Bunga bracts dari Temulawak (Curcuma xanthorrhiza) untuk Perawatan Kulit: Anti-

Acne dan Whitening Agen

abstrak

Penelitian ini bertujuan untuk mengeksplorasi potensi perawatan kulit dari

temulawak bunga bract. Bunga bract kering diekstraksi menggunakan nhexane, etil
asetat (EtOAc), dan metanol (MeOH). Minyak esensial dipisahkan dengan distilasi.
Potensi anti-jerawat itu ditentukan oleh antioksidan, anti-bakteri terhadap
Propionibacterium acnes dan kegiatan penghambatan lipase, sedangkan whitening
adalah ditentukan oleh penghambatan tirosinase. Hasil penelitian menunjukkan
bahwa ekstrak MeOH adalah yang paling ampuh sebagai antioksidan dan EtOAc
ekstrak adalah yang paling ampuh sebagai tirosinase dan lipase inhibitor. ..-
curcumene bertanggung jawab untuk penghambatan aktivitas lipase sementara
xanthorizol bertanggung jawab untuk penghambatan pertumbuhan jerawat P..

1. Perkenalan

Temulawak (Curcuma xanthorrhiza) adalah spesies Zingiberaceae yang secara

empiris banyak digunakan sebagai tradisional obat terutama rimpang-nya. Secara
tradisional, itu secara luas digunakan untuk mengobati batu ginjal, tingkat demam,
tinggi kolesterol, nyeri sendi, dan hepatitis. Banyak studi penelitian telah dilakukan
pada komponen aktif temulawak yang rimpang untuk antioksidan, antilipidemia,
antibakteri, antijamur dan activities1-3. Pemanfaatan temulawak rimpang yang
menyebabkan sejumlah tebal terbuang sampingan pertanian terbuang. Salah satu
produk sampingan ini adalah bunga bract bagian. Sangat menarik untuk
mengeksplorasi potensi temulawak bunga bract untuk tujuan lain untuk mengurangi
volume limbah pertanian. Produk perawatan kulit alami tetap menjadi tema penting
pada penelitian produk alami sejak perawatan kulit bisa mempengaruhi
kepercayaan diri. Anti-jerawat dan agen pemutih menarik subjek pada perawatan
kulit alami. Pada penelitian ini, potensi anti-jerawat ditentukan oleh antioksidan
menggunakan diphenylpicryl hydrazyl (DPPH) metode, anti bakteri terhadap
Propionibacterium acnes dan P. acnes kegiatan penghambatan lipase, sedangkan
potensi pemutih ditentukan oleh penghambatan tirosinase (monophenolase dan
diphenolase). Di sisi lain, informasi tentang senyawa aktif dalam temulawak bunga
bract masih terbatas. Oleh karena itu, Penelitian ini bertujuan untuk menggali
potensi dan mengidentifikasi senyawa aktif temulawak bunga bract untuk kulit
perawatan: yaitu antibakteri terhadap P. acnes, penghambatan lipase, antioksidan
dan aktivitas inhibisi tirosinase.

2. Bahan dan metode

2.1 bahan tanaman dan metode ekstraksi

The bract bunga temulawak dikumpulkan dari Sukabumi, Jawa Barat, Indonesia.
Sampel dikeringkan dalam oven sebelum ekstraksi. Sekitar 15 g bunga kering
temulawak bract diekstraksi dengan meningkatkan polaritas pelarut (150 mL).
Pertama, n-heksana digunakan sebagai pelarut, maka ekstraksi dilanjutkan ke
residu menggunakan etil asetat (EtOAc), dan akhirnya menggunakan metanol
(MeOH). Minyak esensial dari bract bunga temulawak (1 kg) dipisahkan dengan
metode destilasi. Ekstrak paling ampuh dipisahkan dengan kromatografi kolom
silika gel (CC) dan kromatografi lapis tipis preparatif (TLC).

