas dari minyak mentah
disebabkan adanya kedua senyawa ini.
Uji antimikroba senyawa (3) terhadap mikroorganisme
Micrococcus luteus, Rhodococcus equi dan Candida albicans,
ternyata merupakan penyebab aktivitas lebih rendah pada
minyak campuran, dibandingkan dengan senyawa (2) dan (4)
murni (Tabel 2).
Menurut hasil penelitian, senyawa yang diisolasi dari
Guatteriopsis friesiana tidak dapat berperan sebagai
antimikroba pada Enterococcus faecium atau Escherichia coli
pada minyak atsiri mentah. Hal ini disebabkan karena pengujian
terhadap Enterococcus dan Pseudomonas hirae aeruginosa
menggunakan minyak mentah dan senyawa dari daun
Guateriopsis friesiana adalah aktif sebagai antimikroba, tetapi
campuran A tidak aktif sebagai antimikroba dengan berbagai
konsentrasi pengujian (hingga 1000 μg/mL).
Aktivitas biologis dari β-eudesmol (2) sudah diketahui yaitu
sebagai diuretik, aktivitas hipotensi, antihepatotoksit atau agen
antiepileptik, dan insektidal dan juga bersifat antimikrobial
(Kusuma et al., 2004; Ding et al., 2000; Arora et al., 1967; Kiso
et al., 1983; Chiou et al., 1997; Marinho dkk., 2005; Miyakado
et al., 1976). Hal ini disebabkan karena seskuiterpenoid dan
turunannya dapat berfungsi sebagai aksi biologis, termasuk
antiasthmatik, antibakteri, antijamur, antiinflamasi, dan
aktivitas antineoplastik (Founier et al., 1997).
Aktivitas antimikroba dari minyak Guatteriopsis hispida
secara selektif dapat disebabkan karena adanya α dan β-pinene
serta (E)-caryophyllene, dan untuk aktivitas antimikroba dari
minyak Guattreiopsis blepharophylla dapat disebabkan karena
adanya senyawa (1), yang sudah dikenal dapat berfungsi
sebagai antimikrobial (Boyom et., 2003; Juven et al., 1994;
Harbone dan Williams, 1995; Kim et al., 1995; Cimanga et al.,
2002; Shunying et al., 2005; Sibanda et al, 2004.).
Senyawa murni utama dari Guatteriopsis hispida (yaitu α-
pinene, β-pinene dan (E)-caryophyllene) menunjukkan aktivitas
terhadap mikroorganisme Rhodococcus equi dan Candida
albicans, namun nilai MIC pada mikroorganisme Rhodococcus
equi dari senyawa isolasi dan campuran B (campuran senyawa
utama, yang ditemukan dalam minyak) lebih tinggi
dibandingkan minyak mentah (Tabel 2), Hal ini mungkin
disebabkan efek sinergis senyawa lain yang ada dalam minyak.
Efek sinergis ini mungkin juga terjadi pada minyak
Guatteriopsis blepharophylla dan senyawa (1).
3. Kesimpulan
Pada penelitian sebelumnya telah dilaporkan hasil analisis
senyawa volatil, aktivitas antimikroba, isolasi dan karakterisasi
senyawa utama dari daun Guatteriopsis friesiana, Guatteriopsis
hispida dan Guatteriopsis blepharophylla.
Hal yang menarik dari hasil pengujian ini, yaitu terjadi
perbedaan antara penggunaan minyak mentah, senyawa isolasi
dan campurannya, yang dipengaruhi pada jenis mikroorganisme
dan efek sinergis.
Minyak dari seskuiterpenoid maupun campurannya
menunjukkan aktivitas yang sama pada penelitian dan sangat
potensil terhadap aktivitas antimikrobial untuk Rhodococcus
equi, yaitu bakteri penyebab radang paru-paru pada hewan dan
manusia.
Senyawa hasil Isolasi dan identifikasi dari minyak atsiri
sangat penting sebagai kemotasonomi dari keluarga
Annonaceae, terutama dari kelompok Guatteria, yang memiliki
empat genera (Guatteria, Guatteriopsis, Guatteriella dan
Heteropetalum) yang memiliki perbedaan dalam karakter
morfologi.
