Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215

daftar isi yang tersedia di ScienceDirect

karbohidrat Polimer

j ourna l saya ho pa ge: Sevier www.el. com / cari / carbpol

Dimurnikan polisakarida dari Geoffroea spinosa gonggongan memiliki antikoagulan dan antitrombotik
kegiatan tanpa risiko hemorrhagic

Racquel OS Souza Sebuah . ana MS Assreuy Sebuah . Juliana C. Madeira Sebuah . Francisco DS Chagas b .
luane SEBUAH. Parreiras c . Gustavo RC Santos c . Paulo AS Mouro c . Maria G. Pereira Sebuah . b . *
Sebuah Universidade Estadual melakukan Cear, Instituto Superior de Ciencias Biomdicas, Laboratorio de Fisio-Farmacologia da Dalam fl AMAC ao, Av. Paranjana, 1700, Fortaleza, Cear, Brasil

b Universidade Estadual melakukan Cear, Faculdade de Educac ao, Ciencias e Letras melakukan Serto Tengah, Laboratorio de Polissacardeos Bioativos, Rua Jos de Queiroz Pessoa, 2554, Quixada, Ceara, Brasil

c Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rumah Sakit Universitrio Clementino Fraga Filho, Instituto de Bioqumica Medica Leopoldo de Meis, Laboratorio de Tecido Conjuntivo, Rua Rodolpho Paulo Rocco, 255,

Rio de Janeiro, Brasil

articleinfo abstrak

Artikel sejarah: Polisakarida diekstraksi dari kulit kayu dari Geoffroea spinosa, puri fi ed menggunakan kromatografi pertukaran anion dan ditandai dengan
menerima 13 Februari 2014 Diterima di direvisi bentuk 6 analisis kimia dan metilasi, dilengkapi dengan inframerah dan NMR spektroskopi. polisakarida ini diuji untuk antikoagulan, kegiatan
Oktober 2014 Diterima 28 Januari 2015 Tersedia secara
antitrombotik dan antiplatelet mereka dan juga untuk efek mereka pada perdarahan. polisakarida tak terpecah mengandung tingkat rendah
online 12 Februari 2015
protein dan tingkat tinggi karbohidrat (termasuk asam hexuronic). The dimurnikan polisakarida (pecahan FII dan FIII) terdiri dari arabinose
(Ara), rhamnose (Rha), asam hexuronic, sejumlah kecil galaktosa, tetapi tidak ada sulfat ester. Mereka memiliki struktur yang sangat kompleks,
yang sebagian ditandai. NMR dan analisis metilasi menunjukkan bahwa polisakarida memiliki inti -Rha p dan cabang dari 5-linked -Ara f. Residu
Kata kunci:
dari 4-linked -Gal p Sebuah juga ditemukan dalam struktur. The tak terpecah (TPL) dan fraksi FIII, tapi tidak fraksi FI dan FII, berkepanjangan
polisakarida
saat diaktifkan parsial tromboplastin (aPTT). TPL, FII dan FIII menghambat agregasi platelet yang diinduksi oleh ADP. Lebih secara signifikan,
Geoffroea spinosa
Struktur antikoagulan baik tak terpecah dan puri fi fraksi ed menunjukkan efek antitrombotik kuat (31-60%) dan fraksi tidak mengubah kecenderungan perdarahan.
antitrombotik polisakarida tanaman ini bisa menjadi alternatif sumber antikoagulan baru, antiplatelet dan senyawa antitrombotik tanpa risiko yang tidak
antiplatelet diinginkan perdarahan.

2015 Elsevier Ltd All rights reserved.

1. pengantar kebanyakan disakarida berulang Unit ( -D-glukosamin bergantian dengan Asam -L-iduronic) dan itu
adalah yang paling sebagian besar polisakarida klinis bekerja sebagai antikoagulan dan obat
vena trombosis terjadi pada kejadian tahunan di seluruh dunia dari 1 per 1000 orang dewasa ( Cushman,antitrombotik ( Gracher, Cipriane, Carbonero, Gorin, & Iacomini 2010 ). Namun, heparin menyajikan
2007 ). Di Brazil, 1115.695 kematian adalah dilaporkan dalam 2009, sedang 31% disebabkan oleh penyakit kelemahan penting, termasuk keragaman struktural ditandai tergantung pada jaringan asal ( Aquino et
kardiovaskular ( Brasil, 2010 ). Itu pengobatan trombosis menggunakan agen dengan trombolitik, antikoagulan
al., 2010 ), Patogen kontaminasi, bioavailabilitas miskin, osteoporosis dan khusus risiko tinggi
dan kegiatan antiplatelet ( Ringleb 2006 ). Heparin adalah linear sangat sulfat polisakarida yang trombositopenia dan perdarahan ( Beijering, Ten Cate, & Ten Cate 1996; Hirsh, 1991; Hirsh & Levine,
mengandung 1994 ). Sulfat polisakarida diisolasi dari ganggang laut dan invertebrata terdiri sekelompok kompleks
makromolekul secara ekstensif dipelajari sebagai antikoagulan dan antitrombotik ( Ciancia et al.,
2007; Farias, Valente, Pereira, & Mouro, 2000; Fonseca et al., 2008; Pereira et al., 2005; Mouro &
Pereira, 1999 ). Polisakarida tanaman yang lebih tinggi juga struktur kimia heterogen hadir tapi
tindakan mereka dalam koagulasi dan trombosis telah sedikit dieksplorasi. Hanya studi terbaru telah
singkatan: aPTT, diaktifkan parsial tromboplastin waktu; PT, waktu protrombin; ADP, adenosin difosfat; TPL, Total polisakarida;
BSA, bovine serum albumin; PRP, platelet plasma kaya; PPP, trombosit plasma miskin; HSMW, natrium heparin tinggi berat
menunjukkan antikoagulan yang
molekul.

* Sesuai penulis di: Universidade Estadual melakukan Cear, Instituto Superior de Ciencias Biomdicas, Laboratorio
de Fisio-Farmacologia da Dalam fl AMAC ao, Av. Paranjana, 1700, 60714903 Fortaleza, Ceara, Brasil. Tel .: +55 85
31019919; fax: 55 8531019810.

E-mail alamat: mag12 99@yahoo.com . mariag.pereira@uece.br (MG Pereira).