2.2 metode Assay

Potensi anti-jerawat ditentukan dengan metode spektrometri UV-Vis untuk

antioksidan, antibakteri, lipase penghambatan dan penghambatan tirosinase
kegiatan. Aktivitas antioksidan ditentukan dengan metode DPPH dengan (+) -
golongan katekin dengan kemungkinan (Tokyo Chemical Industry, Jepang) dan asam
askorbat kontrol positif dan etanol sebagai blank4. Untuk Uji aktivitas antioksidan,
100 ..L sampel, 100 ..L 2 (N-morfolino) pH asam ethanesulfonic (MES) penyangga
7,4, dan 100 ..L DPPH (11,8 mg DPPH dalam 100 ml etanol) yang ditambahkan
dalam setiap sumur dari 96 piring dengan baik. Setelah 30 menit, absorbansi
campuran diukur pada 514 nm. Aktivitas penghambatan dihitung. Aktivitas
antibakteri terhadap P. acnes dilakukan dengan menentukan konsentrasi hambat
minimum (MIC) dan konsentrasi bakterisida minimum (MBC). Mereka konsentrasi di
mana tidak ada visual pertumbuhan bakteri terdeteksi dan semua bakteri mati,
respectively4. Secara singkat medium terdiri dari GAM Kaldu Nissui 0,5%, glukosa
1% (Wako Pure Chemical Industries, Ltd, Jepang), ekstrak ragi 0,3% (Difco
Laboratorium, Prancis), Gizi Broth 0,5% (Difco Laboratories, Perancis), dan 0,2%
Tween-80 (MP Biomedis, Jepang). Setelah penambahan Tween-80, media itu
disterilkan dalam autoklaf. Untuk masing-masing dengan baik dari 96 piring dengan
baik, sebuah 100 ..L sampel (konsentrasi serial, diencerkan dalam DMSO 20%) yang
terdiri dari 95 ..L menengah dan 5 ..L inokulum adalah menambahkan. Inokulum
disiapkan pada konsentrasi 10-2 CFU / mL. P. acnes dan diinkubasi dalam media 72
h dalam kondisi anaerob. Kontrol negatif untuk aktivitas antibakteri adalah dimethyl
sulfoxide (DMSO), sedangkan kontrol positif tetrasiklin (MP Biomedis, Jepang), dan
3-metil-4 isopropylphenol (IPMP) (TCI, Jepang). P. acnes lipase uji aktivitas
penghambatan dilakukan dengan menggunakan tributyrate 2,3-dimerkapto-1
propanol (BALB) Metode seperti yang dijelaskan before4. Secara singkat, semua
reagen (Dainippon Sumitomo Pharma Co, Ltd, Jepang) yang dimasukkan ke dalam
tabung 1 dan 2. reagen yang 390 ..L DTNB dalam buffer tris (pewarna), 10 ..L PMSF
(esterase inhibitor), 25. .L lipase, dan 25 ..L sampel atau pelarut (DMSO). Kedua
tabung diinkubasi pada 30 C selama 5 menit setelah 50 ..L dari Solusi BALB
(substrat) ditambahkan ke tabung 1, maka tabung dicampur dengan baik dan
diinkubasi pada 30 C selama 30 menit. Setelah 30 menit, reaksi dalam tabung
dihentikan dengan menambahkan 500 ..L berhenti reagen untuk kedua tabung.
Dalam tabung 2, 50 ..L larutan substrat ditambahkan dan kemudian kedua tabung
terguncang untuk mencampur dengan baik solusi dan kemudian disentrifugasi
untuk menghapus bahan larut. Absorbansi masing-masing tabung diukur pada 414
nm. Tetrasiklin digunakan sebagai kontrol positif berdasarkan aktivitasnya untuk
menghambat produksi lipase dari P.acnes5. Tirosinase penghambatan
(monophenolase dan diphenolase) ditentukan dengan metode sebelumnya dan
asam kojic adalah digunakan sebagai control6 positif. Secara singkat, sekitar 70 ..L
ekstrak diencerkan dalam DMSO dikombinasikan dengan 30 ..L tirosinase (Sigma,
333 unit mL-1 dalam buffer fosfat). Setelah inkubasi pada suhu kamar selama 5
menit, 110 ..L substrat (2 mM L-tirosin atau 12 mM L-DOPA) ditambahkan. Inkubasi
dimulai selama 30 menit pada suhu kamar dan absorbansi diukur pada 510 nm.
Konsentrasi ekstrak tanaman di mana setengah dari tirosinase asli Kegiatan
terhambat ditentukan.