4. Eksperimental
4.1. Peralatan
Spektrum NMR direkam dalam sebuah ARX Bruker-200
Spektrometer (200 MHz untuk 1H dan 50 MHz untuk 13C)
menggunakan pelarut kloroform deuterium. Nilai pergeseran
kimia dilaporkan dalam bagian per juta (ppm) dengan referensi
ke TMS. Analisis GC/FID dilakukan menggunakan Hewlett
Packard 6890 GC sistem dengan FID dan GC/MS analisis
Hewlett Packard pada 6890 GC digabungkan dengan model
selektif 5973 massa detektor.
4.2. Sampel Tanaman
Daun Guatteriopsis blepharophylla dan Guatteriopsis
friesiana berasal dari Universitas Federal Amazonas (UFAM),
Manaus, AM, Brazil yang diambil pada bulan Januari 2005.
Daun Guatteriopsis hispida diperoleh pada Adolpho Ducke
Reserve, di sekitar Manaus, AM, Brasil diambil pada Februari
2005. Sampel tanaman dikumpulkan secara random tanpa
memperkirakan usia dari tanaman, dan digabung menjadi 1
sampel. Sampel tanaman tersebut diidentifikasi oleh spesialis
Dr. Antônio Annonaceae Carlos Webber dari Universitas
Federal Amazonas (UFAM). Voucher spesimen Guatteriopsis
blepharophylla (no. 7340), Guatteriopsis friesiana (no. 7341)
dan Guatteriopsis hispida (no. 7707) yang disimpan di
laboratorium Herbarium Departemen Biologi, UFAM, Manaus,
Amazonas, Brazil.
4.3. Isolasi minyak atsiri
Ketiga sampel daun (masing-masing 250 g) dari jenis
Guatteriopsis dikeringkan pada suhu kamar selama 5 hari dan
kemudian didestilasi selama 4 jam, menggunakan alat jenis
Clevenger. Selanjutnya minyak dikeringkan dengan Na2SO4
anhidrat dan persentase komposisi minyak dihitung berdasarkan
berat kering bahan tanaman. Minyak disimpan pada suhu 4 oC
hingga dilakukan analisa lebih lanjut. Semua spesimen
diperoleh dari tanaman berbunga.
4.4. Analisis GC/FID
Analisis senyawa atsiri dilakukan menggunakan sistem
Hewlett Packard 6890 GC dengan kolom kapiler menyatu (30
m x 0,25 mm x 0,25 μm HP-5SM, Crossbond fenil 5%,
Dimetilpolisiloksan 95% Sigmaâ-Aldrich) langsung
digabungkan ke ionisasi nyala detektor. Kondisi injeksi telah
diubah dari Adams (2001): injektor suhu 240 oC; suhu oven
program 60-300 oC pada tingkat 3 oC/menit; 20:1 split selama
1,50 menit, gas pembawa He: 1 mL/menit, konstan aliran;
volume sample 1 μL.
4.5. Analisis GC/MS analisis
Analisis GC/MS dilakukan dalam modus EI pada Hewlett
Packard GC-6890 sistem dengan kolom kapiler menyatu (30 m
x 0,25 mm x 0,25 μm, HP-5MS, Crossbond 5% fenil, 95%
Dimetilpolisiloksan) langsung digabungkan pada Hewlett
Packard 5973 detektor selektif massa. Kondisi injeksi adalah
sama seperti yang dijelaskan di atas. Spektrometer massa
dioperasikan pada 70 eV. Unsur dari minyak atsiri diidentifikasi
dengan perbandingan pola spektrum massa dan indeks retensi
(RI) dengan yang diberikan dalam literatur (Adams, 2001).
Indeks retensi ini (RI) dihitung menurut van den Dool dan
Kratz (1963).
4.6. Fraksinasi Minyak atsiri
4.6.1. Guatteriopsis Blepharophyla
Minyak atsiri (200 mg) difraksinasi dengan kromatografi
kolom silika gel 60 (1,5 x 43,0 cm) (Merck, 0.063-0,200 mm)
menggunakan eluen petroleum eter dengan jumlah CH2Cl2%
yang bertambah (0, 5%, 10%, 20%, 50% dan 80%) selanjutnya
dengan CH2Cl2 dengan jumlah EtOAc yang bertambah (0%,
5%, 10%, 20% dan 50%). Diperoleh empat puluh lima fraksi
(25 mL). Fraksi eluen diuji dan dianalisis menggunakan KLT.
Fraksi 20-25 (50 mg) merupakan caryophyllene oksida (1)
cukup murni dari hasil analisis spektroskopi NMR.