http://dx.doi.org/10.1016/j.carbpol.2015.01.069
0144-8617 / 2015 Elsevier Ltd All rights reserved.
 ROS Souza et al. / Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215
aktivitas menanam polisakarida, suatu kegiatan yang terkait dengan itu Kehadiran residu asam uronic ( Pawlaczyk,
72 h dan disentrifugasi (1445 g, 30 menit, rt). Protokol ini untuk ekstraksi polisakarida mirip dengan
Czerchawski, Pilecki, Lamer-Zarawska, & Gancarz, 2009; Yoon et al., 2002 ).
Geoffroea spinosa Jacq. (Leguminosae), yang dikenal sebagai Umari atau marizeira adalah ditemui
di sepanjang sungai di timur laut Brazil ( Matos, 1999 ). Teh disiapkan daunnya populer digunakan untuk
menstruasi gangguan ( Matos, 1999 ) Dan kulit untuk anemia ( Roque, Rocha, & Loiola 2010 ). Bahan
kimia konstituen dari G. spinosa ekstrak etanol diperoleh dari kulit kayu dan akar telah dipelajari dan
menunjukkan kehadiran dari triterpen dan steroid ( Lopes et al., 2009 ). Dengan demikian, tujuan dari
penelitian ini adalah untuk mengisolasi, mengkarakterisasi dan mengevaluasi itu antikoagulan, antiplatelet
dan efek antitrombotik dari polisakarida dari G. spinosa kulit.
2. bahan dan metode
2.1. Menanam bahan
Barks dari G. spinosa Jacq. dikumpulkan di alam di Kabupaten Custodio-Quixada, Ceara, Brasil.
Tanaman ini identifikasi ed oleh ahli biologi Ms. Vaneicia dos S. Gomes (State University of Ceara) dan
yang susut (tidak ada 46.796) disimpan di Herbarium Prisco Bezerra (federal University of Ceara).
2.2. hewan
Perempuan dan laki-laki tikus Wistar (200-250 g) dipertahankan di bawah 12/12 h light / siklus
gelap, pada 25 C, dengan akses gratis makanan dan air. protokol eksperimental yang sesuai dengan Panduan
untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium Departemen Kesehatan dan Layanan
Kemanusiaan (NIH publikasi ada 85-23, direvisi 1985) dan disetujui oleh Kelembagaan Perawatan
Hewan dan Penggunaan Komite State University of Ceara (CEUA ada
092.046.320). binatang terbius oleh injeksi intramuskular dengan campuran 5% ketamin (90 mg / kg) dan
xylazine (10 mg / kg).
2.3. Manusia darah
Manusia darah (3,2% sodium sitrat) diperoleh dari relawan yang sehat donor dari Hematologi
Pusat Ceara, menurut resolusi tidak ada 466/2012 Dewan Kesehatan Nasional, Brasil.
2.4. kimia dan reagen
adenosine difosfat (ADP), diethylaminoethyl-selulosa (DEAE-cellulose), D-galaktosa, Asam
D-galacturonic, FeCl 3 dan sapi serum albumin (BSA) diperoleh dari Sigma, So Paulo-SP, Brazil; heparin
diperoleh dari Hipolabor, Belo Horizonte-MG, Brazil; otak tromboplastin diperoleh dari Trinity Biotech, Wicklow,
Irlandia; kit untuk diaktifkan thromboplastin parsial waktu (APTT) dan protrombin waktu (PT) berasal
dari Bios DIAGNOSTICA, Sorocaba-SP, Brasil; ketamin dan xylazine berasal dari Konig SA, Avellaneda-BA,
Argentina. Semua bahan kimia lainnya dan reagen adalah dari kelas analitis.
2.5. polisakarida ekstraksi dan puri fi kasi
G. spinosa gonggongan dicuci dengan air suling, dikeringkan pada 40 C, membumi ke bubuk (5 g),
ditangguhkan dalam metanol (01:50 w / v, 76 C, 2 h) dan disaring untuk menghilangkan metanol-larut
material; prosedur diulang dua kali. Bahan larut adalah diekstrak di 0,1 M NaOH (01:50 w / v, 97 C) dan
disentrifugasi (1445 g, 15 menit, rt); Prosedur diulang tiga kali. basa ekstrak (Supernatan 2 dan 3)
dikumpulkan, dinetralkan dengan 1 M HCl, diendapkan dengan 4 volume etanol dan disentrifugasi. Itu supernatan
didialisis air yang mengalir untuk
209
yang dijelaskan oleh Yoon et al. (2002) , Dengan sedikit kation modi fi. The fi nal supernatan diliofilisasi
dan bernama Total polisakarida-TPL.
TPL (20 mg) dilarutkan dalam air suling (2: 1, w / v) dan difraksinasi dengan kromatografi
pertukaran ion (DEAE-cellulose). Kolom ini disetimbangkan, dicuci dengan air suling dan polisakarida
asam dielusi (60 ml / jam) demi langkah bijaksana dengan 0,1, 0,25, 0,5, 0,75 dan 1 M NaCl. Fraksi
polisakarida utama dikumpulkan, didialisis, liofilisasi dan bernama FI (0,1 M), FII (0,25 M) dan FIII (0,5 M).
polisakarida difraksinasi (6 mg / ml) yang diterapkan untuk 0,5%
gel agarosa (60 menit, 110 V) di 0,05 M 1,3-diaminopropana: asetat pH 9.0 ( Vieira, Mulloy, & Mouro,
1991 ). Polisakarida yang fi xed di 0,1% N- cetyl- N, N, N- trimetilamonium (CETAVLON). setelah 24 h, gel
diwarnai dengan Noda-Semua, spesifik untuk asam uronic ( Volpi, Maccari, & Titze 2005 ). Kondroitin
6-sulfat (CS ~ 60 g / mol) dan babi heparin (HMWS ~ 15 g / mol) digunakan sebagai standar.
2.6. Kimia dan karakterisasi struktur
2.6.1. Analisis kimia
Unfractioned (TPL) dan polisakarida difraksinasi dinilai untuk isi karbohidrat ( Dubois, Gilles,
Hamilton, Rebers, & Smith 1956 ), Asam uronic ( Dische 1947 ) Dan protein ( Bradford, 1976 ) Secara
spektrofotometri menggunakan D-galaktosa ( SEBUAH 490 nm),
D-galacturonic asam ( SEBUAH 525 nm) dan BSA ( SEBUAH 595 nm) sebagai standar, masing-masing.
2.6.2. Komposisi Monossaccharide dan analisis metilasi
polisakarida difraksinasi (10 mg) yang dihidrolisis dengan tri fl asam uoracetic (1 mol / l; 96 C; 5 h),
menguap di evaporator rota (Buchi RE 11, Swiss) dan secara ekstensif dicuci dengan air ( Adams,
1965 ). Sampel dihidrolisis berkurang dengan borohidrate natrium (1 h, rt) dan reaksi terganggu dengan
asam asetat sampai netralisasi. asam borat yang dihasilkan telah dihapus sebagai trimetil borat
dengan metanol (3 5 ml) di evaporator rota dan asetilasi dilakukan dengan asetat anhidrida-piridin (1:
1, v / v; 100 C; 1 h). The alditol asetat dihasilkan diekstraksi dengan kloroform (5 ml) dan dianalisis
dengan kromatografi gas, digabungkan dengan spektrometri massa (GC-MS) (GCMSQP2010
Shimadzu, Jepang) pada kolom HP-ultra2 (30 m 0,25 mm
id), menurut Kircher (1960) . Untuk analisis metilasi polisakarida (5 mg) menjadi sasaran dua putaran
metilasi, seperti yang dijelaskan oleh Ciucanu dan Kerek (1984) . Polisakarida alkohol dihidrolisis,
berkurang dengan borohidrida, asetat dan dianalisis pada instrumen GC-MS, seperti dijelaskan di
atas.
2.6.3. FT-IR
Untuk FT-IR (Perkin Elmer Spectrum 100, USA) pengukuran difraksinasi polisakarida (2 mg)
dicampur dengan bubuk kalium bromida dan ditekan ke disk dalam pertengahan inframerah wilayah
di 4000-400 cm - 1.
2.6.4. 1 H dan 13 spektroskopi C NMR
Satu (1D) dan dua dimensi (2D) spektrum polisakarida dicatat dengan menggunakan alat Bruker
DRX 800 MHz dengan probe tiga resonansi, seperti yang dijelaskan sebelumnya ( Pereira,
Vilela-Silva, Valente, & Mouro, 2002; Pomim et al., 2005 ). Sekitar 20 mg setiap sampel dilarutkan
dalam 0,5 ml 99,9% deuterium oksida (Cambridge Isotop Laboratorium, Cambridge, MA, USA). Semua
spektrum direkam pada 35 C dengan HOD (deuterated air menunjukkan puncak karena pertukaran
dengan sisa H 2 O) penindasan oleh presaturation. untuk 1D 1 H NMR, 32 scan dicatat menggunakan
delay antar-scan equals ke 1 detik (s). untuk 2D
1 H / 1 H TOCSY (Total berkorelasi spektroskopi) dan 1 H / 13 C HSQC (heteronuklir koherensi kuantum
tunggal) percobaan, spektrum yang
210 ROS Souza et al. / Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215

tercatat menggunakan menyatakan TPPI (waktu fase proporsi incrementation) untuk quadrature deteksi Tabel 1
Hasil dan komposisi monosakarida dari fraksi polisakarida.
dalam dimensi tidak langsung. TOCSY spektrum dijalankan dengan 4046 400 poin dengan spinlock
apangan dari 10 kHz dan pencampuran waktu 80 milidetik (ms). pergeseran kimia yang ditampilkan tergantungpecahan Menghasilkan Sebuah (%) komposisi monosakarida b (%)

pada luar trimetil-silylpropionic asam pada 0 ppm untuk 1 H dan tergantung pada metanol untuk 13 C.
ara Rha cewek glc Manusia

