RESUME EMBRIOLOGI HEWAN AKUATIK

ANDROGENESIS: METODE TERBAIK DALAM MANIPULASI GENETIK

IKAN

OLEH
DESAK MADE GOLDYNA RARASARI
1314521028

PROGRAM STUDI MANAJEMEN SUMBER DAYA PERAIRAN

FAKULTAS KELAUTAN DAN PERIKANAN
UNIVERSITAS UDAYANA
BALI
2016
Androgenesis merupakan perkembangan organisme yang hanya melibatkan
kromosom jantan. Androgen dapat diproduksi dalam dua cara, yang paling umum
yaitu untuk membuahi telur iradiasi dengan sperma normal. Ini menghasilkan
androgen haploid dan pada pembelahan pertama kejut diberikan untuk mencegah
pembelahan sel, dan sekering dua haploid (N) inti untuk membentuk diploid a (2N)
inti. Androgen yang diproduksi dengan teknik ini bersifat inbrida. Kedua teknik yang

dapat digunakan untuk memproduksi androgen adalah untuk menyuburkan telur yang
materi genetik telah dihancurkan oleh iradiasi dengan sperma dari jantan tetraploid.
Akibatnya, sperma pronukleus adalah diploid daripada haploid, yang berarti zigot
berikutnya juga akan diploid.
Kesuksesan androgenesis di ikan mas pertama kali dilaporkan pada tahun
1990 oleh Grunina et al. dengan menerapkan 25-30 KR dari Xray iradiasi untuk telur
dan kemudian 2-3 menit panas kejutan di 40.5-41oC di 1,7-1,9 t0 (t0 = 21 menit pada
22.5oC atau 20 menit pada 23oC). Sejak iradiasi gamma atau sinar-X banyak
menimbulkan luka metode androgenesis digantikan dengan menggunakan UViradiasi untuk memfasilitasi lebih distribusi homogen, telur Cyprinus carpio yang
direndam dalam cairan ovarium sintetis dan terkena UV iradiasi dengan dosis 250
mJ / cm2. Telur iradiasi yang panas kemudian diberikan terapi kejut panas (40oC, 2
menit dan 26-30 menit setelah fertilisasi) untuk mengembalikan diploidy. Rasio
diploid androgenetic diidentifikasi dengan tidak adanya warna hitam dominan betina
berkisar antara 7.2-18,3%. Tidak ada diploid dua induk menampakkan warna hitam
diproduksi dengan menerapkan optimum UV-dosis (250 mJ / cm2) diikuti oleh terapi
kejut panas.
Produksi keturunan diploid androgenesis

jauh lebih

sulit daripada

gynogenesis, karena hal ini cukup sulit untuk mencapai penghapusan pronukleus
perempuan dan badan polar tanpa merusak sitoplasma, dan radiasi dapat
mempengaruhi DNA mitokondria, messenger RNA (mRNA) dan lainnya konstituen
selain DNA kromosom. Dilakukan pada inaktivasi telur kromosom untuk
menginduksi androgenesis, pengobatan radiasi akan merusak telur konstituen
sitoplasma, karena tidak ada partner genetik mengintegrasikan, seperti tubuh polar di
gynogenesis.

Sehingga pembelahan

mitosis

harus dihambat

dalam proses

androgenesis.
Androgenesis memiliki peran penting dalam pemeliharaan plasma nutfah dan
konservasi satwa langka, Androgenesis dapat digunakan untuk memulihkan gen dari
disimpan populasi sperma cryopreserved yang ada di pusat sumber plasma nutfah.
Sayangnya, teknologi untuk cryopreserve telur ikan sulit untuk dipahami. Aplikasi

