UJI AWAL FITOKIMIA DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SENYAWA HASIL

ISOLASI DARI KULIT BUAH MANGGIS (Garcinia mangostana L.)

PROPOSAL PENELITIAN

DISUSUN OLEH :

LARASATI DENAPUTRI SUDEWO (1406603176)

DEPARTEMEN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS INDONESIA 2017

 ABSTRAK

Telah dilakukan uji awal fitokimia terhadap ekstrak heksana, kloroform, dan metanol pada kulit
buah manggis (Garcinia mangostana Linn.) yang meliputi kandungan kimia fenolik, flavonoid,
saponin, alkaloid, steroid dan triterpenoid diuji pula aktivitas antioksidannya dengan
menggunakan metode DPPH (2,2-diphenyl pikryl hidrazil) dari kulit buah manggis. Hasil uji
awal fitokimia terhadap ekstrak heksana, kloroform, dan metanol kulit buah manggis tersebut
diketahui bahwa ketiga ekstrak mengandung komponen triterpenoid, namun tidak mengandung
steroid. Ekstrak metanol mengandung semua komponen kimia di atas, kecuali steroid. Ekstrak
heksana dan kloroform sama-sama mengandung komponen triterpenoid dan alkaloid, dan tidak
mengandung steroid, fenolik, flavonoid, dan saponin. Sampel yang memiliki aktivitas
penghambatan radikal bebas >50% pada konsentrasi 100 ?g/ml dalam uji DPPH dikategorikan
sebagai sampel yang aktif antioksidan.

Kata kunci : Ekstrak, Fitokimia, Kulit Buah, manggis, Uji Awal

 DAFTAR ISI

ABSTRAK.......................................................................................................................................... 2
DAFTAR ISI...................................................................................................................................... 3
BAB I................................................................................................................................................... 4
PENDAHULUAN............................................................................................................................. 4
1.1 Latar Belakang................................................................................................................................. 4
1.2 Rumusan Masalah........................................................................................................................... 5
1.3 Tujuan Penelitian............................................................................................................................. 5
1.4 Hipotesis............................................................................................................................................ 5
1.5 Manfaat Penelitian.......................................................................................................................... 5
BAB II................................................................................................................................................. 6
TINJAUAN PUSTAKA................................................................................................................... 6
2.1 Tanaman Buah Manggis................................................................................................................. 6
2.2 Senyawa Fenolik.............................................................................................................................. 6
2.3 Senyawa Terpenoid/Steroid........................................................................................................... 7
2.4 Senyawa Alkaloid............................................................................................................................. 7
2.5 Senyawa Saponin............................................................................................................................. 8
2.6 Aktivitas Antioksidan...................................................................................................................... 8
BAB III............................................................................................................................................. 10
METODE EKSPERIMEN............................................................................................................ 10
3.1 Alat dan Bahan.................................................................................................................................. 10
3.2 Persiapan Sampel Kulit Buah Manggis........................................................................................ 11
3.3 Tahap Ekstraksi Kulit Buah Manggis........................................................................................... 11
3.4 Uji Awal Fitokimia Ekstrak Kulit Buah Manggis....................................................................... 11
3.5 Uji Aktivitas Antioksidan dengan metode DPPH....................................................................... 12
LAMPIRAN.................................................................................................................................... 14
JADWAL KEGIATAN........................................................................................................................... 14
BIAYA........................................................................................................................................................ 15
FASILITAS / KERJASAMAA.............................................................................................................. 15
DAFTAR PUSTAKA..................................................................................................................... 16
 BAB I

PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang

Buah manggis termasuk buah eksotik yang sangat digemari oleh konsumen karena
rasanya lezat, bentuk buah yang indah dan tekstur daging buah yang putih halus sehingga
manggis mendapat julukan Queen of Tropical Fruit. Secara tradisional buah manggis adalah
obat sariawan, wasir, dan luka.
Secara umum, kandungan kimia yang terdapat dalam kulit manggis adalah xanthone,
mangostin, garsinon, flavonoid, dan tannin. Senyawa xanthone mempunyai kemampuan
sebagai antioksidan, antibakteri, antifungi, antiinflamasi, bahkan dapat menjadi penghambat
pertumbuhan bakteri Mycobacterium tuberculosis.
Kulit buah manggis dimanfaatkan sebagai pewarna, termasuk untuk tekstil, dan air
rebusannya dimanfaatkan sebagai obat tradisional untuk mengobati penyakit disentri.
Sedangkan di Thailand, kulit buah manggis sudah menjadi ramuan tradisional turun menurun
untuk mengobati infeksi pada kulit, luka dan diare. Bahkan di negara maju seperti di Amerika
Serikat, ekstrak dari kulit manggis sudah menjadi suplemen diet yang dianjurkan oleh Food
and Drug Administration (FDA) atau Badan Pengawas Obat dan Makanan Pemerintah
Amerika Serikat karena potensial sebagai antioksidan
Selama ini pemanfaatan kulit buah manggis (Garcinia mangostana L.) di Indonesia untuk
penyamakan kulit, sebagai zat warna untuk makanan dan industri tekstil. Sedangkan getah
kuningnya dimanfaatkan sebagai bahan baku cat dan insektisida, selain itu air rebusan kulit
buah manggis memiliki efek anti diare. Padahal ada senyawa lain yang terkandung dalam
kulit buah manggis yaitu xanthone yang meliputi mangostin, mangosterol, mangostinon A
dan B, trapezifolixanthone, tovophyllin B, alfa dan beta mangostin, garcinon B,
mangostanol, flavonoid epikatekin, dan gartanin. Senyawa xanthone pada kulit buah
manggis merupakan antioksidan tingkat tinggi karena kandungan antioksidannya 66,7 kali
wortel dan 8,3 kali jeruk, selain itu sifat antioksidannya melebihi vitamin E dan vitamin C.
1.2 Rumusan Masalah

1. Bagaimana cara menentukan kandungan total senyawa fenolik, flavonoid, terpenoid, dan
saponin dalam ekstrak kulit buah manggis?
2. Bagaimana aktivitas dan cara menentukan sifat antioksidan dari ekstrak kulit buah
manggis?
3. Apakah kadar senyawa fenolik, flavonoid, terpenoid, dan saponin dalam ekstrak kulit
buah manggis serta kemampuan antioksidan dapat mempengaruhi penangkalan radikal
bebas dalam tubuh?

1.3 Tujuan Penelitian

Untuk menjawab permasalahan yang ada, penelitian ini mempunyai tujuan berupa:
1. Menentukan kandungan total senyawa fenolik, flavonoid, terpenoid, dan saponin
2. Mengetahui Aktivitas antioksidan dari esktrak kulit buah manggis
3. Memahami cara menentukan kadar kandungan senyawa fenolik, flavonoid, terpenoid, dan
saponin dengan berbagai metode untuk manfaatnya sebagai tanaman potensi obat

1.4 Hipotesis
1. Ditemukan kandungan senyawa fenolik, flavonoid, terpenoid, dan saponin dalam ekstrak
kulit buah manggis
2. Ekstrak kulit buah manggis memiliki aktivitas antioksidan yang dapat membantu dalam
menangkal radikal bebas

1.5 Manfaat Penelitian

Manfaat dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kandungan fenolik, flavonoid,
terpenoid, dan saponin dalam ekstrak kulit buah manggis dengan berbagai metode serta
memahami cara menentukan aktivitas antioksidan dan fungsinya dalam menangkal radikal
bebas.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tanaman Buah Manggis

Setelah diteliti kulit buah manggis ternyata mengandung sumber melimpah dari kelas
polifenol yakni xanthone. Senyawa xanthone yang telah teridentifikasi adalah mangostin,
trapezifolixanthone, tovophyllin B, dan -mangostins, garcinone B, mangostinone,
mangostanol, flavonoid epicatechin, antosianin, asam folat dan tanin. Beberapa senyawa
memiliki aktivitas farmakologi misalnya antiinflamasi, antihistamin dan antioksidan
(Hendra et al., 2011).

Gambar 1. Buah Manggis

Klasifikasi buah manggis adalah sebagai berikut :

Kingdom : Plantae Famili : Guttiferales

Divisi : Spermatophyta Genus : Guttiferae
Klas : Angiospremae Spesies : Garcina mangostana (Bahri et
Sub-klas : Dicotyledonae al., 2012)
Ordo : Thalamiflora

2.2 Senyawa Fenolik

Menurut Suradikusumah (1989), senyawa fenol mencakup sejumlah banyak senyawa
yang umumnya mempunyai sebuah cincin aromatik dengan satu atau lebih gugus hidroksil.
 Senyawa fenol cenderung untuk larut dalam air karena paling sering bergabung dengan gula
glikosida.
Selain itu, senyawa fenol dapat bergabung juga dengan protein, alkaloid, dan terpenoid yang
terdapat dalam rongga sel. Struktur umum senyawa fenol seperti pada Gambar 2.

