Jurnal Praktikum Mikrobiologi Dasar

Pewarnaan dan Cara-cara Pewarnaan

Berty Veibrita S., Nirmayani, Trima Wati, Hendra Saputra, Feiky Aprilasari, Jane Firdha B. P.
Kelompok 2B Praktikum Mikrobiologi Dasar
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Abstrak
Pengamatan bentuk dan ukuran sel akan tampak jelas jika dilakukan pewarnaan terhadap
sel. Pewarnaan bakteri adalah suatu cara untuk memberi warna pada sel atau bagian-
bagiannya sehingga menambah kontras dan tampak lebih jelas. Praktikum ini dilakukan untuk
mengetahui cara-cara pewarnaan pada bakteri. Praktikum ini dilaksanakan pada hari Kamis, 05
November 2015 pada pukul 09.10-11.50 WITA yang bertempat di Laboratorium Mikrobiologi dan
Genetika Molekuler, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mulawarman,
Samarinda. Pada praktikum ini alat yang digunakan adalah jarum ose, kaca preparat, tabung reaksi,
pipet tetes, rak tabung reaksi, cawan petri. Metode pewarnaan sel bakteri ini pertama kali
dikembangkan oleh Christian Gram pada tahun 1884 yaitu seorang ahli bakteriologi
Denmark. Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi empat macam yaitu
pengecatan sederhana, pengecatan negatif, pengecatan diferensial dan pengecatan struktural.
Hasil dari praktikum ini yaitu pada pewarnaan gram didapat bakteri berwarna biru,
menandakan bahwa bakteri tersebut berupa gram positif, sedangakan pada pewarnaan negatif
terdapat banyak bakteri berwarna putih. Pada pewarnaan sederhana terdapat banyak bakteri
yang berbentuk basis atau batang yang bewarna ungu dan pada pewarnaan spora terdapat
spora berwarna kecoklatan.
Kata Kunci: Pewarnaan, bakteri,
Tanggal Praktikum: 5 November 2015; Diserahkan Tanggal 12 November 2015.

Pendahuluan Asisten Pendamping: 1. Cep Hikmat 2. Ersaliany Nurul, 3.