2.3 Silica kromatografi kolom gel (CC), kromatografi lapis tipis preparatif (TLC),
chromatographymass gas spektrometer (GC-MS) dan Fourier transform infrared-
spektrometer (FT-IR) kondisi

Ekstrak yang paling ampuh dipisahkan pertama dengan CC terbuka. Silica gel 60
dengan 75 ukuran partikel ..m digunakan sebagai fase diam dengan dietil eter,
diklorometana dan metanol sebagai fase gerak (metode gradien langkah). Itu fraksi
dikelompokkan oleh TLC. TLC plate adalah plat aluminium gel silika dengan
ketebalan G60F254 0,25 mm dari Merck. Eluen diklorometana adalah: dietil eter (1:
1), dan deteksi adalah melalui sinar ultraviolet pada 254 nm. Komponen minyak
esensial temulawak bunga bract ditentukan oleh GC-MS, sedangkan kelompok
fungsional dalam fraksi aktif ditentukan dengan FT-IR. Kondisi untuk analisis GC-MS
terdiri dari menggunakan dampak electron ionisasi (EI) metode pada kromatografi
gas GC-17A (Shimadzu, Kyoto, Jepang) digabungkan ke GC-MS QP 5050A
spektrometer massa (Shimadzu); Kolom menyatu kapiler silika (30 m 2,5 mm;
0,25 mm ketebalan film), dilapisi dengan DB-5 (Agilent J & W, Kanada); Suhu kolom
pada 100 C (2 menit) untuk 250 C dengan kecepatan 3 C per menit; pembawa
gas, helium pada tekanan konstan 7.59 psi (1 psi sama 6 894,76 pascal) .. modus
Akuisisi itu scan. Senyawa Identifikasi dilakukan dengan membandingkan spektra
massa puncak dengan data perpustakaan. Komposisi persentase dihitung dari luas
puncak GC. Kelompok fungsional dalam fraksi aktif dianalisis dengan FT-IR Alpha
(Bruker, Inggris). Sekitar 2 mg fraksi aktif adalah .. dicampur dengan kalium
bromida (KBr) dan dibuat sebagai pelet dengan tangan pers selama 10 menit.
Transmitansi itu diukur pada 4 000 cm-1-400 cm-1 bilangan gelombang.

3. Hasil dan diskusi

3.1 Potensi ekstrak kasar dan minyak esensial sebagai anti-jerawat

Ekstraksi senyawa dari temulawak bunga bract memberikan hasil yang berbeda,
1,92% untuk n-heksana ekstrak, 0,80% untuk EtOAc ekstrak, 11,47% untuk ekstrak
MeOH, dan 0,01% untuk minyak esensial. Hasil ini menunjukkan bahwa besar
senyawa dalam bract bunga temulawak adalah senyawa polar yang bisa digali
dalam metanol. Berdasarkan tes uji fitokimia, ekstrak MeOH terdiri dari saponin,
flavonoid, tanin dan alkaloid. Potensi masing-masing ekstrak dan minyak esensial
sebagai anti-jerawat, antibakteri terhadap P. acnes, penghambatan lipase, dan agen
antioksidan dapat dilihat pada Tabel 1. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
temulawak bunga bract minyak esensial memiliki terendah MIC dan MBC nilai yang
berarti bahwa minyak adalah yang paling aktif dalam menghambat pertumbuhan
jerawat P.. P. acnes adalah bakteri yang hidup di kulit dan bertanggung jawab untuk
proses peradangan dalam pembentukan jerawat. Dibandingkan dengan kegiatan
kontrol positif, minyak esensial hampir aktivitas yang sama dengan IPMP, tapi tidak
lebih baik dari tetrasiklin. Minyak ini juga menghambat 50% dari P. acnes aktivitas
lipase pada konsentrasi 500 ..g mL-1, hamper potensi yang sama dengan
tetrasiklin sebagai kontrol positif. Lipase yang dihasilkan oleh P. acnes juga
disertakan pada formation7 jerawat. Menghambat aktivitas lipase bisamengurangi
peradangan yang selama pembentukan jerawat. Ekstrak EtOAc ditemukan ekstrak
yang paling aktif untuk menghambat aktivitas lipase (Tabel 1). Itu hampir sama
dengan IPMP sebagai kontrol positif dan lebih aktif dibandingkan dengan tetrasiklin.
Ini ekstrak juga memiliki potensi sebagai antioksidan.