FI 0,55 - - - - -
FII 1,40 73 13 10 2 2
FIII 0.60 79 12 9 - -
2.7. Biologis tes
Standar: arabinosa (Ara), rhamnose (Rha), galaktosa (Gal), glukosa (GLC), mannose (Man). Tiga fraksi juga
mengandung asam hexuronic tapi itu tidak mungkin untuk menentukan isinya karena gangguan protein kontaminan
2.7.1. pembekuan pada reaksi karbazol.
diaktifkan sebagian tromboplastin waktu (aPTT) dan waktu protrombin (PT) adalah dilakukan Menurut
Sebuah 10 mg TPL.
produsen spesifikasi-spesifikasi dan diukur dalam coagulometer (CLOTimer DRAKE, Brasil). Untuk aPTT,
b GC-MS.
normal plasma manusia (90 l) dicampur dengan 10 l TPL atau polisakarida pecahan (0,016-0,100 mg /
ml), Heparin sodium dari tinggi molekuler berat (HSMW; ,000033-0,0016 mg / ml) atau NaCl 0,9% (Saline)
dan diinkubasi pada 37 C selama 1 menit. Cephalin (100 l) adalah ditambahkan dan diinkubasi pada 37
2,0 mg / kg), FII, FIII (2,0 mg / kg) atau HSMW (0,05 mg / kg). Lima menit kemudian, perdarahan
C selama 3 menit. Reaksinya adalah diinisiasikan oleh penambahan 0,25 M CaCl 2 ( 100 l) dan
diinduksi oleh transeksi ekor ekstremitas 3 mm dari ujung. Ekor dihapuskan dengan kertas fi lter
pembekuan waktu itu diukur hingga 300 s. untuk PT tekad, normal manusia plasma (90 l) diinkubasi
setiap 30 s dan waktu (s) perdarahan penghentian tercatat ( MartinichenHerrero, Carbonero, Sassaki,
dengan 10 l TPL (0,016-0,100 mg / ml) atau saline pada 37 C selama 5 menit. reaksi dimulai oleh penambahan
Gorin, & Iacomini 2005 ).
thromboplastin (200 l) dan waktu pembekuan adalah diukur hingga 300 s. Itu aktivitas antikoagulan
dilakukan di rangkap tiga dan dinyatakan dalam detik sebagai rasio antara pembekuan waktu di kehadiran
( T 1) dan di ketiadaan polisakarida ( T 0).
2.8. Analisis statistik

Hasil dinyatakan sebagai mean SEM dan dianalisis dengan ANOVA dan Bonferroni tes.
Perbedaan dianggap untuk p nilai kurang dari 0.05.

3. Hasil dan Pembahasan

2.7.2. trombosit pengumpulan
trombosit kaya plasma (PRP) diperoleh dengan sentrifugasi (118 g, 10 menit, rt). PRP (450 l) 3.1. Polisakarida terisolasi dari G. spinosa
dihangatkan pada 37 C ke cuvettes di aggregometer (Qualiterm PA.04, Brazil) sebelum penambahan 10
TPL, polisakarida pecahan (5, 10 dan 100 g / l) atau HSMW. trombosit pengumpulan, dilakukan dalam Ekstraksi polisakarida dari G. spinosa gonggongan menunjukkan hasil total 5%, yang dianggap
rangkap tiga, diukur itu ketiadaan atau di Kehadiran ADP (3 M; 30 l) dan diamati selama 5 min. Itu agregasi tinggi dibandingkan dengan Caesalpinia Ferrea polong (sekitar 3%), dan bahwa dari Azadirachta indica benih
adalah dikuanti fi kasi sebagai batas maksimum kenaikan cahaya transmitansi dan dinyatakan dalam tegument (sekitar 1,3%), semua diekstraksi dengan prosedur yang sama ( Pereira et al, 2012a.;
Pereira, Silva, Silva, Assreuy, & Pereira, 2012b ). Analisis kimia menunjukkan 62% total karbohidrat
persentase dalam kaitannya dengan kontrol ADP (100% T). Itu aggregometer kalibrasi dilakukan menggunakan
trombosit plasma miskin (PPP; 100% T) diperoleh dengan sentrifugasi (1062 g, 15 menit, rt) ( Lahir & dan 9% protein. Kandungan karbohidrat dalam polisakarida tak terpecah (TPL) adalah mirip dengan
Cross, 1963 ). yang dijelaskan untuk A. indica dan C. ferrea, sedangkan kandungan protein lebih unggul ( Pereira et al.,
2012a, 2012b ). Mungkin dicatat bahwa metode non-enzimatik menggunakan suhu tinggi untuk
ekstraksi polisakarida dari G. spinosa gonggongan efektif, karena kandungan karbohidrat adalah cukup
tinggi dibandingkan dengan kandungan protein.

2.7.3. vena dan arteri pembekuan darah

vena trombosis diinduksi dengan metode yang menggabungkan stasis dan hiperkoagulabilitas.
Setelah anestesi, tikus perut pembuluh darah cava adalah membedah untuk penempatan jahitan longgar
dalam segmen 0,7 cm antara vena renal kanan dan kiri. Saline, TPL (0,5-3,0 mg / kg), FII, FIII (2,0 mg /
kg) atau HSMW (0,05 mg / kg) disuntikkan dan terawat beredar selama 5 menit. Inferior vena cava adalah
terisolasi untuk suntikan tromboplastin (5.0 mg / kg) di tunggal bolus dan 0,7 cm segmen itu dijepit off
oleh distal dan proksimal jahitan. Setelah 20 menit stasis, trombus terbentuk telah dihapus, dikeringkan
selama 1 jam pada 60 C, dan ditimbang ( Vogel, Meuleman, Bourgondin, & Hobbelen 1989 ).
trombosis arteri diinduksi oleh hangat penerapan FeCl 3. Arteri karotis kanan diisolasi, melalui serviks sayatan,
untuk penerapan suatu fl ow ultrasonik Probe (Transonik Systems Inc. 0,5 VB, USA). Setelah 20 menit
stabilisasi, FII, FIII (1.0, 2.0 mg / kg) atau HSMW (0,25 mg / kg) perlahan-lahan disuntikkan ke dalam cava
pembuluh darah. Lima menit kemudian trombosis diinduksi oleh aplikasi topikal dari kertas fi lter (0,8 0,2
mm) direndam dalam 50% FeCl 3,
The puri fi kasi G. spinosa polisakarida, menggunakan kromatografi DEAEcellulose,
mengungkapkan tiga fraksi utama yang dielusi pada 0,1 M (FI), 0,25 M (FII) dan 0,5 M NaCl (FIII) ( Ara.
1 A) dengan hasil dari 0,55%, 1,4% dan 0,6%, masing-masing ( Tabel 1 ). hasil ini serupa dengan yang
dari fraksi polisakarida terisolasi dari bunga-bunga dari Fragaria vesca L. (1,4%), Solidago virgaurea L.
(1,0%) dan
arnica montana L. (0,9%) ( Pawlaczyk et al., 2009 ). komposisi monosakarida dan analisis kimia G.
spinosa fraksi polisakarida mengungkapkan adanya arabinose, rhamnose, asam hexuronic, sejumlah
kecil galaktosa, glukosa dan mannose dan beberapa protein larut ( Tabel 1 ). Kandungan total asam
hexuronic tidak tekun karena gangguan protein kontaminan pada reaksi kolorimetri. Hal ini
selanjutnya dievaluasi kembali pada analisis NMR. Tingginya kandungan total karbohidrat (FI: 38%;
FII: 43%; FIII: 49%) dari G. spinosa