lain adalah untuk menghasilkan monosex sebuah populasi spesies dengan

homogamety laki-laki. Diploid androgenesis diikuti oleh penindasan pembelahan
pertama harus mengarah pada 50% XX dan 50% YY keturunan.
Androgenesis mungkin bukan metode terbaik untuk produksi populasi
monosex, atau seks kontrol di populasi akan dirilis di alam karena keturunannya
adalah bawaan, atau mampu reproduksi (berbeda dengan triploid) dan secara genetik
seragam dan karena itu dapat untuk mendirikan sebuah monokultur yang tidak
diinginkan di alam. Namun, androgenesis bisa berguna dalam produksi laki-laki YY
untuk menciptakan populasi monosex outbred. Hal ini juga memungkinkan
kemungkinan perkembangan pesat galur inbrida untuk dijinakkan dalam tempat induk
menetas.
Sebuah kendala utama penggunaan androgenesis untuk generasi galur inbrida
dan untuk gen adalah tingkat kelangsungan hidup yang sangat rendah diharapkan
progeni androgenetik karena homozigositas untuk gen resesif merusak. Penyelidikan
objektif ketika androgenesis diinduksi untuk menentukan kondisi optimal untuk
produksi androgen diploid ikan mas oleh menemukan tingkat yang optimal berkaitan
dengan (1) radiasi UV Dosis dan (2) suhu terapi kejut panas, waktu paparan dan
waktu pasca-inseminasi.
Ikan Jantan dan betina berat pigmennya 1,0-1,25 kg dipilih dan diinduksi oleh
suntik ovaprim (0,3 ml / kg berat badan). Telur dan sperma dikumpulkan dengan
metode stripping. Telur yang dilucuti dalam cawan petri yang berisi 5 ml sintetis
cairan ovarium. Dengan menjaga telur di sintetis cairan ovarium, satu lapisan
diperoleh dan telur tidak menjadi perekat dan tidak diaktifkan. Sekitar 90-100 telur
menyebar pada cawan petri membentuk single layer yang UV-iradiasi (254 nm;
lampu kuman UV 6W) untuk periode waktu yang berbeda mulai dari 0,5 ke 10 menit.
Jarak antara lampu dan telur sampel adalah 8 cm. Selama iradiasi, telur dalam petri
disimpan dalam nampan es, dan suhu 4oC dipertahankan selama periode iradiasi
untuk menghindari kerusakan yang disebabkan oleh generasi panas selama
penyinaran. Sampel telur secara manual diaduk untuk memastikan iradiasi seragam.
Milt diencerkan pada 1: 3 dengan es dingin garam fisiologis (0,9% Nacl). Setelah

iradiasi, sampel telur yang segera dicampur dengan 0,25 ml suspensi sperma dan
dibuahi oleh menambahkan 10 ml air tawar. Parameter terapi kejut panas (suhu,
postinseminasi waktu dan waktu paparan) yang bervariasi untuk menentukan kondisi
optimum untuk menginduksi diploid. Dalam percobaan 1, telur dikelompokkan dari
betina dan dibagi menjadi 10 kelompok. Dua kelompok sebagai kontrol dan delapan
kelompok yang tersisa diiradiasi untuk durasi yang berbeda: 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 8 dan
10 menit. Jarak antara tabung UV dan sampel adalah 8 sentimeter. Dalam percobaan
2, telur iradiasi yang dipupuk dengan sperma normal dan kemudian panas terkejut.
guncangan panas yang dilakukan pada 38, 40, 42 dan 45 oC untuk pemaparan 1, 2 dan
3 menit pada masing-masing suhu. Interval antara inseminasi dan terapi kejut panas
adalah 26, 28, 30 dan 32 menit. Telur non-iradiasi (kontrol A) yang dipupuk dengan
Milt normal, dan disinari telur (kontrol B) diinseminasi dengan Milt normal tanpa
terapi kejut panas.
Pembuahan

telur

non-iradiasi

dengan

sperma

menghasilkan

tingkat

kelangsungan hidup 52% pada menetas, yang menunjukkan kualitas yang baik gamet.
Ketika telur yang terkena sinar UV untuk durasi 0,5-10 min, hampir semua embrio
menyerah pada kematian. pada jangka waktu UV-iradiasi 2.0 dan 4.0 min, hanya 2%
dari telur menetas dan normal. Dalam androgenesis diploid, telur UV-iradiasi (0.5-10
menit) yang dibuahi dengan sperma normal dan kemudian panas terkejut pada suhu
38, 40, 42 dan 45oC, dan dengan waktu pemaparan dari 1, 2 dan 3 menit dan 26, 28,
30 dan 32 menit setelah pembuahan. Semua kombinasi ini gagal menghasilkan
androgen diploid, eksposur dan setelah pembuahan usia, 100% mortalitas diamati 6
jam setelah pembuahan. Maksimal 12% menetas haploids androgenetik di ikan mas
umum setelah penyinaran dengan sinar-X (dosis: 25-30 KR). Maksimum 53,9%
menetas haploids androgenetik di ikan mas setelah iradiasi pada dosis UV 250 mJ /
cm2. Saat ini hasilnya tidak meyakinkan tetapi memberikan data dasar untuk uji coba
lebih lanjut tentang induksi sukses androgenesis di ikan mas.