1.

Abstrak

Bromelain adalah campuran enzim dari nanasyang berisikomponen protease dan senyawa
lain yang terkait. senyawa ini memiliki aplikasiindustri dan terapi yang luaspada penelitian ini
bromelain sepenunya di ambil dari batang dan buah tanaman nanas kemudian di buat kultur
rapine dalam buffer berairdan di murnkan dengan pengendap amonium sulfat serta
kromatografiD-AE selulosa. Aktivitas enzim ditentukan denganmenggunakanspektrofotometri
dan N a-karbobenzoksi-Lysine p-Nitrophenyl Ester (LNPE) sebagai substrat Jumlah protein
diperkirakan menggunakan metode Bradford.Hasil yang diperoleh, menunjukkan bahwa stem
bromelain (SBM) lebih cocok untuk prosedur pemurnian diadopsi dengan persentase hasil dari
463%dan pemurniandari 4,64 lebih buah bromelan (FBM) yang menunjukkan persentase hasil
pemurnianmasing-masing0,23 dan 23,4%
2. Pendahuluan
Nanas (Ananas comosus) adalah salah satu (sub) tanaman tropis yang paling penting di dunia
(Carlier et al, 2007.). bromelain adalah campuran enzim dari nanas yang berisi, antara komponen
proteinase dan senyawa lainnya yang terkait erat (Maurer, 2001;. Pavan et al, 2012). Fungsi nya
antaralain bromelain menunjukkan modulasi proteolitik dari matriks seluler di berbagai proses
fisiologis, termasuk (in vitro dan in vivo) antiedematous, antiinflamasi,antitrombotik kegiatan
antikanker dan fibrinolitik. Bromelain memiliki banyak aplikasi medis dan industri (Chobotova
et al, 2010;. Pavan et al, 2012.). Bromelain terakumulasi dalam seluruh pabrik nanas dan di
semua varietas pada tingkat dan sifat yang berbeda(Gautam, et al., 2010)
Ada dua senyawa kimia yang berbeda yaitu iso-enzim bromelain merupakan endopeptidase
utama yang ditemukan di batang nanas dikenal sebagai 'batang bromelain' (SBM) (EC.3.4.22.32)
sedangkan endopeptidase utama yang ditemukan dalam buah nanas disebut sebagai 'bromelain
buah '(FBM) (EC.3.4.22.33) (Maurer, 2001).Ektrak bromelain di peroleh dari nanas yang
dihaluskan dalam bentuk jus kemudian di sentrifugasi, ultrafiltrasi, dan liofilisasi.Proses ini
menghasilkan bubuk kekuningan ktivitas enzim ditentukan dengan substrat yang berbeda seperti
kasein (FIP Unit), gelatin (unit gelatin pencernaan), atau tripeptides kromogenik (Pavanet al.,
2012) .
 Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai dan membandingkan tingkat dan hasil
pemurnian SBM dan FBM yang di peroleh dengan mengekstraksi dan menyiapkan ekstrak
kasardari batang dan buah nanas.
a. Bahan dan Metode
a) Bahan
1. Reagen Kimia dan Peralatan.Semua reagen kimia dan peralatan yang
diperoleh dari sumber terpercaya dan kemurnian tertinggi.
2. sampel segar. Sampel yang digunakan dalam penelitian ini sepenuhnya adalah
tanaman nanas matang yang di peroleh dari desa Uhi,Uhunmwunde Lokasi
Pemerintah Daerah, Edo State, Nigeria. Sampel diidentifikasi di departemen
ilmubiologi, Bayero Universitas Kano.
b) Metode
1) ekstraksi (metode yang diadopsi dari Gautam et al (2010))
Stem: batang nanas segar dicuci dengan 0,1% larutan hidrogen
peroksida setela itu kupas dipotong kecil-kecil dan ditimbang (berat
77.3g basah). Bagian batang nanas segar di blender dan di
homogenisasi menggunakanQlink Turinar kemudian tambakan larutan
buffer natrium asetat (pH: 7,0;Kepekatan .: 100 mM) kemudian
disaring,tambahkan zodium benzoate sebagai pengawet pada
konsentrasi 1 g per kg batang Filtrat dikumpulkan sebagai 'Stem Crude
Lysate'(SCL).
Buah: buah nanas segar dibersihkan dipotong-potong kecil dan
ditimbang (600g berat basah). Jus diekstraksi menggunakan
homogenizer (kapasitas Qlink Turinar 2L blender) dan kemudian
disaring tambahkan Sodium benzoate ke filtrat sebagai pengawet pada
konsentrasi 0,2 g untuk setiap 100 ml filtrat. Filtrat kemudian diberi
label 'Buah mentah Lysate' (FCL)

b. Pemurnian (metode yang diadopsi dari Gautam et al (2010))