terus untuk 1 min. Arteri dicuci dengan 0,9% NaCl dan aliran darah diukur selama 60 menit dengan ultrasonikfraksi mirip dengan fraksi bioaktif FI dari A. indica ( 54%) ( Pereira et al., 2012b ) Dan FIII dari C. ferrea ( 39%)
Probe ( Surin, Prakash, Barthwal, & Dikshit 2010 ). ( Pereira et al., 2012a ). Namun, rendahnya tingkat kontaminan protein (FI: 3,5%; FII: 2,8%; FIII: 3,0%)
ditemukan di G. spinosa mirip dengan fraksi FI dari A. indica

2.7.4. Berdarah (3%), tetapi berbeda dari fraksi FIII dari C. ferrea ( 7%). Secara umum, komposisi polisakarida
hewan adalah dibius dan vena jugularis kiri cannulated untuk suntikan fosfat buffered saline (PBS), bervariasi sesuai dengan sumber dan metode yang digunakan untuk isolasi dan pemurnian ( Rolin,
TPL (0,5, 1.0 atau 1993 ).
 ROS Souza et al. / Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215 211

Ara. 1. Ion bertukar kromatografi dan elektroforesis gel agarosa dari G. spinosa polisakarida. (A) TPL yang diterapkan untuk kolom DEAE-cellulose (12 3 cm) dan polisakarida pecahan dielusi (1 ml / menit) demi langkah bijak dalam NaCl ( ) dan
dipantau oleh karbohidrat total SEBUAH 490 nm ( ) Dan asam hexuronic SEBUAH 525 nm ( ) . (B) FII dan FIII (6 mg / ml,
30 l) adalah diterapkan dalam 0,5% gel agarose di 0,05 M 1,3-diaminopropana: asetat pH 9.0 (110 V, 60 menit) dan diwarnai dengan noda-Semua. Kondroitin 6-sulfat (CS ~ 60 g / mol); heparin sodium (HSMW ~ 15 g / mol).

Itu gel agarosa elektroforesis mengungkapkan band polydisperse biru untuk FII dan FIII, menunjukkan dari pita absorpsi pada 1240 cm - 1 menunjukkan tidak adanya ester sulfat (S O) di polisakarida ini ( Ara.
adanya asam hexuronic di 2 SEBUAH).
1 H NMR spektrum di 800 MHz dari polisakarida ed puri fi tercatat 35 C menunjukkan lebih luas
G. spinosa polisakarida ( Ara. 1 B). Hasil penelitian menunjukkan bahwa teknik ini, terkait dengan
penggunaan Noda-Semua, dapat digunakan sebagai novel alternatif metode untuk mendeteksi adanya dan buruk diselesaikan sinyal, menunjukkan struktur kimia jelas heterogen. Itu tidak mungkin untuk

asam hexuronic di menanam polisakarida dan juga untuk mengevaluasi kemurnian non-sulfat menanam melacak sistem berputar menggunakan 1 H 1 H NYAMAN atau TOCSY spektrum. Itu
polisakarida. Selain, SDS-PAGE (Diwarnai dengan Noda-Semua) juga menunjukkan band polydisperse (Data
tidak ditunjukkan). 13 C 1 H HSQC spektrum menunjukkan sinyal lebih diselesaikan ( Ara. 2 Pita

3.2. Struktural analisis dari G. spinosa polisakarida
Pecahan FII dan FIII, serta polisakarida tak terpecah dari G. spinosa, mengandung arabinosa (Ara),
rhamnose (Rha) dan kecil jumlah galaktosa (Gal) ( Tabel 1 ). persentase yang sama dari Rha dan Gal
ditemukan di polifenol-polisakarida dari Erigeron canadensis ( Rha: 0,7-12,4%; Gal: 3,8-23,4) ( Pawlaczyk
et Al., 2011a ), Filipendula ulmaria ( Rha: 5,5%; Gal: 15,7%) dan Rubus plicatus ( Rha: 2,4; Gal: 16,1) ( Pawlaczyk
et al., 2009 ). FT-IR dari fraksi FII dan FIII menunjukkan band di wilayah 1200-800 cm - 1 khas karbohidrat
C), yang ditugaskan oleh analogi dengan data yang diterbitkan untuk polisakarida yang sama (lihat tabel
2 ; Makarova, Patovab, Shakhmatova, Kuznetsova, & Ovodovb, 2013 ). Secara khusus, sinyal anomeric
dari unit -arabinofuranosyl yang mudah diidentifikasi karena karakteristik pergeseran rendah lapangan
mereka di 13 C skala. Dua sistem ditugaskan untuk -Ara f residu. Yang lebih besar (Sinyal A ' di Ara. 2 B
dan C dan tabel 2 ) Adalah 5-linked -Ara f residu, seperti yang ditunjukkan oleh ~ 6 ppm bawah fi
pergeseran medan sinyal C5. Sistem kurang intens (diindikasikan sebagai A di Ara. 2 B dan C dan tabel
2 ) Adalah non-mengurangi terminal
-
ara f. Dua sistem lain juga diidentifikasi pada 13 C 1 H HSQC spektrum berdasarkan perbandingan dengan

( Ara. 2 SEBUAH). Sejak FIII telah menunjukkan sinyal lebih tinggi Intensitas dibandingkan dengan FII, data yang diterbitkan sebelumnya, satu ditugaskan untuk 2- dan 4-linked -Rha p ( ditunjukkan oleh R di Ara.

itu menunjukkan bahwa FIII adalah lebih tinggi kemurnian yang FII, seperti yang sudah terlihat pada 2 B dan C dan tabel 2 ) Dan satu lagi untuk 4-linked -Gal p A (sinyal ditunjukkan sebagai

gel agarosa elektroforesis. sinyal diamati pada 3410 cm - 1 berhubungan dengan ikatan getaran dari
kelompok OH dan orang-orang antara 2950 dan 2850 cm - 1 berasal dari getaran peregangan alifatik C H G). Lihat nilai-nilai 1 H dan 13 pergeseran kimia C di tabel 2 . Secara keseluruhan, hasil ini menunjukkan
kelompok, terutama dari metil (CH 3) kelompok metil ester ( Kacurkov, Capek, Sasinkov, Wellner, & bahwa polisakarida dari G. spinosa mengandung inti -Rha p dan cabang -Ara f. Kami tidak memiliki data
Ebringerov, 2000; Pawlaczyk et al., 2011a ). FT-IR spektrum FIII mengungkapkan spektral pola karbohidrat untuk memperjelas distribusi -Gal p Sebuah pada struktur polisakarida. Residu galaktosa tidak
khas untuk rhamnogalacturonan dan / atau homogalacturonan dengan sinyal yang kuat di 1611 dan diidentifikasi mungkin karena terjadinya mereka dalam jumlah rendah.
1414 cm - 1,

Perbandingan antara 13 C 1 H HSQC pecahan FII ( Ara. 2 B)

dan FIII ( Ara. 2 C) menunjukkan bahwa dua fraksi ini berbeda sebagian besar dalam proporsi mereka
dari 4-linked -Gal p A (FIII > FII) dan juga pada non-terminal -Ara f unit (FII > FIII), seperti yang ditunjukkan
oleh intensitas sinyal anomeric dari sistem berputar ( tabel 3 ). Tentu saja nilai-nilai integral ini
membutuhkan interpretasi yang cermat karena mereka berasal dari bukan keseluruhan sinyal NMR
karakteristik untuk resonansi dari COO - kelompok asam uronic ( Kacurkov dkk., 2000; Pawlaczyk et diselesaikan.
al., 2011b ). Ketidakhadiran

tabel 2
1 H dan 13 C pergeseran kimia dari unit utama dari fraksi FII dan FIII dari G. spinosa.