Mikroorganisme yang ada di alam ini
mempunyai morfologi, struktur dan sifat-
sifat yang khas begitu pula dengan bakteri.
Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna
dan kontras dengan air, dimana sel-sel
bakteri yang ada di suspensikan. Salah satu
cara unutk mengamati bentuk sel bakteri
sehingga mudah di identifikasi adalah
dengan cara metode pengenceran atau
pewarnaan. Hal tersebut berfungsi untuk
mengetahuisifat fisiologisnya yaitu
mengetahui reaksi dinding sel bakteri
melalui serangkaian pengecetan atau
pewarnaan [1].
Teknik pewarnaan warna pada bakteri
dapat dibedakan menjadi empat macam
yaitu pengecatan sederhana, negatif,
diferensial dan struktural. Pemberian
warna pada bakteri atau jasad-jasad renik
lain dengan menggunakan larutan tunggal
suatu pewarna pada lapisan tipis atau
olesan, yang sudah difiksasi, dinamakan
pewarnaan sederhana prosedur pewarnaan
yang menampilkan perbedaan diantar sel-
sel mikroba atau bagian- bagian sel
Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi, Biologi, FMIPA Unmul
Nur Maulida 4. Yusnaini
Penanggung-jawab: Koordiantor mata Kuliah Mikrobiologi
Dasar: Dr. rer. nat. Bodhi Dharma M.Si dan Eko Kusumawati S.
Si, M. P Serta Kepala Laboratorium Mikrobiologi dan Genetika
Molekuler Dr. rer. nat. Bodhi Dharma M.Si, FMIPA Unmul
mikroba disebut teknik pewarnaan
diferensial. Sedangkan pengecatan
struktural hanya mewarnai satu bagian dari
sel sehingga dapat membedakan bagian-
bagian dari sel. Termasuk dalam
pengecatan ini adalah pengecatan
endospora, flagella dan pengecatan kapsul
[6].
Karakterisasi merupakan salah satu
kegiatan dilakukan untuk menobservasi
bakteri maupun kapang hasil isolasi
(isolat). Kegiatan karakterisasi dapat
dilakukan berdasarkan sifat sitologi
(bentuk sel, gerak atau motilitas, sifat
Gram dan endospora), sifat morfologi, dan
sifat fisiologi. Uji sifat morfologi
mencakup sifat-sifat koloni, seperti ukuran,
bentuk, warna dan tepian, sedangkan uji
sifat fisiologi diantaranya uji hidrolisis
pati, hidrolisis lemak, hidrolisis protein
dan uji katalase [2].
Prinsip dasar dari pewarnaan adalah
adanya ikatan ion antara komponen selular
dari bakteri dengan senyawa aktif dari
Jurnal Praktikum Mikrobiologi Dasar
pewarna yang disebut kromogen. Ikatan
ion dapat terjadi karena adanya muatan
listrik baik pada komponen seluler maupun
pada pewarna. Terdapat tiga mcam metode
pewarnaan yaitu pewarnaan sederhana,
pewarnaan diferensial dan pewarnaan
gram. Pewarnaan sederhana menggunakan
pewarna tunggal, pewarnaan diferensial
memakai serangkaian larutan pewarna atau
reagen. Pewarnaan gram merupakan
metode pewarnaan yang paling umum
digunakan untuk mewarnai sel bakteri [5].
Pewarnaan bakteri bertujuan untuk
memudahkan melihat bakteri dengan
mikroskop, memperjelas ukuran dan
bentuk bakteri, untuk melihat struktur luar
dan struktur dalam bakteri seperti dinding
sel dan vakuola, menghasilkan sifat-sifat
fisik dan kimia yang khas dari pada bakteri
dengan zat warna, serta meningkatkan
kontras mikroorganisme dengan sekitarnya
[3].
Bakteri atau mikroba lainya dapat di
lihat dengan mikroskop biasa tanpa yaitu
dengan cara-cara khusus, misalnya dengan
cara tetesan bergantung, menggunakan
kondensor medan gelap dan lain-
lain.Tetapi pengamatan dari pewarnaan ini
lebih sukar dan tidak di pakai untuk
melihat bagian-bagian sel dengan teliti,
karena sel bakteri dan mikroba lainya
transparan. Melihat dan mengamati bakteri
dalam keadaan hidup sangat sulit, karena
selain bakteri itu tidak berwarna juga
transparan dan sangat kecil untuk
mengatasi hal tersebut maka di
kembangkan suatu teknik pewarnaan
bakteri ,sehingga sel dapat terlihat jelas
dan mudah di amati. Oleh karena itu teknik
pewarnaan sel bakteri ini merupakan salah
satu cara yang paling utama dalam
penelitian-penelitian mikrobiologi [1].
Metode Praktikum
Waktu dan Tempat
Praktikum ini dilaksanakan pada hari
Selasa, 3 November 2015 pada pukul 09.10-
11.50 WITA yang bertempat di Laboratorium
Mikrobiologi dan Genetika Molekuler,
FMIPA, Universitas Mulawarman, Samarinda.
Alat-alat
Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi, Biologi, FMIPA Unmul
Alat yang digunakan dalam praktikum
mengenai pewarnaan adalah jarum ose, tabung
reaksi, kaca preparat, kaca penutup, pipet tetes,
mikroskop biologi dan lampu spiritus.
Bahan-bahan
Bahan yang digunakan dalam
praktikum tersebut adalah alkohol,
safranin, Escherichia coli, air mengalir,
Kristal violet, nigrosin dan malachite
green.
Cara Kerja
1. Pewarnaan sederhana
Preparat ulas di buat pada object glass
setelah jarum ose dipijarkan pada lampu
Bunsen, 1/2 tetes crystal violet ditetesi
pada preparat ulas tersebut, diamkan,
setelah itu di cuci dengan air mengalir dan
diamati pada mikroskop.
2. Pewarnaan gram
Jarum ose dipijarkan lalu diambil
bakteri E.coli, dibuat preparat ulas pada
object glass, ditetesi crystal violet lalu
didiamkan selama 1 menit, dicuci dengan
air mengalir, ditetesi lugol lalu didiamkan
selama 1 menit, di cuci kembali pada air
mengalir, ditetesi alkohol 95% lalu
didiamkan 30 detik, dicuci pada air
mengalir, ditetesi lagi safranin lalu
didiamkan 2 menit, dicuci pada air
mengalir, lalu dikeringkan dan diamati di
bawah mikroskop.
3. Pewarnaan spora
Jarum ose dipijarkan, lalu diambil
bakteri E.coli lalu dibuat preparat ulas
pada object glass, lalu ditutup kertas
saring, ditetesi malachite green, dilakukan
fiksasi selama 15 menit, dicuci pada air
mengalir, ditetesi safarin, dikeringkan
preparat dan diamati di bawah mikroskop.
4. Pewarnaan negatif
Jarum ose dipijarkan lalu diambil
bakteri pada E. coli, dibuat preparat ulas
pada object glass, ditetesi nigrosin lalu
diratakan, dikeringkan preparat dan
diamati di bawah mikroskop.
Hasil dan Pembahasan
Hasil yang didapatkan dari
praktikum adalah:
Jurnal Praktikum Mikrobiologi Dasar
No Pewarnaan Pengamatan karena itu, perlu dilakukan pewarnaan agar
bakteri bakteri tampak jelas bila diamati dengan
1 Pewarnaan Terdapat banyak mikroskop.
sederhana bakteri yang Crystal violet adalah pewarna
berbentuk cocus, triarylmethane. Pewarna ini digunakan sebagai
warna yang terlihat histologis noda dalam metode gram klasifikasi
bakteri. Crystal violet memiliki sifat-sifat anti
violet (ungu).
bakteri, jamur dan obat cacing. Crystal violet
2 Pewarnaan Terdapat banyak dipakai sebagai zat warna primer dikarenakan
mampu melekatkan bakteri pada kaca dan
negatif bakteri berwarna
mencegah autolisis pada sel, membuat sel-sel
putih dan berbentuk lebih kuat atau keras, mencegah
batang. latar mengkerutnya globula-globula protein
belakang berwarna sel, mempertinggi sifat reaktif gugusan-
gelap. gugusan, membunuh bakteri secara cepat
dengan tidak mengubah bentuk dan
strukturnya dan mengubah afinitas cat.
4 Pewarnaan Terdapat banyak
Ciri-ciri bakteri gram negatif yaitu:
spora bekteri berbentuk 1. Struktur dinding selnya tipis, sekitar
batang, dan bakteri 1015 mm, berlapis tiga atau
berwarna merah multilayer.
2. Dinding selnya mengandung lemak
lebih banyak (11-22%), peptidoglikan
terdapat di dalam lapisan kaku,
Pada pewarnaan sederhana sebelah dalam dengan jumlah sedikit
10% dari berat kering, tidak
menguraikan satu jenis zat warna saja
mengandung asam tekoat.
dengan dilakukan fiksasi terlebih dahulu. 3. Kurang rentan terhadap senyawa
Saat diamati dibawah mikroskop terdapat penisilin.
banyak bakteri yang berbentuk basis atau 4. Pertumbuhannya tidak begitu
batang yang bewarna ungu pada sampel dihambat oleh zat warna dasar
cincau. misalnya crystal violet.
Pada pewarnaan gram termasuk 5. Komposisi nutrisi yang dibutuhkan
pewarnaan diferensial (untuk relatif sederhana.
membedakan) karena dapat membedakan 6. Tidak resisten terhadap gangguan
bakteri-bakteri yang bersifat gram negaif. fisik.
Pada pewarnaan ini didapat bakteri 7. Resistensi terhadap alkali (1% KOH)
lebih pekat.
berwarna biru, menandakan bahwa bakteri
Ciri-ciri bakteri gram positif yaitu:
tersebut berupa gram positif. 1. Struktur dinding selnya tebal, sekitar
Pada pewarnaan negatif yang diwarnai 15-80 nm, berlapis tunggal atau
adalah latar belakangnya sedangkan monolayer.
bakterinya sendiri tidak mengalami 2. Dinding selnya mengandung lipid
pewarnaan saat diamati dibawah yang lebih normal (1-4%),
mikroskop terdapat banyak bakteri peptidoglikan ada yang sebagai lapisan
berwarna putih yang ada pada sampel es tunggal. Komponen utama merupakan
teh. lebih dari 50% berat ringan.
Pada pewarnaan spora dengan Mengandung asam tekoat.
menggunakan malachnite green, dilakukan 3. Bersifat lebih rentan terhadap
penisilin.
fiksasi dan pemberian safranin. Saat
4. Pertumbuhan dihambat secara nyata
diamati dibawah mikroskop terdapat spora oleh zat-zat warna seperti crystal
berwarna hijau pada sampel es dawet. violet.
Bakteri umumnya tidak memiliki 5. Komposisi nutrisi yang dibutuhkan
pigmen, sehingga tidak berwarna dan lebih rumit.
hampir tidak terlihat karena tidak kontras 6. Lebih resisten terhadap gangguan
dengan media dimana mereka hidup. Oleh fisik.

Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi, Biologi, FMIPA Unmul

Jurnal Praktikum Mikrobiologi Dasar
7. Resistensi terhadap alkali (1% KOH)
larut.
Kesimpulan
Dalam praktikum tersebut didapatkan
hasil yaitu jenis-jenis pewarnaan bakteri
antara lain, pewarnaan sederhana,
pewarnaan differensial seperti pewarnaan
gram, pewarnaan tahan asam, dan lain-
lain, pewarnaan khusus seperti pewarnaan
spora, pewarnaan kapsul, dan lain-lain, dan
pewarnaan negatif. Pada pewarnaan gram
didapat bakteri berwarna biru, menandakan
bahwa bakteri tersebut berupa gram positif,
sedangakan pada pewarnaan negatif
terdapat banyak bakteri berwarna putih.
Pada pewarnaan sederhana terdapat banyak
bakteri yang berbentuk basis atau batang
yang bewarna ungu dan pada pewarnaan
spora terdapat spora berwarna kecoklatan.
Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi, Biologi, FMIPA Unmul
Daftar Pustaka
[1] Dwidjoseputro, D. 2005. Dasar -
Dasar Mikrobiologi. Malang: Penerbit
Djambatan.
[2] Karmana, Oman. 2008. Biologi. PT
Grafindo Media Pratama: Jakarta
[3] Pelczar, M. J. 2007. Dasar - Dasar
Mikrobiologi. Jakarta : UI Press.
[4] Subandi, 2009. Dasar - Dasar Mikro-
biologi. Gunung Djati Press: Bandung
[5] Volk & Wheeler. 1984. Mikrobiologi
Dasar Edisi Kelima Jilid I. Jakarta :
Erlangga
[6] Waluyo, Lud. 2004. Mikrobiologi
Umum. Malang : UMM Press