4.6.2. Guatteriopsis friesiana
Minyak atsiri (300 mg) diperlakukan pada kondisi yang sama
seperti di atas dan diperoleh empat fraksi (30 mL). Fraksi elusi
diuji dan dianalisis menggunakan KLT. Selanjutnya dilakukan
kromatografi pemisahan fraksi 24-28 (50 mg) menggunakan
KLT preparatif dan 1% gel silika AgNO3 Doping, eluen
petroleum eter-EtOAc (80:20, v/v), menghasilkan β-eudesmol
(2), γ-eudesmol (3) dan α-eudesmol (4) yang cukup murni, yang
dianalisis dengan spektroskopi NMR.
4.6.3. Caryophyllene oksida (1)
Senyawa ini merupakan minyak bening (50,0 mg).
Spektroskopi data 1H dan 13C NMR: sama dengan data yang
dilaporkan dalam Raharivelomanana et al. (1995). Data EIMS :
sama dengan data yang dilaporkan dalam Sköld et al. (2006)
dan Raharivelomanana et al. (1995).
4.6.4. β-Eudesmol (2)
Senyawa ini berupa solid berbentuk amorf (15,0 mg). Data
spektroskopi 1H dan 13C NMR serta EIMS : sama dengan data
yang dilaporkan dalam Kusuma et al. (2004) dan
Raharivelomanana et al. (1995).

4.6.5. γ-Eudesmol (3)
Berupa minyak bening (8.0 mg). Data spektroskopi 1H dan
13C NMR: sama dengan data yang dilaporkan dalam
Raharivelomanana et al. (1995). Data EIMS: sama dengan data
yang dilaporkan dalam van Beek et al. (1989).
4.6.6. α-Eudesmol (4)
Berupa padatan berbentuk amorf (6,4 mg). Data spektroskopi
1H dan 13C NMR: sama dengan data yang dilaporkan dalam
Raharivelomanana et al. (1995). Data EI-MS: sama dengan data
yang dilaporkan dalam van Beek et al. (1989).
4.7. Kultur Mikroorganisme
Pertumbuhan aktivitas hambat dari minyak atsiri diuji
terhadap 11 mikroorganisme (Bacillus subtilis ATCC 5061,
Candida albicans ATCC 10.231, Enterococcus faecium CCT
5079, Enterococcus hirae ATCC 10541, Escherichia coli
ATCC 11.775, Micrococcus luteus ATCC 4698, Pseudomonas
aeruginosa ATCC 13388, Rhodococcus equi ATCC 6939,
Salmonella choleraesuis ATCC 10708, Staphylococcus aureus
ATCC 6538 dan Staphylococcus epidermides ATCC 12228).
Mikroorganisme diperoleh dari Tropical Culture Collection
(TCC) dari Tosello André Yayasan, Campinas, São Paulo,
Brazil. Mikroorganisme dipilih berdasarkan penggunaan secara
medis yang digunakan di laboratorium sebagai bagian dari
program skrining dengan tujuan mengidentifikasi produk alami
yang berpotensi untuk dimanfaatkan sebagai obat antimikroba
baru. Pertumbuhan aktivitas hambat dari senyawa berikut ini
diujikan, meliputi : caryophyllene oksida (1), β-eudesmol (2), γ-
eudesmol (3), α-eudesmol (4) (semua diisolasi dari minyak), α-
pinene, β-pinene, (E)-caryophyllene (Dari Aldrich Chemical
Company, Milwaukee, Wisconsin, USA), campuran A
(perbandingan β-eudesmol, γ, α–eudesmol adalah 1.0:0.5:0.3)
dan campuran B (perbandingan β-pinene, α-pinene, (E)-
caryophyllene adalah 1.0:0.8:0.5).