Struktur Satuan H-1 / C-1 H-2 / C-2 H-3 / C-3 H-4 / C-4 H-5 / C-5 H-6 / C-6

- Ara f- ( 1 SEBUAH 5.15 / 108,53 4.12 / 82,64 3,96 / 78,04 4.07 / 85,49 3,72-3,83 / 62,48
5) - -Ara f- ( 1 SEBUAH ' 5.08 / 108,92 4.12 / 82.2 4.00 / 78,19 4.20 / 83,7 3,79-3,88 / 68,2
2,4) - -Rha p- ( 1 R 5.26 / 99,9 4.11 / 76,63 4.09 / 71.6 nd nd 1.30 / 18
4) - -Gal p A- (1 G 5.08 / 100,39 3,77 / 69,59 4.01 / 70,26 4.40 / 79,3 4.73 / 72.7 nd
Referensi
- Araf- (1 2 Sebuah 5.17 / 108,2 4.13 / 82,4 3.97 / 77.8 4.07 / 85.2 3,75-3,85 / 62,4
5) - -Ara f- ( 1 Sebuah 5.08 / 108,9 4.12 / 82.5 4.01 / 77.8 4.18 / 83,6 3,86-3,81 / 67,9
2,4) - -Rha p- ( 1 Sebuah 5.20 / 100.3 4.08 / 77.8 4,02 / 72,06 3.68 / 80.2 3.73 / 69,1 1,32 / 18
4) - -Gal p A- (1 Sebuah 5.09 / 101,3 3.73 / 69,4 4.00 / 69,4 4.45 / 79,9 4.97 / 71,5 /174.6

Bahan kimia pergeseran relatif ke eksternal asam trimethysilylpropionic pada 0 ppm untuk 1 H dan metanol untuk 13 C. nd: tidak terdeteksi.
Sebuah nilai-nilai referensi dari Makarova et al. (2013) .
212 ROS Souza et al. / Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215

Ara. 2. FT-IR dan NMR spektrum G. spinosa fraksi polisakarida (FII dan FIII). spektrum FT-IR di kisaran 4000-400 cm - 1 ( SEBUAH). 13 C 1 H HSQC spektrum fraksi FII (B) dan FIII (C). sinyal ditunjukkan oleh A ', A, R dan G mengacu pada 5-linked -Ara f, non-mengurangi
erminal -Ara f, 2- dan 4-linked -Rha f dan 4-linked -Gal p A, masing-masing. Tak dikenal sinyal fi ed memiliki ditugaskan untuk 'x'.

analisis metilasi yang G. spinosa polisakarida adalah tugas yang sulit karena mereka
mengandung residu dengan variabel kerentanan terhadap hidrolisis asam (Gal p SEBUAH > Rha p). Kondisi
yang lebih drastis untuk melepaskan Gal p Sebuah dapat merusak Rha p. Namun demikian, kami
berusaha untuk FII fraksi alkohol, yang menghasilkan 30% dari 2,3,5-tri HAI- Me-Ara, 54% dari 2,3-di- HAI-

tabel 3 Me-Ara dan 16% dari 3- HAI- Me-Rha. Sebagian besar hasil ini con fi rms kesimpulan berdasarkan
ntegral dari 1 H / 13 C anomeric sinyal dari fraksi FII dan FIII berasal dari 13 C / 1 H HSQC spektrum. analisis NMR. Tentu saja, kita tidak bisa membedakan antara 5-linked Ara f dari 4-linked Ara f, tetapi
furanosyl konformasi dari residu -Ara jelas ditunjukkan oleh analisis NMR. Rendahnya hasil 3- HAI- Me-Rha

Struktur Satuan FII (%) FIII (%) mungkin konsekuensi dari kehilangan derivatif ini selama hidrolisis asam. Sekali lagi, turunan alkohol
dari galaktosa tidak diidentifikasi.
2,4) - -Rha p- ( 1 R 17 15
4) - -Gal p A- (1 G 13 64
5) - -Ara f- ( 1 SEBUAH ' 50 13
- Ara f- ( 1 SEBUAH 20 8
 ROS Souza et al. / Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215 213

tabel 4 menjadi aktivitas dipertahankan dalam FIII fraksi. Sebaliknya, penelitian lain telah menunjukkan
antikoagulan aktivitas unfractioned dan fraksi polisakarida dengan uji aPTT.
peningkatan aktivitas antikoagulan dalam puri fraksi fi ed ( Pawlaczyk et al., 2009 ). Sehubungan
polisakarida mg / ml aPTT (s) T 1 / T 0 Sebuah dengan tes PT diamati tidak ada aktivitas penghambatan TPL, menunjukkan tidak ada gangguan
dalam koagulasi jalur ekstrinsik, mirip dengan polisakarida sulfat seperti heparin ( Telles et al, 2011.;
TPL 0,016 38,8 0,7 1.2
0,033 39,4 2.7 1.2 Weirong Cai, Xie, Chen, & Zhang, 2013 ). Dengan demikian, berdasarkan pada aktivitas antikoagulan
0,066 109.9 5.5 # 3.3 ditunjukkan oleh TPL dan FIII dalam tes aPTT, adalah mungkin untuk menunjukkan bahwa residu
0,1 144.2 2.1 # 4.4
asam hexuronic berkontribusi aksi polisakarida dari G. spinosa menyalak di koagulasi jalur intrinsik.
FI 0,016 41,0 1,6 1.3
0,033 41,7 0,1 1.3
0,066 37,5 1.4 1.1
0,1 46,2 4.3 1.4
FII 0,016 42.0 0,1 1.3
0,033 45,2 0,3 1.4
Kami tidak memiliki penjelasan yang jelas untuk tidak adanya kurva dosis-respons untuk aktivitas
0,066 55,6 2.8 1,7
antikoagulan fraksi FIII. Pengamatan serupa dilaporkan untuk polisakarida alga ( Melo & Mouro 2008 ).
0,1 43.0 1,5 1.3
FIII 0,016 38.0 3.6 1.2 Dalam hal ini, hasil aktivitas antikoagulan dari keseimbangan antara penghambatan protease
0,033 35,3 1.4 1.1 koagulasi (efek antikoagulan) dan aktivasi faktor XII (aktivitas pro-koagulan). Aspek ini membutuhkan
0,066 121.0 9.5 # 3.7
penyelidikan masa depan untuk polisakarida tanaman.
0,1 52,6 7,6 1,6
HSMW (156 IU) 0.000033 52,0 3,5 1,6
0,00033 92.0 7,5 # 2.8
0,0008 153.0 27,0 # 4.7
0,0016 > 300 # -

aPTT, diaktifkan parsial waktu thromplastin. 3.4. Efek dari G. spinosa polisakarida di agregasi platelet
Sebuah T 1 / T 0: waktu pembekuan plasma di hadapan ( T 1) dan tidak adanya polisakarida ( T 0). Berarti SEM ( n = 3).