Gambar 2. Struktur senyawa fenol

2.3 Senyawa Terpenoid/Steroid

Terpenoid terdapat dalam senyawa tumbuhan, memiliki struktur siklik dan satu gugus
fungsi atau lebih (hidroksil, karbonil, dan lain-lain). Umumnya, terpenoid larut lemak dan
berada di dalam sitoplasma sel tumbuhan. Penggolongan senyawa terpenoid, berdasarkan
kemudahannya dalam menguap dibagi menjadi tiga golongan, yaitu : mudah menguap
(monoterpen dan seskuiterpen sebagai minyak atsiri), sulit menguap (diterpenoid), dan tidak
menguap (triterpenoid dan steroid) (Direja 2007).

Triterpenoid merupakan senyawa berkerangka karbon dari enam satuan isoprene dan
secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon asiklik, yaitu skualena. Triterpenoid dibagi
menjadi empat golongan senyawa, yaitu triterpena, steroid, saponin, dan glikosida jantung.
Sterol adalah triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin siklopentana
penhidrofenantrena.

2.4 Senyawa Alkaloid

Alkaloid merupakan salah satu golongan senyawa organik yang utama. Alkaloid dapat
ditemukan pada tumbuhan dan hewan. Namun dalam dunia tumbuhan, senyawa alkaloid
merupakan golongan senyawa organik (metabolit sekunder) terbesar diantara senyawa
lainnya baik secara jumlahnya maupun penyebarannya (Astuti et al. 1995).
 Alkaloid pada tumbuhan telah diketahui pada 40 suku dari tumbuhan berbunga. Umumnya,
suku tumbuhan itu termasuk kelas dikotil dan hanya sedikit pada monokotil.
Alkaloid sering bersifat racun bagi manusia dan memiliki banyak kegiatan fisiologi yang
menonjol, sehingga digunakan secara luas dalam bidang pengobatan (Harborne 1996).
Berdasarkan strukturnya, jenis alkaloid sangatlah banyak dan beragam.

2.5 Senyawa Saponin

Saponin adalah senyawa glikosida triterpena dan sterol yang tersebar luas pada tumbuhan
tingkat tinggi. Saponin merupakan senyawa aktif permukaan dan bersifat seperti sabun serta
dapat dideteksi dengan kemampuannya membentuk busa yang mantap (tahan lama) ketika
diekstraksi dan menghemolisis darah. Saponin memiliki sifat antimikroba, baik triterpen
maupun steroidal (Naidu 2000). Saponin memiliki rasa pahit menusuk dan menyebabkan
bersin serta iritasi pada selaput lendir.

2.6 Aktivitas Antioksidan

Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih elektron
kepada radikal bebas, sehingga radikal bebas tersebut dapat diredam. Antioksidan
didefinisikan sebagai senyawa yang dapat menunda, memperlambat, dan mencegah proses
oksidasi lipid. Dalam arti khusus, antioksidan adalah zat yang dapat menunda atau
mencegah terbentuknya reaksi radikal bebas (peroksida) dalam oksidasi lipid (Dalimartha
dan Soedibyo, 1999).
DPPH dapat digunakan untuk menguji kemampuan antioksidan yang terkandung dalam
makanan. Prinsipnya dimana elektron ganjil pada molekul DPPH memberikan serapan
maksimum pada panjang gelombang 516 nm yang berwarna ungu. Warna ini akan berubah
dari ungu menjadi kuning lemah apabila elektron ganjil tersebut berpasangan dengan atom
hidrogen yang disumbangkan senyawa antioksidan.
Reaksi antara DPPH dengan atom H netral yang berasal dari antioksidan dapat dilihat
dibawah:
Gambar 2. Mekanisme penghambatan reaksi radikal oleh DPPH
 BAB III

METODE EKSPERIMEN

3.1 Alat dan Bahan

Alat dan Bahan Keterangan

Spektrofotometer UV Vis GENESYS 10S UV-Vis
Timbangan analitik Shimidzu
Mikropipet 1 5 ml BOECO

Vacuum rotary evaporator Heidolph laborata 4001

Erlenmeyer
Labu ukur
Gelas Ukur 50 ml
Kuvet disposable 280 700 nm Kartel
Spatula
Kertas Whatman no. 41
Corong Kaca
Pipet Volumetri
Cawan Petri
Pipet Tetes Canon
Penyaring Buchner