4.7.1. Determination of Minimal Inhibitory Concentration
(MIC)
Strain bakteri ditumbuhkan semalaman pada suhu 36 oC
dalam media agar (Merck), sedangkan C. albicans ditumbuhkan
di media agar Saboraud Dextrose. Inokulum untuk uji disiapkan
dengan melarutkan 0,85% larutan NaCl, disesuaikan dengan
skala McFarland 0,5 dan diukur menggunakan spektofotometri
pada panjang gelombang 580 nm. Suspensi sel diencerkan
menjadi 104 UFC/ml untuk digunakan dalam uji aktivitas. Uji
Konsentrasi Hambat Minimal (MIC) dilakukan sesuai dengan
metode Ellof (1998), menggunakan broth Müller-Hinton pada
plat kultur jaringan uji (96 sumur). Setiap bahan tanaman diuji
dengan pengulangan dua kali. Larutan stok minyak atsiri,
senyawa murni dan campuran A dan B diencerkan dan
dipindahkan, dan pengenceran serial dilakukan sehingga
konsentrasi dalam kisaran 1,0-0,016 mg/mL (1,0, 0,5, 0,25,
0,125, 0,063, 0,032 dan 0,016 mg/mL). Kloramfenikol dan
nistatin (Merck) digunakan sebagai acuan kontrol antibiotik
dalam kisaran 0,25-0,002 mg/mL (0,25, 0,125, 0,063, 0,032,
0,016, 0,008, 0,004 dan 0,002 mg/mL). Inokulum yang
ditambahkan untuk semua sumur dan plat diinkubasi pada 36
o
C selama 48 jam. Aktivitas antimikrobial dideteksi dengan
menambahkan 20 μL TTC 5% larutan air (triphenyl tetrazolium
klorida, Merck). MIC didefinisikan sebagai konsentrasi
terendah dari minyak atsiri, senyawa murni dan campuran A
dan B yang menghambat pertumbuhan seperti ditunjukkan oleh
pewarnaan sel TTC (sel yang mati tidak ternoda oleh TTC).
Ucapan Terima Kasih
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Prof. Dr. Antônio
Carlos Webber dari Federal University of Amazonas (UFAM),
Brazil, untuk identivikasi botanical dan CNPq serta Fundac_ão
Araucária–PR untuk motivasinya.
Daftar Pustaka
Adams, R.P., 2001. Identification of Essential oil Components by Gas
Chromatography/Quadrupole Mass Spectroscopy. Allured Publishing
Corporation, Carol Stream, Illinois.
Arora, C.K., Arora, R.B., Mesta, C.K., Shanbag, S.N., Seshari, R.,
Maheshari, M.L.,
Battacharya, S.C., 1967. Hypotensive activity of b-eudesmol and some
related sesquiterpenes. Ind. J. Med. Res. 55, 463–472. van Beek, T.A.,
Kleis, R., Posthumus, M.A., van Veldhuizen, A., 1989. Essential oil of
Amyris balsamifera. Phytochemistry 28, 1909–1911.
Boyom, F.F., Ngouana, V., Zollo, P.H.A., Menut, C., Bessiere, J.M., Gut, J.,
Rosenthal, P.J., 2003. Composition and anti-plasmodial activities of
essential oils from some Cameroonian medicinal plants.
Phytochemistry 64, 1269–1275.
Braga, R., 1976. Plantas do Nordeste especialmente do Ceará, 4a ed. Editora
Universitária UFRN, Natal-Rio Grande do Norte.
Castedo, L., Granja, J.A., Lera, A.R., Villaverde, M.C., 1991. Alkaloids
from Guatteria goudotiana. Phytochemistry 30, 2781–2783.
Chiou, L.C., Ling, J.Y., Chang, C.C., 1997. Chinese herbs constituent b-
eudesmol alleviated the electroshock seizures in mice and
electrographic seizures in rat hippocampal slices. Neurosci. Lett. 231,
171–174.
Cimanga, K., Kambu, K., Tona, L., Apers, S., Bruyne, I., Hermans, N.,
Totté, J., Pieters, L., Vlietinck, A.J., 2002. Correlation between
chemical composition and antibacterial activity of essential oils of
some aromatic medicinal plants growing in the Democratic Republic
of Congo. J. Ethnopharmacol. 79, 213–220.
Ding, H.Y., Wu, Y.C., Lin, H.C., 2000. Phytochemical and pharmacological
studies on Chinese changzhu. J. Chinese Chem. Soc. 47, 561–566.
Ellof, J.N., 1998. A sensitive and quick microplate method to determine the
minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria. Planta
Med. 64, 711–713.
Fechine, I.M., Navarro, V.R., Da Cunha, E.V.L., Silva, M.S., Maia, J.G.S.,
Barbosa-Filho, M., 2002. Alkaloids and volatile constituents from
Duguetia flagellaris. Biochem. Syst. Ecol. 30, 267–269.
Founier, G., Hadjiakhoondi, A., Lebouef, M., Cavé, A., 1997. Essential oils
of Annonaceae. Part. VIII. Volatile constituents of the essential oils
from three Guatteria species. J. Essent. Oil Res. 9, 275–278.
Gemtchújnicov, I.D., 1976. Manual de Taxonomia Vegetal: plantas de
interesse econômico. Ed. Agronômica Ceres, São Paulo-SP.
Harbone, J.B., Williams, C.A., 1995. Anthocyanins and other flavonoids.