ANOVA dan Bonferroni tes. TPL dan FIII, pada 10 g / l dan 100 g / l, menghambat agregasi platelet yang disebabkan oleh
#
p < 0,001 dibandingkan dengan kontrol-plasma T 0 ( 32,6 s).
ADP: TPL (26% dan 46%) dan FIII (21% pada kedua dosis). Namun, FII adalah penghambatan pada
semua dosis: 5 (34%), 10 (50%) dan 100 g / l (54%) dan FI menunjukkan tidak ada aktivitas. HSMW,
Di Kesimpulannya, NMR dan analisis metilasi menunjukkan bahwa digunakan sebagai kontrol penghambatan, menghambat agregasi hanya pada 100 g / l (16%). Selain
G. spinosa polisakarida mengandung inti -Rha p dan cabang 5-linked -Ara f. Residu dari 4-linked -Gal p Sebuah
itu, tidak TPL atau polisakarida fraksi yang dihasilkan agregasi per se dalam ketiadaan ADP ( Ara. 3 ).
juga diidentifikasi tapi itu tidak mungkin untuk menentukan distribusi mereka di polisakarida rantai. Pecahan Sebaliknya, properti menggabungkan telah dijelaskan untuk polisakarida sulfat dari ganggang laut ( Ciancia
FII dan FIII berbeda dalam komposisi mereka. FIII mengandung lebih tinggi proporsi -Gal p A dan lebih et al., 2007; Farias et al., 2000 ). Hasil kami relevan, karena hanya ada beberapa laporan tentang
rendah dari non-mengurangi akhir terminal -Ara f dari FII. fungsi trombosit polisakarida tanaman. Agregasi collageninduced dihambat oleh total polisakarida dari P.
volubilis ( 0,01 g / l) di 19% ( Yoon et al., 2002 ) Dan oleh fraksi polifenol-polisakarida dari E. canadensis
( 0,20 g / l) di 23% ( Pawlaczyk et al., 2011a ). Tidak adanya kurva dosis-respons yang jelas untuk efek
agregasi platelet dari polisakarida tanaman dapat mengakibatkan dari kompleks berbagai efek
3.3. Efek dari G. spinosa polisakarida dalam koagulasi senyawa ini, seperti yang dibahas di atas untuk aktivitas antikoagulan fraksi FIII.

Di itu aPTT uji TPL (0,1 mg / ml), FIII (0,066 mg / ml) dan HSMW (0,0008 mg / ml), tetapi tidak FI
dan FII, secara signifikan meningkatkan waktu pembekuan di 4.0 (144.2 2.1 s), 3.7 (121 9.5 s) dan 4,7
(153,0 27,0 s) lipat, masing-masing, dibandingkan dengan kontrol plasma (32,6 3.4 s) ( tabel 4 ).
tanaman lain polisakarida juga menunjukkan antikoagulan kegiatan. Polisakarida yang diperoleh dari
spesies yang berbeda dari tanaman menunda waktu koagulasi ke 120 -> 600 s di

0,5 mg / ml ( Yoon et al., 2002 ) Dan orang-orang dari bunga-bunga dari Echinaceae purpurea dan F. 3.5. Efek dari G. spinosa polisakarida di trombosis dan perdarahan
vesca menunda waktu koagulasi untuk 84-96,7 s di 0,2 mg / ml ( Pawlaczyk et al., 2009 ). Sebaliknya, di
TPL uji TP tidak mengubah waktu pembekuan sama sekali konsentrasi diuji (0,016-0,1 mg / ml).
Dalam model trombosis vena, trombus terbentuk terutama oleh sel-sel merah dan fi brin dan
beberapa trombosit ( Vogel et al., 1989 ). Dalam model ini, TPL menghambat pembentukan trombus
Itu antikoagulan Kegiatan telah baik ditunjukkan untuk sulfat polisakarida diisolasi dari rumput laut, disebabkan oleh thromboplastin (4,7 0,08 mg) di 0,5 mg / kg (31%), 1,0 mg / kg (51%) dan 2,0 mg / kg
senyawa yang sangat anionik, di mana aktivitas antikoagulan terkait dengan kehadiran sulfat kelompok. (60%) ( Ara. 4 SEBUAH). FII dan FIII, di 2,0 mg / kg, dan heparin di 0,05 mg / kg juga dicegah
Ini jelas ditunjukkan untuk sulfat galaktan dari B. occidentalis ( Farias, Nazareth, & Mouro 2001 ), Gelidium pembentukan trombus oleh 51%, 52% dan 65%, masing-masing. Arteri trombosis diinduksi oleh FeCl 3
Crinale ( Pereira et al., 2005 ), Caulerpa racemosa dan

menyebabkan cedera vaskular dan trombus oklusif disusun oleh sejumlah besar trombosit, sel darah
Caulerpa cupressoides ( Rodrigues, Vanderlei, Quinder, Fontes, & Benevides, 2010 ). Namun, sampai merah yang terlibat dalam jaringan fi brin ( Tseng, Dozier, Haribabu, & Graham, 2006 ). Dalam model
saat ini, tidak ada deskripsi kehadiran kelompok sulfat di polisakarida diisolasi dari tanaman yang lebih trombus arteri yang disebabkan oleh FeCl 3 ( 9.4 0.40 min) saat trombus oklusi adalah secara
tinggi dan itu adalah percaya bahwa aktivitas antikoagulan adalah karena semata-mata untuk itu kehadiran signifikan meningkat di 5,7 kali (53,7 6,25 menit) oleh FII (1,0 mg / kg), tetapi tidak diubah oleh FIII.
dari Asam hexuronic dalam struktur mereka ( Yoon et al., 2002; Pawlaczyk et al., 2009 ). Struktural analisis HSMW (0,25 mg / kg) meningkatkan waktu oklusi di 5,3 kali lipat (50 6.32 min) ( Ara. 4 B). Potensi
menyarankan bahwa unit asam hexuronic terjadi di inti pusat dari G. spinosa polisakarida ( tabel 2 ). Itu tinggiyang lebih baik dari FII diamati dalam model trombosis arteri sejalan dengan efek penghambatan
jumlah dari 4-linked -Gal p Sebuah fraksi FIII dapat menjelaskan aktivitas antikoagulan diamati untuk ampuh dalam agregasi platelet. Hal ini penting untuk menyoroti hal-hal baru dari data ini, karena ada
fraksi ini FIII sementara Fraksi FII adalah tidak aktif. kekurangan dalam literatur pada tanaman polisakarida efek dalam model ini. Namun, efek
antitrombotik telah sudah dijelaskan untuk polisakarida sulfat pada kedua model trombosis vena dan
arteri pada tikus ( Fonseca et al., 2008 ). Bahkan,

G. spinosa fraksi polisakarida tidak menunjukkan peningkatan antikoagulan aktivitas dibandingkan

dengan unfractioned polisakarida,
214 ROS Souza et al. / Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215

Ara. 3. Efek dari G. spinosa polisakarida pada agregasi platelet yang diinduksi ADP. TPL, FI, FII, FIII atau HSMW (156 IU) ditambahkan ke 450 l dari PRP, diinkubasi (1 menit, 37 C) dan dirangsang dengan ADP (3 M, 5 menit). % Berarti SEM ( n = 3). ANOVA dan
uji Bonferroni, * p < 0,05 dibandingkan dengan ADP.