Serbuk dari kulit buah manggis

Air destilasi Duchefa Biochemie

Akuabides
Heksana
Kloroform
Methanol
HgCl2
KI
Asam Salisilat
I2
Bi(NO3)3
HNO3 pekat
H2SO4 pekat
FeCl3
 HCl pekat
Asam Asetat Anhidrat
NaCl
Ammonia

3.2 Persiapan Sampel Kulit Buah Manggis

Sampel kulit buah manggisyang terkumpul dibersihkan dari kotoran yang
menempel, kemudian dipotong kecil-kecil, selanjutnya dikeringkan dengan diangin-
anginkan. Sampel yang sudah kering kemudian digiling hingga diperoleh serbuk halus
yang siap untuk dimaserasi.

3.3 Tahap Ekstraksi Kulit Buah Manggis

Serbuk halus kulit buah manggissebanyak 5 gram dimaserasi (direndam) berturut-
turut dengan pelarut heksana, kloroform, dan metanol dengan ketinggian pelarut 1 cm
diatas sampel. Maserasi dilakukan selama 24 jam pada suhu kamar. Hasil maserasi
disaring menggunakan penyaring Buchner dan filtrat yang diperoleh diuapkan secara
vakum menggunakan vacuum rotary evaporator untuk memperoleh ekstrak kental.

3.4 Uji Awal Fitokimia Ekstrak Kulit Buah Manggis

Ekstrak kental heksana, kloroform, dan metanolkulit buah manggismasing-
masingselanjutnyadianalisis untuk dilakukan uji awal fitokimia kandungan alkaloid,
steroid, triterpenoid, fenolik,flavonoid, dan saponin, dengan langkah-langkah sebagai
berikut:
1. Identifikasi Kandungan Alkaloid
Sebanyak 1 ml ekstrak kental heksana, kloroform, dan metanol kulit buah manggis
masing-masing dimasukkan dalam tabung reaksi dan ditambah 5 tetes amonia pekat.
Setelah itu, disaring dan filtrat kemudian ditambah 2 ml asam sulfat 2N dan dikocok
hingga menghasilkan lapisan atas dan bawah. Lapisan atas dibagi menjadi 3 bagian,
pada tabung pertama ditambahkan 1 tetes pereaksi Mayer, dan adanya alkaloid ditandai
dengan terbentuknya endapan putih. Pada tabung kedua ditambah 1 tetes pereaksi
Dragendorff dan terbentuknya endapan orange menandakan adanya alkaloid.
 Kemudian, tabung ketiga ditambah 1 tetes pereaksi Wagner dan terbentuknya endapan
coklat menandakan adanya alkaloid.

2. Uji Kandungan Steorid & Terpenoid

Sebanyak 1 ml ekstrak kental kulit buah manggis dari pelarut heksana, kloroform, dan
metanol masing-masing dimasukkan dalam tabung reaksi.
Kemudian ditambah dengan asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat (secukupnya).
Jika terbentuk warna biru atau hijau,maka menandakan adanya steroid. Jika terbantuk
warna ungu atau jingga, maka menandakan adanya triterpenoid
3. Uji Kandungan Fenolik
Sebanyak 3 tetes ekstrak kental heksana, kloroform, dan methanol kulit buah manggis
masing-masing ditaruh pada pelet porselen. Kemudian ditambahkan sedikit heksana,
kloroform, dan metanol (0,5 mL) pada masing- masing ekstraknya, lalu diaduk sampai
homogen. Setelah itu, masing-masing sampel ditambah beberapatetes FeCl35%.
Adanya fenolik ditandai dengan terbentuknya warna hijau, kuning, orange, atau merah

4. Uji Kandungan Flavonoid

Sebanyak 1 ml ekstrak kental heksana, kloroform, dan metanol kulit buah manggis
masing-masing dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambah dengan 5 tetes etanol 60%-
70%, lalu dikocok sampai homogen. Setelah itu ditambah sedikit pita Mg (1 mg) dan 5
tetes HCl pekat. Jika menghasilkan warna kuning, orange, atau merah menandakan
adanya flavonoid