Nat. Prod. Rep. 7, 453–455.
Hutchinson, J., 1964. The Genera of Flowering Plants, vol. 1. University
Press, Oxford.
Juven, B.J., Kanner, J., Schved, F., Weisslowic, H., 1994. Factors that
interact with antibacterial action of thyme essential oil and its active
constituents. J. Appl. Bacteriol. 76, 626–631.
Kim, J., Marshall, M.R., Wei, C., 1995. Antibacterial activity of some
essential oil components against five foodborne pathogens. J. Agric.
Food Chem. 43, 2839– 2845.
Kiso, Y., Tohkin, M., Hikino, H., 1983. Antihepatotoxic principles of
Atractylodes rhizomes. J. Nat. Prod. 46, 651–654.
Kusuma, I.W., Ogawa, T., Itoh, K., Tachibana, S., 2004. Isolation and
identification of an antifungal sesquiterpene alcohol from Amboyna
wood. Pak. J. Biol. Sci. 7, 1735–1740.
Leboeuf, M., Cavé, A., Bhaumik, P.K., Mukherjee, B., Mukherjee, R., 1982.
phytochemistry of the Annonaceae. Phytochemistry 12, 2783–2913.
Lima, M.A., Fechine, I.M., Silva, M.S., Maia, J.G.S., Cunha, E.V.L.,
Barbosa-Filho, J.M., 2003. Alkaloids and volatile constituents from
Guatteria juruensis. Biochem. Syst. Ecol. 31, 423–425.
Maia, J.G.S., Andrade, E.H.A., Carreira, L.M.M., Oliveira, J., Araújo, J.S.,
2005. Essential oils of the Amazon Guatteria and Guatteriopsis
species. Flavour Frag. J. 20, 478– 480.
Marinho, C.G.S., Della Lucia, T.M.C., Guedes, R.N.C., Ribeiro, M.M.R.,
Lima, E.R., 2005. b-eudesmol-induced aggression in the leaf-cutting
ant Atta sexdens rubropilosa. Entomol. Exper. Applic. 117, 89–93.
Miyakado, M., Kato, T., Ohno, N., Mabry, T.J., 1976. Pinocembrin and (+)-
b-eudesmol from Hymenoclea monogyra and Bacharis glutinosa.
Phytochemistry 15, 846.
Raharivelomanana, P., Bianchini, J.P., Cambon, A., Azzaro, M., Faure, R.,
1995. Twodimensional NMR of sesquiterpenes. Magn. Reson. Chem.
33, 233– 235.
Ribeiro, J.E.L.S., Maas, P.J.M., Maas, H., Miralha, J.M., Webber, A., 1999.
Annonaceae. In: Ribeiro, J.E.L.S., Hopkins, M.J.G., Vicentini, A.,
Sothers, C.A., Costa, M.A.S., Brito, J.M., Souza, M.A.D., Martins,
L.H.P., Lohmann, L.G., Assunc_ão, P.A.C.L.,
Pereira, E.C., Silva, C.F., Mesquita, M.R., Procópio, L.C. (Eds.), Flora da
Reserva Ducke Guia de Identificac_ão das plantas vasculares de uma
floresta de terrafirme na Amazônia Central. DFID (Departamento for
International Development), INPA, Manaus – Amazonas, pp. 121–
135.
Rupprecht, J.K., Hui, Y.H., MacLaughlin, J.L., 1990. Annonaceous
acetogenins: a review. J. Nat. Prod. 53, 237–278.
Shunying, Z., Yang, Y., Huaidong, Y., Yue, Y., Guolin, Z., 2005. Chemical
composition and antimicrobial activity of the essential oils of
Chrysanthemum indicum. J. Ethnopharmacol. 96, 151–158.
Sibanda, S., Chigwada, G., Poole, M., Gwebu, E.T., Noletto, J.A., Schmidt,
J.M., Rea, A.I., Setzer, W.N., 2004. Composition and bioactivity of the
leaf essential oil of Heteropyxis dehniae from Zimbabwe. J.
Ethnopharmacol. 92, 107–111.
Sköld, M., Kalberg, A.T., Matura, M., Börje, A., 2006. The fragrance
chemical bcaryophyllene- air oxidation and skin sensitization. Food
Chem. Toxicol. 44, 538–545.
Van den Dool, H., Kratz, P.D., 1963. A generalization of the retention index
system including linear temperature programmed gas–liquid
partitionchromatography. J. Chromatogr. A 11, 463–471.