Ara. 4. Efek dari G. spinosa polisakarida dalam model vena dan arteri trombosis dan perdarahan. (A) Trombosis vena: TPL, FII, FIII, HSMW (156 IU) atau 0,9% NaCl adalah disuntikkan di segmen perut cava vena (0,7 cm). Setelah 5 menit, trombus
diinduksi oleh tromboplastin (5 mg / kg) diikuti oleh stasis (20 menit). (B) trombosis arteri: fl ow ultrasonik probe diterapkan dalam arteri karotis kanan. FII, FIII, HSMW (229 IU) atau 0,9% NaCl disuntik setelah 20 menit ke dalam vena cava. Setelah
5 menit, trombosis adalah diinduksi oleh topikal aplikasi kertas fi lter (50% FeCl 3). ( C) TPL, FII, FIII, HSMW atau PBS disuntikkan dalam vena jugularis kiri. Lima menit kemudian, perdarahan diinduksi oleh bagian ekor (3 mm dari ujung). Ekor
dihapuskan dengan kertas tisu setiap 30 s. Berarti SEM ( n = 3). ANOVA dan Bonferroni tes. * p < 0,05 dibandingkan dengan garam (A dan B); * p < 0,001 dibandingkan dengan PBS (C).

kami hasil menguatkan penggunaan tanaman obat untuk pengobatan dan pencegahan penyakit kontaminan dengan struktur non-polisakarida dapat mempengaruhi perdarahan dan itu dihapus
tromboemboli ( Yoon et al., 2002 ). Pendarahan adalah efek buruk penting obat antikoagulan, seperti itu kasus
selama persiapan dari fraksi FII dan FIII.
heparin massa molekul tinggi dan rendah ( Fabris et Al., 2000 ). Didalam konteks, protokol yang Kontribusi utama dari penelitian ini adalah demonstrasi dari efek potensial dari polisakarida
mengevaluasi waktu perdarahan yang banyak digunakan sebagai indikator fungsi trombosit pada diisolasi dari kulit kayu dari tanaman obat G. spinosa dalam acara tromboemboli, bebas dari risiko
manusia. Namun, untuk kami pengetahuan tidak ada laporan dalam literatur menunjukkan aksi polisakarida perdarahan.
tanaman yang lebih tinggi pada berdarah waktu. Di Sebaliknya, peningkatan perdarahan telah
ditunjukkan untuk sulfated polisakarida diisolasi dari rumput laut ( Mauray et al., 1995; Zhao et al., 2012 ).
Dalam studi ini kami menunjukkan bahwa TPL secara signifikan meningkat pendarahan di 2,0 mg / kg
4. Kesimpulan
(2595 61 s) di 2,8 kali dibandingkan dengan PBS (907 16 s). Sebaliknya, tidak FII atau FIII diubah pendarahan
di 2,0 mg / kg. HSMW (0,05 mg / kg) meningkat perdarahan (7300 45 s) di 8,4 kali lebih tinggi dari PBS
Polisakarida diisolasi dari G. spinosa gonggongan mengandung inti -Rha p dan cabang dari 5-linked -Ara
( Ara. 4 C). Bertentangan dengan heparin, kami hasil jelas menunjukkan bahwa G. spinosa polisakarida fraksi
f. Residu dari 4-linked
memiliki antitrombotik dan efek antiplatelet, tanpa meningkatkan berdarah kecenderungan. Data ini bisa
- Gal p Sebuah juga ditemukan dalam struktur. polisakarida ini memiliki antikoagulan, antiplatelet
berhubungan dengan rendah aktivitas ini fraksi di koagulasi cascade (seperti yang ditunjukkan pada itu aPTT
dan efek antitrombotik, tanpa mencampuri perdarahan. Sebuah fraksi tertentu yang diperoleh dengan
test) atau untuk penghapusan senyawa kontaminan hadir di itu total ekstrak. kromatografi pertukaran anion dan mata uang sebagai FIII sangat menjanjikan untuk pengembangan
masa depan obat antitrombotik karena memiliki efek antitrombotik tetapi tanpa kecenderungan
perdarahan yang tidak diinginkan.

Ucapan Terima Kasih

Saya t mungkin mengherankan bahwa efek pendarahan, terdeteksi pada tak terpecah polisakarida, menghilang
sebagai fraksi FIII yang dimurnikan, sedangkan itu antikoagulan aktivitas tetap. Tetapi bahkan untuk Penulis berterima kasih kepada Ms. Vaneicia dos S. Gomes, yang diidentifikasi spesies tanaman.
heparin, pecahan dengan tinggi dan rendah aktivitas antikoagulan mengalami perdarahan yang sama efek ( Tovar
Penelitian ini dana hibah oleh Brasil dari CNPq, jubah, FUNCAP dan FAPERJ. PAS Mouro dan AMS
et al., 2012 ). Juga, kita tidak bisa mengecualikan bahwa Assreuy adalah peneliti senior CNPq.
 ROS Souza et al. / Karbohidrat Polimer 124 (2015) 208-215 215

Referensi Pawlaczyk, I., Czerchawski, L., Kuliczkowski, W., Karolko, B., Pilecki, W., Witkiewicz,
W., et al. (2011). aktivitas antikoagulan dan anti-platelet persiapan polyphenolicpolysaccharide diisolasi dari

Adams, G. SEBUAH. (1965). AC id hidrolisis hubungan yang lemah. Metode di Karbohidrat

tanaman obat Erigeron Canadensis L. Trombosis Penelitian, 127, 4328-4340.

Kimia, 5, 285-287.
Aquino, R. S., Pereira, M. S., Vairo, B. C., Cinelli, L. P., Santos, G. R., Fonseca, R. J., et al. Pawlaczyk, I., Capek, P., Czerchawski, L., Bijak, J., Lewik-Tsirigotis, M., Pliszcak-Krl,

(2010). Heparins dari babi dan mukosa usus sapi: Apakah mereka obat-obatan serupa? trombosis dan hemostasis, 103, A., et al. (2011). Efek antikoagulan dan karakterisasi kimia Lythrum salicaria L. glycoconjugates. Polimer

1005-1015. karbohidrat, 86,

Beijering, R. J. R., Ten Cate, H., & Ten Cate, J. W. (1996). aplikasi klinis baru 277-284.

agen antitrombotik. Annals of hematologi, 72, 177-183. Pawlaczyk, I., Czerchawski, L., Pilecki, W., Lamer-Zarawska, E., & Gancarz, R. (2009).

lahir, G. V. R., & Cross, M. J. (1963). Agregasi trombosit darah. The Journal of senyawa polifenol-polisakarida dari tanaman obat yang dipilih

Fisiologi, 168, 178-195. Asteraceae dan Rosaceae keluarga: karakterisasi kimia dan aktivitas antikoagulan darah. Polimer karbohidrat, 77, 568-575.

Bradford, M. (1976). Sebuah metode cepat dan sensitif untuk kuantisasi mikrogram
Pereira, M. S., Vilela-Silva, SEBUAH. C. E. S., Valente, SEBUAH. P., & Mouro, P. SEBUAH. S. (2002). A 2-
kuantitas protein memanfaatkan prinsip protein-pewarna mengikat. Analitis Biokimia, 72, 248-254.
sulfated, 3-linked - l- galactan adalah polisakarida antikoagulan. Karbohidrat Penelitian, 337, 2231-2238.

Brasil. (2010). Capitulo 5: Mortalidade por doenc sebagai crnicas no Brasil: situac ao
Pereira, L. P., Silva, R. O., Bringel, P. H. S. F., Silva, K. E. S., Assreuy, M. SEBUAH. S., & Pereira,
em 2009 e Tendencias de 51.991 a 2009. Dalam Sade Brasil, 2010: uma Analise da situac AO de sade e de evidncias
selecionadas de Impacto de AC OES de vigilancia em sade / Ministerio da Sade, Secretaria de vigilancia em
M. G. (2012). fraksi polisakarida Caesalpinia Ferrea polong: Potensi antiin fl penggunaan dgn kasih sayang. Journal

Sade. Braslia: Ministerio da Sade.

of Ethnopharmacology, 139, 642-648.
Pereira, L. P., Silva, K. E. S., Silva, R. O., Assreuy, M. SEBUAH. S., & Pereira, M. G. (2012).