5. Uji Kandungan Saponin

Sebanyak 1 ml ekstrak kental heksana, kloroform, dan metanol kulit buah manggis
masing-masing dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambah 2 ml aquades, lalu dikocok
sampai homogen. Setelah itu, dipanaskan selama 2-3 menit dandinginkan.Setelah
dingin, kocok kembali dengan kuat. Adanya busa yang stabil (bertahan lama)
menunjukkan sampel mengandung saponin.
3.5 Uji Aktivitas Antioksidan dengan metode DPPH
Metode uji aktivitas antioksidan DPPH dilakukan dengan sedikit modifikasi. Larutan
DPPH 6 105 M diperoleh dengan pelarutan serbuk DPPH sebanyak 1,182 mg ke dalam
50 mL metanol. Larutan uji diperoleh dengan pelarutan senyawa uji sebanyak 10 mg ke
dalam 1 mL metanol.
Larutan uji dipipet 33,33 L dan dimasukkan ke dalam tube yang terlindung dari cahaya,
kemudian ditambahkan 1 mL DPPH. Campuran larutan tersebut dikocok dengan vortex
selama 10 detik.
Selanjutnya, larutan tersebut diinkubasi pada suhu 37 C selama 20 menit. Selama proses
reduksi oleh antioksidan, larutan DPPH radikal akan berubah warna dari ungu menjadi
kuning pucat. Penurunan absorbansi ini diukur dengan spektrofotometer UV pada
panjang gelombang 515 nm (As). Larutan Blanko yang digunakan terdiri dari 33,33 L
metanol dalam 1 mL DPPH yang diukur pada panjang gelombang yang sama (Ab).
Trolox digunakan sebagai kontrol positif. Perlakuan pada uji DPPH ini dilakukan dengan
tiga kali pengulangan (triplicate).

Aktivitas penghambatan radikal dapat dihitung dengan rumus di bawah ini:

Ab As
Penghambatan= x 100
As
 LAMPIRAN
JADWAL KEGIATAN

September Oktober November Desember Januari

Minggu ke- 2 3 4 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
Seminar Uji
Kelayakan Proposal
Inventaris Alat dan
Bahan
Preparasi
kulit buah manggis

Ekstraksi kulit buah

manggis dalam
berbagai pelarut

Preparasi Larutan
Standar DPPH
Uji senyawa fitokimia
terhadap sampel
ekstrak kulit manggis
Pengamatan
Menggunakan UV-
Vis
Uji Aktivitas
Antioksidan
Dengan metode DPPH
Analisa dan
pengolahan data
Konsultasi
Studi Literatur
Penyusunan Skripsi
Progress Report
Sidang Skripsi
 BIAYA

No. Jenis Pengeluaran Biaya (Rp)

1. Bahan Habis Pakai Rp 2.500.000,-
2. Peralatan Penunjang Rp 2.000.000,-
3. Perjalanan Rp 1.000.000,-
4. Biaya Kesekretariatan dan Lainnya Rp 900.000,-
Jumlah Rp 6.400.000,-

FASILITAS / KERJASAMAA

No. Fasilitas Yang Digunakan Jumlah

1. Laboratorium 1
2. Alat-Alat Penunjang Prosedur Kuantitatif 1
Spektrofotometer GENESYS 10S UV-
3. Rp 1.000.000,-
V

is
 DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2008. Keragaan Kondisi Manggis Indonesia. Makalah Direktur Jenderal
Hortikultura. Direktorat Jenderal Hortikultura, Departemen Pertanian, Jakarta.
Balunas, M,J., Bin Su., Brueggemeir, R.W., dan Kinghorn, A.D. 2008. Xanthones from
the botanical supplement mangosteen (garcinia mangostana) with aromatase inhibitor
activity. J. Nat Prod, 71 (7) : 1161- 1166.
Matsumoto, K., Akao, Y., Kobayashi, E., Ohguchi, K., Ito, T., dan Tanaka, T. 2003.
Induction of apoptosis by xanthones from mangosteen in human leukemia cell lines. J.
Nat. Prod. 2003, 66, 1124-1127.
Pothitirat, W., dan Gritsanapan, W. 2008. Quantitative Analysis Of Total Mangostins In
Garcinia Mangostana Fruit Rind. J Health Res. 22(4): 161- 166.
Sharma, Om P., dan Bhat Tej K. 2009. DPPH Antioxidant Assay Revisited. J Food
Chem. 113: 12021205.
Yu, L., Zhao, M., Yang, B., Zhao, Q., dan Jiang, Y. 2007. Phenolics From Hull of
Garcinia Mangostana Fruit and Their Antioxidant Activities. J Food Chem. 104: 176-
181.