Tabel 1. antibakteri The, penghambatan lipase, dan kegiatan antioksidan temulawak

bunga bract ekstrak mentah dan minyak esensial

Tes potensi antioksidan dari ekstrak menunjukkan bahwa ekstrak MeOH adalah
ekstrak yang paling aktif untuk menghambat DPPHradikal. Aktivitas ekstrak MeOH
lebih rendah dibandingkan dengan catechin dan asam askorbat sebagai kontrol
positif (Tabel 1). Berdasarkan laporan kami sebelumnya, aktivitas antioksidan dari
MeOH dan EtOAc ekstrak temulawak bunga bract yang lebih baik dibandingkan
dengan temulawak rimpang yang memiliki nilai IC50 80,72 ..g mL-1 8.3.1 Potensi
ekstrak mentah dan minyak esensial sebagai zat pemutih The whitening potensi
terkait dengan tirosinase penghambatan pada monophenolase dan reaksi
diphenolase. Tirosinase adalah enzim yang bertanggung jawab untuk konversi L-
tyrosine untuk DOPA dan juga dikonversi DOPA ke DOPA quinone9. Dengan
menghambat aktivitas tirosinase, pembentukan melanin yang bertanggung jawab
untuk warna kulit bisa menjadi terhambat. Aktivitas ekstrak kasar dan minyak
esensial sebagai tirosinase inhibitor dapat dilihat pada Tabel 2. ekstrak EtOAc
adalah paling ekstrak ampuh sebagai inhibitor tirosinase karena memiliki nilai
terendah IC50 dibandingkan dengan ekstrak lainnya. Berdasarkan kami laporan
sebelumnya pada rimpang temulawak yang memiliki IC50 0,27 mg mL-1 untuk
monophenolase dan 0,90 mg mL-1 untuk diphenolase, temulawak bunga bract
tidak sebagus rimpang temulawak sebagai pemutih agent6.

Tabel 2. Aktivitas inhibisi tirosinase dari temulawak ekstrak bunga bract dan minyak
esensial

3.2 Senyawa dalam minyak esensial temulawak bunga bract

Minyak esensial dari temulawak bunga bract memiliki potensi sebagai antibakteri
dan lipase inhibitor. Sangat menarik untuk mengidentifikasi senyawa hadir dalam
minyak esensial yang bertanggung jawab untuk kegiatan tersebut. Kandungan
kimia ini dalam bunga temulawak bract ditentukan oleh GC-MS dan hasilnya
ditunjukkan pada Tabel 3. Komponen utama dalam minyak yang xanthorrhizol
dan ..- curcumene (Gambar 1). Komponen-komponen utama milik kelompok
seskuiterpen dengan tipe struktur bisabolane.

Tabel 3. senyawa dalam minyak esensial temulawak bunga bract

Kegiatan dua komponen utama untuk anti-jerawat ditunjukkan pada Tabel 4. Hasil
penelitian menunjukkan bahwaxanthorrhizol menghambat pertumbuhan jerawat P.
pada konsentrasi 0,5 mg mL-1. Aktivitas antibakteri xanthorrhizol adalah lebih baik
daripada IPMP sebagai kontrol positif, tapi xanthorrhizol tidak memiliki aktivitas
inhibisi lipase dan tidak baik sebagai antioksidan. Tidak seperti xanthorrhizol, ..-
curcumene tidak memiliki antibakteri yang baik dan antioksidan kegiatan, tetapi
memiliki aktivitas inhibisi lipase. Xanthorrhizol dilaporkan sebagai
antinociceptive10, antimetastatic11, dan antifungi 3. Hwang juga melaporkan
bahwa xanthorrhizol adalah antibakteri dengan aktivitas spektrum yang luas, stabil
dari panas dan aman untuk skin12 manusia.