Ciucanu, J., & Kerek, F. (1984). Sebuah metode yang sederhana dan cepat untuk permethylation dari
Anti-peradangan polisakarida dari Azadirachta indica benih tegument. Revista Brasileira de Farmacognosia, 22, 617-622.

karbohidrat. Karbohidrat Penelitian, 131, 209-217.

Pereira, M. G., Benevides, N. M., Melo, M. R., Valente, SEBUAH. P., Melo, F. R., & Mouro,
Ciancia, M., Quintana, SAYA., Vizcargnaga, M. I., Kasulin, L., De dios, A., Estevez, J. M., et al. (2007). Polisakarida dari
rumput laut hijau Codium rapuh dan C. vermilara dengan efek kontroversial di hemostasis. International Journal of P. A. (2005). Struktur dan aktivitas antikoagulan dari galactan sulfat dari alga merah, Crinale Gelidium. Apakah ada

Biological makromolekul, 5, 641-649. fi c persyaratan struktural tertentu untuk tindakan antikoagulan? Polimer karbohidrat, 340, 2015-2023.

Pomim, V. H., Pereira, M. S., Valente, SEBUAH. P., Tollefsen, D. M., Pavao, M. S. G., & Mouro,
Cushman, M. (2007). Epidemiologi dan faktor risiko trombosis vena. seminar
di hematologi, 44, 62-69. P. SEBUAH. S. (2005). belahan dada selektif dan aktivitas antikoagulan dari fucan sulfat. Stereospeci fi c

Dische, Z. (1947). Reaksi spesifik baru fi c warna asam hexuronic. The Journal of penghapusan dari ester 2-sulfat dari polisakarida dengan hidrolisis asam ringan, persiapan oligosakarida dan

Biologis Kimia, 167, 189-198. heparin kofaktor aktivitas antikoagulan II-dependent. glycobiology, 15, 369-381.

Dubois, M., Gilles, K. SEBUAH., Hamilton, J. K., Rebers, P. A., & Smith, F. (1956). kolorimetri
metode untuk penentuan gula dan zat terkait. Kimia Analisis, Ringleb, P. A. (2006). Trombolitik, antikoagulan dan agen anti-platelet. Pukulan,

28, 350-356. 37, 312-322.

Rodrigues, J. SEBUAH. G., Vanderlei, E. S. O., Quinder, SEBUAH. L. G., Fontes, B. P., & Benevides, N. M.
Makarova, E. N., Patovab, HAI. P., Shakhmatova, E. G., Kuznetsova, S. P., & Ovodovb, Y.
S. (2013). Studi struktural pectic yang polisakarida dari Siberian fi r (Abies sibirica Ledeb.). Karbohidrat Polimer, 92, 1817-1826.B
B. (2010). P
Polissacardeos sulfatados isolados das clorofce
clorofceas C
Caulerpa racemosa
m e
C m A S mB S

Fabris, F., Luzzato, G., Stefani, P. M., Girolami, B., Cella, G., & Girolami, A. (2000).
Heparin-induced thrombocitopenia. Haematologica, 85, 72-81. R C D R W & N B m E

Farias, W. R. L., Nazareth, R. A., & Mouro, P. SEBUAH. S. (2001). efek ganda dari sulfat
P S D A m P
R U H R R M M U
d- galaktan dari alga merah Botryocladia occidentalis mencegah trombosis dan menginduksi platelet pengumpulan. Trombosis
dan Haemostasis, 86, 1540-1546. m C m M C R G N

Farias, W. R. L., Valente, SEBUAH. P., Pereira, M. S., & Mouro, P. SEBUAH. S. (2000). Struktur
N B R B P M

dan aktivitas antikoagulan dari galaktan sulfat. Isolasi dari galactan sulfat yang unik dari alga merah Botryocladia
occidentalis dan perbandingan aksi antikoagulan dengan yang dari galaktan sulfat dari invertebrata. The Journal S W R P P B w M K &D M m

of Biologis Kimia, 275, 29.299-29.307. M m E m

M

Fonseca, R. J. C., Oliveira, S. N. M. C. G., Melo, F. R., Pereira, M. G., Benevides, N.

M. B., & Mouro, P. SEBUAH. S. (2008). sedikit perbedaan dalam sulfatation dari galaktan alga account untuk perbedaan C B S S D A Am m C M S S P M S R

mereka antikoagulan dan kegiatan antitrombotik vena. trombosis dan hemostasis, 99, 539-545. E S S m m P
S m P m

Gracher, SEBUAH. H. P., Cipriane, T. R., Carbonero, E. R., Gorin, P. SEBUAH. J., & Iacomini, M. (2010).
Antitrombin dan heparin kofaktor II-dimediasi inaktivasi -thrombin oleh sintetik, sulfated mannogalactan. Trombosis
U H M C N M G R C C O N M C G
Penelitian, 126, 180-187.
Hirsh, J. (1991). Heparin. New England Journal of Medicine, 324, 1565-2157. R C H m

Hirsh, J., & Levine, M. N. (1994). Molekul rendah heparin Berat: prop- Laboratorium m H m

erties dan klinis evaluasi. Sebuah ulasan. European Journal of Surgery Supplement,
571, 9-22. M D A H B &G m U M m

Kacurkov, M., Capek, P., Sasinkov, V., Wellner, N., & Ebringerov, A. (2000). FT-IR C m m P

studi tanaman model dinding sel Senyawa: polisakarida pectic dan hemiselulosa. Karbohidrat polimer, 43, 195-203.
R M M U H

Kircher, H. W. (1960). Gas-cair kromatografi gula termetilasi. analisis B HA

Bahan kimia, 32, 1103-1106. B C m

Lopes, E. L., Torres, M. C. M., Maia, SEBUAH. SAYA. V., Lima, M. SEBUAH. S., Neto, M. A., & Pessoa, HAI. D. L. (2009). Identifikasi Cac ao de macrolactonas
de Geoffroea spinosa Jacq. por LCMS-IT-TOF.
V G M M m D G B G M &H P M

Sociedade Brasileira de Espectrometria de Massa-BrMASS. tersedia online P m m m m m m

< http://www.brmass.com.br/congresso/resumos/1P151.pdf > ( diakses pada 28 Agustus 2014). P

V N M & D m m
m m m m w
Martinichen-Herrero, J. C., Carbonero, E. R., Sassaki, G. L., Gorin, P. SEBUAH. J., & Iacomini,
N S m C m B A mB m m
M. (2005). antikoagulan dan kegiatan antitrombotik dari galactomannan kimia sulfat diperoleh dari lumut Cladonia
P
ibitipocae. International Journal of Biologis makromolekul, 35, 97-102.

Matos, F. J. SEBUAH. (1999). Plantas da medicina populer Do Nordeste: propriedades atribudas

W C X C Y & H P m

e con fi rmadas. Fortaleza: EUFC. P m

Mauray, S., Sternberg, C., Theveniaux, J., Millet, J., Sinquin, C., Tapon-Bretaudire, J., et al. (1995). vena kegiatan
antitrombotik dan antikoagulan dari fraksi fucoidan. pembekuan darah hemostasis, 74, 1280-1285. Y S P M S P M S G Hw K P Y R &M P
SEBUAH S m P m

Melo, F. R., & Mouro, P. SEBUAH. S. (2008). Sebuah alga sulfat galactan memiliki biasa ganda
m m P

efek pada vena trombosis karena aktivasi faktor XII dan penghambatan koagulasi protease. pembekuan darah hemostasis,
D W C U H
99, 531-538.
Mouro, P. SEBUAH. S., & Pereira, M. S. (1999). Mencari alternatif untuk heparin: sulfat m m m P

fucans dari laut invertebrata. Tren Kedokteran Kardiovaskular, 9, 225-232.