1. Sentrifugasi
lysates mentah (SCL dan FCL) disentrifugasi selama 10 menit pada 2.000 rpm, 10 menit
pada 4.000 rpm dan 15 menit pada 4.000 rpm berturut-turut. Supernatan kemudian dikumpulkan
dan diberi label sebagai 'Stem Extract mentah' (SCE) dan 'Buah mentah Extract' (FCE) untuk
batang dan buah, masing-masing satu . Amonium sulfat di tambakan pada ekstrak kasar kedua
enzim sebanyak 13,2 g garam pada 30ml SCE dan FCE dengan pengadukan terus menerus
setiap 45 menit.Kemudian Solusi sampel diinkubasi semalam pada suhu 4oC. Setelah inkubasi,
enzim yang diendapkan disentrifugasi pada 4.000 rpm selama 30 menit. Pelet dari keduaekstrak
dikumpulkan dan dilarutkan dalam 10 ml 10 penyangga mM Tris HCl (pH 8.0).
2. kromatografi penukar Ion
diethylaminoethyl (DEAE) selulosa, ketebalan 15 cm, disusun dalam kolom kromatografi
dan diseimbangkan dengan 0,5 M larutan natrium fosfat (pH 8.0) diikuti dengan eluting
penyangga 1 (pH: 8.1) yang berisi; 25 mM Tris HCl dan 25 mM NaCl Sampel enzim dituangkan
ke dalam kolom, dari sisi, tanpa mengganggu EAE selulosa Sampel dielusi menggunakan
eluting penyangga pertama 1 (yaitu 25 mM Tris HCl dan 25 mM NaCl), pH: 8.1 Elusi pada laju
alir adalah 6 tetes per menit dan eluat di kumpulkan pada kontainer polos. Kapasitas 5ml Proses
yang sama dari elusi dilakukan dengan menggunakan larutan penyangga 2, 3, 4, 5 dan 6 yang
mengandung 50 mM, 75 mM, 100 mM, 125 mM dan 150 mM NaCl, masing-masing (pH:
8.1).Sampel enzim yang dituangkan ke kolom lagi tapi dengan enzim yang dielusi menggunakan
eluting penyangga 2 (10 ml 25 mM Tris HCl dan 50 mM NaCl), pH: 8.1. Proses elusi dilanjutkan
menggunakan eluting buffer 3, 4, 5 dan 6 yang mengandung 75 mM, 100 mM, 125 mM dan
masing-masing 150 mM NaCl, Akhirnya, semua eluat pertukaran ion (5ml masing-masing) yang
diujiuntuk aktivitas enzim dan konsentrasi total protein ditentukan dengan metode Bradford.

3. Penentuan aktivitas Aktivitas Enzim Bromelain

ditentukan dengan penentuan nilai spektrofotometri menggunakan metode yang

dijelaskan oleh Arnon (1976) Dua tabung reaksi didirikan (Test danKosong). Tepat 2.60 ml
Reagen A (30 mM Sodium Asetat Buffer dengan 100 mM Kalium Klorida dan 1.0 mM L-sistein,
pH 4,6 pada 25 C) dipipet dalam tabung tes berlabel 'Test' sementara 2,70 ml dipipet ke dalam
tabung reaksi berlabel 'Kosong'. Hal ini diikuti dengan penambahan 0,10 ml sampel enzim ke
dalam tabung reaksi berlabel uji saja. Mereka dicampur dengan inversi dan menyeimbangkan
untuk 25oC. Kemudian 0,10 ml Reagen B (substrat: 50 mM Na-CBZ-L-Lysine p-Nitrophenyl
Ester) ditambahkan untuk kedua tabung. Mereka segera dicampur dengan inversi lagi dan
peningkatan A340 nm tercatat sekitar 5 menit. Akhirnya, A 340nm / menit ditentukan dengan
definisi unit satu unit kegiatan bromelain setara dengan 1,0 umol dari p-Nitrophenol yang
dilepaskan dari LNPE pada pH 4,6 dan25oC.

4. Penentuan Jumlah Konsentrasi Protein

Jumlah protein ditentukan dengan menggunakan bioassay Sistem 'protein
QuantiChromTM assay kit didasarkan pada meningkatkan metode Coomassie Biru G (Bradford,
1976) menggunakan Bovine Serum Albumin (BSA) sebagai standar
3. Hasil dan Pembahasan
1. Hasil
Hasil yang diperoleh dari pemurnian bromelain untuk FBM dan MBS disajikan
pada Tabel 1 dan Tabel 2,

2. Pembahasan
 dari Tabel 1 dan 2 dapat diamati bahwa pemurnian untuk FBM dan MBS adalah .23 dan
4.64 sedangkan hasil persentase nya yaitu 23,4 dan 463 Semakin tinggi penggandaan untuk
pemurnian dari SBM mungkin terjadi karena modifikasi struktural dari situs aktif enzim di
hadapan komponen tak dikenal pada langkah pemurnian Kasus serupa dilaporkan oleh Ketnawa
et al (2011)dengan persentase hasil dari 206% pemurnian dari 3,44. Dalam kasus mereka, situs
aktif bromelain ini (dari kulit nanas) telah diubah dengan Polyethylene glycol (PEG) yang
digunakan, dalam dua-Phase Extraction System (ATP). Demikian pula, 106% persentase hasil
dan 5,2 pemurnian kali lipat dilaporkan oleh Hemavathi et al (2007), dengan situs aktif
bromelian ini telah dimodifikasi oleh Concanavalin Sebuah sistem misel terbalik (RMS) yang
digunakan.
Review jurnal: Studi Banding Ekstraksi dan PemurnianStem Enzim
Bromelain Dari Buah Nanas (Ananas comosus )

NAMA : Ridwan Brampi Kono

NIM : 154111065

KELAS : FARMASI B

SEMESTER : IV

PRODI : S1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN

CITRA HUSADA MANDIRI

KUPANG

2016/2017