Kegiatan Tabel 4. Anti-jerawat dari xanthorrhizol dan ..- curcumene

3.3 Pemisahan temulawak bunga bract EtOAc ekstrak

EtOAc ekstrak temulawak bunga bract dipisahkan dengan kromatografi kolom silika
gel berdasarkan nya

penghambatan tirosinase, penghambatan lipase dan kegiatan antioksidan. Uji

analisis fitokimia menunjukkan bahwa EtOAc ekstrak terdiri dari alkaloid dan
flavonoid a. Pemisahan menghasilkan 12 fraksi. Kegiatan masing-masing fraksi
ditunjukkan pada Tabel 5. Fraksi F1, F3, F10, F12 dan aktif sebagai tirosinase dan
lipase inhibitor serta antioksidan. Pecahan F12 adalah fraksi yang paling aktif
karena memiliki IC50 nilai terendah untuk penghambatan tirosinase, nilai IC50
rendah untuk aktivitas penghambatan lipase antioksidan dan tinggi. Antara empat
fraksi aktif, F1 dipisahkan lebih lanjut karena memiliki volume tertinggi
dibandingkan dengan fraksi lainnya. Pemisahan dilanjutkan dengan kromatografi
lapis tipis preparatif. Pemisahan ini memberikan 2 fraksi, yaitu F1.1 dan F1.2.
Kegiatan F1.1 dan F1.2 ditunjukkan pada Tabel 5. Hasil kegiatan uji menunjukkan
bahwa F1.2 adalah fraksi aktif dibandingkan dengan F1.1. Fraksi F1.2 memiliki
tirosinase dan kegiatan inhibisi lipase serta aktivitas antioksidan. Untuk memahami
kelompok fungsional dalam F1.2 serta F12, pengukuran spektrum IR dilakukan.
Spektrum inframerah menunjukkan bahwa F12 yang merupakan fraksi yang paling
aktif memiliki kelompok fungsional hidroksil, aromatik dan C-O-C. Ini berarti bahwa
fraksi ini terdiri dari senyawa kelompok flavonol. Analisis uji fitokimia menunjukkan
bahwa F12 terdiri dari flavonol. Senyawa flavonol dilaporkan memiliki aktivitas
terhadap P. acnes aktivitas lipase yang myricetin (IC50: 0.38 mM) dan quercetin
(IC50: 0.42 mM) 13. Tapi robinetin yang juga milik kelompok flavonol tidak
menghambat tapi mempercepat aktivitas lipase. Beberapa dilaporkan flavonol juga
pemutih activity14. Ini berarti bahwa penelitian lebih lanjut diperlukan untuk
mengidentifikasi komponen aktif dari F12. Berbeda dari fraksi F12, fraksi F1.2
memiliki gugus karbonil yang tidak ditemukan di F12. Berdasarkan ini
mengakibatkan komponen di F1.2 bisa flavonoid. Analisis uji fitokimia menunjukkan
bahwa F1.2 terdiri dari Auron.

Tabel 5. penghambatan tirosinase, penghambatan lipase dan antioksidan kegiatan

fraksi dari EtOAc ekstrak temulawak bunga bract

Spektrum inframerah dari F12 dan F1.2 ditunjukkan pada Gambar 2. Jenis-jenis
getaran dari kelompok fungsional di F12 danF12 tercantum dalam Tabel 6.

Tabel 6. jenis Getaran kelompok fungsional dalam fraksi F12 dan F1.2

4. Kesimpulan

Temulawak bunga bract memiliki potensi yang baik untuk dikembangkan sebagai
produk perawatan kulit. The MeOH Ekstrak adalah ekstrak yang paling ampuh untuk
aktivitas antioksidan diikuti oleh ekstrak EtOAc. Terbaik ekstrak sebagai tirosinase
dan lipase inhibitor adalah ekstrak EtOAc. Fraksi 12 dari EtOAc ekstrak yang
terkandung flavonol dan fraksi F1.2 terkandung Auron berdasarkan spektrometri
inframerah dan uji fitokimia. lipase sementara xanthorizol bertanggung jawab untuk
menghambat pertumbuhan P. acnes.